食品安全檢測 第二章樣品前處理技術

1、第二章 樣品前處理技術樣品前處理：樣品的制備和對樣品中待測組分進行提取、凈化和濃縮的過程。在整個食品安全性的檢測分析中，70%80%甚至更多的時間用在樣品的前處理上，而給實驗帶來的誤差有60%以上來自樣品的前處理。樣品前處理的目的就是濃縮被測物質、消除基質干擾、保護儀器、提高方法的準確性、精密度、選擇性和靈敏度。主要的樣品前處理方法：1、超聲萃??；2、微波萃?。?、液固萃取；4、加速溶劑萃??；5、超臨界萃??；6、固相萃??；7、固相微萃取；8、基質分散固相萃??；9、液液萃??；10、微量化學法技術；11、液液萃??；12、柱層析樣品制備的基本要求1、食品危害殘留物質分析,特點：基體復雜；目標化合物檢

2、測限量越來越嚴格；某些危害殘留物質在食品樣品中存在的濃度極低；各目標化合物的性質差異較大；可能同時存在多種組分。2、評價前處理方法是否合理,應考慮的因素：操作是否簡便、省時；被測組分的回收率是否高；成本是否低廉；對人體及環(huán)境是否產(chǎn)生影響。萃取技術萃?。河糜袡C溶劑等方法把被測物從試樣中提取出來，凈化后供測定使用。萃取技術要求溶劑盡可能選擇性溶解殘留危害物質，而不是不溶解和少量溶解食品基體，萃取效果的關鍵是溶劑的選擇，殘留危害物質提取回收率的大小直接決定整個分析步驟的精確度。分類：1、液固萃??；2、超聲萃??；3、微波萃?。?、液液萃??；5、加速溶劑萃??；6、超臨界萃取1、萃取技術超聲萃取超聲萃?。?/p>

3、SAE）就是在溶劑萃取過程中引入超聲波，提高溶劑萃取的過程?；驹恚嚎栈?、熱效應、機械作用。高頻聲波空化作用產(chǎn)生的極大壓力造成生物細胞及整個生物體破碎，同時超聲波產(chǎn)生的振動作用加強了胞內物質的釋放、擴散和溶解。影響SAE的因素：超聲波的強度、頻率、提取時間、提取溶劑等。􀁺SAE的操作方法：將樣品和溶劑放于密閉的容器中，置于一定能量的超聲波水浴中，數(shù)秒后拿出，再放入、拿出2、萃取技術微波萃取微波萃?。∕AE）就是在溶劑萃取過程中引入微波，加速溶劑萃取的過程?；驹恚海?）微波輻射能穿透萃取介質到達物料內部，物料吸收微波能，內部溫度迅速上升，細胞內部壓力增大而破裂；（2）

4、微波所產(chǎn)生的電磁場，加速被萃取成分向萃取溶劑界面的擴散速率。微薄萃取工藝流程：微波萃取的設備：微波萃取罐、連續(xù)微波萃取線。微波提取成套生產(chǎn)線工藝組成流程：粉碎、預處理、微波提取、料液分離、濃縮系統(tǒng)等五個環(huán)節(jié)。MAE的影響因素：萃取溶劑、萃取溫度、時間、溶劑體積、試樣中的水分或濕度、基體物質等。微波提取優(yōu)點：微波輔助提取是里外同時加熱。沒有高溫熱源，消除了熱梯度，有效地保護功能成分；由于微波可以穿透式加熱，提取的時間大大節(jié)??；微波能有超常的提取能力，大大簡化工藝流程。微波提取沒有熱慣性易控制，所有參數(shù)均可數(shù)據(jù)化；微波提取物純度高，可水提、醇提、油提；溶劑用量少（可較常規(guī)方法少5090）；微波設備

5、是用電設備，不需配備鍋爐，無污染、安全、屬于綠色工程；生產(chǎn)線組成簡單，節(jié)省投資。3、萃取技術加速溶劑萃取加速溶劑萃?。ˋSE）就是采用常規(guī)溶劑在高溫高壓條件下進行自動萃取的技術。􀁺 基本原理：（1）提高溫度（50200 ）能加速溶質分子的解析動力學過程，減小解析過程的活化能；降低溶劑的粘度，減小溶劑進入樣品基體的阻力；增加溶劑進入樣品基體的擴散；降低溶劑和基體樣品的表面張力，有利于萃取物與溶劑的接觸。（2）升高壓力（10.320.6 MPa）使溶劑的沸點升高；可保證易揮發(fā)性物質不揮發(fā)；在壓力下可快速充滿萃取池。4、萃取技術超臨界流體萃取超臨界流體萃取（SPE）是以超臨界流體作

6、為萃取劑，把所需要的組分從復雜的樣品中提取出來的一種分離技術。超臨界流體性質：超臨界流體的物理性質介于氣體與液體之間。超臨界CO2的特點：1、在超臨界狀態(tài)下，流體具有氣液兩相的雙重特點；2、密度對溫度和壓力的變化十分敏感；3、來源廣，價格低廉；4、不燃燒、不助燃、操作安全；無毒、易揮發(fā)、操作后殘留物少；5、對設備無腐蝕；臨界溫度低?；驹恚撼R界流體的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行。 在萃取的過程中，超臨界流體具有很好的流動性和滲透性，將超臨界流體與待分離的物質充分接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小不同的成分依次萃取出來；然后通過改

7、變溫度或壓力使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質析出，從而達到分離提純的目的。超臨界萃取條件的選擇：原料前處理（粒度、水分含量等）；萃取壓力；萃取溫度；流體的流量；改性劑；萃取時間；分離條件（溫度和壓力）等。超臨界萃取的特點：萃取和分離合二為一，不存在物料的相變過程，不需回收溶劑，操作方便，萃取效率高，而且能耗較少，節(jié)約成本；壓力和溫度都可以成為調節(jié)萃取過程的參數(shù)，因此工藝流程短、耗時少；超臨界流體的極性可以改變，一定溫度條件下，只要改變壓力或加入適宜的夾帶劑即可提取不同極性的物質，可選擇范圍廣；SFE全過程不用有機溶劑，萃取物絕無殘留溶劑，無污染；CO2容易取得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，真正

