艾滋與梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查

1、內(nèi)容介紹1 . h i v 實(shí) 驗(yàn) 室 檢 查2 . 梅 毒 實(shí) 驗(yàn) 室 檢 查3 . 丙 肝 實(shí) 驗(yàn) 室 檢 查 艾滋病，醫(yī)學(xué)全名為“獲得性免疫缺陷綜合征”（acquiredimmunedeficiencysyndrome-aids）,是人體感染了人類免疫缺陷病毒（hivhumanimmunodeficiencyvirus,），又稱艾滋病病毒所導(dǎo)致的傳染病。值得一提的是，hiv本身并不會引發(fā)任何疾病，而是當(dāng)免疫系統(tǒng)被hiv破壞后，人體由于失去抵抗能力而感染其他的疾病導(dǎo)致死亡！通俗地講，艾滋病就是人體的免疫系統(tǒng)被艾滋病病毒破壞，使人體對威脅生命的各種病原體喪失了抵抗能力，從而發(fā)生多種感染或腫瘤

2、，最后導(dǎo)致死亡的一種嚴(yán)重傳染病。這種病毒終生傳染，破壞人的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵抗各種疾病的能力。當(dāng)艾滋病病毒感染者的免疫功能受到病毒的嚴(yán)重破壞、以至不能維持最低的抗病能力時，感染者便發(fā)展為艾滋病病人。隨著人體免疫力的降低，人會越來越頻繁地感染上各種致病微生物，而且感染的程度也會變得越來越嚴(yán)重，最終會因各種復(fù)合感染而導(dǎo)致死亡。艾滋病主要通過血液、不正當(dāng)?shù)男孕袨?、吸毒和母嬰遺傳四種途徑傳播。國際醫(yī)學(xué)界至今尚無防治艾滋病的有效藥物和療法。因此，艾滋病也被稱為“超級癌癥”和“世紀(jì)殺手” u 目前流行趨勢u 從1981年發(fā)現(xiàn)第一例病例起，至2011年，已有超過2500w人死于hiv感染，3400w人攜

3、帶/感染hiv，年新增感染hiv人數(shù)超過250w，年死亡170w。約97%的發(fā)病出現(xiàn)在中低收入國家，其中15-24歲感染者約占總數(shù)的39%。u我國概況u從1985年中國發(fā)現(xiàn)第一例hiv病例起,截止2013年8月份，發(fā)現(xiàn)hiv及其攜帶者超過60w人，死亡超12w人，近年15至24歲所占感染者比例逐年增加，同性戀之間感染所占比例也逐年上升，尤以男男性行為增加最為迅速，50歲以上異性傳播比例也有增長趨勢。uhiv傳播途徑hiv主要存在于感染者和病人的血液、精液、陰道分泌物、乳汁和傷口滲出液中。故性接觸（包括同性、異性和雙性性接觸）、血液及血制品（包括共用針具、介入性醫(yī)療操作等）和母嬰垂直傳播（包括產(chǎn)

4、前、產(chǎn)中和產(chǎn)后）為其主要傳播途徑，正常的人際間交往如擁抱，共同用餐等不會傳播hivu人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。病毒外膜是類脂包膜，來自宿主細(xì)胞，并嵌有病毒的蛋白gp120與gp41；gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并與gp41通過非共價(jià)作用結(jié)合。向內(nèi)是由蛋白p17形成的球形基質(zhì)（matrix），以及蛋白p24形成的半錐形衣殼（capsid），衣殼在電鏡下呈高電子密度。衣殼內(nèi)含有病毒的rna基因組、酶（逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶）以及其他來自宿主細(xì)胞的成分（如trnalys3，作為逆轉(zhuǎn)錄的引物）。ugp120和gp41構(gòu)成感染因子主要結(jié)構(gòu)。uhiv-1型與hiv-2型區(qū)

