腫瘤的基因診斷

1、腫瘤的分子診斷腫瘤的分子診斷Moleculardiagnosisoftumors 多基因疾病多基因疾病是指疾病的發(fā)生涉及是指疾病的發(fā)生涉及兩個以上基因兩個以上基因的結(jié)構(gòu)或的結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控的改變。分子診斷是指利用分子生物學(xué)和分子表達(dá)調(diào)控的改變。分子診斷是指利用分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的方法，通過檢測遺傳學(xué)的方法，通過檢測基因的存在、結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)基因的存在、結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)的異常的異常，對人類狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。，對人類狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。 腫瘤的分子診斷腫瘤的分子診斷是指用分子生物學(xué)手段，通過是指用分子生物學(xué)手段，通過檢測腫檢測腫瘤相關(guān)基因的存在，分析腫瘤相關(guān)基因的缺陷、表達(dá)及瘤相關(guān)基

2、因的存在，分析腫瘤相關(guān)基因的缺陷、表達(dá)及其功能其功能，以達(dá)到腫瘤診斷的目的。，以達(dá)到腫瘤診斷的目的。概概 念念一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制 腫瘤自身原因腫瘤自身原因 外因外因內(nèi)因內(nèi)因無限增殖無限增殖轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移空間空間資源資源 免疫監(jiān)控免疫監(jiān)控 攘外攘外 安內(nèi)安內(nèi)同流和污同流和污視而不見視而不見 腫瘤免疫監(jiān)控失活腫瘤免疫監(jiān)控失活功能喪失功能喪失一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身 一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Limitless replicativepotentialTissue invas

3、ion& metastasisSustainedangiogenesisInsensitivity toanti-growth signalsSelf-sufficiency ingrowth signalsEvadingapoptosis一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Self-sufficiency in growth signalsAutocrine loopsOver-expression of receptorReceptor is always onDownstream signals一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子

4、機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身nExternal triggersnIntracellular triggersnDeath receptorsnCaspasesnSensors (8, 9)nExecutioners (3)Evading apoptosis一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Insensitivity to antigrowth signals一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Sustained angiogenesisnVEGF(血管內(nèi)皮生長因子)nFGF1/2（成纖維細(xì)胞生長因子）nThrombo

5、spondinnThalidomidenAvastin一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Tissue invasion and metastases一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制1、 腫瘤自身腫瘤自身Limitless reproductive potentialnHayflick hypothesisnLimited number of doublingsnTelomere maintenancenTelomerasenNot all tumor cells have this potentialnTumor stem cells

6、 (1)免疫監(jiān)視系統(tǒng)免疫監(jiān)視系統(tǒng)要素要素 識別力識別力攻擊力攻擊力組成組成分工分工 快速反應(yīng)快速反應(yīng)特異反應(yīng)特異反應(yīng) 信息傳遞信息傳遞一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào)（1）、）、 免疫監(jiān)視系統(tǒng)免疫監(jiān)視系統(tǒng)識別識別特異反應(yīng)特異反應(yīng)抗原遞呈細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào)（1）、）、 免疫監(jiān)視系統(tǒng)免疫監(jiān)視系統(tǒng)攻擊攻擊效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào) （2）、）、 免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生證據(jù)證據(jù)體內(nèi)

7、細(xì)胞突變隨時在發(fā)生，但腫瘤不是隨時發(fā)生。體內(nèi)細(xì)胞突變隨時在發(fā)生，但腫瘤不是隨時發(fā)生。免疫缺陷與腫瘤發(fā)生免疫缺陷與腫瘤發(fā)生免疫功能與腫瘤發(fā)展免疫功能與腫瘤發(fā)展一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào)（2）、）、 免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因腫瘤監(jiān)控失常原因識別問題識別問題腫瘤自身腫瘤自身免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞隱蔽抗原隱蔽抗原來源與正常細(xì)胞相同來源與正常細(xì)胞相同抗原遞呈功能缺失抗原遞呈功能缺失無視無視一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào)（2）、）、 免疫監(jiān)視系統(tǒng)與腫瘤發(fā)生免疫監(jiān)視系統(tǒng)與

