丙溴磷在棉花上的殘留分析研究

1、本 科 畢 業(yè) 設(shè) 計 （論 文）丙溴磷在棉花上的殘留分析研究題 目 _指導教師_輔導教師_學生姓名_學生學號_ 化工學 2003級2 化學工程與工藝 院（部） 專業(yè) 班二七 年 六 月 八 日中文摘要丙溴磷在棉花上的殘留分析研究摘 要本文對丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)、棉籽和棉葉上的最終殘留量進行了研究。另外，還對氣質(zhì)聯(lián)用法獲得的丙溴磷質(zhì)譜圖進行了解析。對棉花上丙溴磷的殘留動態(tài)和最終殘留量分析測定采用的方法是以丙酮為提取溶劑，石油醚-氯化鈉水溶液液液分配，乙腈-石油醚反萃取，硅膠吸附凈化；用配備電子捕獲檢測器（63ni-ecd）的氣相色譜儀檢測。本檢測方法最小檢出量為1 × 10 -1

2、1 g，最低檢出濃度為0.02 mgkg -1。丙溴磷工作曲線方程為y = -23 4213 421 759x，相關(guān)系數(shù)r = 0.9 949。本文方法的添加濃度為0.02 mgkg -1、0.2 mgkg -1和 2 mgkg -1 3個水平。棉籽平均回收率為86 % 104 %，相對標準偏差為5.33 % 15.86 %；棉葉的回收率平均87 % 104 %，相對標準偏差為7.20 % 14.28 %。該數(shù)據(jù)符合農(nóng)藥殘留試驗準則的要求。殘留動態(tài)試驗結(jié)果表明，在棉花上噴施500 gl -1丙溴磷乳油，劑量1 875 ghm -2，有效成分，其在棉葉上的原始沉積量很高，濟南試驗點為110 mg

3、kg -1，長沙為83 mgkg -1，但其降解很快。丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)方程濟南為：ct = 107e-0.9891t，r= -0.9 733，半衰期t1/2為0.7 d；長沙為：ct = 54e-0.4805 t，r= -0.9 660，半衰期t1/2為1.4 d。以降解速率評價，丙溴磷屬于易降解農(nóng)藥。濟南和長沙兩地試驗點棉籽的殘留量最大值為0.13 mgkg -1，可以看出，棉籽的殘留量遠低于推薦的最大殘留限量2 mgkg -1；濟南棉葉的丙溴磷殘留量最大值為0.32 mgkg -1，長沙的為19 mgkg -1。根據(jù)殘留試驗數(shù)據(jù)和國際食品法典的有關(guān)規(guī)定，建議在棉花上使用500 gl

4、 -1丙溴磷乳油防治棉鈴蟲，施藥劑量不要高于有效成分937.5 ghm -2，最多施藥3次，最后一次施藥距采收間隔期不少于21 d。綜合考慮各種限制因素，棉籽上的丙溴磷最大殘留限量（mrl）暫定2 mgkg -1較適宜。關(guān)鍵詞：gc-ecd；丙溴磷；棉籽；棉葉；農(nóng)藥殘留分析iabstractstudy on determination of profenofos residue in cottonabstractdetermination of profenofos residue in cotton was studied. in addition, it was also parsed t

5、he mass spectrogram of profenofos by gc-ms.the analysis sample was extracted by acetone, liquid-liquid distribution with petroleum ether and acetonitrile in one separator, then distribution with petroleum ether and water solution of sodium chloride in another separator, and cleaned up with silica ge

6、l column. the residual dynamics and final residual level of profenofos in cotton seeds and cotton leaves were determined with gc-ecd.the method for limit of detection was 1 × 10-11 g, and the limit of quantification was 0.02 mgkg -1. the working curve of profenofos was y = -23 4213 421 759x, r

7、= 0.9 949. while fortification level was 0.02 mgkg -1 , 0.2 mgkg -1 , 2 mgkg -1, the result showed that the mean recoveries were 86 % 104 % and the rsd was 5.33 % 15.86 % in cotton seeds, and these were 87 % 104 % and the rsd was 7.20 % 14.28 % in cotton leaves, respectively. these were according wi

8、th guideline on pesticide residue trials in china.when high dosage（1875 ghm -2, a.i.）of profenofos emulsion was applied in the cotton leaves once time, the initial residue of profenofos in it was 110 mgkg -1 in jinan and 83 mgkg -1 in changsha. the degradation equation of profenofos in cotton leaves

9、 was ct = 107e-0.9891t，r= -0.9 733 in jinan, and ct = 54e-0.4805 t，r= -0.9 660 in changsha, and the half-lives of profenofos were 0.7 d and 1.4 d, respectively. the results showed that profenofos is easy to degrade in cotton.the maximum value of residue in cotton seeds was 0.13 mgkg -1 in jinan and

10、changsha, which was far lower than the recommended mrl 2 mgkg -1; the maximum value of residue in cotton leaves was 0.32 mgkg -1 in jinan and 19 mgkg -1 in changsha, respectively.according to the data of profenofos residue and regulation of codex, it suggested that the dosage of 500 gl -1 profenofos

11、 ec should be no more than 937.5 ghm -2 for applying 3 times, and the interval from applying to harvesting was no less than 21 days. considering all kinds of factors, it is reasonable that the mrl of profenofos in cotton seeds is 2 mgkg -1.key words: gc-ecd; profenofos; cotton seeds; cotton leaves;

