沙門氏菌和志賀氏菌的檢測

1、沙門氏菌和志賀菌檢測沙門氏菌和志賀菌檢測熊熊 長長 輝輝v腸道感染細菌是通過腸道感染細菌是通過糞糞-口傳播口傳播途徑進行傳播的一途徑進行傳播的一類細菌。類細菌。v主要包括主要包括腸桿菌腸桿菌科科細菌、霍亂弧菌、副溶血性弧細菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、幽門螺桿菌菌、幽門螺桿菌等。等。中與醫(yī)學有關(guān)的包括：中與醫(yī)學有關(guān)的包括：等。等。腸道感染細菌腸道感染細菌 腸腸 桿桿 菌菌 科科 共共 同同 特特 性性相似的形態(tài)染色相似的形態(tài)染色簡單的培養(yǎng)條件簡單的培養(yǎng)條件活潑的生化反應(yīng)活潑的生化反應(yīng)G-小桿菌，有鞭毛小桿菌，有鞭毛(痢疾桿菌外痢疾桿菌外) 菌毛，某些有莢膜，無芽胞菌毛，某些有莢膜，無芽胞需氧或兼

2、性厭氧，營養(yǎng)要求不高需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高 致病菌致病菌非致病菌非致病菌 乳糖乳糖發(fā)酵發(fā)酵實驗實驗陰性陰性陽性陽性 SS瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基（含膽鹽、乳糖、中性紅等）（含膽鹽、乳糖、中性紅等）4、抗原構(gòu)造復雜、抗原構(gòu)造復雜鞭毛抗原（H）IgG菌體抗原（O）IgMK或Vi抗原溶原性轉(zhuǎn)換溶原性轉(zhuǎn)換生化反應(yīng)性變異生化反應(yīng)性變異通過耐藥性變異耐藥性變異毒力性變異毒力性變異轉(zhuǎn)導轉(zhuǎn)導接合接合5、抵抗力、抵抗力：不強不強6、易變異：、易變異：通過通過引起引起沙門菌檢測 美國細菌學家美國細菌學家SalmonSalmon與與SmithSmith于于18851885年分離出年分離出豬霍亂沙門菌。豬霍亂沙門菌

3、。19901990年為紀念年為紀念SalmonSalmon，定名這，定名這類細菌為沙門菌屬。類細菌為沙門菌屬。 沙門菌是腸桿菌科的重要致病菌。包括傷寒、沙門菌是腸桿菌科的重要致病菌。包括傷寒、副傷寒甲、乙、丙型，腸炎，鼠傷寒等沙門菌，副傷寒甲、乙、丙型，腸炎，鼠傷寒等沙門菌，現(xiàn)今已發(fā)現(xiàn)現(xiàn)今已發(fā)現(xiàn)23242324個血清型。個血清型。 在世界各地的食物中毒中，沙門菌食物中毒常在世界各地的食物中毒中，沙門菌食物中毒常占首位或第二位。規(guī)定在藥品和食品中不得檢占首位或第二位。規(guī)定在藥品和食品中不得檢出沙門菌。美國每年報道病例出沙門菌。美國每年報道病例45 00045 000個左右，個左右，實際數(shù)量可能多

4、達實際數(shù)量可能多達200-300200-300萬。傷寒每年萬。傷寒每年400-400-500500例。例。生物學特性1.1.形態(tài)形態(tài) 兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌，（0.4-0.90.4-0.9）m m (1-3)m(1-3)m，無芽，無芽孢，周生鞭毛，一般無莢膜，少孢，周生鞭毛，一般無莢膜，少數(shù)有包膜。數(shù)有包膜。 光滑型的細菌大小均勻，粗光滑型的細菌大小均勻，粗糙型則大小不一，長短不一。糙型則大小不一，長短不一。培養(yǎng)和生化反應(yīng) 兼性厭氧，最適生長溫度兼性厭氧，最適生長溫度35353737，最適生長，最適生長PHPH為為6.86.87.8.7.8.本菌屬對營養(yǎng)的要求不高，

5、在本菌屬對營養(yǎng)的要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長的菌落為圓形、光滑、濕普通營養(yǎng)瓊脂上生長的菌落為圓形、光滑、濕潤，半透明，邊緣整齊的菌落，有時可出現(xiàn)粗潤，半透明，邊緣整齊的菌落，有時可出現(xiàn)粗糙型的菌落。在腸道選擇性培養(yǎng)基上菌落小至糙型的菌落。在腸道選擇性培養(yǎng)基上菌落小至中等，透明或半透明，乳糖不發(fā)酵，與志賀菌中等，透明或半透明，乳糖不發(fā)酵，與志賀菌的菌落相似，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在的菌落相似，有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在SSSS瓊脂上形成中心黑色的菌落。瓊脂上形成中心黑色的菌落?？乖瓨?gòu)造 菌體抗原（菌體抗原（o o）：不被乙醇、不被乙醇、0.1%0.1%石炭酸所破石炭酸所破壞。與特異性抗血清呈