8、腫瘤發(fā)生腫瘤監(jiān)控失常原因腫瘤監(jiān)控失常原因殺傷問題殺傷問題腫瘤自身腫瘤自身 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞殺傷免疫細(xì)胞殺傷免疫細(xì)胞抑制因子抑制因子功能異常功能異常抑制性免疫細(xì)胞抑制性免疫細(xì)胞一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制一、腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制2、免疫監(jiān)控失調(diào)、免疫監(jiān)控失調(diào)二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容二、腫瘤的分子診斷內(nèi)容腫瘤標(biāo)志物的檢測腫瘤標(biāo)志物的檢測 1978年年Herberman在美國國立癌癥研究所召開的人類腫瘤免在美國國立癌癥研究所召開的人類腫瘤免疫診斷會上提出的。由腫瘤組織和細(xì)胞產(chǎn)生的與腫瘤的形成、發(fā)疫診斷會上提出的。由腫瘤組織和細(xì)胞產(chǎn)生的與腫瘤的形成、發(fā)生相關(guān)的物質(zhì)生相關(guān)的物質(zhì),這些物質(zhì)存在于腫瘤細(xì)胞的胞

9、核、胞質(zhì)、胞膜上這些物質(zhì)存在于腫瘤細(xì)胞的胞核、胞質(zhì)、胞膜上或體液中；不存在于正常成人組織而見于胚胎組織或體液中；不存在于正常成人組織而見于胚胎組織,或在腫瘤組或在腫瘤組織中含量超過正常含量。存在于腫瘤患者的組織、體液和排泄物織中含量超過正常含量。存在于腫瘤患者的組織、體液和排泄物中，能夠用免疫學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)的方法檢測。中，能夠用免疫學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)的方法檢測。 n原癌基因原癌基因n癌基因癌基因n病毒癌基因病毒癌基因n腫瘤抑制基因腫瘤抑制基因n腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因n腫瘤耐藥基因等腫瘤耐藥基因等腫瘤相關(guān)基因腫瘤相關(guān)基因細(xì)胞基因組中調(diào)控細(xì)胞增殖和分化且具有能細(xì)胞基因組中調(diào)控細(xì)胞增殖和分

10、化且具有能夠使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因，包括病夠使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因，包括病毒癌基因和細(xì)胞癌基因；毒癌基因和細(xì)胞癌基因； 癌基因在正常細(xì)胞的基因組中癌基因在正常細(xì)胞的基因組中n存在存在n不表達(dá)狀態(tài)不表達(dá)狀態(tài)n表達(dá)水平不足以引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化表達(dá)水平不足以引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化癌基因：癌基因：定位定位功能功能癌基因，產(chǎn)物癌基因，產(chǎn)物分泌蛋白分泌蛋白生長因子生長因子sis PDGFsis PDGF鏈鏈跨膜蛋白跨膜蛋白受體型酪氨酸激酶受體型酪氨酸激酶erberb B2 ,EGF B2 ,EGF樣受體樣受體erberb B ,EGF B ,EGF受體受體 fmsfms ,CSF-1 ,CSF-1

11、受體受體 膜結(jié)合蛋白膜結(jié)合蛋白G-G-蛋白蛋白 非受體型酪氨酸激酶非受體型酪氨酸激酶 rasras p21ras p21ras srcsrc pp60src pp60src 胞漿可溶性蛋白胞漿可溶性蛋白非受體型酪氨酸激酶非受體型酪氨酸激酶 絲氨酸絲氨酸/ /蘇氨酸激酶蘇氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)連接蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)連接蛋白 RafRaf， ab1 ab1 crk,SH2/SH3crk,SH2/SH3調(diào)節(jié)蛋白調(diào)節(jié)蛋白vavvav ,SH2 ,SH2調(diào)節(jié)蛋白調(diào)節(jié)蛋白 胞核蛋白胞核蛋白轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子MybMyb， mycmyc fosfosjunjunerberb A,T3 A,T3受體受體 表表1 1細(xì)胞癌基