12、pesticide residue analysisi目 錄1 前言11.1 丙溴磷概述11.1.1 所屬農(nóng)藥類別11.1.2 理化性質(zhì)21.1.3 作用特點21.1.4 毒性21.1.5 常用劑型21.1.6 主要應(yīng)用31.2 農(nóng)藥殘留分析概述31.2.1 農(nóng)藥殘留定義31.2.2 農(nóng)藥殘留的來源31.2.3 農(nóng)藥殘留分析的目的和特點31.2.4 農(nóng)藥殘留分析的方法和程序41.2.5 農(nóng)藥殘留分析方法的選擇41.2.6 農(nóng)藥殘留分析的發(fā)展41.3 氣相色譜（gc）簡介51.3.1 氣相色譜原理51.3.2 電子捕獲檢測器及其原理61.3.3 氣相色譜的應(yīng)用62 材料與方法72.1 田間試驗7

13、2.1.1 田間試驗概況72.1.2 試驗點的氣候條件、土壤類型72.2 檢測條件和方法72.2.1 儀器及設(shè)備82.2.2 試劑及耗材82.2.3 樣品制備82.2.4 分析步驟92.2.4.1 提取92.2.4.2 液液分配92.2.4.3 凈化92.2.5 丙溴磷分析測定條件92.2.5.1 氣相色譜分析測定條件92.2.5.2 氣-質(zhì)聯(lián)用儀分析測定條件102.2.6 標準溶液的配制102.2.7 標準工作曲線的建立102.2.8 最低檢出濃度的確定102.2.9 添加回收試驗112.2.10 降解動態(tài)試驗112.2.11 最終殘留試驗112.2.12 殘留量計算公式113 結(jié)果與討論1

14、33.1 丙溴磷標準樣品色譜分離圖133.2 棉葉樣品中殘留物的質(zhì)譜譜圖及其解析133.3 丙溴磷工作曲線153.4 添加回收結(jié)果和色譜圖163.4.1 添加回收結(jié)果163.4.2 棉籽棉葉樣品色譜圖173.5 殘留動態(tài)試驗結(jié)果233.6 最終殘留量試驗結(jié)果25結(jié) 論27參考文獻29致 謝31青島科技大學本科畢業(yè)設(shè)計（論文）1 前言 1.1 丙溴磷概述中文通用名：丙溴磷；英文通用名：profenofos；中文商品名：迅抗、迅凱、黑鉆、黑暴、庫龍；英文商品名：curacron，selecron，polycron，nonacron等；化學名稱：o-乙基-o-(4-溴-2-氯苯基)-s-丙基硫代磷酸

15、酯；化學結(jié)構(gòu)式：化學分子式：c11h15brclo3ps；分子量：374；ca登記號：41198-08-7；70年代中期由當時的瑞士汽巴-嘉基公司研究開發(fā)1。1.1.1 所屬農(nóng)藥類別農(nóng)藥種類繁多，按其用途大致可以分為殺蟲劑、殺螨劑、殺線蟲劑、殺軟體動物劑、殺鼠劑、殺菌劑、除草劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等幾大類。其中的殺蟲劑是指防治農(nóng)、林業(yè)害蟲及病媒昆蟲的農(nóng)藥。殺蟲劑按照來源又可以分為有機合成殺蟲劑、植物源殺蟲劑、微生物殺蟲劑、無機殺蟲劑等幾大類。而有機合成殺蟲劑按照化學結(jié)構(gòu)又可以分為有機氯殺蟲劑、有機磷殺蟲劑、氨基甲酸酯殺蟲劑、擬除蟲菊酯殺蟲劑、沙蠶毒素類殺蟲劑五大類。丙溴磷為中毒的有機磷（一硫代磷酸

16、酯類）殺蟲劑，具有觸殺和胃毒作用，可以防治棉花、果樹、茶樹、蔬菜等作物上的多種害蟲。1.1.2 理化性質(zhì)純品為淡黃色液體，沸點110 0.13 pa -1，20 蒸汽壓13.33×10 -5 pa，20 相對密度1.455 gcm -3，折光率nd50 1.5 466。在20 水中溶解度為20 mgl-1，能與大多數(shù)有機溶劑互溶2。在中性和弱酸條件下較穩(wěn)定，在堿性條件下易分解。20 水解半衰期：93 d（ph 5）、14.6 d（ph 7）、5.7 d（ph 9）。1.1.3 作用特點丙溴磷是廣譜有機磷殺蟲劑和殺螨劑。它的作用方式是抑制乙酰膽堿酯酶的活性。具有觸殺和胃毒作用。該殺蟲劑

17、是一種神經(jīng)軸突毒劑，可用于防治棉花、果樹、茶樹、蔬菜、棉花等作物上的多種咀嚼式口器、刺吸式口器害蟲和螨類。1.1.4 毒性世界衛(wèi)生組織將丙溴磷劃分為中等毒性(毒性等級)殺蟲劑，其毒性作用通過抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使其失去分解乙酸膽堿的功能。當有機磷劑中毒時，由于它的結(jié)構(gòu)有親電子性的磷，也具有帶正電荷部分，且它的結(jié)構(gòu)與乙酸膽堿近似，所以當它進入機體后，它的帶正電荷部位與乙酰膽堿酯酶的負矩部位結(jié)合，而親電子性的磷與乙酰膽堿的酯解部位結(jié)合，形成的結(jié)合緊密、極難緩慢離解的磷?；憠A酯酶，而乙酰膽堿酯酶的活動性被抑制，喪失及時分解乙酰膽堿的能力，從而有過剩的乙酰膽堿在體內(nèi)逐漸大量積聚，而對膽堿能神經(jīng)發(fā)