8、實現(xiàn)生產(chǎn)過程綠色化，降低生產(chǎn)成本；萃取溫度低，可以有效保留生物活性，而且能把高沸點，低揮發(fā)性、易熱解的物質在其沸點溫度以下萃取出來。凈化技術􀁺1、液液萃??；2、固相萃??；3、固相微萃??；4、基質分散固相萃??；5、柱層析(凝膠、離子交換、親和、分配、吸附柱層析等）1、凈化技術固相萃取固相萃?。⊿PE）是在液液萃取和液相色譜的基礎上發(fā)展起來的一種的萃取技術。􀁺 基本原理：利用高效高選擇性的固體吸附劑（固定相）將液體樣品中的目標化合物吸附，使其與樣品的基體和干擾化合物分離，然后用合適的洗脫液（另一種體積較小的溶劑）進行洗脫或加熱解吸，達到分離和富集目標化合物的目的

9、。􀁺固相萃取的實質就是一種液相色譜分離，是一個包括液相和固相的物理萃取過程。分離模式也與液相色譜相同，分為正相、反相、離子交換等。固相萃取的類型：石墨碳(反相)-SPE、離子交換樹脂-SPE、金屬配合物吸附劑-SPE、鍵合硅膠-SPE、聚合物吸附劑-SPE、免疫親和吸附劑-SPE、分子嵌入聚合物-SPE等。操作步驟：吸附劑的活化；加樣；萃??；淋洗；洗脫吸附劑的活化：在樣品萃取之前要用適當?shù)娜軇┝芟摧腿≈?，使吸附劑保持濕潤；加樣：加入一定體積的被處理樣品溶液，使其完全通過吸附劑；淋洗：用溶劑強度較弱的溶劑選擇性洗去部分雜質；洗脫：用溶劑強度較強的溶劑洗脫被測物。SPE的特點：可

10、以獲得高的回收率和高的富集倍數(shù)；減少了高純有機溶劑的用量，減少了對環(huán)境的污染，同時減少了有機溶劑中的雜質對被測分析物的影響；無相分離操作，避免了乳化影響，易于收集分析物組分；操作簡單、快速、易于實現(xiàn)自動化；但目標化合物的回收率和精密度低于液液萃取。2、凈化技術固相微萃取􀁺固相微萃?。⊿PEM）是在固相萃取基礎上發(fā)展起來的新型萃取分離技術，是一種基于液固吸附平衡的樣品富集方法，屬于非溶劑型選擇性萃取。􀁺基本原理：利用待測物在樣品基質與萃取相之間的非均相平衡。將聚合物涂層纖維浸潤在水相萃取物中，或保留在樣品頂空使待測組分擴散吸附到石英纖維表面的固定相涂層（頂空固

11、相微萃取），待吸附平衡后，涂層纖維/進樣頭立即轉移到GC或HPLC的進樣口。SPME的萃取模式主要有三種：1、直接法，即將涂層纖維保留在樣品中，主要用于半揮發(fā)性的氣體液體樣品萃取；2、頂空法，即將涂層纖維放置在樣品頂空中，主要用于揮發(fā)性固體或廢水水樣萃?。?、膜方法，將涂層纖維放在經(jīng)過微波萃取及膜處理過的樣品中，主要用于難揮發(fā)性復雜樣品的萃取。樣品萃?。簩PME針管穿透樣品瓶隔墊，插入瓶中；推手柄桿使纖維頭伸出針管，纖維頭可以浸入水溶液中（浸入方式）或置于樣品上部空間（頂空方式），萃取時間大約2-30min；縮回纖維頭，然后將針管退出樣品瓶。􀁺GC分析：將SPME針管插入G

12、C儀進樣口；推手柄桿，伸出纖維頭，熱脫附樣品進色譜柱；縮回纖維頭，移去針管。HPLC分析：􀁺將SPME針管插入SPME/HPLC接口解吸池，進樣閥置于“Load”位置；􀁺推手柄桿伸出纖維頭，關閉閥密封夾；􀁺將閥置于“Inject”位置，流動相通過解吸池洗脫樣品進樣；􀁺閥重新置于“Load”位置，縮回纖維頭，移走SPME針管。影響SPEM的因素：涂膜纖維性能、萃取時間、離子強度、解吸附時間和溫度等。􀁺SPEM的特點：集采集、濃縮于一體，簡單方便，不造成二次污染。與液液萃取或固相萃取相比，具有操作時間短、樣品

13、量少、無需萃取溶劑、適于分析揮發(fā)性和非揮發(fā)性物質、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。免疫檢測技術免疫檢測技術是以抗原抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的分析檢測技術。在此基礎上結合一些生化或物理方法作為信號顯示或放大系統(tǒng)即可建立免疫測定法。即抗原可以特異性地與抗體結合，通過抗原抗體的特異性識別反應來進行檢測?？乖悄茉跈C體中引起特異性免疫應答的物質，抗原進入機體后，可刺激機體產(chǎn)生抗體和引起細胞免疫。在免疫測定中，抗原是能與抗體結合的物質，能在機體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白。􀁺抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白（Ig），與免疫測定有關的主要為IgG和IgM。抗原與抗體間的

14、反應是依靠局部的分子間作用力結合的。主要有四種：氫鍵、范德華力、靜電和疏水相互作用?？乖贵w結合反應具有高度特異性、交叉反應和可逆性?？乖贵w結合的理化特性主要表現(xiàn)為由親水膠體轉化為疏水膠體。一個成功的免疫學測定法必須具備的3個要素：性能優(yōu)良的抗體、靈敏而專一的標記物和高效的分離手段。 現(xiàn)有的免疫測定方法很多，按照不同的方法分類。經(jīng)典的免疫測定法不需要標記物；標記免疫測定法分為放射性標記測定法和非放射性標記測定法，按反應介質分為均相和非均相免疫測定法。經(jīng)典免疫測定法在食品安全衛(wèi)生分析上較少采用，而靈敏度高的非均相、非放射性標記免疫測定法種類繁多，發(fā)展較快、檢測靈敏度高，使用范圍廣。2、免疫學檢