12、因按其產(chǎn)物定位和功能分類細(xì)胞癌基因按其產(chǎn)物定位和功能分類能 夠 抑 制 細(xì) 胞 惡 性 轉(zhuǎn) 化 或 抑 制 細(xì) 胞 異 常能 夠 抑 制 細(xì) 胞 惡 性 轉(zhuǎn) 化 或 抑 制 細(xì) 胞 異 常 增殖的基因增殖的基因目前研究較多的有目前研究較多的有p53p53基因、基因、pRBpRB基因、基因、p16p16蛋白、蛋白、p15p15蛋白、蛋白、p21p21等。等。 抑癌基因抑癌基因基因基因染色體定染色體定位位相關(guān)腫瘤相關(guān)腫瘤基因產(chǎn)物及功能基因產(chǎn)物及功能RBRB13q1413q14RBRB、成骨肉瘤、胃癌、成骨肉瘤、胃癌、SCLCSCLC、乳癌、結(jié)腸、乳癌、結(jié)腸癌癌p105p105，控制生長，控制生長W

13、TWT11p1311p13WTWT、橫紋肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、橫紋肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌、肝母細(xì)胞瘤肝母細(xì)胞瘤WT-ZFPWT-ZFP，負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子NF-1NF-117p1217p12神經(jīng)纖維瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、雪旺氏細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、雪旺氏細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維肉瘤神經(jīng)纖維肉瘤GAPGAP，拮抗，拮抗p21rasBp21rasBDCCDCC18q21.318q21.3結(jié)腸瘤結(jié)腸瘤P192, P192, 細(xì)胞粘附分子細(xì)胞粘附分子p53p5317p1317p13星狀細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、乳星狀細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)腸癌、乳癌、成骨肉瘤、癌、成骨肉瘤、SC

14、LCSCLC、胃癌、磷狀細(xì)胞肺、胃癌、磷狀細(xì)胞肺癌癌P53 P53 控制腫瘤生長控制腫瘤生長erberb A A17q2117q21ANLLANLLT3T3受體，含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)受體，含鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因錄因表表2 2 已確定的幾種抑癌基因已確定的幾種抑癌基因 野生型野生型P53P53生物學(xué)活性生物學(xué)活性n當(dāng)當(dāng)DNADNA損傷的時候損傷的時候,P53,P53基因就明顯表基因就明顯表達(dá)使細(xì)胞在達(dá)使細(xì)胞在G1G1期生長阻滯，促使細(xì)胞期生長阻滯，促使細(xì)胞凋亡。凋亡。n抑制腫瘤細(xì)胞生長抑制腫瘤細(xì)胞生長n保持保持DNADNA完整性完整性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤耐藥基因腫瘤耐藥基因 血小板衍生生長

15、因子（血小板衍生生長因子（PDGFPDGF）n 表皮生長因子（表皮生長因子（EGFEGF）n VGFVGF基因等基因等腫瘤生長因子腫瘤生長因子 腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷腫瘤的基因診斷目前主要集中在腫瘤的基因診斷目前主要集中在以下幾個方面：以下幾個方面：腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物腫瘤抗藥基因腫瘤抗藥基因突變的癌基因突變的癌基因腫瘤相關(guān)的病毒基因腫瘤相關(guān)的病毒基因標(biāo)志分類標(biāo)志分類機(jī)制機(jī)制分子標(biāo)志分子標(biāo)志應(yīng)用于癌癥診斷應(yīng)用于癌癥診斷分子遺傳性分子遺傳性染色體易位染色體易位t(9t(9；22)22)，t t（1414；1818），），t(11t(11；12)12)等等白血病、淋巴瘤等白血病、淋巴

16、瘤等點突變點突變p53,ER rasp53,ER ras等等胃癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌等癌、肺癌等缺失缺失BRCA1BRCA1，BRCA2BRCA2，DCCDCC等等乳腺癌、結(jié)腸癌乳腺癌、結(jié)腸癌改變拼接改變拼接CD44CD44，muc-1,VLA-4muc-1,VLA-4等等結(jié)腸癌、腎癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、乳腺癌、腦瘤等腦瘤等擴(kuò)增擴(kuò)增erb-B2,EGFR,N-myc,raserb-B2,EGFR,N-myc,ras乳腺癌、腦瘤、神經(jīng)母細(xì)乳腺癌、腦瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤胞瘤比例改變比例改變明膠酶明膠酶A/TIMP2A/TIMP