5、別在于含有vpu基因， vpu基因?yàn)閔iv-1所特有，對hiv的有效復(fù)制及病毒體的裝配與成熟不可少。u從感染艾滋病病毒到血液中能夠檢測出艾滋病病毒抗體這段時間稱為“窗口期”。u一般為2周3個月，有極少數(shù)人可長達(dá)6個月。u在“窗口期”作艾滋病病毒抗體檢測，結(jié)果呈“陰性”，但是體內(nèi)有病毒。u有較強(qiáng)的傳染性，可以將病毒傳播給他人。u潛伏期：從艾滋病病毒侵入人體到出現(xiàn)臨床癥狀之前這段時間。艾滋病平均潛伏期為7-10年。u處于潛伏期的感染者沒有癥狀，體表外觀等一般狀況正常，與常人無異。對早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)防造成很大困難。u潛伏期不是靜止期，更不是安全期，病毒在持續(xù)繁殖，具有強(qiáng)烈的破壞作用。u有傳染性，可以將病

6、毒傳播給他人。 1. 1.酶聯(lián)免疫法（elisa)elisa)可使用血液、唾液、尿液樣品，elisa多為單純hiv抗體檢測試劑。hiv抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可同時檢測血液中hiv-1p24抗原和hiv-1/2抗體。hiv抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的hiv抗原或抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 2.2.化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)這類試劑采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。hiv抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的hiv抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必

7、須符合試劑盒規(guī)定。 3.3.快速檢測（rtrt）及其它抗體檢測試驗(yàn) 免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，hiv抗原線狀固定在膜上，待檢樣品（血液或唾液）沿著固 相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。其他還有免疫滲濾實(shí)驗(yàn)和凝膠凝集實(shí)驗(yàn)等。u 病原檢測主要指用病毒分離培養(yǎng)、電鏡形態(tài)觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標(biāo)本中直接檢測病毒或病毒基因。由于前兩種方法難度大，且需要特殊設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員。因此僅抗原檢測和rt-pcr(反轉(zhuǎn)錄pcr)可用于臨床診斷。u hiv-1p24抗原檢測可用于hiv-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；hiv-1抗體陽性母親所生嬰兒

8、早期的輔助鑒別診斷；hiv-1抗原/抗體elisa試劑檢測呈陽性，但hiv-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷。p24抗原檢測一般用elisa雙抗體夾心法試劑u hiv核酸檢測可用于hiv感染的輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效判定、預(yù)測疾病進(jìn)展等。常用的hiv病毒載量檢測方法包括逆轉(zhuǎn)錄pcr實(shí)驗(yàn)（rt-pcr）、核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)（nasba）、分支dna雜交實(shí)驗(yàn)（bdna）以及實(shí)時熒光定量pcr技術(shù)。 u菌種的分類根據(jù)其危險(xiǎn)性決定(包括實(shí)驗(yàn)室感染的可能性，感染后發(fā)病的可能性，癥狀輕重及愈后情況，有無致命危險(xiǎn)及有效的防止實(shí)驗(yàn)室感染方法，用一般的微生物操作方法能否防止實(shí)驗(yàn)室感染、我國有否此種菌種及曾

9、否引起流行、人群免疫力等情況)。依其危險(xiǎn)程度的大小，我國的菌種分為四類。u致病性病原微生物可根據(jù)其易感程度分為四類，第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（hiv）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。uhiv抗體檢測（包括篩查和確證實(shí)驗(yàn)）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學(xué)檢測應(yīng)在符合級生物安全實(shí)驗(yàn)室（bsl-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。u hiv分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應(yīng)用活病毒的研究工作，應(yīng)在級生物安全實(shí)驗(yàn)室（bsl-3）中進(jìn)行。u hiv核酸提取和檢測均應(yīng)在符合級生物安全實(shí)驗(yàn)室（bsl-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。u hiv

10、病毒株應(yīng)保存在符合級生物安全實(shí)驗(yàn)室（bsl-3）要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室；hiv陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應(yīng)保存在符合bsl-2要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室。二類生物安全實(shí)驗(yàn)室u定義u生物安全實(shí)驗(yàn)室（biosafety laboratory ），也稱生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室 (biosafety containment for laboratories)，是通過防護(hù)屏障和管理措施，能夠避免或控制被操作的有害生物因子危害，達(dá)到生物安全要求的生物實(shí)驗(yàn)室和動物實(shí)驗(yàn)室u二級實(shí)驗(yàn)室要求：u對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子，對健康成人、動物和環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害。有有效的