6、顆粒狀凝集，形成慢，壞。與特異性抗血清呈顆粒狀凝集，形成慢，不易搖散?，F(xiàn)已知有不易搖散?，F(xiàn)已知有5050多種，多數(shù)沙門菌含有多種，多數(shù)沙門菌含有兩種以上的兩種以上的O O抗原，有的抗原，有的O O抗原是一種菌獨有的，抗原是一種菌獨有的，有的是幾種菌共有的，凡含有共同特異性抗原有的是幾種菌共有的，凡含有共同特異性抗原成分的血清型歸為一個群，可將沙門菌化分為成分的血清型歸為一個群，可將沙門菌化分為4242群，按群，按A-ZA-Z排列，排列，Z Z以后的順序以以后的順序以O(shè) O5151-O-O6767表示。表示。引起人類沙門菌病的引起人類沙門菌病的95%95%以上都在以上都在A-F 6A-F 6個群

7、內(nèi)。個群內(nèi)。H H抗原：為不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原，加熱或用乙抗原：為不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原，加熱或用乙醇處理均被破壞。沙門菌醇處理均被破壞。沙門菌H H抗原有兩個相抗原有兩個相, ,第一第一相特異性較高稱特異相相特異性較高稱特異相, ,用小寫英文字母用小寫英文字母a a、b b、c c表示，直至表示，直至z z，z z以衙用以衙用z z加阿拉伯數(shù)字表示，加阿拉伯數(shù)字表示，如如z1z1、z2z2、z3z3等，第二相抗原為沙門菌共有，等，第二相抗原為沙門菌共有，稱非特異相，直接用稱非特異相，直接用1 1、2 2、3 3表示。同時有第表示。同時有第一相和第二相一相和第二相H H抗原的細菌稱為雙相菌，僅有抗原

8、的細菌稱為雙相菌，僅有一相者稱單相菌。一相者稱單相菌。H H抗原是定型的依據(jù)，其刺抗原是定型的依據(jù)，其刺激機體產(chǎn)生的抗體以激機體產(chǎn)生的抗體以IgGIgG為主，與相應(yīng)的抗血為主，與相應(yīng)的抗血清呈絮狀反應(yīng)。清呈絮狀反應(yīng)。 表面抗原：在沙門菌屬中已被證實的表面抗原有表面抗原：在沙門菌屬中已被證實的表面抗原有ViVi抗原、抗原、M M抗原、抗原、5 5抗原三種抗原三種 ViVi抗原：是一種不耐熱的酸性多糖聚合物，加熱抗原：是一種不耐熱的酸性多糖聚合物，加熱60306030分分鐘或經(jīng)石炭酸處理即被破壞，經(jīng)人工培養(yǎng)基傳代后也易失鐘或經(jīng)石炭酸處理即被破壞，經(jīng)人工培養(yǎng)基傳代后也易失去。新分離的傷寒及副傷寒沙門

9、菌常帶有此抗原。去。新分離的傷寒及副傷寒沙門菌常帶有此抗原。ViVi抗原抗原位于菌體的最表層，有抗吞噬及保護細菌免受相應(yīng)抗體和位于菌體的最表層，有抗吞噬及保護細菌免受相應(yīng)抗體和補體的溶菌作用。補體的溶菌作用。ViVi抗原存在時可阻止抗原存在時可阻止O O抗原與相應(yīng)抗體抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，故在沙門血清學鑒定時應(yīng)加以注意，需事先加發(fā)生凝集，故在沙門血清學鑒定時應(yīng)加以注意，需事先加熱破壞熱破壞ViVi抗原之后，抗原之后，O O抗原才得以與相應(yīng)的抗原才得以與相應(yīng)的O O抗血清發(fā)生凝抗血清發(fā)生凝集。帶集。帶ViVi抗原的沙門菌亦可用抗原的沙門菌亦可用ViVi噬菌體進行分型，有助于噬菌體進行分型，有助

10、于流行病學調(diào)查和追蹤傳染源。流行病學調(diào)查和追蹤傳染源。qM M抗原：粘液抗原，在菌型鑒定上無特殊抗原：粘液抗原，在菌型鑒定上無特殊意義。意義。q5 5抗原：抗原：4.抵抗力 不強，加熱不強，加熱601h601h，或，或651520min651520min即即被殺死。在水中能存活被殺死。在水中能存活2323周，在糞便中周，在糞便中可存活可存活1212月。對膽鹽和煌綠等染料有抵月。對膽鹽和煌綠等染料有抵抗力。因此可用于制備沙門菌的選擇培抗力。因此可用于制備沙門菌的選擇培養(yǎng)基。養(yǎng)基。5.變異性 S-RS-R變異變異: :自臨床標本初次分離的菌株一般都是光滑型，經(jīng)人工培自臨床標本初次分離的菌株一般都是

