動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體用

1、12 2002年年12月月30日，日， 兩場(chǎng)籌備了兩場(chǎng)籌備了10年的年的“太太空婚禮空婚禮”首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，植物細(xì)胞植物細(xì)胞“新人新人”黃花煙草黃花煙草和和革新一號(hào)煙草革新一號(hào)煙草葉肉細(xì)胞葉肉細(xì)胞原原生質(zhì)體生質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞和和骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在，兩批新人同時(shí)在 “產(chǎn)房產(chǎn)房”電融電融合儀內(nèi)孕育新生命。合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y太空婚禮”植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)3(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過程示意圖4A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞人工誘

2、導(dǎo)人工誘導(dǎo)1.11.1動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞融合的概念細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指交）：是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融融合形成一個(gè)合形成一個(gè)單核細(xì)胞單核細(xì)胞的過程。的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合51.21.2動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程 為什么滅活的為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性滅活病毒、滅活病毒、PEGPEG、電激等、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的手段？誘導(dǎo)的手段

3、？融合后細(xì)胞的類型？融合后細(xì)胞的類型？ABAB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？有什么特點(diǎn)？結(jié)果結(jié)果三種三種AAAA、ABAB、BBBB（A A、B B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.21.2動(dòng)物細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程原理？原理？71.31.3動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用8比較項(xiàng)比較項(xiàng)目目細(xì)胞融合細(xì)胞融合的原理的原理細(xì)胞融合的細(xì)胞融合的方法方法誘導(dǎo)手段誘導(dǎo)手段用途用途植物體植物體細(xì)胞雜細(xì)胞雜交交細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性纖維素酶、纖維素酶、果膠酶果膠酶去除去除細(xì)胞壁后誘細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體導(dǎo)原生質(zhì)體融合融合離心、電刺離心、電刺激、振動(dòng)

4、、激、振動(dòng)、聚乙二醇聚乙二醇克服遠(yuǎn)源克服遠(yuǎn)源雜交不親雜交不親和，獲得和，獲得雜種植株雜種植株動(dòng)物細(xì)動(dòng)物細(xì)胞融合胞融合細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使細(xì)胞分散使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合除應(yīng)用植物除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手細(xì)胞雜交手段外，段外，還有還有滅活病毒滅活病毒獲得雜種獲得雜種細(xì)胞、細(xì)胞、制備制備單克隆抗單克隆抗體體1.4 1.4 比較動(dòng)、植物細(xì)胞雜交技術(shù)比較動(dòng)、植物細(xì)胞雜交技術(shù)9【例例1】能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動(dòng)振動(dòng)【例例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物

5、質(zhì)有何特點(diǎn)（融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（ ）具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息 B.能無限增殖能無限增殖 C.可形成新個(gè)體可形成新個(gè)體 D.培養(yǎng)過程會(huì)貼培養(yǎng)過程會(huì)貼壁壁【例例3】動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞 BBA10抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)漿細(xì)胞（即效應(yīng)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。細(xì)胞）。二、單

6、克隆抗體二、單克隆抗體11抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原抗原 反復(fù)注射動(dòng)物反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的從動(dòng)物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度體的特異性差、靈敏度低。低。12讀下面一段資料，讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B B細(xì)胞細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B B細(xì)胞只細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得

7、大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)單一抗體，必須用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆單克隆抗體：?jiǎn)蝹€(gè)抗體：?jiǎn)蝹€(gè)B B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體的抗體13提示提示1 1：對(duì)：對(duì)B B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：?jiǎn)栴}：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。計(jì)一個(gè)方案。2.2單克隆

8、抗體的制備單克隆抗體的制備14一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細(xì)胞又能大量增殖的細(xì)胞15為什么給小鼠注射特定的為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 會(huì)有幾種融合方式？會(huì)有幾種融合方式？ 雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？有何特點(diǎn)？來的？有何特點(diǎn)？ 是否所有的雜交瘤細(xì)胞都是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？能產(chǎn)生