11、預(yù)防和治療措施。u實(shí)驗(yàn)設(shè)施u二級生物安全柜u高壓消毒鍋u普通冰箱u恒溫培養(yǎng)箱u定時器u冰凍離心機(jī)u試管 試管架 移液管 無菌吸管 痰盒等等u實(shí)驗(yàn)室安全制度u準(zhǔn)入制度u個人防護(hù)制度u標(biāo)本接收制度u廢棄物處理制度l實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行全員安全培訓(xùn)并強(qiáng)化“普遍性防護(hù)原則”安全意識，所有的血液、未固定的組織和組織液樣品，均應(yīng)視為有潛在的傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。所有管理和檢測人員都應(yīng)接受省級以上艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室主持的安全培訓(xùn)，包括上崗前培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受管理人員的監(jiān)督。l必須對新上崗人員進(jìn)行安全教育和培訓(xùn)，使他們清楚實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)，通過考核等方式確認(rèn)他們具備安全操作的能力后方可單獨(dú)工作。l必須對

12、新調(diào)入人員、外來合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任批準(zhǔn)后，方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。l生物安全培訓(xùn)和監(jiān)督應(yīng)有客觀詳實(shí)的記錄。l實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)詳細(xì)了解所有工作人員的教育和培訓(xùn)背景、特長、性格特點(diǎn)等。要根據(jù)人員特點(diǎn)、工作種類、所涉及的生物材料合理安排工作區(qū)域，要定期對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行安全檢查。u個人防護(hù)制度要點(diǎn)l 鑒于我國性病/結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的基本情況,實(shí)驗(yàn)工作內(nèi)容,感染控制的原理,個人防護(hù)為是最重要的,也是最后一道防護(hù)屏障,必須給予足夠重視.l穿戴順序:口罩,帽子,防護(hù)服,護(hù)目鏡,鞋套,雙層手套；l脫下順序:外層手套,護(hù)目鏡,防護(hù)服,內(nèi)層手套,帽子,鞋套,口l遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適

13、于工作的情況，應(yīng)暫停工作。l 皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等，應(yīng)用防水敷料嚴(yán)密覆蓋。l工作人員上崗前必須進(jìn)行hiv抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標(biāo)志物檢測，應(yīng)接種乙肝疫苗。應(yīng)每年對工作人員采血檢測hiv抗體，血清應(yīng)長期保留。l進(jìn)實(shí)驗(yàn)室工作前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。l嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。l操作過程中，如發(fā)現(xiàn)防護(hù)服被污染應(yīng)立即更換，如手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置應(yīng)急沖洗眼睛裝置。u 意外事故處理l發(fā)生意外事故時，應(yīng)針對事故的類型立即進(jìn)行緊急處理，主要包括：l皮膚針刺

14、傷或切割傷，應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它 消毒劑消毒傷口。l 皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙荩?0%乙醇或其它皮膚消毒劑。l 粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。l 衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒處理。l 污染物潑濺：小范圍污染物潑濺，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理和清洗。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場，查清情況，確定消毒的程序。l 發(fā)生空氣污染時，可采用低溫蒸汽甲醛氣體對空氣進(jìn)行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)空氣消毒。l 如果發(fā)生重大潑濺事故，應(yīng)采取

15、以下措施進(jìn)行：l 從污染處疏散人員，但要防止污染擴(kuò)散；l 控制污染擴(kuò)散，鎖門并禁止人員進(jìn)入；l通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)、安全負(fù)責(zé)人等，查清情況，確定消毒處理的程序。u標(biāo)本接受制度要點(diǎn)l檢測方法不同，要求的標(biāo)本不同全血、血清、血漿、唾液、尿液以及dbs樣品可用于hiv抗體檢測。 抗凝全血可用于cd4+和cd8+t淋巴細(xì)胞測定。 血漿可用于hiv-1病毒載量、基因型及耐藥檢測。dbs樣品可用于hiv-1基因型及耐藥檢測。 全血、血漿、淋巴細(xì)胞富集液、外周血淋巴細(xì)胞（pbmc）及dbs（干血斑樣品）樣品可用于hiv核酸的定性檢測。 pbmc、全血、淋巴細(xì)胞富集液等可用于hiv-1分離培養(yǎng)。l樣品的編碼和記

