醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測技術(shù) ppt課件

1、醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測與檢驗技術(shù)醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測與檢驗技術(shù) 湖南省湖南省cdc cdc 李世康李世康目錄目錄目錄目錄潔凈手術(shù)部空氣潔凈手術(shù)部空氣醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范 gb 50333-2002皮膚黏膜消毒液皮膚黏膜消毒液皮膚消毒劑衛(wèi)生要求gb27951-2011;黏膜消毒劑通用要求gb27954-2011透析用水透析用水血液透析和相關(guān)治療用水 yy0572-滅菌醫(yī)療器具敷料等滅菌醫(yī)療器具敷料等中華人民共和國藥典壓力蒸汽滅菌器壓力蒸汽滅菌器消毒與滅菌效果的評價方法與標(biāo)準(zhǔn) gb 15981-1995醫(yī)院污水醫(yī)院污水醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放要求 gb 18466-2005致病菌檢測中大腸、致病菌檢測

2、中大腸、沙門、乙型溶鏈、綠沙門、乙型溶鏈、綠膿、金葡膿、金葡分別按gb4789.3， gb4789.4， gb/t4789.11, gb7918.4, gb7918.5方法進(jìn)行。國家標(biāo)準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn) 強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)新舊版主要區(qū)別：新舊版主要區(qū)別：v 環(huán)境分類、環(huán)境分類、v 高中低度危險性醫(yī)療器材分類、高中低度危險性醫(yī)療器材分類、v 空氣采樣方法、空氣采樣方法、v 增加治療用水檢查。增加治療用水檢查。重點：重點：v 4.醫(yī)院消毒衛(wèi)生要求醫(yī)院消毒衛(wèi)生要求v 附錄附錄a 采樣及檢查方法采樣及檢查方法 類環(huán)境：類環(huán)境：采用采用空氣潔凈技術(shù)空氣潔凈技術(shù)的診療場所，分潔的診療場所，分潔凈手術(shù)部和其他潔凈

3、場所。凈手術(shù)部和其他潔凈場所。 類環(huán)境：類環(huán)境：非潔凈非潔凈手術(shù)部手術(shù)部（室）；產(chǎn)房；（室）；產(chǎn)房；導(dǎo)管室導(dǎo)管室；血液病病區(qū)、燒傷病區(qū)等血液病病區(qū)、燒傷病區(qū)等保護(hù)性隔離病區(qū)保護(hù)性隔離病區(qū)；重癥；重癥監(jiān)監(jiān)護(hù)病區(qū)護(hù)病區(qū)；新生兒室新生兒室等。等。 類環(huán)境：類環(huán)境：母嬰同室；母嬰同室；消毒供應(yīng)中心的檢查包裝消毒供應(yīng)中心的檢查包裝滅菌區(qū)和無菌物品存放區(qū)滅菌區(qū)和無菌物品存放區(qū)；血液透析中心（室）；血液透析中心（室）；其他普通住院病區(qū)等。其他普通住院病區(qū)等。 iv類環(huán)境：類環(huán)境：普通門（急）診普通門（急）診及其檢查、治療（注及其檢查、治療（注 射、換藥等）室；射、換藥等）室；感染性疾病科門診和病區(qū)感染性疾病

4、科門診和病區(qū)。環(huán)境類別環(huán)境類別 i類環(huán)境類環(huán)境類環(huán)境類環(huán)境 類環(huán)境類環(huán)境 類環(huán)境類環(huán)境 a cfu皿為平板暴露法，皿為平板暴露法，cfu/m3為空氣采樣器法。為空氣采樣器法。 b 平板暴露法檢測時的平板暴露時間。平板暴露法檢測時的平板暴露時間。潔凈手術(shù)部潔凈手術(shù)部 其他潔凈場所其他潔凈場所 空氣平均菌落數(shù)空氣平均菌落數(shù)a cfu皿皿 符合符合gb 50333要求要求 4. 0(30 min)b 4. 0(15 min) 4. 0(5 min) 4.0(5 min) cfu/m3 150 - -物體表面平均菌落數(shù)物體表面平均菌落數(shù)cfu/cm250 50 100 100 懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或疑似暴