17、2乳腺癌轉(zhuǎn)移等乳腺癌轉(zhuǎn)移等病毒性病毒性病毒轉(zhuǎn)化病毒轉(zhuǎn)化HPV,HCV,HBVHPV,HCV,HBV，EBVEBV宮頸癌、肝癌、鼻咽癌等宮頸癌、肝癌、鼻咽癌等組織性組織性組織分化組織分化PSA,PSMAPSA,PSMA前列腺癌前列腺癌muc-18,muc-18,酪氨酸酸酶，酪氨酸酸酶，Mage-3Mage-3黑素瘤黑素瘤AFP,AFP,白蛋白白蛋白肝癌肝癌甲狀腺球蛋白甲狀腺球蛋白甲狀腺癌甲狀腺癌NPGP9.5NPGP9.5，酪氨酸羥化酶表面活性物，酪氨酸羥化酶表面活性物質(zhì)等質(zhì)等神經(jīng)母細(xì)胞瘤神經(jīng)母細(xì)胞瘤腫瘤性腫瘤性腫瘤細(xì)胞特征腫瘤細(xì)胞特征CEACEA肺癌、肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌

18、腺癌-HCG-HCG黑素瘤等黑素瘤等CK-19CK-19肺鱗癌肺鱗癌端粒酶端粒酶結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等癌等微衛(wèi)星體等微衛(wèi)星體等結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸部癌等癌等表表3 3 腫瘤基因診斷的分子標(biāo)志及其應(yīng)用腫瘤基因診斷的分子標(biāo)志及其應(yīng)用可分為四大類可分為四大類 I.I.組織特異性基因標(biāo)志組織特異性基因標(biāo)志 II.II.腫瘤特異性基因標(biāo)志腫瘤特異性基因標(biāo)志 III.III.血管生成因子血管生成因子 IV.IV.其它與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子及基質(zhì)蛋白酶其它與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子及基質(zhì)蛋白酶及其抑制劑及其抑制劑 腫瘤轉(zhuǎn)移基因標(biāo)志物腫瘤轉(zhuǎn)移基因標(biāo)志物組織特異性基因標(biāo)志

19、物組織特異性基因標(biāo)志物指腫瘤組織和指腫瘤組織和/ /或起源正常組織所特有，在淋巴或起源正常組織所特有，在淋巴組織和血細(xì)胞中不存在的。如角質(zhì)蛋白家族組織和血細(xì)胞中不存在的。如角質(zhì)蛋白家族（CKCK）mRNAmRNA、粘蛋白基因、表皮生長因子受體、粘蛋白基因、表皮生長因子受體（EGFREGFR）mRNAmRNA等。等。存在于腫瘤及其起源的正常細(xì)胞中，不存在于存在于腫瘤及其起源的正常細(xì)胞中，不存在于其他細(xì)胞。其他細(xì)胞。如如CEA mRNACEA mRNA、AFP mRNAAFP mRNA、PSA mRNAPSA mRNA等等血管生成因子血管生成因子如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VE

20、GFVEGF）等。）等。 突變的癌基因突變的癌基因癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途癌基因的突變是癌基因激活的重要方式和途徑。除了見到較大范圍片段的缺失或插人以徑。除了見到較大范圍片段的缺失或插人以及染色體轉(zhuǎn)位之外，大多數(shù)情況下，都是少及染色體轉(zhuǎn)位之外，大多數(shù)情況下，都是少數(shù)核苷酸或單個堿基的突變。數(shù)核苷酸或單個堿基的突變。 . .癌基因點突變的檢測癌基因點突變的檢測 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCPSSCP）檢測技術(shù)等）檢測技術(shù)等 . .腫瘤相關(guān)的病毒基因腫瘤相關(guān)的病毒基因EBEB病毒（病毒（EBVEBV）人乳頭瘤病毒（人乳頭瘤病毒（HPVHPV）乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HB