15、測技術酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的基礎是抗原與抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記?；驹恚菏箍乖蚩贵w結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性;結合物與相應的抗原或抗體反應后，結合的酶仍能催化底物生成有色物質，而顏色的深淺可定量抗體或抗原的含量。材料和試劑：完整的ELISA試劑盒包括：已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）、酶標記的抗原或抗體（結合物）、酶催化的底物、陰性對照樣品和陽性對照樣品（定性檢測）、參考標準品和控制血清（定量測定）、結合物及標本的稀釋液、洗滌

16、液和酶反應終止液。類型：雙抗體夾心法測定抗原；雙抗原夾心法測抗體；間接法測抗體；競爭法測抗體；競爭法測抗原。3、免疫學檢測技術放射免疫測定法（RIA）放射免疫測定法（RIA）是將放射性同位素檢測的高度敏感性與免疫反應的高度選擇性相結合的一種免疫標記檢測技術。RIA的基礎是待測抗原和標記抗原對有限量抗體進行競爭性結合?；驹恚捍郎y抗原是指人體內某種微量活性物質（如微生物和寄生蟲抗原、激素、酶或藥物等），標記抗原是將已知的上述物質標記上同位素（食品安全快速檢測中最常用的是3H和14C），具有示蹤作用。這兩種抗原具有共同的決定簇，都能與相應的抗體發(fā)生特異的結合。將標記抗原（Ag*）和未標記抗原（A

17、g）與特異性抗體（Ab）相混合，兩者競爭與抗體結合結果形成標記的和未標記的抗原抗體復合物。采用分離技術（如用活性炭）將Ag*-Ab、Ag-Ab復合物（B）和游的Ag、Ag*（F）分離，測定B和F的放射活性，繪制B/F對Ag量的關系曲線。測定時需先用一系列已知濃度的未標記抗原和一定量標記抗原及抗體相混合，然后測出標準濃度抗原參加下的標記抗原抗體復合物的放射結合率（B/F），繪出標準競爭抑制曲線。試驗時，在相同條件下，根據(jù)待測抗原的放射性結合率，在標準曲線上即可查得相應的抗原含量.4、免疫學檢測技術PCRPCR又稱聚合酶鏈式反應（PCR），即通常說的PCR體外擴增技術，又稱無細胞克隆技術，是一種對

18、特定的DNA片段在體外進行快速擴增的新方法，該方法操作簡便，可使微量的特定DNA片段在幾小時內迅速擴增至幾百萬倍，目前已在分子生物學、生物醫(yī)學等領域得到了廣泛的應用。依據(jù)DNA摸板的特性，模仿體內的復制過程，在體外合適的條件下以單鏈DNA為模板，以人工合成的寡核苷酸為引物，以四種脫氧核苷酸（dNTP）為底物，利用熱穩(wěn)定的聚合酶延的方向摻入核苷酸來特異地擴增DNA片段。􀁺PCR反應過程通常由2040個循環(huán)組成，每個循環(huán)由高溫變性低溫復性適溫延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性：加熱9395，模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA變性，解離成單鏈，作為擴增的模板；模板

19、DNA與引物的復性：溫度降至55左右，引物與單鏈DNA模板的互補序列特異性地結合引物的延伸：在適宜的溫度條件下，DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。重復循環(huán)變性-復性-延伸三過程，DNA擴增量呈指數(shù)上升最終的擴增量可用NN（E）n計算。理論上，單一拷貝基因經(jīng)過40個循環(huán)，產(chǎn)物的拷貝數(shù)為1012。􀁺注：擴增遵循酶促反應動力學原理。第三章農藥殘留量的檢驗食品中農藥殘留的分類概1、農藥􀁺農藥：是指用于預防、消滅或者控制危害農業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草

20、和其他有害生物以及有目的地調節(jié)植物、昆蟲生長的化學合成或者來源于生物、其他天然物質的一種物質或者幾種物質的混合物及其制劑。􀁺分類：按用途分：殺（昆）蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺線蟲劑、殺螨劑、殺鼠劑、落葉劑和植物生長調節(jié)劑等; 按化學組成分：有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯、有機氯、有機砷、有機汞等.2、農藥殘留農藥殘留：是指農藥使用后殘存于生物體、食品（農副產(chǎn)品）和環(huán)境中的微量農藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。當農藥過量或長期施用，導致食物中農藥殘存數(shù)量超過最大殘留限量（MRL）時，將對人和動物產(chǎn)生不良影響，或通過食物鏈對生態(tài)系統(tǒng)中其他生物造成毒害。我國近年生產(chǎn)的高毒殺蟲

21、劑主要有甲胺磷、甲基對硫磷氧樂果、久效磷、對硫磷、甲拌磷等，因而，這些農藥目前在農作物中殘留最嚴重。3、食品中農藥殘留的來源：1、施用農藥對農作物的直接污染；􀁺2、農作物從污染的環(huán)境中吸收農藥；􀁺3、通過食物鏈污染食品；􀁺4、其他來源：糧庫內使用熏蒸劑等對糧食造成的污染；禽畜飼養(yǎng)場所及禽畜身上施用農藥對動物性食品的污染；糧食貯存加工、運輸銷售過程中容器、車船的混裝；事故性污染，用錯農藥品種和劑量，誤食等。傳統(tǒng)的農藥殘留量分析技術的一般過程常用的農藥殘留分析樣品前處理技術􀂋1、樣品采集:(以蔬菜農藥殘留量檢測的樣品采集為例)

22、采集對象：蔬菜基地：上市前的蔬菜市場：正在售賣的蔬菜檢測部位:大白菜、小白菜(去根、去外測菜葉)；蘿卜、胡蘿卜(取葉、根);番茄、茄子等(去蒂)。􀂋2、提取方法：萃取分離法、索氏抽提法、微波加熱提取法、超聲輔助提取法等(傳統(tǒng)技術)。􀂋3、凈化方法：液液分配法、吸附柱色譜法、磺化法、凝結沉淀法、冷凍法、薄層色譜法等。􀂋4、濃縮方法：自然揮發(fā)法、吹氣法、真空旋轉蒸發(fā)法。農藥殘留分析樣品前處理新技術：固相萃取技術；固相微萃取技術；超臨界流體萃取技術；基質固相分散萃取技術；凝膠滲透色譜技術；免疫親和色譜技術；衍生化技術等農藥殘留檢驗技術概述：目前我