18、生過度刺激，誘發(fā)中毒癥狀。由于磷?；憠A酯酶比較穩(wěn)定，水解速度極慢，因此活性恢復極慢3。家蠅（musca domestica）的ld50為0.070 ± 0.006 g/只。對鳥類中等毒性（對野鴨的lc50為150 612 mgkg -1，對日本鵪鶉為>1 000 mgkg -1）45。大白鼠急性口服ld50為358 mgkg -1。大白鼠急性經(jīng)皮ld50為3 300 mgkg -1。大白鼠4 h吸入ld50為3 gm3空氣。經(jīng)口和皮膚表現(xiàn)為中等急性毒性。對魚和大多無脊椎動物高毒69。1.1.5 常用劑型庫龍原藥、庫龍50 %乳油，用于防治棉鈴蟲用量（有效成分）562.5 93

19、7.5 ghm -2。賽立克50 %乳油登記防治甘藍菜青蟲，用量（有效成分）375 750 ghm -2。多蟲清44 %乳油（庫龍+氯氰菊酯復配）登記防治棉花棉鈴蟲、紅鈴蟲、棉蚜10。1.1.6 主要應(yīng)用主要用于棉花和蔬菜防治棉鈴蟲、煙青蟲、紅蜘蛛、棉蚜、棉薊馬、葉蟬、小菜蛾、八斑夜蛾、甘藍夜蛾、菜蚜和薊馬等。對刺吸式口器害蟲和螨類的用藥量為250 500 g aihm -2，對咀嚼式口器害蟲用藥量為400 1200 g aihm -2 11。1.2 農(nóng)藥殘留分析概述1.2.1 農(nóng)藥殘留定義由于農(nóng)藥的應(yīng)用而殘留于生物體、農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中的農(nóng)藥親體及其具有毒理學意義的雜質(zhì)、代謝轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和反應(yīng)物等所

20、有衍生物的總稱12。1.2.2 農(nóng)藥殘留的來源當農(nóng)藥直接作用于農(nóng)作物、畜禽或環(huán)境介質(zhì)（包括水、空氣、土壤等）時，或者間接通過揮發(fā)、飄移、徑流、食物或飼料等方式暴露于上述受體時就產(chǎn)生了農(nóng)藥殘留。過高的農(nóng)藥殘留量一般是由于使用化學性質(zhì)穩(wěn)定、不易分解的農(nóng)藥品種，或者是不合理地過量使用農(nóng)藥造成的。當用持留有農(nóng)藥殘留的飼料飼喂家畜，或者在農(nóng)藥污染的土壤上種植作物，持留著的微量（或痕量）農(nóng)藥就會向家畜、作物體內(nèi)轉(zhuǎn)移和蓄積，這是農(nóng)藥殘留的間接來源。1.2.3 農(nóng)藥殘留分析的目的和特點農(nóng)藥殘留分析是應(yīng)用現(xiàn)代分析技術(shù)對殘存于各種食品、環(huán)境介質(zhì)中微量、痕量以至超痕量水平的農(nóng)藥進行的定性、定量測定。其主要作用和目的

21、是研究農(nóng)藥施用后在農(nóng)作物或環(huán)境介質(zhì)中代謝、降解和轉(zhuǎn)歸，制定農(nóng)藥殘留限量標準、農(nóng)藥安全使用標準等，以滿足政府管理機構(gòu)對農(nóng)藥注冊以及農(nóng)藥安全、合理使用的管理的需要；檢測食品或飼料中農(nóng)藥殘留的種類和水平，以確定其質(zhì)量和安全性，并作為食品和飼料在國際國內(nèi)貿(mào)易中品質(zhì)評價和判斷的標準和依據(jù)，滿足政府管理機構(gòu)對食品質(zhì)量和安全管理的需要；檢測環(huán)境介質(zhì)（水、空氣、土壤）和生態(tài)系生物構(gòu)成的農(nóng)藥殘留種類和水平，以了解環(huán)境質(zhì)量和評價生態(tài)系統(tǒng)的安全性，滿足環(huán)境監(jiān)測與保護的管理需要。1.2.4 農(nóng)藥殘留分析的方法和程序農(nóng)藥殘留分析方法可分為兩類：一類是單殘留方法，它是定量測定樣品中一種農(nóng)藥(包括其具有毒理學意義的雜質(zhì)或降