21、VHBV）、丙型肝炎病毒（）、丙型肝炎病毒（HCVHCV）感染）感染對于這些腫瘤組織細(xì)胞中相關(guān)病毒基因及其編對于這些腫瘤組織細(xì)胞中相關(guān)病毒基因及其編 碼產(chǎn)物的檢測，可以作為這些類型的腫瘤診斷的碼產(chǎn)物的檢測，可以作為這些類型的腫瘤診斷的標(biāo)志標(biāo)志。腫瘤基因診斷的常用方法PCRPCR、RT-PCRRT-PCRSouthern blotSouthern blot雜交技術(shù)、雜交技術(shù)、Northern Northern blotblot雜交技術(shù)雜交技術(shù)基因芯片基因芯片基因測序?；驕y序。腫瘤基因的分子診斷意義腫瘤基因的分子診斷意義 1.1.腫瘤的早期診斷和篩選腫瘤的早期診斷和篩選2.2.腫瘤療效監(jiān)測腫瘤療

22、效監(jiān)測 3.3.腫瘤的預(yù)后判斷腫瘤的預(yù)后判斷 4.4.腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測 腫瘤基因檢測在腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測中腫瘤基因檢測在腫瘤微轉(zhuǎn)移檢測中應(yīng)用舉例應(yīng)用舉例前列腺癌特異性基因前列腺癌特異性基因DD3DD3PCA3PCA3 nDD3DD3PCA3PCA3是一種非編碼是一種非編碼RNARNA的基因，定位于的基因，定位于9q219q212222染色體。它為前列腺癌特異性染色體。它為前列腺癌特異性基因之一，基因之一，DD3DD3PCA3PCA3 mRNA mRNA僅在前列腺癌細(xì)僅在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)，而在其它正常組織和癌組織胞中表達(dá)，而在其它正常組織和癌組織以及細(xì)胞系中均不表達(dá)。以及細(xì)胞系中均不表

23、達(dá)。 DD3 mRNA 14DD3 mRNA 14外顯子擴(kuò)增結(jié)果外顯子擴(kuò)增結(jié)果M M：50bp DNA Ladder50bp DNA Ladder；1 1：LNCaPLNCaP陽性對照；陽性對照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PIN(PIN(前列腺上皮內(nèi)瘤變前列腺上皮內(nèi)瘤變 ) )；5 5 6 6：BPH(BPH(前列腺增生前列腺增生) )；7 7：直腸癌；：直腸癌；8 8：直腸癌癌旁；：直腸癌癌旁；9 9：結(jié)腸癌；：結(jié)腸癌；1010：結(jié)腸癌癌旁；：結(jié)腸癌癌旁；1111：乳腺癌；：乳腺癌；1212：甲：甲狀腺癌；狀腺癌；1313：胃癌；：胃癌；1414：胃癌癌旁；：胃癌癌旁；1515：

24、膀胱癌；：膀胱癌；1616：軟組織纖維肉瘤；：軟組織纖維肉瘤；1717：轉(zhuǎn)移性腺癌；：轉(zhuǎn)移性腺癌；1818：淋巴：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；1919：卵巢成熟性畸胎瘤；：卵巢成熟性畸胎瘤；2020：正常肝臟；：正常肝臟；2121：膽囊；：膽囊；2222：胎盤；：胎盤；2323：試劑空白。：試劑空白。DD3 mRNA 13DD3 mRNA 13外顯子擴(kuò)增結(jié)果外顯子擴(kuò)增結(jié)果M M：50bp DNA Ladder50bp DNA Ladder；1 1：LNCaPLNCaP陽性對照；陽性對照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PINPIN；5 5 6 6：BPHBPH；7 7：直腸癌