23、國農藥殘留檢測方法主要有兩大類: 農藥殘留色譜檢測法和快速檢測法。色譜檢測法是為農藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。農藥殘毒快速檢測法主要是防止有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留要重超標的蔬菜和水果流入市場。常用的色譜檢驗技術：薄層色譜法、紙色譜、氣相色譜、液相色譜法、GC-MS聯(lián)用技術。1 、薄層色譜（TCL）：半定量和定性檢測技術。􀂋TCL不需要特殊設備和試劑，方法簡單、快速、直觀、靈活，TCL除用特殊的顯色劑觀察斑點顏色和用Rf定性外，與其它技術聯(lián)用，不僅可以定性，而且可以對樣品中待分離的一種或多種成分進行定量分析。但是靈敏度不高，多把它作為分離手段?？赏瑫r分析多個樣品，多用于復雜混合物的

24、分離和篩選。2、氣相色譜技術（GC）􀁺基本原理：殘留的農藥經(jīng)有機溶劑提取并經(jīng)凈化、濃縮后，注入氣相色譜儀、氣化后在載氣攜帶下于色譜柱中分離，并由檢測器檢測。􀁺GC是應用最多的方法，占有關色譜法報道的70%以上。氣相色譜法具有高選擇性、高分離效能、高靈敏度、快速等優(yōu)點。易氣化，氣化后又不發(fā)生分解等的農藥均可采用GC檢測。􀁺用于GC的檢測器主要有FID、ECD、NPD、TCD、FPD、MSD等。3、高效液相色譜技術（HPLC）􀁺HPLC可以分離檢測極性強、分子量大及離子型農藥，尤其對不易氣化或受熱易分解的化合物更能顯示出它的突

25、出優(yōu)點。􀁺常用的液相色譜柱有8柱、18柱、氨基柱、硅膠柱等，檢測器有紫外檢測器、熒光檢測器等。􀁺 近年來，HPLC的檢測效率、靈敏度、速度和操作自動化程度現(xiàn)已成為農藥殘留檢測不可缺少的重要技術，其缺點是溶劑消耗量大，檢測器種類較GC少，靈敏度不如GC高。4、氣相色譜-質譜聯(lián)用技術（GC-MS）􀁺GC-MS是將氣相色譜儀和質譜儀串聯(lián)成為一個整機使用的檢測技術。它既具有氣相色譜高分離效能，又具有質譜準確鑒定化合物結構的特點，可達到同時定性定量的檢測目的。用于農藥和藥物殘留量檢測工作，特別是應用于農藥和藥物代謝物、降解物的檢測和多殘留檢測等具有突

26、出的特點。5、液相色譜質譜聯(lián)用技術（LC-MS）􀁺 LC-MS將氣相色譜儀和質譜儀串聯(lián)成為一個整機使用的檢測技術。LC-MS可以首先將混合物分離為單一組分，之后再用質譜檢測器進行檢測。如此過程不僅可以得到更有意義的質譜數(shù)據(jù)，而且可以在一定程度上排除基質干擾，克服離子抑制現(xiàn)象，優(yōu)化質譜檢測信號。液質聯(lián)用系統(tǒng)是殘留分析理想的檢測手段。對于需要高靈敏度、寬適用范圍、復雜基質的多殘留快速篩選工作而言，液質聯(lián)用無疑是首選的最佳檢測手段農藥殘留量檢驗新技術：超臨界流體色譜；毛細管電泳技術；直接光譜技術（近紅外光譜分析、熒光光譜分析）；酶聯(lián)免疫吸附試驗技術；酶抑制技術；生物傳感器技術；實驗

27、室機器人1、超臨界流體色譜超臨界流體色譜（SCF）是以超臨界流體為流動相的色譜分離檢測技術。􀁺特點：超臨界流體黏度小、傳質阻力小、擴散速度快，其分離能力和速度可與GC相比；其密度、溶解力和速度可與HPLC相比；且超臨界流體的物理、化學性質都是密度的函數(shù)。􀁺超臨界流體色譜儀的工作流程：SFC的部件組成與HPLC很相似，包括流動相輸送系統(tǒng)（泵、流量緩沖器和混合柱等）、色譜分離系統(tǒng)（進樣器、色譜柱和柱溫箱等）、檢測系統(tǒng)（檢測器等）和計算機軟件。SCF以超臨界流體作為流動相，它的密度隨壓力增加而增加，而密度的增加引起流動相溶劑效率的提高，同時可縮短淋洗時間。在SFC

28、中采用程序升密度相對于GC中的程序升溫和HPLC中的梯度洗脫，并且SFC可以與大部分GC和HPLC的檢測器相連，許多在GC上需經(jīng)過衍生化才能分析的農藥，都可以用SFC直接測定。2、毛細管電泳（CE）毛細管電泳（CE）是以高壓（可達30 kV）下產(chǎn)生的強電場為驅動力，以小內徑的石英毛細管（常用25100m）為分離通道，依據(jù)各組分之間電泳淌度或分配系數(shù)的差異實現(xiàn)分離。􀁺特點：CE是電泳技術與色譜技術的完美結合，分離速度快，分離效果好，儀器結構比較簡單。􀁺CE根據(jù)分離模式的不同，可分為毛細管區(qū)帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電聚焦電泳、膠束電動毛細管色譜和毛細管電

29、色譜。農藥殘留快速檢測技術傳統(tǒng)的農藥殘留量分析技術的優(yōu)缺點：農藥殘留快速檢測方法1、生化檢測法（膽堿酯酶抑制法）：速測卡、酶片、速測儀、生物傳感器等2、免疫分析法（抗體抗原反應）：ELISA試劑盒、免疫傳感器等3、活體生物測定法（發(fā)光細菌或敏感性家蠅）速測卡法：速測卡法（紙片法）是國家標準快速檢驗方法蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量快速檢測。1、測定范圍：由酶抑制法測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢驗方法，適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。 2、原理：3、試劑：速測卡: 固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯的紙片；pH7.5緩沖溶液：分別取15.0g Na2HP