22、解產(chǎn)物)殘留的方法。另一類是多殘留方法，它是在一次分析中能夠同時測定一種以上農(nóng)藥殘留的方法。程序：樣品采集（包括采樣、樣品的運輸和保存，是進行準確的殘留分析的前提）；樣品預(yù)處理（對送到實驗室的樣品進行縮分、剔除或粉碎等處理，使實驗室樣品成為適于分析處理的檢測樣品）；樣品制備（包括提取，指從試樣中分離殘留農(nóng)藥的過程；凈化，指將提取物中的農(nóng)藥與共提物質(zhì)分離的過程）；樣品測定（包括定量和定性）；以及殘留農(nóng)藥的確證1315。1.2.5 農(nóng)藥殘留分析方法的選擇在選擇采用何種農(nóng)藥殘留分析方法時，一般應(yīng)考慮以下幾個因素：目標農(nóng)藥的理化性質(zhì)、分析任務(wù)的要求、樣品的性質(zhì)及樣品來源的用藥歷史；單殘留或多殘留方法；

23、考慮最大殘留限量和方法檢測限以及方法總誤差；分析時間和費用；分析方法的有效性。1.2.6 農(nóng)藥殘留分析的發(fā)展20世紀50年代以來，農(nóng)藥殘留分析經(jīng)歷了巨大的變化和發(fā)展。農(nóng)藥殘留痕量分析技術(shù)的需求推動了分析科學尤其是儀器分析的飛速發(fā)展。反之，儀器分析技術(shù)的高度發(fā)展，也是農(nóng)藥殘留分析能夠達到超痕量水平的前提條件。近10年來，農(nóng)藥殘留分析的發(fā)展表現(xiàn)了以下突出的趨勢：總體上，農(nóng)藥殘留分析繼續(xù)朝著安全、環(huán)保、高效、經(jīng)濟的方向快速發(fā)展，表現(xiàn)為分析樣品量的小型和微型化、溶劑用量的減少、高毒性溶劑（如苯）和氯代烴類溶劑的限用或慎用以及隨著分析時效的提高，分析成本下降，實驗室的農(nóng)藥殘留分析人員比過去有了更強的安全

24、意識和環(huán)境保護意識。樣品處理出現(xiàn)了許多新技術(shù)，如固相提取法（spe）、超臨界流體提取法（sfe）、固相微提取法（spme）、微波輔助提取法（mae）、加速溶劑提取法（ase）、基質(zhì)固相分散提取法（mspde）以及凝膠滲透層析（gpc）等。這些新技術(shù)集提取、凈化和富集于一體，體現(xiàn)了高效、快速、經(jīng)濟、安全、環(huán)保、環(huán)境友好和自動化聯(lián)用的發(fā)展方向。在檢測方面，多殘留分析方法已經(jīng)成為殘留分析實驗室的主要方法，分析范圍擴大至數(shù)百種農(nóng)藥；超臨界流體色譜（sfc）、高效毛細管電泳（hpce）、離子色譜（ic）和高效薄層色譜（hptlc）等新的分析技術(shù)不斷涌現(xiàn)；聯(lián)用、自動化技術(shù)廣泛應(yīng)用，氣-質(zhì)聯(lián)用越來越多地進入

25、殘留分析實驗室，液-質(zhì)聯(lián)用、串聯(lián)質(zhì)譜等技術(shù)也已成熟。以酶聯(lián)免疫技術(shù)（elisa）為代表的快速檢測技術(shù)受到市場需求的刺激而發(fā)展迅速，一些快速檢測技術(shù)已進入市場，滿足了生產(chǎn)和生活實際中人們對農(nóng)藥殘留現(xiàn)場和即時分析的要求。農(nóng)藥殘留分析方法的標準化步伐加快，越來越多的農(nóng)藥殘留試驗室的質(zhì)量控制和獲得認可，農(nóng)藥殘留分析的技術(shù)與結(jié)果在國際間的協(xié)同化（harmonization）應(yīng)用已成為可能。這將極大地提高農(nóng)藥殘留分析的效率。世界經(jīng)濟一體化的趨勢和現(xiàn)代人們?nèi)找鎻娏业馁|(zhì)量和健康意識，農(nóng)藥殘留已成為食品安全問題的重要構(gòu)成，政府管理機構(gòu)對農(nóng)藥殘留的監(jiān)測和管理正在形成完善的監(jiān)控和決策體系。1.3 氣相色譜（gc）簡

26、介1.3.1 氣相色譜原理氣相色譜（gc）主要是利用物質(zhì)的沸點，極性及吸附性質(zhì)的差異來實現(xiàn)混合物的分離。待分析樣品在氣化室氣化后被惰性氣體（即載氣，也叫流動相）帶入色譜柱，柱內(nèi)含有液體或固體固定相，由于樣品中各組分的沸點，極性或吸附性能不同，每種組分都傾向于在流動相和固定相之間形成分配或吸附平衡。但由于載氣是流動的，這種平衡實際上很難建立起來。也正是由于載氣的流動，使樣品組分在運動中進行反復多次的分配或吸附/解吸，結(jié)果是在載氣中分配濃度大的組分先流出色譜柱，而在固定相中分配濃度大的組分后流出。組分流出色譜柱后，立即進入檢測器。檢測器能夠?qū)悠方M分的存在與否轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，而電信號的大小與被測組分