11、光滑型，經(jīng)人工培養(yǎng)，傳代后可逐漸變民粗糙型菌落。此時菌體表面的特異多糖抗養(yǎng)，傳代后可逐漸變民粗糙型菌落。此時菌體表面的特異多糖抗原喪失，在生理鹽水中可出現(xiàn)自凝。原喪失，在生理鹽水中可出現(xiàn)自凝。 H-OH-O變異：是指有鞭毛的沙門菌失去鞭毛的變異變異：是指有鞭毛的沙門菌失去鞭毛的變異 位相變異：具有雙相位相變異：具有雙相H H抗原的沙門菌變成只有其中某一相的單相抗原的沙門菌變成只有其中某一相的單相菌，稱位相變異。在沙門菌血清學分型時，如遇到單相菌，特別菌，稱位相變異。在沙門菌血清學分型時，如遇到單相菌，特別是只有第是只有第相（非特異相）抗原時，需反復分離和誘導出第相（非特異相）抗原時，需反復分離

12、和誘導出第相相（特異相）抗原方可作出鑒定。（特異相）抗原方可作出鑒定。 V-WV-W變異：是指沙門菌失去變異：是指沙門菌失去ViVi抗原的變異。初次分離得到的具有抗原的變異。初次分離得到的具有ViVi抗原、抗原、O O抗原不凝集的沙門菌稱抗原不凝集的沙門菌稱V V型菌；型菌；ViVi抗原部分喪失，與抗原部分喪失，與O O抗原血清發(fā)生凝集又可與抗原血清發(fā)生凝集又可與ViVi抗血清凝集者稱抗血清凝集者稱VWVW型菌。型菌。 ViVi抗原完抗原完全喪失，與全喪失，與O O抗原血清發(fā)生凝集又與抗原血清發(fā)生凝集又與ViVi抗血清不凝集者稱抗血清不凝集者稱W W型菌。型菌。V-WV-W變異的過程是變異的過

13、程是V V型菌經(jīng)人工培養(yǎng)，逐漸喪失部分型菌經(jīng)人工培養(yǎng)，逐漸喪失部分ViVi抗原而成為抗原而成為VWVW型，進而喪失全部型，進而喪失全部ViVi抗原而成為抗原而成為W W型菌。型菌。 二、致病性與免疫性二、致病性與免疫性 致病物質(zhì)： 1.侵襲力：菌毛幫助細菌黏附腸粘膜上皮細胞 Vi抗原 可阻斷相應(yīng)抗體和補體的作用，抵抗吞噬細胞的吞噬作用。 內(nèi)毒素：可激活補體系統(tǒng)、吸引白細胞，引起腸道炎癥，吸收入血可引起全身中毒，發(fā)熱、白細胞減少、中毒性休克。 腸毒素：類似于大腸桿菌腸毒素。 2. 2. 所致疾病所致疾病 1) 1) 腸熱癥（傷寒和副傷寒）：由傷寒沙門菌、甲、乙、腸熱癥（傷寒和副傷寒）：由傷寒沙門

14、菌、甲、乙、丙型副傷寒沙門菌引起。丙型副傷寒沙門菌引起。 2 2）食物中毒（急性胃腸炎）：由鼠傷寒沙門菌、豬霍亂）食物中毒（急性胃腸炎）：由鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌引起，有發(fā)熱、惡心嘔吐、水樣瀉，嚴沙門菌、腸炎沙門菌引起，有發(fā)熱、惡心嘔吐、水樣瀉，嚴重者致脫水、休克、腎衰而死亡（主見于嬰兒、老人等），重者致脫水、休克、腎衰而死亡（主見于嬰兒、老人等），但，大多但，大多2323天自愈。天自愈。 3 3）敗血癥）敗血癥 ：常由豬霍亂沙門菌、丙型副傷寒沙門菌、：常由豬霍亂沙門菌、丙型副傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌等引起。有高熱、寒戰(zhàn)、貧血等鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌等引起。有高熱

15、、寒戰(zhàn)、貧血等嚴重癥狀。多見于兒童及免疫力低下者。嚴重癥狀。多見于兒童及免疫力低下者。 免疫性：免疫性：主要依靠細胞免疫，牢固。主要依靠細胞免疫，牢固。 二、微生物學檢查 標本采集 根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同分根據(jù)疾病的類型、病情和病程的不同分別采集不同的標本。分離培養(yǎng)原則上于發(fā)病第別采集不同的標本。分離培養(yǎng)原則上于發(fā)病第1 1周采血，第周采血，第2 2周取糞便或尿液，全程均可作骨周取糞便或尿液，全程均可作骨髓培養(yǎng)。血清學診斷應(yīng)在病程的不同時期分別髓培養(yǎng)。血清學診斷應(yīng)在病程的不同時期分別采集采集2 23 3份標本。份標本。血液、骨髓血液、骨髓糞、尿、可疑食物糞、尿、可疑食物增菌培養(yǎng)增菌培