30、O4·12H2O與1.59g KH2PO4，用500mL蒸餾水溶解。4、儀器：常量天平；有條件時配備37±2恒溫裝置；有條件時配備專為速測卡而設計的“農藥殘留速測儀”和超聲波提取器。5、分析步驟(1)表面測定法（粗篩法）：1)擦去蔬菜表面泥土，滴23滴緩沖溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。2)取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。放置10min進行預反應，有條件時在37恒溫裝置中進行。注：預反應后的藥片表面必須保持濕潤。3)將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min。4)每批測定應設一個緩沖液的空白對照卡。（同時進行）思考：空白對照卡不變藍的原因

31、？（2）整體測定法：1)選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，振搖50次，靜置2min以上。2）取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min進行預反應。注：預反應后的藥片表面必須保持濕潤。3）將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min。4）每批測定應設一個緩沖液的空白對照卡。思考：蔬菜剪得太碎對試驗結果有怎樣的影響？6、結果判定和表述：檢測結果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農藥抑制（陽性）和未抑制（陰性）來表示。8、速測卡法檢測注意事項􀁺 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇等含有對酶有影響的

32、植物次生物質的樣品，應采取整株（體）蔬菜浸提或采用表面測定法；對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。􀁺當溫度低于37時，酶反應的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應的時間應相對延長。延長時間的確定，以空白對照卡用手指捏3min時可以變藍，且樣品放置的時間應與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。􀁺紅色藥片與白色藥片疊合反應時間以3min為準。速測卡對農藥非常敏感，測定時如果附近噴灑農藥或使用殺蟲劑，以及操作者和器具沾有微量農藥，都會造成對照和測定藥片不變藍。酶抑制率法：酶抑制率（分光光度法）是國家標準快速檢驗方法蔬菜中有機磷和

33、氨基甲酸酯類農藥殘留量快速檢測。1、測定范圍：由酶抑制法測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢驗方法，適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。􀁺 2、原理：3、試劑􀁺 pH8.0緩沖溶液：取11.9mg無水磷酸氫二鉀與3.2mg磷酸二氫鉀，用1000mL蒸餾水溶解。 顯色劑：取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，在4冰箱中保存。􀁺底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿加8.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置于4冰箱中保存，保存期不超過一周。􀁺乙酰膽堿酯酶：根

34、據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，但吸光度值應控制在0.3以上?？蛇x用以上試劑制備的試劑盒。4、儀器：常量天平；37±2恒溫水浴或恒溫箱；分光光度計或農殘快速測定儀5、分析步驟樣品處理：選取有代表性的蔬菜，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取1g放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩12min，倒出提取液，靜置35min，待測。對照溶液測試：先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，再加入0.lmL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37放置15min以上（每批樣品的控制時間應一致，30min）。加入0.lmL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應3min的吸

35、光度變化值或儀器記錄值A0；樣品測試：于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，記錄反應3min的吸光度變化值At。思考：樣品處理對試驗結果可能有哪些影響？6、結果處理（1）結果計算􀁺Ac對照溶液反應3min吸光度的變化值；􀁺At樣品溶液反應3min吸光度的變化值。（2）結果判定：當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率50%時，表明蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥存在，樣品檢測為陽性結果，則檢驗需要重復兩次以上，并可用其他方法進一步具體確定農藥品種和含量。7、酶抑制率法的使用注意事項􀁺蔥、蒜、胡蘿卜、生姜、韭菜及番茄汁液等，

36、含有對酶有影響的植物次生物質，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，不要剪得太碎，浸提時間不要太長，必要時可采取整株（體）蔬菜浸提法。對一些含葉綠素較高的蔬菜也是如此。􀁺 當溫度條件低于37時，加入酶液和顯色劑后放置反應的時間應相對延長，延長時間的確定應以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化A0值在0.3以上，即可往下操作。且樣品放置時間應與空白對照溶液放置的時間一致。􀁺當吸光度過大無法讀取時，說明測定溶液渾濁有干擾。􀁺 乙酰膽堿系統(tǒng)是2003年衛(wèi)生部批準了國家標準GB/T 5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量快速檢

37、測方法時開始使用的，標準規(guī)定蔬菜農殘檢測用乙酰膽堿系統(tǒng)取代丁酰膽堿（NY/T 448-2001）。8、速測卡法與酶抑制率法的比較􀁺共同點：兩種方法的原理、緩沖（提?。┤芤簆H值、測定中的干擾物質和排除方法基本相同。􀁺速測卡法檢出限：在使用速測卡法檢出蔬菜樣品為農藥陽性時，即可視為有機磷或氨基甲酸酯類的農藥已超標。在有條件的單位，可用氣相色譜儀或質譜儀對陽性試樣進行進一步的實驗。􀁺酶抑制率法的選擇：在氣相色譜分析儀還未問世時，對有機磷類農藥的檢測即采取了酶抑制率法，只是由于當時酶的純度不夠高、靈敏度較低、酶試劑保存期短、及方法不能區(qū)分出具體的

38、農藥而被氣相色譜法所取代。而今用其作為快速分析則恰到好處。只是現(xiàn)在酶試劑的質量還應進一步提高，有效保存期應設法延長。因此，在實驗前，必需測試酶的活性，達到要求后才能往下進行。􀁺相比之下，速測卡法操作簡單、使用方便，常溫下試藥的有效期可達一年；酶抑制率法操作要煩瑣些，夏天時，試藥需要冷藏運輸，但以數(shù)字形式讀取數(shù)據(jù)，較為直觀。酶抑制法1、方法特點：檢測對象廣泛（有機磷農藥和氨基甲酸酯類農藥），且適用于一些基質復雜的樣品，如：蔬菜、水果、茶葉和肉等。靈敏度高。適用的溫度范圍廣，在1535下可直接測定，無需其它溫控設施。比色波長為600nm。樣品測定時，無需設置對照。測定結果表示簡單