27、的量或濃度成比例。當將這些信號放大并記錄下來，就是色譜圖。在沒有組分流出時，色譜圖的記錄是檢測器的本底信號，即色譜圖的基線1617。1.3.2 電子捕獲檢測器及其原理電子捕獲檢測器（electron capture detector，ecd）是高靈敏度的氣相色譜檢測器，同時又是出現(xiàn)最早的選擇性檢測器。它僅對那些能俘獲電子的化合物，如鹵代烴，含n和o及s等雜原子的化合物有響應(yīng)。由于它靈敏度高，選擇性好，多年來已廣泛應(yīng)用于環(huán)境樣品中痕量農(nóng)藥，多氯聯(lián)苯等的分析。ecd是氣相電離檢測器之一，但它的信號不同于fid等其他電離檢測器，fid等信號是基流的增加，ecd信號是高背景基流的減小。ecd的不足之處

28、是線性范圍較小，通常僅10 2 10 4。ecd系統(tǒng)由ecd電池和檢測電路組成。ecd的工作原理是：由色譜柱流出的載氣及補充氣進入ecd池，在放射源射線的轟擊下被電離，產(chǎn)生大量電子。在電源、陰極和陽極電場作用下，該電子流向陽極，得到10 -8 a 10 -9 a的基流。當電負性組分從柱后進入檢測器時，即俘獲池內(nèi)電子，使基流下降，產(chǎn)生一負峰。通過放大器放大，在記錄器被記錄，即為響應(yīng)信號。其大小與進入池中組分量成正比。負峰不便觀察和處理，通過極性轉(zhuǎn)換為正峰1819。1.3.3 氣相色譜的應(yīng)用氣相色譜可以分析的樣品范圍極為廣泛，大致可分為石油和石油化工分析，環(huán)境分析，食品分析，藥物和臨床分析，物化參

29、數(shù)測定，聚合物分析，無機物分析14。另外，氣相色譜還應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析，測定各種樣品中g(shù)g -1、ngg -1、甚至pgg -1級的農(nóng)藥或代謝產(chǎn)物及降解產(chǎn)物。其分析過程一般包括取樣、樣品處理（萃取、凈化和衍生化）和測定，根據(jù)農(nóng)藥種類和樣品基質(zhì)的不同，上述各個步驟的復雜性有所不同。色譜法常用于樣品的定量分析。gc對農(nóng)藥殘留的分析主要有機氯農(nóng)藥殘留分析、有機磷農(nóng)藥殘留分析、氨基甲酸酯殺蟲劑殘留分析以及除草劑殘留分析20。氣相色譜法具有操作簡便、分離效果好、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣等特點；ecd檢測器靈敏度高，是選擇性檢測器；而丙溴磷是熱穩(wěn)定性強的電負性物質(zhì)，且國內(nèi)外沒有采用gc-ecd法測定棉花中丙溴

30、磷的文獻報道，因此本試驗采用采用gc-ecd分析方法測定棉花中丙溴磷的殘留量。2 材料與方法2.1 田間試驗2.1.1 田間試驗概況試驗時間：2006年試驗地點：山東省濟南市，歷城區(qū)；湖南省長沙市，湖南農(nóng)業(yè)大學試驗農(nóng)藥：500 gl -1丙溴磷乳油試驗作物：棉花，魯原單14號（濟南）；湘雜棉2號（長沙）試驗方法：試驗小區(qū)面積：濟南市：30 m2（12.0 m×2.5 m）；長沙市：30 m2（7.5 m×4.0 m）。設(shè)6個處理：推薦劑量（937.5 ghm -2，有效成分)施藥2次、3次；高劑量（1875 ghm -2，有效成分）施藥1次、2次、3次和不施藥空白對照區(qū)ck

31、，每次施藥的間隔期7 d，各處理3次重復，各重復間順序排列，各處理間隨機排列。施藥時間：濟南市：第1次 2006年7月8日，第2次 2006年7月15日，第3次 2006年7月22日；長沙市：第1次 2006年8月22日，第2次 2006年8月29日，第3次 2006年9月5日。施藥方法：濟南市在棉花花蕾期，長沙市在結(jié)果期（由于田間試驗安排稍晚沒有統(tǒng)一）將500 gl -1丙溴磷乳油采用2次稀釋法稀釋后，用mad-美的比背負式噴霧器葉面噴霧，藥液量350 lhm -2。2.1.2 試驗點的氣候條件、土壤類型濟南試驗點屬暖溫帶大陸性季風氣候區(qū)，四季分明，年平均氣溫14 ，年平均降水量650 mm

32、 700 mm。本試驗點為壤土，ph 6.9，有機質(zhì)含量1.1 %，前茬為地瓜，整個生長期沒施與丙溴磷類型相同的農(nóng)藥。長沙試驗點屬亞熱帶大陸性季風氣候區(qū)，四季分明，年平均氣溫17.5 ，年平均降水量1200 mm 1500 mm。本試驗點為河潮土，ph 6.5，有機質(zhì)含量為0.9 %，前茬為小麥，整個生長期沒施與丙溴磷類型相同的農(nóng)藥。2.2 檢測條件和方法2.2.1 儀器及設(shè)備美國varian cp-3800型氣相色譜儀：配備電子捕獲檢測器（63ni -ecd），star6.0色譜工作站。電子頂載天平：bs2000s，北京賽多利斯天平有限公司；高速組織搗碎機：dfy-200型，上海標本模型廠；