5、發(fā)與醫(yī)院環(huán)境有關(guān)時，懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或疑似暴發(fā)與醫(yī)院環(huán)境有關(guān)時， 應(yīng)進(jìn)行應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物目標(biāo)微生物檢測。檢測。 critical device/items 進(jìn)入正常進(jìn)入正常無菌組織無菌組織、脈管系統(tǒng)脈管系統(tǒng)或或有無菌體液（如血液）有無菌體液（如血液）流過，一旦被微生物污染將導(dǎo)致極高感染危險的器材。流過，一旦被微生物污染將導(dǎo)致極高感染危險的器材。 semi-critical deviceitems 直接或間接直接或間接接觸黏膜接觸黏膜的器材。的器材。 no-critical device/items 僅與完整皮膚接觸而僅與完整皮膚接觸而不與黏膜接觸不與黏膜接觸的器材。的器材。目錄目錄v 相對正壓

6、潔凈的條件進(jìn)行試驗。相對正壓潔凈的條件進(jìn)行試驗。v 100100級空氣潔凈實驗室級空氣潔凈實驗室、100100級空氣潔凈操作臺級空氣潔凈操作臺v p p2 2生物安全柜、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、采樣箱、干燥生物安全柜、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、采樣箱、干燥箱、高壓鍋、冰箱、超凈臺、顯微鏡、紫外線測定儀、溫箱、高壓鍋、冰箱、超凈臺、顯微鏡、紫外線測定儀、溫濕度計、照度計等設(shè)備濕度計、照度計等設(shè)備v 計量認(rèn)證：儀器、設(shè)備、定期計量認(rèn)證。計量認(rèn)證：儀器、設(shè)備、定期計量認(rèn)證。v 監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識，熟悉消監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識，熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能，具備熟悉

7、的檢驗技能；選擇合理的采毒設(shè)備和藥劑性能，具備熟悉的檢驗技能；選擇合理的采樣時間（消毒后、消毒前）樣時間（消毒后、消毒前）; ;遵循嚴(yán)格的無菌操作。遵循嚴(yán)格的無菌操作。目錄目錄v空氣微生物污染檢查空氣微生物污染檢查v物體表面微生物污染檢查物體表面微生物污染檢查v醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查v滅菌醫(yī)療器材檢查滅菌醫(yī)療器材檢查v消毒醫(yī)療器材檢查消毒醫(yī)療器材檢查v使用中消毒液染菌量檢查使用中消毒液染菌量檢查v治療用水檢查治療用水檢查v醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水檢查醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水檢查v壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測類環(huán)境在潔凈系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動前采樣；、 、 類環(huán)境在消毒或規(guī)定的通風(fēng)換氣后從事

8、醫(yī)療活動前采樣1、類環(huán)境參照gb50333 ；2、 、 類環(huán)境采用平板暴露法，布點布點方法需注意。類環(huán)境暴露15min， 、 類環(huán)境暴露5min。將平板放置于37培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后計數(shù)。平板暴露法按平均每皿的菌落數(shù)報告：cfu/（皿暴露時間）。gb 15982-2012gb 50333-2002放置0.8m至1.5m高臺面；行走動作輕，減少走動；監(jiān)測人員穿潔凈服，戴口罩，注意手衛(wèi)生；先布點（放皿），后開蓋；采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁扣放于平皿旁；同一房間的空氣與物表，均由一人操作。類環(huán)境4. 0 cfu皿皿 (15 min) ； 、 類環(huán)境 4. 0 cfu皿皿 (5 min) 。具體見

9、表1（1) 室內(nèi)面積30 m2，設(shè)置內(nèi)、中、外對角線3 個點，內(nèi)、外布點部位距墻壁1m處。 (2) 室內(nèi)面積30 m2，設(shè)4角及中央5 點，4角布點部位距離墻壁1m處。潛在污染區(qū)、污染區(qū)消毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場情況確定。棉拭子法：棉拭子法：用5cm5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有的無菌棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，連續(xù)采樣14個規(guī)格板面積。剪去手接觸部分，并將棉拭子放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)，立即送檢。若采樣物體表面有消毒劑殘留時，采樣液應(yīng)。門把等小型物體則采用棉拭子直接在 物體表面按一定順序涂抹采樣，結(jié)果計算用cfu件表示。傾注法是指傾注法是指將采