16、養(yǎng)（膽鹽葡萄糖肉湯）（膽鹽葡萄糖肉湯）分分 離離 培培 養(yǎng)養(yǎng)（SS、EMB、MAC、血平板）、血平板）增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)(SF、CN、TT)37 1824h可疑菌落可疑菌落初初 步步 鑒鑒 定定（涂染檢、（涂染檢、KIA、MIU、IMViC等生化反應(yīng)、等生化反應(yīng)、A-F多價血清凝集）多價血清凝集） 最最 終終 鑒鑒 定定腸道桿菌系統(tǒng)生化反應(yīng)腸道桿菌系統(tǒng)生化反應(yīng) 單價因子血清定血清型單價因子血清定血清型37 1824h37 1824h37 1824h檢驗程序檢驗程序檢驗方法 直接檢測直接檢測 將病人標本或肉湯增菌培養(yǎng)物直將病人標本或肉湯增菌培養(yǎng)物直接用商品乳膠凝集試劑進行試驗，可快速檢出接用商品乳

17、膠凝集試劑進行試驗，可快速檢出沙門菌和志賀菌。沙門菌和志賀菌。檢驗方法 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 常規(guī)的腸道選擇鑒別培養(yǎng)基能有常規(guī)的腸道選擇鑒別培養(yǎng)基能有效地分離沙門菌。常用腸道鑒別培養(yǎng)基（效地分離沙門菌。常用腸道鑒別培養(yǎng)基（MACMAC或或EMBEMB）和選擇培養(yǎng)基（）和選擇培養(yǎng)基（SSSS等），強選擇性培等），強選擇性培養(yǎng)基（孔雀綠和亞硫酸鉍等）僅適用范圍于暴養(yǎng)基（孔雀綠和亞硫酸鉍等）僅適用范圍于暴發(fā)流行時。發(fā)流行時。分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)（1 1）血液和骨髓：血液）血液和骨髓：血液5ml5ml或骨髓液或骨髓液0.5ml0.5ml膽汁葡萄糖膽汁葡萄糖肉湯或胰化蛋白大豆肉湯中，肉湯或胰化蛋白大豆肉湯中，3

18、5-3735-37孵育，若有生孵育，若有生長（多在長（多在2424日內(nèi)出現(xiàn)）則移種至血瓊脂平板和日內(nèi)出現(xiàn)）則移種至血瓊脂平板和SSSS培養(yǎng)培養(yǎng)基中。基中。（2 2）糞便或肛拭：最好作床邊接種，或用卡）糞便或肛拭：最好作床邊接種，或用卡- -布（布（Cary-Cary-BlairBlair）運送培養(yǎng)基。）運送培養(yǎng)基。（3 3）尿液和體液：無菌采集的中段尿、膽汁、腦脊液、）尿液和體液：無菌采集的中段尿、膽汁、腦脊液、胸腹水等經(jīng)胸腹水等經(jīng)3000r/min3000r/min離心沉淀后接種于增菌液、血瓊離心沉淀后接種于增菌液、血瓊脂和腸道選擇培養(yǎng)基。脂和腸道選擇培養(yǎng)基。（4 4）食物等固體物質(zhì)：磨碎后

19、加）食物等固體物質(zhì)：磨碎后加10ml10ml無菌生理鹽水混勻，無菌生理鹽水混勻，接種于增菌液和腸道選擇培養(yǎng)基。接種于增菌液和腸道選擇培養(yǎng)基。鑒定與分型生化鑒定 疑為沙門菌的可疑菌落可用手工或商品生化反應(yīng)進行疑為沙門菌的可疑菌落可用手工或商品生化反應(yīng)進行生化鑒定，常用三糖鐵生化鑒定，常用三糖鐵(TSI)(TSI)瓊脂和賴氨酸瓊脂來初步鑒定。瓊脂和賴氨酸瓊脂來初步鑒定。本菌在本菌在TSITSI上典型的生化模式為：堿上典型的生化模式為：堿/ /酸，葡萄糖產(chǎn)氣，硫酸，葡萄糖產(chǎn)氣，硫化氫陽性（化氫陽性（K/A+K/A+）。少數(shù)菌株為乳糖發(fā)酵型，呈（）。少數(shù)菌株為乳糖發(fā)酵型，呈（A/AA/A），），這些菌