33、調(diào)速多用振蕩器：hy-4型，常州國華電器有限公司；循環(huán)水式真空泵：shz-d（）型，鞏義市英峪予華儀器廠；旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器：re-52a型，上海亞榮生化儀器廠；進樣器：10 ml；分液漏斗：250 ml、500 ml；層析柱：25 cm (長)×2 cm(i.d.)。2.2.2 試劑及耗材丙溴磷標準樣品：91 %（北京國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心提供）。二級水，自制；石油醚（60 90 ）：分析純，用前重蒸餾，天津化學試劑有限公司；乙腈：hplc級，天津四友公司；丙酮：analyzed hplc級，美國baker；二氯甲烷：gc殘留分析用，西班牙scharlau；無水硫酸鈉：分析純，用前650 灼

34、燒4 h，北京化工廠；氯化鈉：優(yōu)級純，北京化工廠；助濾劑：celite 545，美國；硅膠：試劑級，150 mm 180 mm，105 至少活化4 h，趁熱放入避光的干燥器中，使用前用1.5 %二級水減活，青島海洋化工廠；活性炭：煙臺三合化學試劑有限公司；助濾劑、硅膠和濾紙用前必須進行除雜處理。2.2.3 樣品制備用聚乙烯塑料袋包裝。各處理小區(qū)棉籽、棉葉以5點法采樣，每小區(qū)樣品總重不少于1 kg。棉籽軋花后硫酸脫絨、棉葉長度剪成2 3 cm冷藏在-20 條件下待測。測定前趁凍粉碎混勻樣品，再連續(xù)四分法取樣0.2 kg待測。2.2.4 分析步驟2.2.4.1 提取稱取制備好的樣品20 g（精確至

35、0.01 g）放入高速組織搗碎機中，加入60 ml丙酮溶液，勻漿2 min，鋪1 cm厚助濾劑，布氏漏斗過濾，用40 ml丙酮溶液分3次清洗搗碎缸、布氏漏斗，合并濾液裝入100 ml量筒中，用丙酮稀釋至刻度線，倒入抽濾瓶搖勻待等份轉(zhuǎn)移。2.2.4.2 液液分配在250 ml分液漏斗中加入50 ml石油醚，再加入40 ml乙腈，用移液管轉(zhuǎn)移5 ml樣品溶液于分液漏斗中，再接著用30 ml×2 乙腈萃取，合并乙腈相于500 ml分液漏斗中，加入150 ml 2.5 %氯化鈉水溶液，再加入50 ml石油醚，液液分配，再接著用50 ml×2 石油醚萃取，合并石油醚相（上層），過無水

36、硫酸鈉柱（16 g）干燥，在40 水浴中減壓旋轉(zhuǎn)濃縮近干，用3 ml 90 %石油醚-丙酮溶液溶解提取物，準備上樣。2.2.4.3 凈化層析柱上鋪下墊8 g 厚無水硫酸鈉，中間夾8 g硅膠（棉葉需在硅膠上加0.2 g活性炭），用30 ml丙酮預(yù)淋后，用40 ml石油醚平衡，轉(zhuǎn)移上樣液，用80 ml 90 %石油醚-丙酮溶液淋洗層析柱（棉葉用100 ml 90 %石油醚-丙酮溶液淋洗層析柱），收集淋洗液，在40 水浴中減壓旋轉(zhuǎn)濃縮干，用2 ml 50 %石油醚-丙酮溶液定容，上機測定。2.2.5 丙溴磷分析測定條件2.2.5.1 氣相色譜分析測定條件色譜柱及固定相：j&w scienti

37、fic db-1701 30 m×0.25 mm i.d.×0.25 mm膜的石英毛細管柱；溫度：柱箱100 (保持1 min) 30 min -1 275 (保持20 min)；氣化室及檢測室：300 ；載氣(高純n2)：柱前壓0.14 mpa；補充氣(make up gas)：高純n2，流量30 mlmin -1；分流時間：1 min；分流比：201；進樣量：1 ml。2.2.5.2 氣-質(zhì)聯(lián)用儀分析測定條件儀器：thermofinnigan,trace ms氣相色譜條件：色譜柱：db-5（25 m×0.25 mm×0.25 m）；氣化室、檢測器溫度

38、：280 ；柱箱：100 （1 min）30 min -1 280 （15 min）；載氣：高純氦；分流比：241；流量：10 mlmin -1。質(zhì)譜條件：電離能量：70 ev；em電流：200 µa；掃描區(qū)間：e/2 50470；離子源溫度：200 ；接口溫度：250 。在上述條件下對棉葉上的殘留物進行質(zhì)譜定性分析。2.2.6 標準溶液的配制用丙酮配制約1 000 mgml -1丙溴磷標準儲備溶液，然后逐級用丙酮稀釋，即可用于添加回收試驗和丙溴磷標準工作曲線的建立。2.2.7 標準工作曲線的建立用丙酮、1.953 mgl -1、3.906 mgl -1、7.813 mgl -1、1

39、5.63 mgl -1、31.25 mgl -1、62.50 mgl -1、125.0 mgl -1、250.0 mgl -1、500.0. mgl -1丙溴磷標準溶液建立標準工作曲線。2.2.8 最低檢出濃度的確定最小檢出量：1×10 -11 g。（式2-1）式中：m1 最小檢出量，1×10 -11 g；m2 稱樣量，g；v1 樣品溶液定容體積，2 ml；v2 樣品溶液進樣體積，1 µl。按式2-1，丙溴磷在棉籽、棉葉上的最低檢出濃度均為0.02 mgkg -1。2.2.9 添加回收試驗取空白對照區(qū)棉籽和棉葉樣品進行丙溴磷添加回收試驗，棉籽、棉葉添加濃度分別設(shè)0