10、樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已融化的4548的營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置361 溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。gb15982-20121.采樣面積：被采表面100/cm，取全部表面；被采表面100 cm，取100 cm。2.門把手等不規(guī)則物體表面用面拭子直接涂擦采樣，用cfu/件表示件表示。3.同一房間空氣、物表采樣，先采空氣，后才物表，最好由一個人操作。4. 樣品標(biāo)識一定要清楚，能溯源、追蹤，以便整改。5.中和劑選用0.1%硫代硫酸鈉生理鹽水。 、類環(huán)境5. 0 cfu

11、cm2 ； 、 類環(huán)境 10. 0 cfucm2 。- -食物、微生物或有機(jī)物接觸到的物體食物、微生物或有機(jī)物接觸到的物體表面，都會留下表面，都會留下atpatp（三磷酸腺苷）（三磷酸腺苷）- -物體經(jīng)清潔后，部分殘留的食物、微物體經(jīng)清潔后，部分殘留的食物、微生物或其他有機(jī)物，通過測定這些殘生物或其他有機(jī)物，通過測定這些殘留物細(xì)胞內(nèi)留物細(xì)胞內(nèi)atpatp含量，就可以反映出物含量，就可以反映出物體的清潔度。體的清潔度。atpatp生物熒光技術(shù)生物熒光技術(shù)- has become the standard method for determining cleanliness levels on c

12、ontact surfaces during past ten years.- a direct indicator of potential for contamination. -monitoring and verification of haccp and ssop.-在過去的十年里，在過去的十年里，atpatp熒光快速檢測法已經(jīng)變成一熒光快速檢測法已經(jīng)變成一種國際測定物體表面清潔水平的標(biāo)準(zhǔn)方法、得到了種國際測定物體表面清潔水平的標(biāo)準(zhǔn)方法、得到了國際公認(rèn)。國際公認(rèn)。-一種直接可視的污染監(jiān)測手段一種直接可視的污染監(jiān)測手段-得到得到haccphaccp和和ssopssop認(rèn)可的監(jiān)測和檢驗手

13、段認(rèn)可的監(jiān)測和檢驗手段采取手衛(wèi)生后，在接觸病人或從事醫(yī)療活動前采樣。被檢人五指并攏，用浸有的棉拭子在雙手指屈面雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約一只手涂擦面積約302），），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml采樣液的試管內(nèi)，立即送檢。若采樣時手上有消毒劑殘留，采樣液應(yīng)含相應(yīng)中和相應(yīng)中和劑劑。傾注法gb15982-2012選用0.1%硫代硫酸鈉生理鹽水。衛(wèi)生手消毒衛(wèi)生手消毒：醫(yī)務(wù)人員用速干手消毒劑揉搓雙手，以減少手部暫居菌的過程。外科手消毒外科手消毒：外科手術(shù)前醫(yī)務(wù)人員用肥皂（皂液）和流動水洗手，再用手消毒劑清除或者殺滅手部暫居菌和減少常居菌的過程

14、。使用的手消毒劑可具有持續(xù)抗菌活性。衛(wèi)生手消毒后醫(yī)務(wù)人員手表面的菌落總數(shù)應(yīng)10cfu/cm2；外科手消毒后醫(yī)務(wù)人員手表面的菌落總數(shù)應(yīng)5cfu/cm2 。2 手衛(wèi)生熒光檢測法手衛(wèi)生熒光檢測法在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。直接接種法直接接種法即取規(guī)定量供試品分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中。每個容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的 10%，同時，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于 15ml，胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基每管裝量不少于 10ml。培養(yǎng) 14 天，并逐日觀察。1.在潔凈度潔凈度100級區(qū)域級區(qū)域中進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染

15、。 2.采樣后送檢時間不得超過6h，樣品保存于4，則不超過24h。 3.如消毒因子為消毒劑，采樣液中應(yīng)加入中和劑。 應(yīng)采有效期有效期內(nèi)的樣品（高壓滅菌2周；環(huán)氧乙烷2年）。4.滅菌后內(nèi)鏡（如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡、腦室鏡等）應(yīng)每月進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好記錄，合格標(biāo)準(zhǔn)為無菌生長。 無菌的判斷：將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天；培養(yǎng)期間應(yīng)逐日逐日觀察觀察并記錄是否有菌生長。如在加人供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)培養(yǎng)3 天，天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否