39、，無需計算抑制率，由吸光度直接判定。2、原理：3、儀器和試劑常量天平；分光光度計。􀁺緩沖液：pH 7.71的磷酸鹽緩沖液（適用于蔬菜等的檢測）；pH 8.0的Tris鹽酸緩沖液（適用于茶葉、肉等的檢測）。􀁺底物溶液：2%碘化硫代乙酰膽堿水溶液。􀁺顯色劑：0.04%的2,6-二氯靛酚水溶液。􀁺氧化劑：0.5%次氯酸鈣水溶液。􀁺還原劑：10%亞硝酸鈉水溶液。􀁺膽堿酯酶液：0.2g膽堿酯酶酶粉溶于10mL緩沖液中。􀁺脫色劑：活性炭。􀁺丙酮：分析純。h

40、8698;碳酸鈣：分析純。4、分析步驟5、結果判定：6、注意事項􀁺 若室溫低于15，建議使用30水浴，即提取液要在水浴中預熱，并且加入酶液后的試管也需要放置于水浴中，同時室溫也應控制在20以上。􀁺速測試劑對農藥非常敏感，測定時如果附近噴灑農藥或使用衛(wèi)生殺蟲劑，以及操作者和器具沾有微量農藥，都會對檢測結果帶來影響。􀁺分光光度計長期處于開機等待狀態(tài)時，應將比色室蓋打開，避免儀器感光元件因過度疲勞而損壞。方法的比較􀁺 思考題：根據(jù)蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥的生物化學測定的課程實驗，設計速測卡法和酶抑制率法快速檢測蔬菜中農藥殘

41、留量的實驗。分析所有可能的影響因素。第四章 獸藥殘留量的檢驗獸藥與獸藥殘留獸藥：預防和治療畜禽疾病的藥物；促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品的品質；也包括一些化學的、生物的動物保健品或飼料添加劑。􀂋 獸藥殘留：是“獸藥在動物源食品中的殘留”的簡稱，是指動物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物，以及與獸藥有關的雜質。獸藥殘留產(chǎn)生的原因：非法使用違禁或淘汰藥物；不遵守休藥期規(guī)定；濫用藥物；違背有關標簽的規(guī)定；屠宰前用藥。獸藥殘留的類型：1、抗生素類：氯霉素、四環(huán)素、土霉素、青霉素等。􀂋2、磺胺類：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等。􀂋

42、;3、呋喃類：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。􀂋4、激素和-興奮劑：鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、孕酮等。􀂋5、抗寄生蟲類：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。獸藥殘留的危害：毒性損害；引發(fā)過敏反應；導致病原菌產(chǎn)生耐藥性；破壞微生態(tài)平衡，導致二重感染；致畸、致癌、致突變作用；影響生態(tài)環(huán)境；影響畜牧業(yè)的發(fā)展。獸藥殘留的分析方法：獸藥殘留的檢驗分析方法包括篩選、檢測和確認。篩選方法：微生物檢驗（微生物抑制試驗）免疫法（免疫檢測試劑盒）檢測和確認方法：理化檢驗技術（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。水產(chǎn)品中氯霉素的檢驗􀂋

43、;氯霉素（CAP）是由委內瑞拉鏈絲菌產(chǎn)生的一種光譜抗生素。CAP對造血系統(tǒng)有毒性反應，是一種禁用藥。􀂋氯霉素的檢測方法主要有：微生物篩選法、GC（ECD）、HPLC（UV）、GC-MS、GS-MS/MS、ELISA以及RIA等。對蝦中氯霉素含量的競爭性ELISA法檢測*競爭性ELISA的基本原理（以競爭性ELISA法測定氯霉素抗原為例）：酶標抗原與樣品或標準體中的非標記抗原（氯霉素）具有相同的與抗體結合的能力，兩者競爭與固相載體包被的抗體結合。洗滌多余的酶標抗原，加酶反應的底物顯色后根據(jù)顏色的深淺進行定量。􀂋在整個反應當中，樣品中氯霉素含量越多，反應顯色就越

44、淡。反之，樣品中氯霉素含量越少，則顯色越深。競爭性ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實驗設計：實驗方案設計：為了達到某種特定的目的，使用多種實驗試劑、儀器和設備，按照可行的實驗原理，列出實驗的操作順序、確定各步驟的操作方法，列出實驗必須的注意事項。1）實驗目的：進一步學習酶聯(lián)免疫試驗法的基本原理和實驗方法，確實掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理、實驗方法和結果的分析。2）實驗原理3）主要試劑：氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。氯霉素檢測試劑盒的組成：微量測試孔；氯霉素標準溶液；10倍濃縮萃取稀釋液；10倍濃縮洗滌液；氯霉素酶標記物；底物溶液；反應終止液。4）主要儀器：簡易的萃取設備、氮

45、吹儀、離心機、酶標分析儀。4、實驗步驟（1）實驗準備：從冰箱取出試劑盒，將氯霉素標準溶液、濃縮萃取稀釋液、濃縮洗滌液、酶標記物、底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫30 min。配制原倍萃取稀釋液及洗滌液：用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別按1:9的比例稀釋。（2）樣品制備：將3g蝦肉剪碎后放入50mL帶塞離心管中，加入6mL乙酸乙酯，用均質機均質約1min，再震蕩約30s。離心（3000rpm，10 min），取2mL上清液至玻璃管中，于50下氮氣吹干。于上述玻璃管中加入正己烷2mL，先將殘余物完全溶解后，再加入1mL原倍萃取稀釋液，震蕩約30s。離心（3000rpm，10min

46、），用吸管吸去上層液及中間乳化層部分，棄掉，取下層液備用。若乳化現(xiàn)象較嚴重，則先將大部分上層液取出后，再將玻璃管置入80水中，隔水加熱約510min。（3）操作步驟：取一定的微量測試孔條，于適當微孔中分別加入100L標準溶液。在另外的微孔中加入100L已完成前處理的樣品溶液。在每一微孔中加入50L酶標記物。輕敲盤子四周，使其充分混合后室溫下避光靜置溫育1h。甩掉反應液，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復3次。最后一次甩掉洗液后，在吸水紙上拍干。每一微孔中加入底物溶液100L，輕敲盤子四周。于室溫下避光靜置溫育20min。于每一微孔中加入100L反應終止液，用酶標儀于波長450nm下判讀。5、結果