40、.02 mgkg -1、0.2 mgkg -1和 2 mgkg -1 3個水平。各處理5次重復。2.2.10 降解動態(tài)試驗棉葉上的降解動態(tài)試驗為一次施藥（1875 ghm -2，有效成分），多次采樣。采樣間隔為1/24 d、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d、21 d、30 d、60 d。2.2.11 最終殘留試驗施藥劑量2個水平，推薦劑量937.5 ghm -2（有效成分）施藥2次、3次；高劑量1875 ghm -2（有效成分）施藥2次、3次。在棉花收獲期分2次（2次采樣間隔期為10 d）采集成熟棉籽、棉葉樣品進行測定。2.2.12 殘留量計算公式根據(jù)本試驗條件，以質(zhì)量系數(shù)表示的試樣中

41、丙溴磷的殘留量x1（%）按式（2-2）計算： (2-2)式中：x1 樣品中農(nóng)藥殘留量(mgkg -1)；c標標準溶液濃度(mgml -1)；s樣樣品溶液的峰面積；s標標準溶液的峰面積；m 等份樣品質(zhì)量，g。3 結(jié)果與討論3.1 丙溴磷標準樣品色譜分離圖丙溴磷標準樣品色譜分離圖見圖3-1。t/mine/mv11.5 min丙溴磷（0.01 ng）圖3-1 丙溴磷標準樣品色譜分離圖fig.3-1 chromatogram of standard solution profenofos3.2 棉葉樣品中殘留物的質(zhì)譜譜圖及其解析質(zhì)譜法一般采用高速電子束撞擊氣態(tài)分子，將分解出的陽離子加速導入質(zhì)量分析器中

42、，然后按質(zhì)核比的大小順序進行收集和記錄下來，即得到質(zhì)譜圖?？梢愿鶕?jù)質(zhì)譜圖進行相對分子量的測定，分子式的測定以及有機化合物的結(jié)構(gòu)鑒定。棉葉樣品中的殘留物在2.2.5.2分析條件下氣質(zhì)聯(lián)用儀獲得的質(zhì)譜圖見圖3-2。圖3-2 丙溴磷的氣質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜圖fig.3-2 gc-ms spectrogram of profenofos丙溴磷離子碎片裂解途徑見圖3-3。圖3-3 丙溴磷離子碎片裂解途徑fig.3-3 degradation of fragment ion of profenofos 解析：由圖3-2可知，m/z 374.0為丙溴磷的分子離子峰，丙溴磷的基峰（m/z）為97，基峰離子碎片見圖3-3

43、，而質(zhì)荷比（m/z）為339、208、206、139、125、167的幾個離子峰的相對峰度也是比較強的。m/z 339為分子離子失去一個-cl后的碎片離子峰，m/z 208（206為cl的同位素導致）為分子離子丟失一個-p=o和-och2ch3以及-sch2ch2ch3后的碎片離子峰，m/z 139為分子離子丟失一個-ch2ch3和一個并發(fā)生重排后的碎片離子峰，m/z 125為分子離子丟失一個-ch2ch2ch3和一個并發(fā)生重排加氫后的碎片離子峰，m/z 167為分子離子丟失一個后的碎片離子峰，m/z 97為分子離子丟失一個-ch2ch3和一個以及一個-ch2ch2ch3后重排加氫的碎片離子峰

44、。3.3 丙溴磷工作曲線以峰面積y和進樣量x(ng)作圖，得到丙溴磷標樣的直線回歸方程y= -23 4213 421 759x，相關(guān)系數(shù)r = 0.9 949，該r值遠大于相關(guān)系數(shù)檢驗表中查得相應(yīng)顯著水平下的臨界值r，（n-2）0.765，表明所建立的標準工作曲線線性很好，工作曲線見圖3-4。圖3-4 丙溴磷標準工作曲線fig.3-4 the standard curve of profenofos3.4 添加回收結(jié)果和色譜圖3.4.1 添加回收結(jié)果丙溴磷標樣在棉籽和棉葉上添加水平為0.02 mgkg -1、0.2 mgkg -1、2 mgkg -1，棉籽的回收率極值為82 % 118 %，三

45、個添加水平的平均回收率范圍為86 % 104 %），相對標準偏差為5.33 % 15.86 %；棉葉的回收率極值72 % 118 %三個添加水平的平均回收率范圍平均87 % 104 %，相對標準偏差為7.20 % 14.28 %。以上數(shù)據(jù)表明該方法的準確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留試驗準則的要求。添加回收率結(jié)果見表3-1。表3-1 丙溴磷在棉籽、棉葉上的添加回收試驗結(jié)果tab.3-1 recovery of profenofos in cottonseed and cotton leaves樣品matrix樣品量sample/g添加量fortificationamount/mg添加水平fortif