16、再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。陽性對照管應(yīng)生長良好，陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。試驗無效。表2：醫(yī)療器具供試品：最少檢驗數(shù)量為10（瓶或支）。 1. 無菌檢查法對象與環(huán)境無菌檢查法對象與環(huán)境2. 培養(yǎng)基及其培養(yǎng)基及其適用性檢查適用性檢查（無菌性檢查和靈敏度檢（無菌性檢查和靈敏度檢查）查）（更換新批次的培養(yǎng)基時需做）（更換新批次的培養(yǎng)基時需做）3. 稀釋液、沖洗液及其制備方法稀釋液、沖洗液及其制備方法（如對不能用破壞性方法（如對不能用破壞性方法取樣的特殊醫(yī)療用品的采樣過程中需使用）取樣的特殊醫(yī)療用品的采樣過程

17、中需使用）4. 方法適用性試驗方法適用性試驗（每遇到新樣品類型時做）（每遇到新樣品類型時做）（包括薄膜過濾法和（包括薄膜過濾法和）：如）：如薄膜過濾法主要檢測水溶液供試品與注射用藥物等，薄膜過濾法主要檢測水溶液供試品與注射用藥物等，對于小型滅菌醫(yī)用器具、敷料、針灸針、腸線、縫合線等供試品使對于小型滅菌醫(yī)用器具、敷料、針灸針、腸線、縫合線等供試品使用直接接種法為宜。用直接接種法為宜。6. 結(jié)果判斷結(jié)果判斷7. 檢測量表檢測量表 2015版藥典無菌檢查法的增、修訂內(nèi)容版藥典無菌檢查法的增、修訂內(nèi)容 1、方法應(yīng)用范圍增加、方法應(yīng)用范圍增加“生物制品生物制品”。 2、實驗環(huán)境的修訂。、實驗環(huán)境的修訂。

18、 3、培養(yǎng)基體系的修訂。、培養(yǎng)基體系的修訂。 4、檢查方法的整合修訂。、檢查方法的整合修訂。 5、參照、參照usp 對表對表2、表、表3的整合修訂。的整合修訂。2015版中國藥典2010版中國藥典2010年版無菌檢查環(huán)境要求： 應(yīng)在潔凈度10000級背景下的局部100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)進(jìn)行。2015年版無菌檢查 在無菌條件下進(jìn)行試驗，環(huán)境必須達(dá)到無菌檢查的要求。 環(huán)境要求：該項檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度萬級（環(huán)境潔凈度萬級（c c級）級）背景下的局部百局部百級（級（a a級）級）的單向流區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物

19、的檢出。操作前環(huán)境潔凈度應(yīng)經(jīng)驗證。日常檢驗需對試驗環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。2010年版 1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 30 35 ； 20252.改良馬丁培養(yǎng)基 23 28 培養(yǎng)。3. 選擇性培養(yǎng)基 4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 5. 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基6. 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 7. 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2015年版1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 30 35 ； 2025培養(yǎng)（生）2. 胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基 20 25培養(yǎng)培養(yǎng)。 3. 選擇性培養(yǎng)基 4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基5. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 6. 沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 7. 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 無菌檢查之培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查之

20、培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基靈敏度檢查實驗菌株的修訂 2010年版 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌改良馬丁培養(yǎng)基 白色念珠菌、黑曲霉 2015年版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基:金黃色葡萄球菌cmcc(b)26 003、銅綠假單胞菌cmcc(b)10 104、生孢梭菌cmcc(b)64 941;胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基:枯草芽孢桿菌cmcc(b)63 501、白色念珠菌cmcc(f)98 001、黑曲霉cmcc(f)98 0032010年版1、接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)基2、接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

21、3、接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基4、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上2015年版 1、接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基2、接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基3、接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 4、接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基流體培養(yǎng)基7 支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3 天；v取每管

