09微生物的生理生化反應(yīng)

1、l在生活細(xì)胞中存在的化學(xué)反應(yīng)稱之為代謝。在生活細(xì)胞中存在的化學(xué)反應(yīng)稱之為代謝。l微生物在代謝活動(dòng)中的生理生化反應(yīng)呈現(xiàn)出很微生物在代謝活動(dòng)中的生理生化反應(yīng)呈現(xiàn)出很大的多樣性。大的多樣性。l淀粉的水解實(shí)驗(yàn)淀粉的水解實(shí)驗(yàn)l糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)l吲哚、甲基紅、吲哚、甲基紅、v-p v-p 反應(yīng)反應(yīng)l微生物對(duì)大分子的淀粉不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外淀粉酶將其分解后才能吸收利用。l微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）將大分子物質(zhì)的分解過程可以通過觀察細(xì)菌菌落周圍的物質(zhì)變化來證實(shí)。l淀粉遇碘液呈藍(lán)色，但在淀粉被細(xì)菌水解的區(qū)域，遇碘不再呈藍(lán)色，這可作為細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶的證據(jù)。 1 1、淀粉的水解試驗(yàn)、淀粉的水

2、解試驗(yàn)l菌種：菌種：枯草芽孢桿菌，大腸桿菌。枯草芽孢桿菌，大腸桿菌。l培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：固體淀粉培養(yǎng)基。固體淀粉培養(yǎng)基。l溶液或試劑：溶液或試劑：盧戈氏碘液。盧戈氏碘液。l器材：器材：無菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，試管架。無菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，試管架。操作步驟： （1）無菌操作制備淀粉固定培養(yǎng)基平板。 （2）將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌分別在同一平板不同的部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名。 （4）將平板倒置在37溫箱中培養(yǎng)24h。 （5）觀察各種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。滴入少量盧戈氏碘液于平皿中,輕輕旋轉(zhuǎn)平板,使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。+枯草大腸結(jié)果：l將結(jié)果填入下表?！啊北硎娟栃?，“”表示陰性。菌名枯草芽孢桿菌大

3、腸桿菌淀粉水解實(shí)驗(yàn)2 2、糖發(fā)酵試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)l糖發(fā)酵試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)。某些細(xì)菌能利用糖類作為碳源和能源，使糖類分解而產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不同種的細(xì)菌對(duì)于各種糖類利用能力不同，分解產(chǎn)物也不同。l大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；l普通變形桿菌只能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。l傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖。 1.菌種：大腸桿菌，普通變形桿菌斜面各一 支。 2.培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā) 酵培養(yǎng)基試管各3支（內(nèi)裝有倒置的杜漢氏 小管）。 3.儀器或其他用具：試管架，接種環(huán)等。 產(chǎn)酸指示劑、倒置小管l1.用標(biāo)簽紙?jiān)诟髟嚬芡獗谏戏謩e標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名

4、稱和所接種的細(xì)菌菌名。l2.取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對(duì)照。l另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對(duì)照。l在接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡。 3.將接種過和作為對(duì)照的6支試管均置37培養(yǎng)2448h。 4.觀察各試管顏色變化及杜漢氏小管中有無氣泡。l實(shí)驗(yàn)報(bào)告 將結(jié)果填入下表?！?”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，“-”表示不產(chǎn)酸或不產(chǎn)氣。糖類發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌對(duì)照葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵l吲哚試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)（indol testindol test）l甲基紅試驗(yàn)（甲基紅試驗(yàn)（methyl r

5、ed testmethyl red test）lv.p.v.p.反應(yīng)（反應(yīng)（voges-prokauer testvoges-prokauer test）l了解試驗(yàn)原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。l吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、伏-普試驗(yàn)主要用來鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣腸桿菌（enterobacter aerogenes）。l主要是用于水的細(xì)菌學(xué)檢查，因?yàn)榇竽c桿菌雖非致病菌，但在飲水中若大腸桿菌超過一定數(shù)量則表示受糞便污染；l而產(chǎn)氣腸桿菌則廣泛存在于自然界中，因此，檢查水時(shí)要將二者區(qū)分開來。 l有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會(huì)形成紅色的玫瑰

6、吲哚。l色氨酸水解反應(yīng)l吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)l大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。l某些細(xì)菌在糖代謝過程中，將培養(yǎng)基中的糖分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基變酸，加入培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑ph4.2（紅色）-6.3（黃色），可使培養(yǎng)基由原來的桔黃色變?yōu)榧t色，即甲基紅陽性反應(yīng)。l大腸桿菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸;l產(chǎn)氣腸桿菌將有機(jī)酸轉(zhuǎn)化為非酸性末端產(chǎn)物,如乙醇、丙酮酸等。l某些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即伏-普反應(yīng)陽性，沒有紅色化合物產(chǎn)生則為陰性。l產(chǎn)氣腸桿菌

7、伏-普反應(yīng)陽性，大腸桿菌伏-普為陰性。 l菌種 大腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌；l培養(yǎng)基 蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；l溶液或試劑 甲基紅試劑，40koh，5-萘酚，乙醚，吲哚試劑等。l1接種與培養(yǎng) (1)將大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中（做吲哚試驗(yàn)），置37溫室中培養(yǎng)2天。 (2)將上述二菌分別接種于2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（做甲基紅試驗(yàn)與伏-普試驗(yàn)），置37溫室培養(yǎng)2天。l2觀察結(jié)果 (1)吲哚試驗(yàn) 于培養(yǎng)48小時(shí)后的蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加34滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置13分鐘，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。 (2)甲基紅試驗(yàn) 培養(yǎng)48小時(shí)后，將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物分為兩小管（其中一管留做伏-普試驗(yàn)），在一管內(nèi)加甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變紅色者為陽性，黃色者為陰性。 (3)伏普試驗(yàn) 培養(yǎng)兩天后，將另一支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加入510滴40koh，然后加入等量的5-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37溫箱中保溫1530min，以加快反應(yīng)速度。培養(yǎng)物呈紅色者，為陽性。1結(jié)果將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表?！?”表示陽性反應(yīng)；“-”表示陰性反應(yīng)。菌名吲哚試驗(yàn)甲基紅實(shí)驗(yàn) 伏普試驗(yàn)大腸桿菌產(chǎn)氣腸菌對(duì) 照