46、icationlevel/mgkg -1回收率recovery/%平均回收率mean recovery/%相對標準偏差rsd/%棉籽200.40.02118，114，89，81，9810015.8640.2109，113，88，114，10010410.4840282，93，87，82，88865.33棉葉200.40.02108，101，98，93，1181049.7140.291，79，72，104，908714.2840297，97，82，96，100947.203.4.2 棉籽棉葉樣品色譜圖棉籽空白樣品色譜分離圖見圖3-5、3-6。t/mine/mv圖3-5 棉籽空白樣品色譜分離圖（濟

47、南）fig.3-5 chromatogram of cotton seeds ck (jinan)t/mine/mv圖3-6 棉籽空白樣品分離色譜圖（長沙）fig.3-6 chromatogram of cotton seeds ck (changsha)添加水平為0.02 mgkg -1的棉籽樣品色譜分離圖見圖3-7、3-8。t/mine/mv圖3-7 添加水平為0.02 mgkg -1棉籽樣品色譜分離圖(濟南)fig.3-7 chromatogram of fortification level of 0.02 mgkg -1 of cotton seeds (jinan)e/mvt/mi

48、ne/mv圖3-8 添加水平為0.02 mgkg -1棉籽樣品分離色譜圖(長沙)fig.3-8 chromatogram of fortification level of 0.02 mgkg -1 of cotton seeds (changsha)棉籽樣品色譜分離圖見圖3-9、3-10。t/mine/mv圖3-9 棉籽樣品分離色譜圖(濟南)fig.3-9 chromatogram of cotton seeds sample (jinan)t/mine/mv圖3-10 棉籽樣品分離色譜圖(長沙)fig.3-10 chromatogram of cotton seeds sample (ch

49、angsha)棉葉空白樣品色譜分離圖見圖3-11、3-12。t/mine/mv圖3-11 棉葉空白樣品色譜分離圖（濟南）fig.3-11 chromatogram of cotton leaves ck (jinan)t/mine/mv圖3-12 棉葉空白樣品色譜分離圖（長沙）fig.3-12 chromatogram of cotton leaves ck (changsha)添加水平為0.02 mgkg -1的棉葉樣品色譜分離圖見圖3-13、3-14。t/mine/mv圖3-13 添加水平為0.02 mgkg -1棉葉樣品分離色譜圖(濟南) fig.3-13 chromatogram of

50、 fortification level of 0.02 mgkg -1 ofcotton leaves (jinan)t/mine/mv圖3-14 添加水平為0.02 mgkg -1棉葉樣品分離色譜圖(長沙)fig.3-14 chromatogram of fortification level of 0.02 mgkg -1 ofcotton leaves (changsha)棉葉樣品色譜分離圖見圖3-15、3-16。t/mine/mv圖3-15 棉葉樣品分離色譜圖(濟南)fig.3-15 chromatogram of cotton leaves sample (jinan)t/mine

51、/mv圖3-16 棉葉樣品分離色譜圖(長沙)fig.3-16 chromatogram of cotton leaves sample (changsha)由圖3-5 圖3-16可見，濟南、長沙兩地棉籽、棉葉的空白樣品在丙溴磷的出峰位置都沒有色譜峰，表明空白樣品中不含丙溴磷；棉籽、棉葉樣品色譜分離圖與其添加回收譜圖相似，圖中對應(yīng)位置都有丙溴磷色譜峰，依此確定樣品中含有丙溴磷。3.5 殘留動態(tài)試驗結(jié)果丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)測定結(jié)果見表3-2。表3-2 丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)測定結(jié)果tab.3-2 the degradation dynamic in cotton leaves施藥劑量dose

52、 of applying/ghm -2(a.i.)取樣間隔時間interval sampling/d濟 南jinan長 沙changsha平均殘留量mean residual level/mgkg -1降解率rate of degradation/%平均殘留量mean residual level/mgkg -1降解率rate of degradation/%18751/241108314560326129.691158337.1949.38979.0922.497145.5953.696215.4950.7399302.0981.998601.7980.1599.9丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)曲

53、線見圖3-17、3-18。ct = 53.8606e-0.4805 tr=-0.9660試驗結(jié)果表明，丙溴磷在棉葉上的原始沉積量很高，濟南試驗點為110 mgkg -1，長沙試驗點為83 mgkg -1，但其降解很快，丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)曲線（圖3-17、圖3-18）符合方程ct = c0 e -kt，方程的r值均大于0.05顯著水平。用表3-2的測定數(shù)據(jù)計算得出丙溴磷在棉葉上的降解動態(tài)方程濟南為：ct = 107e-0.9891t，r= -0.9 733，半衰期0.7 d；長沙為：ct = 54e-0.4805 t，r= -0.9 660，半衰期1.4 d。施藥后60 d取樣的殘留量分別

54、是1.7 mgkg -1和0.15 mgkg -1，殘留量仍然較高?？偟目磥?，丙溴磷在棉上的降解速率都是濟南大于長沙試驗點，可能與氣象條件、土壤質(zhì)地和棉株生長狀態(tài)有關(guān)。3.6 最終殘留量試驗結(jié)果丙溴磷在棉籽和棉葉上的最終殘留量測定結(jié)果見表3-3、3-4。表3-3 丙溴磷在棉籽上的最終殘留量測定結(jié)果tab.3-3 the final residue levels in cotton seeds試驗地點trial site取樣日期time of sampling藥后取樣間隔時間interval sampling/d施藥劑量does of applying/ghm -2(a.i.)施藥2次applying twice施藥3次applying three times