16、錄 應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop），規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號），保證其唯一性。采血前，先對裝有樣品的離心管或?yàn)V紙進(jìn)行標(biāo)記，核對后編碼。要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)面，最好使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲存的耐低溫標(biāo)簽。應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時錄入電腦保存。l樣品保存用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于28，一周以上應(yīng)存放于-20以下。 用于核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于4，3個月以內(nèi)應(yīng)存放于-20以下。3個月以上應(yīng)置于-70以下。艾滋病檢測篩查實(shí)驗(yàn)室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送確證實(shí)驗(yàn)室，篩查陰性

17、樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存12個月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時間。艾滋病檢測確證實(shí)驗(yàn)室收到的篩查陽性樣品，無論確證結(jié)果如何，均應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時間。u廢棄物處理制度要點(diǎn)應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（gb 19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）處置實(shí)驗(yàn)室廢棄物。艾滋病實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器中，安全運(yùn)至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄。艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室物品常用的化學(xué)消毒方法 廢棄物缸：5000mg/

18、l 次氯酸鈉。 生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。 溢出物：5000mg/l次氯酸鈉。 污染的臺面和器具：2000mg/l 次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。u 物理消毒法 高壓蒸汽消毒，121，保持1520min; 干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140，保持23h。做為篩查實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)有2種方法不同但性能均符合要求的hiv抗體檢測試劑備用。試劑間的特異性和敏感度應(yīng)有區(qū)別（不一定兩者均要達(dá)到很高的標(biāo)準(zhǔn)，不現(xiàn)實(shí)）以便進(jìn)行復(fù)檢時互為補(bǔ)充。質(zhì)控樣品檢測關(guān)系工作開展的有效性，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行，使hiv篩查工作質(zhì)量能有保證?？剖业膽?yīng)養(yǎng)成生物安全觀念，注意清潔區(qū)，半污染區(qū)及污染

19、區(qū)的位置，在各區(qū)的行為均應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)室sop中的規(guī)范。認(rèn)真做好各項(xiàng)記錄工作，記錄的目的是保證實(shí)驗(yàn)室工作的可溯源性，也是保證實(shí)驗(yàn)室自身工作質(zhì)量的可靠性的唯一證據(jù)。梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(treponema pallidum subspecies pallidum) 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 地方亞種 地方性梅毒 極細(xì)亞種 雅司病密螺旋體屬 品他螺旋體 品他病 性接觸是主要的傳染途徑 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性，隨著病期的延長，傳染性越來越小。到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性。母嬰傳播在妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病

20、期2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒，病期越長，傳染性越小。輸血傳染間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑（接觸部位附有梅毒螺旋體） 。梅毒的診斷 早期梅毒（一期、二期和早期隱性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隱性梅毒） 必須依靠病史、癥狀及實(shí)驗(yàn)檢查進(jìn)行綜合分析 梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查 結(jié)果對診斷有決定性意義1. 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）2. 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）原理（抗心磷脂抗體）： 人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。 主要是igm和igg混合抗體?？贵w產(chǎn)生時

21、間 感染3周-4周，硬下疳出現(xiàn)1周-2周 一般在感染后57周（或硬下疳出現(xiàn)后23周）產(chǎn)生。 抗體作用 無保護(hù)作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。反應(yīng)原理 抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分 心磷脂、卵磷脂和膽固醇方法包括： 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rpr) 不加熱血清反應(yīng)素(usr) 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（trust） 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(vdrl)等。vdrlvdrlusrusrrprrprtrusttrust抗原成分抗原成分心磷脂、卵磷脂、心磷脂、卵磷脂、 膽固醇膽固醇同前同前+edta