20、株的硫化氫往往陰性。在賴氨酸鐵瓊脂上的典型生這些菌株的硫化氫往往陰性。在賴氨酸鐵瓊脂上的典型生化模式為化模式為K/KK/K和硫化氫陽性，但亦存在賴氨酸和硫化氫陰性和硫化氫陽性，但亦存在賴氨酸和硫化氫陰性的菌株（副傷寒的菌株（副傷寒A A沙門菌）。初步反應(yīng)疑為沙門菌的菌株必沙門菌）。初步反應(yīng)疑為沙門菌的菌株必須經(jīng)全面生化反應(yīng)證實和血清學分型后才能發(fā)出報告須經(jīng)全面生化反應(yīng)證實和血清學分型后才能發(fā)出報告。| 乳糖乳糖: :蔗糖蔗糖: :葡萄糖葡萄糖=10 : 10 : 1=10 : 10 : 1| 以酚紅作指示劑以酚紅作指示劑| 當待檢菌發(fā)酵乳糖或蔗糖時，產(chǎn)酸量多，使整個培養(yǎng)當待檢菌發(fā)酵乳糖或蔗糖時

21、，產(chǎn)酸量多，使整個培養(yǎng)基均呈黃色；如僅發(fā)酵葡萄糖，則產(chǎn)酸少，斜面由于基均呈黃色；如僅發(fā)酵葡萄糖，則產(chǎn)酸少，斜面由于細菌生長分解蛋白胨而釋放氨，酚紅顯堿性紅色、而細菌生長分解蛋白胨而釋放氨，酚紅顯堿性紅色、而底層黃色底層黃色| 細菌對培養(yǎng)基中硫代硫酸鈉或硫酸鈉、亞硫酸鈉的還細菌對培養(yǎng)基中硫代硫酸鈉或硫酸鈉、亞硫酸鈉的還原作用，生成硫化氫。硫化氫遇硫酸亞鐵或檸檬酸鐵原作用，生成硫化氫。硫化氫遇硫酸亞鐵或檸檬酸鐵銨產(chǎn)生不溶性黑色硫化亞鐵。銨產(chǎn)生不溶性黑色硫化亞鐵。生化反應(yīng)生化反應(yīng)初步鑒別：三糖鐵瓊脂初步鑒別：三糖鐵瓊脂斜面紅色、底層黃色，出現(xiàn)部分黑色或全部黑斜面紅色、底層黃色，出現(xiàn)部分黑色或全部黑色

22、色斜面紅色、底層黃色，無黑色斜面紅色、底層黃色，無黑色斜面、底層均黃色，出現(xiàn)部分黑色或全部黑色斜面、底層均黃色，出現(xiàn)部分黑色或全部黑色 除沙門菌外，變形桿菌、檸檬酸鹽菌、志賀菌除沙門菌外，變形桿菌、檸檬酸鹽菌、志賀菌等也可出現(xiàn)上述反應(yīng)。等也可出現(xiàn)上述反應(yīng)。 吲哚試驗：陰性吲哚試驗：陰性志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生不產(chǎn)生H H2 2S S。大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生產(chǎn)生H H2 2S S 。沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖、蔗糖，大

23、多數(shù)產(chǎn)生沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖、蔗糖，大多數(shù)產(chǎn)生H H2 2S S ，多數(shù)產(chǎn)氣。，多數(shù)產(chǎn)氣。下面照片所示下面照片所示2-3-42-3-4，可能是大腸桿菌、沙門氏菌還是志賀氏，可能是大腸桿菌、沙門氏菌還是志賀氏菌？菌？沙門菌屬細菌的初步鑒定沙門菌屬細菌的初步鑒定MIU觸酶氧化酶硝酸鹽硝酸鹽還原還原診斷血清凝集診斷血清凝集KIA斜面斜面 底層底層 產(chǎn)氣產(chǎn)氣 H2S甲型副傷寒KA+-/+-+AF多價+A群+乙型副傷寒KA+-+AF多價+B群+丙型副傷寒KA+-+AF多價+C群+vi+豬霍亂沙門菌KA+-/+-+AF多價+C群+傷寒沙門菌KA-+/-+-+AF多價+D群+vi+其他沙門菌K

24、A+-+AF多價+腸炎+鑒定與分型鑒定與分型血清學分型血清學分型2.2.血清學分型血清學分型 用抗血清對所分離菌種的用抗血清對所分離菌種的O O抗原、表面抗原、表面ViVi抗原，第一相和第二相抗原，第一相和第二相H H抗原進行凝集試驗（抗原進行凝集試驗（O O：ViVi：第一相第一相H H：第二相：第二相H H）。多數(shù)實驗室先用多價）。多數(shù)實驗室先用多價O O抗血清抗血清（A-FA-F）對沙門菌分離株進行分群。）對沙門菌分離株進行分群。95%95%以上的沙門菌臨以上的沙門菌臨床分離株都屬床分離株都屬A-FA-F群，多價抗血清凝集后再用分別代表群，多價抗血清凝集后再用分別代表每一個每一個O O血