9、專一性抗體？ 如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？大量的單克隆抗體？BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的抗體的B B細(xì)胞細(xì)胞（二選）：選（二選）：選能產(chǎn)生所需能產(chǎn)生所需專專一抗體的雜交一抗體的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞17單抗制備過程分哪幾步？單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？序是？ 182.3單克隆抗體

10、的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。度高，并能大量制備。19“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭主要用于治療主要用于治療癌癥治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞?！纠? 4】科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可

11、產(chǎn)生大量的單合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ）A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞B.B.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的B B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞【例例5 5】單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （ ）B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B BT T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 A.A. C C骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 D D雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞AD【例例6】用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下用動(dòng)物細(xì)胞工程技

12、術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤錯(cuò)誤的是（的是（ ）A A將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞B B用纖維素酶處理用纖維素酶處理B B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C C用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D D篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B22兩個(gè)過程兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗

13、體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)2324(1)(1)若若A A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B B細(xì)胞是取自小鼠細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的體內(nèi)的 細(xì)胞，細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射前，應(yīng)給小鼠注射_類物質(zhì)。類物質(zhì)。（2）d過程過程是一個(gè)是一個(gè)_過程，該過程的進(jìn)過程，該過程的進(jìn)行常用行常用_或或_的誘導(dǎo)。的誘導(dǎo)。(3)(3)假設(shè)僅考慮某兩

14、個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成 種種類型的類型的C C細(xì)胞，因此需用細(xì)胞，因此需用_培養(yǎng)基篩選出培養(yǎng)基篩選出D D細(xì)細(xì)胞用于培養(yǎng)，胞用于培養(yǎng)，D D細(xì)胞的名稱是細(xì)胞的名稱是 ，其特點(diǎn)，其特點(diǎn)是是_。效應(yīng)效應(yīng)B抗原抗原細(xì)胞融合細(xì)胞融合聚乙二醇聚乙二醇 滅活的病毒滅活的病毒選擇性選擇性 3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞25(4)(4)在培養(yǎng)時(shí)通過在培養(yǎng)時(shí)通過_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D細(xì)細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5 5項(xiàng)）項(xiàng)）_。（5 5）單克隆抗體在疾病的診斷

15、、治療和預(yù)防方面）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_。特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高無菌、無毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和無菌、無毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pHpH；適宜的氣體環(huán)境適宜的氣體環(huán)境261515、（1）單克隆抗體是指）單克隆抗體是指 。（2 2）制備單克隆抗體的步驟：）制備單克隆抗體的步驟：將將_注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少胞，其中至少1 1個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。將步驟獲得的將步驟獲得的B B淋巴細(xì)胞與步驟培養(yǎng)的骨

16、髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在在_的誘導(dǎo)下融合。的誘導(dǎo)下融合。將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在_培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本領(lǐng)。的本領(lǐng)。檢測(cè)和分離帶有抗檢測(cè)和分離帶有抗X X抗體的陽性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放抗體的陽性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。將陽性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克將陽性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。隆抗體?；瘜W(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)性質(zhì)單

17、一，特異性強(qiáng)的抗體抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇選擇性選擇性無限增殖無限增殖產(chǎn)生專一抗體產(chǎn)生專一抗體27（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養(yǎng)法，可獲得體外培養(yǎng)法，可獲得10 g/mL的抗體；的抗體；動(dòng)物體內(nèi)動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得誘生法可獲得520mmg/mL的抗體。你選擇的方法及原的抗體。你選擇的方法及原因是因是 。（4 4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因?yàn)樗怯眯∈蟮臑樗怯眯∈蟮腳細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是_，應(yīng)用于人體，會(huì)作為，應(yīng)用于人體，會(huì)作為 產(chǎn)產(chǎn)生生 ，解決這個(gè)問題的方法是，解決這個(gè)問題的方法是_。大量生產(chǎn)選，小規(guī)模生產(chǎn)選大量生產(chǎn)選，小規(guī)模生產(chǎn)選效應(yīng)效應(yīng)B蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)異物異物免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)采用人的效應(yīng)采用人的效應(yīng)B細(xì)胞制備細(xì)胞制備2815、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：體的實(shí)驗(yàn)