47、處理：所測得的標準吸光值和樣品吸光值（B）除以第一個標準（零標準）的吸光值（B0）再乘以100。以B/B0的百分數(shù)值為縱坐標，以標樣濃度（ppb）為橫坐標，繪制標準半對數(shù)曲線。根據(jù)每個樣品的B/B0的百分數(shù)值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度（ppb）。根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度乘以樣品稀釋倍數(shù)計算出樣品中氯霉素的實際濃度，最后的結果用“g/kg”單位表示。6、注意事項：使用前先將取出置于室溫下，回溫30min?；販睾螅〕鏊栉⒘繙y試孔條，將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置于4保存。濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋。每次吸取不同的液體時一定要換移液槍的吸頭。加樣時必須小心勿濺出

48、微孔外，以免造成其他微孔的污染，加樣品或試劑時槍頭請勿接觸微孔，不可產(chǎn)生氣泡。洗滌必須充分，重復3次。溫育時，要蓋上塑料片或標簽紙，置于暗處，溫育時間不夠不要隨意取出；顯色后盡快比色。試劑盒較貴且量很少，準確量取，不要造成浪費。7、分析與討論為什么氯霉素含量與顯色成反比？加底物進行溫育反應后不顯色的原因？洗滌不徹底會對結果產(chǎn)生怎樣的影響？為什么？標準曲線偏離（線性不好）的原因有哪些？樣品吸光值高于標準吸光值的原因？避光溫育時間不夠會對實驗結果有怎樣的影響？影響氯霉素酶聯(lián)免疫吸附檢測準確的因素有哪些？豬組織中鹽酸克倫特羅的檢驗鹽酸克倫特羅（CLB）是2-受體興奮劑。是一種腎上腺素神經(jīng)興奮劑，屬于

49、激素類興奮劑，是國家按興奮劑管理的藥品，為人、畜呼吸系統(tǒng)藥物（氨哮素、克喘素）。鹽酸克倫特羅可促進動物生長，加速脂肪轉化，提高瘦肉率，被俗稱為“瘦肉精”。非法使用鹽酸克倫特羅作為飼料添加劑，使用量大（是治療劑量的5-10倍），使用時間長（持續(xù)添加時間一般3周以上），代謝慢，因而容易在動物體內（尤其是眼、肺、肝、腎）殘留。􀂋鹽酸克倫特羅通過食物鏈進入人體，產(chǎn)生蓄積中毒，如頭暈、乏力、心律失常等。因此，國內外已經(jīng)禁止-腎上腺素激動劑在動物生產(chǎn)中的應用。感官識別：健康肉淡紅色，肉質彈性好，無“出汗”現(xiàn)象；“問題肉”特別鮮紅，脂肪非常薄，瘦肉纖維疏松，有“出汗”現(xiàn)象?？藗愄亓_的檢驗方

50、法：HPLC、GC-MS、毛細管區(qū)帶電泳法和免疫分析法豬組織中鹽酸克倫特羅的檢驗GS/MS法*動物性食品中克倫特羅殘留量的測定第一法GC/MS法。􀂋 基本原理：固體樣品剪碎，用高氯酸溶液勻漿。若為液體試樣，則加入高氯酸溶液，進行超聲加熱提取，用異丙醇+乙酸乙酯（40+60）萃取，有機相濃縮，經(jīng)弱陽離子交換柱進行分離，用乙醇+濃氨水（98+2）溶液洗脫，洗脫液濃縮，經(jīng)N,O-雙三甲級硅烷三氟乙酰胺衍生后于氣質聯(lián)用儀上進行測定，以美托洛爾為內標，進行定量。豬組織中鹽酸克倫特羅的檢驗ELISA法*動物性食品中克倫特羅殘留量的測定第三法ELISA法。􀂋基本原理：微孔

51、板包被有針對克倫特羅IgG的抗抗體；加入克倫特羅抗體，經(jīng)過溫育和洗滌后；加入酶標記物、標準或樣品溶液，克倫特羅與酶標記物競爭與抗體結合；沒有連接的克倫特羅酶標記物在被洗滌除去；加入酶底物和發(fā)色劑并且溫育，結合的酶標記物將無色的發(fā)色劑為藍色的產(chǎn)物，加入反應終止液使顏色有藍轉變?yōu)辄S色。在450nm處比色測定。酶聯(lián)免疫實驗設計：實驗的關鍵操作：1）試劑盒的選擇和準備：固相載體：吸附性能，孔底透明度，板、孔性能差異；包被物：純度；儲存條件：2-8；室溫平衡：試驗用試劑應提前1-2h從冰箱中取出，待溫度與室溫平衡后使用；及時保存：試劑完畢后不需用的部分應及時放回冰箱保存。2）試劑的處理：盡可能使用新鮮樣

52、本；進行必要的前處理。3）加樣：加樣前樣本必須混合均勻；加在板孔底部，避免加在孔壁上部；不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡；每次加標本應更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染；加酶結合物和底物時可用定量多道加液器。4）溫育：溫育前必須震動混勻，但不可濺出；溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確；溫育必須避光。5）洗滌：清洗必須徹底；避免出現(xiàn)板孔干燥；反轉傾空微孔板要迅速，避免清洗液混合。6）顯色和比色：顯色的溫度和時間應按規(guī)定力求準確；顯色必須避光；使用多道加液器加終止液；顯色完畢后盡快比色測定。 第五章毒素的檢驗毒素是活的生物有機體中存在的或向外界釋放、分泌的一類具有明顯生物活性的物質。毒素分類（按來源）：1、植物毒素：

53、含甙類植物：氰苷、皂苷等含生物堿類植物：烏頭堿、雷公藤堿等含毒蛋白類植物：相思豆、巴豆樹等含酚類化合物植物：兒茶酚等2、動物毒素：蛇毒：海蛇、蝰蛇、眼睛蛇、響尾蛇爬蟲類：毒蜥蜴兩棲類：青蛙、蟾蜍和蠑螈昆蟲：蜈蚣、蝎子、蜘蛛、蜜蜂、螞蟻等魚類：鲀毒魚類、膽毒魚類、卵毒魚類肉毒魚類海洋生物（大約有4萬種）：貝類、藻類等3、微生物毒素：細菌毒素，真菌毒素，霉菌毒素河豚毒素的檢驗河豚毒素（TTX），又名河豚毒素酐-4-河豚毒素鞘，或河豚酸，是一種生物堿類的天然毒素。河豚魚的肝、脾、胃、卵巢、卵子、睪丸、皮膚以及血液均含有毒素，其中以卵和卵巢的毒性最大，肝臟次之河豚毒素的毒力單位，一般用MU表示，即在3