25、；：直腸癌；8 8：直腸癌癌旁；直腸癌癌旁；9 9：結(jié)腸癌；：結(jié)腸癌；1010：結(jié)腸癌癌旁；：結(jié)腸癌癌旁；1111：乳腺癌；：乳腺癌；1212：甲狀腺癌；：甲狀腺癌；1313：胃癌；：胃癌；1414：胃癌癌旁；：胃癌癌旁；1515：膀胱癌；：膀胱癌；1616：軟組織纖維肉瘤；：軟組織纖維肉瘤；1717：轉(zhuǎn)移性腺癌；：轉(zhuǎn)移性腺癌；1818：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；1919：卵巢成熟性：卵巢成熟性畸胎瘤；畸胎瘤；2020：正常肝臟；：正常肝臟；2121：膽囊；：膽囊；2222：胎盤；：胎盤；2323：試劑空白。：試劑空白。DD3 mRNA 34DD3 mRNA 34外顯子擴(kuò)增

26、結(jié)果外顯子擴(kuò)增結(jié)果M M：50bp DNA Ladder50bp DNA Ladder；1 1：LNCaPLNCaP陽性對照；陽性對照；2 2 3 3：PCaPCa；4 4：PINPIN；5 5 6 6：BPHBPH；7 7：直腸癌；：直腸癌；8 8：直腸癌癌旁；直腸癌癌旁；9 9：結(jié)腸癌；：結(jié)腸癌；1010：結(jié)腸癌癌旁；：結(jié)腸癌癌旁；1111：乳腺癌；：乳腺癌；1212：甲狀腺癌；：甲狀腺癌；1313：胃癌；：胃癌；1414：胃癌癌旁；：胃癌癌旁；1515：膀胱癌；：膀胱癌；1616：軟組織纖維肉瘤；：軟組織纖維肉瘤；1717：轉(zhuǎn)移性腺癌；：轉(zhuǎn)移性腺癌；1818：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；：淋巴

27、結(jié)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤；1919：卵巢成熟性：卵巢成熟性畸胎瘤；畸胎瘤；2020：正常肝臟；：正常肝臟；2121：膽囊；：膽囊；2222：胎盤；：胎盤；2323：試劑空白。：試劑空白。前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織前列腺組織和其他腫瘤組織及癌旁組織DD3 mRNADD3 mRNA檢測結(jié)果檢測結(jié)果 M M：50bp DNA50bp DNA標(biāo)準(zhǔn)；標(biāo)準(zhǔn)；1 1：LNCaPLNCaP陽性對照；陽性對照；2 2：BPHBPH；3 3：健康男性志愿者；：健康男性志愿者；4 41010為為PCaPCa；1111為試劑空白。為試劑空白。 外周血外周血DD3 mRNADD3 mRNA的的RT-PCRRT-PCR擴(kuò)

28、增電泳圖擴(kuò)增電泳圖RT-PCRRT-PCR檢測結(jié)果檢測結(jié)果 v 4444例例PCaPCa組中組中1313例可見例可見DD3 mRNADD3 mRNA陽性結(jié)果陽性結(jié)果( (其中其中B B期、期、C C期及期及D D期分別有為期分別有為0 0例、例、2 2例，例，1111例例) )。v 3030例例BPHBPH患者和患者和1818名健康男性志愿者標(biāo)本中均未名健康男性志愿者標(biāo)本中均未檢出檢出DD3 mRNADD3 mRNA。 外周血外周血DD3 mRNADD3 mRNA的巢式的巢式RT-PCRRT-PCR擴(kuò)增電泳圖擴(kuò)增電泳圖 M M：50bp DNA50bp DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；分子量標(biāo)準(zhǔn)；1 1：L

29、NCaPLNCaP陽性對照；陽性對照；2 2：陰性對照：陰性對照( (女性女性) )；3 3：BPHBPH患者；患者；4 4：健康男性志愿者；：健康男性志愿者；5 58 8：未治療的：未治療的PCaPCa；9 9：試劑空白：試劑空白 巢式巢式RT-PCRRT-PCR檢測結(jié)果檢測結(jié)果v 4444例例PCaPCa組中組中2121例可見例可見DD3 mRNADD3 mRNA陽性結(jié)果陽性結(jié)果( (其中其中B B期、期、C C期、期、D D期分別有期分別有1 1例、例、5 5例、例、1515例例) )v 3030例例BPHBPH患者和患者和1818名健康男性志愿者均未見陽名健康男性志愿者均未見陽性結(jié)果性結(jié)果 兩種方法對兩種方法對PCaPCa患者外周血患者外周血DD3 m