25、清群的單價因子血清定群。血清群的單價因子血清定群。O O分群之后再用分群之后再用H H因子血清檢查第一相和第二相因子血清檢查第一相和第二相H H抗原，綜合抗原，綜合O O、H H及及ViVi因因子血清的檢查結(jié)果，判斷血清型。子血清的檢查結(jié)果，判斷血清型。鑒定與分型鑒定與分型血清型分型血清型分型 注意：試驗時與多價血清不凝集時，可在玻璃試管內(nèi)注意：試驗時與多價血清不凝集時，可在玻璃試管內(nèi)用生理鹽水將細菌制成嘗菌液，放入沸水中用生理鹽水將細菌制成嘗菌液，放入沸水中1530min1530min，冷卻后再次做凝集試驗。因冷卻后再次做凝集試驗。因ViVi抗原能阻斷抗原能阻斷O O凝集反應(yīng)，凝集反應(yīng)，而煮

26、沸處理能破壞菌體表面的而煮沸處理能破壞菌體表面的ViVi抗原。僅出現(xiàn)單相抗原。僅出現(xiàn)單相H H抗抗原（第一相或第二相）時，需用位相分離的方法誘導原（第一相或第二相）時，需用位相分離的方法誘導出另一相抗原后再進行檢查。出另一相抗原后再進行檢查。鑒定與分型鑒定與分型ViVi噬菌體分型噬菌體分型 標準的標準的ViVi噬菌體共有噬菌體共有3333型，該法可用于流行病型，該法可用于流行病學調(diào)查和追蹤傳染源，常在一些特殊的參考實驗室內(nèi)學調(diào)查和追蹤傳染源，常在一些特殊的參考實驗室內(nèi)進行，一般醫(yī)院的微生物實驗室不列為常規(guī)檢查項目。進行，一般醫(yī)院的微生物實驗室不列為常規(guī)檢查項目。血清學診斷血清學診斷 用已知傷寒

27、、副傷寒的用已知傷寒、副傷寒的O O、H H抗原，檢測受檢血清中有抗原，檢測受檢血清中有無相應(yīng)的抗體的半定量試管內(nèi)凝集試驗，稱為肥達反無相應(yīng)的抗體的半定量試管內(nèi)凝集試驗，稱為肥達反應(yīng)。應(yīng)。 方法方法 將受檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，每個稀將受檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，每個稀釋度需作出努力個復管，分別加入等量的傷寒沙門菌釋度需作出努力個復管，分別加入等量的傷寒沙門菌O O、H H抗原及副傷寒沙門菌甲、乙、丙的抗原及副傷寒沙門菌甲、乙、丙的H H抗原進行試管內(nèi)抗原進行試管內(nèi)凝集，凡血清最高稀釋度出現(xiàn)明顯凝集者為凝集將價。凝集，凡血清最高稀釋度出現(xiàn)明顯凝集者為凝集將價。1 1）正常凝集價）正常凝集

28、價 正常人由于隱性感染或預防接種，血清中通?？珊Ｈ擞捎陔[性感染或預防接種，血清中通?？珊幸欢ㄋ降哪贵w，正常的凝集價可因不同地區(qū)而有差異有一定水平的凝集抗體，正常的凝集價可因不同地區(qū)而有差異 一般情況下，傷寒沙門菌一般情況下，傷寒沙門菌O O抗體的凝集價應(yīng)在抗體的凝集價應(yīng)在180180以上，以上，H H抗體抗體凝集價在凝集價在11601160以上，引起副傷寒沙門菌以上，引起副傷寒沙門菌H H抗體凝集價在抗體凝集價在180180以以上才有診斷意義上才有診斷意義 2 2）動態(tài)觀察）動態(tài)觀察 有時單次效價不能定論，可在病程中逐周檢查。若效有時單次效價不能定論，可在病程中逐周檢查。若效價逐次

29、增加或恢復期效價比初次價逐次增加或恢復期效價比初次44倍者有意義倍者有意義 O O與與H H抗體的診斷意義：抗體的診斷意義： O O抗體出現(xiàn)較早，為抗體出現(xiàn)較早，為IgMIgM，持續(xù)時間短（約半年），消，持續(xù)時間短（約半年），消退后不易受非特異性病原刺激而重現(xiàn)。退后不易受非特異性病原刺激而重現(xiàn)。H H抗體出現(xiàn)較晚，抗體出現(xiàn)較晚，為為IgGIgG，持續(xù)時間長達數(shù)年，消退后易受非特異性病原刺，持續(xù)時間長達數(shù)年，消退后易受非特異性病原刺激而重現(xiàn)。激而重現(xiàn)。 O O、H H凝集價均超過正常值，則腸熱癥的可能性大：凝集價均超過正常值，則腸熱癥的可能性大：若兩者均底，腸熱癥的可能性?。喝魞烧呔?，腸熱癥的