54、0 min內殺死一只20g左右的雄性DDY小鼠的毒素量。毒力在20000 MU以上為“劇毒”；200020000 MU之間為“強毒”；2002000MU之間為“弱毒”；100 MU以下為“無毒”。􀁺河豚毒素的LD50為8.7g/kg（小鼠，腹腔注射），對人的經(jīng)口最小致死量為40g/kg體重，大約12mg河豚魚毒素結晶可使一個成人致死。河豚毒素的檢測方法：TTX的檢測方法：小鼠單位法、熒光分光光度法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法和毛細管電泳法等。􀁺熒光分光光度法：TTX加堿水解后生成2-氨基-6-羥甲基-8-羥基喹唑啉，該物質法熒光。在最大激發(fā)波長370nm

55、，最大發(fā)射波長為495nm條件下檢測熒光強度。1、TTX的檢測小鼠單位法基本原理：一定體重的小鼠經(jīng)腹腔注射TTX之后，其死亡時間的倒數(shù)與注射的TTX劑量之間存在著線性關系。據(jù)此，可根據(jù)小鼠死亡的時間推斷TTX的量。所得的毒力用MU表示（1MU0.22gTTX）。實驗步驟：（1）樣品處理：（2）動物試驗：選擇體重15-20g健康小白鼠，每組3只以上。將樣品處理液以水稀釋成各種濃度，每只小白鼠腹腔注射0.5mL。測定小白鼠呈現(xiàn)TTX特有癥狀的時間。河豚毒素毒力單位V檢液體積，mL；S白鼠體重，g；M最小致死量的檢液稀釋倍數(shù)；m樣品質量，g；V1動試物給予劑量，mL。貝類毒素的檢驗大多數(shù)貝類均含有一

56、定數(shù)量的有毒物質，貝類中毒現(xiàn)象越來越普遍。貝類中毒主要與主要與貝類吸食浮游藻類有關。毒物在貝體內蓄積和代謝，人類食用后可造成中毒。􀂋目前研究報道較多的毒素包括腹瀉性貝毒（DSP）、麻痹性貝毒（PSP）、神經(jīng)性貝毒（NSP）、記憶缺損性貝毒（ASP）和西加魚毒素（CTX）5種。麻痹性貝類毒素的檢驗麻痹性貝類毒素（PSP）是山膝溝澡屬的渦鞭藻所產(chǎn)生的一組毒素，在美國的大石房蛤中發(fā)現(xiàn)的濃度最高。最常見含有PSP的生物是蛤和貽貝，偶爾也涉及扇貝和牡蠣等。目前已分離出20種毒素。PSP的毒性與河豚毒素相當，攝入這種貝毒僅1mg就可導致人的死亡。國際許可的安全劑量為100g貝肉中含有相當

57、于80g的STX。PSP極易溶于水，部分溶于甲醇和酒精，不溶于大多數(shù)非極性溶劑。它是一種生物堿，容易從酸性溶液中萃取。PSP的檢測方法1、生物測定法：小鼠單位法，家蠅生物分析法，蝗蟲生物分析法2、理化分析法：HPLC，電泳法，TLC3、免疫化學法腹瀉性貝類毒素的檢驗腹瀉性貝類素（DSP）是一類脂溶性物質，化學結構是聚醚或大環(huán)內酯化合物。DSP的直接生產(chǎn)者也是海藻。能產(chǎn)生DSP的藻類也主要是甲藻和原甲藻屬的藻類。能引起腹瀉的DSP主要是OA和DTX1-3。DSP在日本櫛孔扇貝、牡蠣、蛤仔、紫貽貝等中都有存在。DSP的檢測方法：小鼠單位法、細胞毒性試驗法、HPLC法、HPLC-MS等。И

58、698;小鼠單位法是AOAC標準方法，也是我國出口貝類中DSP的標準檢測方法。體重為1620g的小白鼠腹腔注射0.51mL貝類提取液后，在15min時殺死小鼠所需的最低毒素量為1個MU。􀁺HPLC法用于DSP不同結構組分的分析及鑒定。分離貝類原料中不同結構的DSP，轉化成熒光酯類衍生物，通過測定分離組分的熒光強度，與標準樣品進行比較定量。記憶缺失性貝類毒素的檢驗􀁺記憶性貝類毒素（ASP）是一類存在于赤潮藻中的硅藻屬中的毒素。ASP的主要成分是軟骨藻酸（DA），是一種具有生理活性的氨基酸類物質。ASP的中毒癥狀主要包括惡心、嘔吐、腹瀉等，同時有昏迷等類似神經(jīng)性

59、中毒癥狀，中毒后的典型特征是永久性喪失部分記憶。􀁺ASP的檢測方法主要有：小鼠單位法、HPLC法、和CE法等。1、小鼠單位法􀁺最低檢出限為50g/g ，遠高于美國FDA規(guī)定的貝類食品中ASP的限量標準。2、HPLC法􀁺用一定溶液提取貝類中的ASP，用C18反相HPLC分離其中的DA。根據(jù)DA的紫外吸收特性，用紫外檢測器進行檢測，通過標準DA的色譜行為進行比較定性和定量。HPLC法的最低檢出限為0.5g/g。若將貝類的ASP提取液預先用離子交換柱除部分雜質后，再進行HPLC分析，檢出限可以進一步提高；去除雜質后，再用熒光衍生化進行衍生，檢測限可提高到0.006g/g。3、CE法􀁺貝類中的ASP（主要為DA）用甲醇溶液提取，經(jīng)離子交換樹脂純化，用CE法分離其中的DA，并與標準DA的電泳行為進行比較定量。組胺的檢驗組胺是又名組織胺，分子式為C5H9N3，化學名為2-咪唑基乙胺。是一種生物堿，溶于水和乙醇。組胺是魚體中的游離組氨酸，在組氨酸脫羧酶