22、+edta+氯化氯化膽堿膽堿同前同前+edta+edta+氯化氯化膽堿膽堿+ +活性炭活性炭同前同前+edta+edta+氯化膽堿氯化膽堿+ +甲苯胺紅甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定不穩(wěn)定,1,1天天穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月穩(wěn)定穩(wěn)定4 4 8 8 保存保存1212個月個月血清試驗(yàn)前處理血清試驗(yàn)前處理需滅活需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應(yīng)板及結(jié)果判反應(yīng)板及結(jié)果判斷斷玻片，肉眼或顯玻片，肉眼或顯微鏡微鏡玻片，肉眼或顯玻片，肉眼或顯微鏡微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋注釋唯一

23、用于檢查腦唯一用于檢查腦脊液的試驗(yàn)，診脊液的試驗(yàn)，診斷神經(jīng)梅毒斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷一期敏感性一期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）74%-87%74%-87%77%-88%77%-88%77%-99%77%-99%77%-99%77%-99%二期敏感性二期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）100%100%100%100%100%100%100%100%晚期敏感性晚期敏感性（未經(jīng)治療）（未經(jīng)治療）98%98%99%99%98%98%99%99%試驗(yàn)前期準(zhǔn)備 rpr儀(水平旋轉(zhuǎn)儀器) 必須滴！必須滴！ rpr試劑 50l移液器、吸頭 記號筆、廢物缸 工作服 一次性手套

24、、口罩、帽子 生物安全柜加樣：吸取50l血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)。 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用試劑盒提供的針頭加1滴抗原。 反應(yīng)：將卡片置梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀8分鐘立即在亮光下觀察結(jié)果。稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50l生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 加樣：吸取50l血清(漿)與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布滿整個圈內(nèi)。 重復(fù)定性試驗(yàn)后兩步。3+4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的紅色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體渾濁。：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊

25、為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個月，vdrl試驗(yàn)抗體滴度下降2個稀釋度，6個月下降4個稀釋度。 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性技術(shù)性假陽性 由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯誤所造成。生物學(xué)假陽性 是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)

26、生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性風(fēng)疹水痘傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹系統(tǒng)性紅斑狼瘡 自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡 結(jié)節(jié)性多動脈炎 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 橋本氏甲狀腺炎風(fēng)濕性心臟病干燥綜合征毒品癮者 慢性腎炎肝硬化老年 麻風(fēng) (是唯一產(chǎn)生慢性生物學(xué)假陽性的感染性 疾病)梅毒假陽性反應(yīng)的處理 技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可除外。 對急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做tpha（tppa）等試驗(yàn)進(jìn)行排除。原理 指二期梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果。處理 將血清稀釋

27、后再進(jìn)行試驗(yàn)。耐血清性（血清固定） 指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。檢測血中特異性抗梅毒螺旋體特異蛋白為抗原的抗體（ igg 和igm ）。特異性igm型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出。梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(tppa) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(tpha) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（tp-elisa） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(rt) 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（fta-abs） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（clia） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（wb）tppa試驗(yàn)原理與tpha試驗(yàn)基本相同

28、tppa試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒 tpha試驗(yàn)中梅毒螺旋體致敏羊紅細(xì)胞特點(diǎn) 梅毒螺旋體(nichols株)全抗原1. 試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。 2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第24孔各25微升。3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4. 加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5. 混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒。6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4冰箱過夜觀察結(jié)果。1.觀察加未致敏顆粒的

29、第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)。 2. 觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級如下。 4+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。 3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。 1+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。 ：顆粒沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)。 一：顆粒緊密沉積孔底中央。原理 用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。特點(diǎn) 本法可用于大規(guī)模血清檢測。梅毒螺旋體試驗(yàn)的作用是作為證實(shí)試驗(yàn)它們可以幫助確定非梅毒螺旋體試驗(yàn)陽性反應(yīng)是真陽性還是假陽性。 一旦這些試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。特異性強(qiáng)，敏感性高 很少出現(xiàn)假陽性。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在普通人群中，有1%的生物學(xué)假陽性發(fā)生。 如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清可使fta-abs試驗(yàn)呈假陽性反應(yīng)，但大多數(shù)病例中螺旋體呈串株?duì)顭晒狻?傳染性單核細(xì)胞增多癥，可能由于嗜異性抗體所致，可使tpha呈假陽性。麻風(fēng)患者也可使特異試驗(yàn)呈陽