30、可能性?。喝羧鬙 O不高不高 H H高，可高，可能是預防接種或非特異性反應(yīng)；能是預防接種或非特異性反應(yīng)；若若 O O高高H H不高，則可能不高，則可能為傷寒早期，或與其他沙門菌有交叉反應(yīng)。為傷寒早期，或與其他沙門菌有交叉反應(yīng)。 結(jié)果判斷及報告結(jié)果判斷及報告（1 1）生化試驗符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬）生化試驗符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬A-FA-F多價多價O O血血清凝集試驗陽性反應(yīng)，做出檢出沙門菌報告。清凝集試驗陽性反應(yīng)，做出檢出沙門菌報告。（2 2）生化試驗不符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬）生化試驗不符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬A-FA-F多價多價O O血清凝集試驗陰性反應(yīng)，做出未檢出沙門菌報告。

31、血清凝集試驗陰性反應(yīng)，做出未檢出沙門菌報告。（3 3）生化試驗符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬）生化試驗符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬A-FA-F多價多價O O血血清凝集試驗陰性反應(yīng)；或生化試驗不符合沙門菌屬反清凝集試驗陰性反應(yīng)；或生化試驗不符合沙門菌屬反應(yīng)，沙門菌屬應(yīng)，沙門菌屬A-FA-F多價多價O O血清凝集試驗陽性反應(yīng)；均應(yīng)血清凝集試驗陽性反應(yīng)；均應(yīng)進一步鑒定后再做結(jié)論報告。進一步鑒定后再做結(jié)論報告。 對于疑似菌株或須進一步鑒定的菌株，對于疑似菌株或須進一步鑒定的菌株，根據(jù)待檢菌已測試的特性，可選擇增添根據(jù)待檢菌已測試的特性，可選擇增添一些必要的生化試驗。一些必要的生化試驗。 糖醇發(fā)酵試驗糖醇發(fā)酵

32、試驗 明膠液化試驗明膠液化試驗 硝酸鹽還原試驗硝酸鹽還原試驗 甲基紅試驗甲基紅試驗 VPVP試驗試驗檸檬酸鹽利用試驗檸檬酸鹽利用試驗半乳糖苷酶試驗半乳糖苷酶試驗苯丙氨酸脫氨酶試驗苯丙氨酸脫氨酶試驗丙二酸鈉試驗丙二酸鈉試驗有機酸鹽利用試驗有機酸鹽利用試驗甘油品紅試驗甘油品紅試驗注意事項注意事項 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 對照對照 挑取菌落挑取菌落 純培養(yǎng)純培養(yǎng) 嚴格按照規(guī)定進行嚴格按照規(guī)定進行 避免對環(huán)境造成污染避免對環(huán)境造成污染志賀菌屬檢測 志賀菌屬是人類細菌性痢疾最常見的病原菌，通稱志賀菌屬是人類細菌性痢疾最常見的病原菌，通稱痢疾桿菌。根據(jù)生化反應(yīng)與血清學試驗該屬細菌分為痢痢疾桿菌。根據(jù)生化反應(yīng)與血清學

33、試驗該屬細菌分為痢疾、福氏、鮑氏和宋內(nèi)志賀菌四群。疾、福氏、鮑氏和宋內(nèi)志賀菌四群。CDCCDC分類系統(tǒng)分類系統(tǒng)（19891989）將生化性狀相近的）將生化性狀相近的A A、B B、C C群歸為一群，統(tǒng)稱群歸為一群，統(tǒng)稱為為A A、B B、C C血清群，將鳥氨酸脫羧酶和血清群，將鳥氨酸脫羧酶和-半乳糖苷酶均半乳糖苷酶均陽性的宋內(nèi)志賀菌單列出來。我國以福氏和宋內(nèi)志賀菌陽性的宋內(nèi)志賀菌單列出來。我國以福氏和宋內(nèi)志賀菌引起的菌痢引起的菌痢- -最為常見。最為常見。 細菌性痢疾是一種常見病，主細菌性痢疾是一種常見病，主要流行于發(fā)展中國家，全世界年病例數(shù)超過要流行于發(fā)展中國家，全世界年病例數(shù)超過2 2億，

34、其中億，其中500500萬例需住院治療，年死亡病例達萬例需住院治療，年死亡病例達6565萬。萬。 生物學性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)和染色 革蘭陰性桿菌，菌體短小，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，有菌毛。培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 兼性厭氧、營養(yǎng)要求不高兼性厭氧、營養(yǎng)要求不高 在腸道選擇培養(yǎng)基上呈無色半透明在腸道選擇培養(yǎng)基上呈無色半透明S S型菌落菌型菌落菌落落 SSSS平板無色菌落平板無色菌落MacMac平板無色菌落平板無色菌落EMBEMB平板無色菌落平板無色菌落 宋內(nèi)志賀菌多呈扁平、宋內(nèi)志賀菌多呈扁平、R R型菌落，個別菌株可型菌落，個別菌株可遲分解乳糖遲分解乳糖 生化反應(yīng)生化反應(yīng) 氧化酶試驗（）氧化酶試驗（） 分解葡萄糖

35、、不分解乳糖，（個別菌株分解葡萄糖、不分解乳糖，（個別菌株遲分解乳糖或不分解乳糖）遲分解乳糖或不分解乳糖） KIAKIA：KAKA MIUMIU： / / IMViCIMViC：/ / 除除A A群外，均能發(fā)酵甘露醇群外，均能發(fā)酵甘露醇抗原結(jié)構(gòu) 只有O、K抗原，無H抗原 K抗原可阻斷O抗原與相應(yīng)抗體的凝集 根據(jù)O抗原分4群和44型志賀菌抗原分類抵抗力 對理化因素抵抗力弱 尤其對酸敏感 對消毒劑敏感 易產(chǎn)生耐藥性變異性 S-R變異 宋內(nèi)志賀的菌落由光滑型變?yōu)榇植谛蜑镾-R變異,此外尚伴有生化特征、抗原構(gòu)造及致病性的變異，而出現(xiàn)不典型菌株。 耐藥性變異 志賀菌于50年代首先出現(xiàn)對磺胺的耐藥性，后發(fā)

36、展成多重耐藥性，在70年代和80年代分別出現(xiàn)對四環(huán)素和氨芐青霉素的耐藥性，最近又出現(xiàn)對SMZ-TMP的耐藥性。志賀菌的多重耐藥性的問題已成為一個嚴重的醫(yī)學問題臨床意義 致病物質(zhì)： 侵襲力：菌毛、大質(zhì)粒 內(nèi)毒素： 志賀毒素：屬外毒素，由A群志賀菌產(chǎn)生，具有腸毒、細胞毒、神經(jīng)毒作用急性菌痢急性菌痢 發(fā)熱、腹痛、里急后重、膿血粘液便。發(fā)熱、腹痛、里急后重、膿血粘液便。急性中毒性菌痢急性中毒性菌痢 休克為主要表現(xiàn)的全身中毒癥狀；小兒多見，休克為主要表現(xiàn)的全身中毒癥狀；小兒多見，為內(nèi)毒素在特殊情況下的反應(yīng)。為內(nèi)毒素在特殊情況下的反應(yīng)。慢性菌痢慢性菌痢 病程超過病程超過2 2個月，反復發(fā)作或遷延不愈。個月

37、，反復發(fā)作或遷延不愈。攜帶者攜帶者 恢復期帶菌、慢性帶菌、健康帶菌恢復期帶菌、慢性帶菌、健康帶菌所致疾病所致疾病免免 疫疫 性性 志賀菌感染局限與腸粘膜，志賀菌感染局限與腸粘膜，一般不入血一般不入血，SIgASIgA為主，病后為主，病后免免疫力短暫疫力短暫。致病性與免疫性致病性與免疫性1 1、侵襲力：、侵襲力：菌毛菌毛有利于菌粘附回結(jié)腸粘膜有利于菌粘附回結(jié)腸粘膜2 2、毒、毒 素：素：加重局部和全身癥狀加重局部和全身癥狀內(nèi)毒素內(nèi)毒素作用于腸壁作用于腸壁通透性增加通透性增加粘膜炎癥、潰瘍粘膜炎癥、潰瘍局部局部全身全身內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素血癥外毒素（外毒素（A A群群1 1型）型）與內(nèi)毒素協(xié)同作用與內(nèi)

38、毒素協(xié)同作用 致致 病病 物物 質(zhì)質(zhì)肛門括約肌肛門括約肌臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)急性細菌性痢疾急性細菌性痢疾急性典型：發(fā)熱、腹痛、膿血粘液便急性典型：發(fā)熱、腹痛、膿血粘液便非急性典型：小兒非急性典型：小兒中毒型中毒型 成人成人易誤漏診易誤漏診慢性細菌性痢疾：病程遷移二月以上慢性細菌性痢疾：病程遷移二月以上傳染源傳染源: :患者與帶菌者患者與帶菌者 所所 致致 疾疾 病病免疫力免疫力:SIgA中毒性痢疾病人中毒性痢疾病人微生物學檢驗 標本采集 糞便或肛拭 新鮮膿血便 立即送檢或床邊接種 保存于30甘油鹽水或卡-布培養(yǎng)基及時送及時送/ /暫用暫用3%3%甘油緩沖水保存甘油緩沖水保存SSSS平板（無色透明小菌落）平板（無色透明小菌落）血清學反應(yīng)（玻片凝集）血清學反應(yīng)（玻片凝集） 檢檢 測測 報報 告告分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)新鮮膿血便新鮮膿血便/ /肛拭肛拭雙