22、裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果?？瞻讓φ展軕?yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。進(jìn)行產(chǎn)品無菌檢查時，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的進(jìn)行產(chǎn)品無菌檢查時，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗。驗結(jié)果時，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗。v 方法適用性試驗按方法適用性試

23、驗按“供試品的無菌檢查供試品的無菌檢查” 的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。方法適用性試驗也可與供試品的無方法適用性試驗也可與供試品的無菌檢查菌檢查進(jìn)行。進(jìn)行。 2010版 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接入小于100 cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌 改良馬丁培養(yǎng)基接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉。2015版硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌大腸埃希菌ccmcc(b)44 102、生孢梭菌生孢梭菌各2管；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接入小于100cfu的枯草芽孢桿菌枯草

24、芽孢桿菌、白色念珠菌白色念珠菌、黑曲霉黑曲霉各2管。培養(yǎng)時間不得超過5天。方法適用性試驗的修訂在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。直接接種法直接接種法即取規(guī)定量供試品分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的容器中。每個容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的 10%，同時，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于 15ml，胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基每管裝量不少于 10ml。培養(yǎng) 14 天，并逐日觀察。1.在潔凈度潔凈度100級區(qū)域級區(qū)域中進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染。 2.采樣后送檢時間不得超過6h，樣品保存于4，則不超過24h。 3.如消毒因子為消毒劑，采

25、樣液中應(yīng)加入中和劑。 應(yīng)采有效期有效期內(nèi)的樣品（高壓滅菌2周；環(huán)氧乙烷2年）。4.滅菌后內(nèi)鏡（如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡、腦室鏡等）應(yīng)每月進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好記錄，合格標(biāo)準(zhǔn)為無菌生長。 無菌的判斷：將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天；培養(yǎng)期間應(yīng)逐日逐日觀察觀察并記錄是否有菌生長。如在加人供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)培養(yǎng)3 天，天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。陽性對照管應(yīng)生長良好，陽性對照管應(yīng)生長良

26、好，陰性對照管不得有菌生長。否則，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。試驗無效。表2：醫(yī)療器具供試品：最少檢驗數(shù)量為10（瓶或支）。樣品類型樣品類型樣本制備方法樣本制備方法可用破壞性方法取可用破壞性方法取樣的樣的1.敷料類等非管道類樣品取2個包裝內(nèi)的樣本，剪成約10mm30mm大小的樣片21片，接種含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管5管與胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)管2管。每培養(yǎng)管含培養(yǎng)基40ml，各接種3片樣片。2.注射針、針灸針、縫合針、棉簽等小樣本可直接接種含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管5管與胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)管2管。每管含培養(yǎng)基15ml。3.輸液（血）器等導(dǎo)管類樣本選7支樣本，以無菌注射器吸取5.0ml-10.

27、0ml無菌洗脫液注入管內(nèi)往返搖蕩5次。將樣本洗脫液分別接種含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)管5管與胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)管2管。培養(yǎng)管含培養(yǎng)基15ml，每管接種樣本洗脫液1.0ml。不能用破壞性方法不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器材取樣的醫(yī)療器材應(yīng)在應(yīng)在環(huán)境潔凈度環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)中，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹，采樣取全部表面或不少于100cm2；然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行。牙科手機(jī)牙科手機(jī)環(huán)境同上，將每支手機(jī)分別置于含中，頁面高度應(yīng)大于4.0cm，于旋渦混合器上洗滌震蕩30s以上，

28、取進(jìn)行無菌檢查。對照與培養(yǎng)對照與培養(yǎng)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件：1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 30 35 2. 胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基 20 25培養(yǎng)培養(yǎng)陽性對照：陽性對照：應(yīng)根據(jù)供試品特性供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗的菌液制備同方法適用性試驗，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查時每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)72h內(nèi)應(yīng)生長良好。陰性對照陰性對照

29、:供試品無菌檢查時，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。在消毒處理后，存放有效期內(nèi)采樣。gb 15982-2012和內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)操作規(guī)范（2004年版）1.消毒劑濃度監(jiān)測每日定時監(jiān)測并做好記錄，保證消毒效果。消毒劑使用時間不得超過產(chǎn)品說明書規(guī)定的使用期限。2.消毒后內(nèi)鏡（如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡、鼻竇鏡等）應(yīng)每季度進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好監(jiān)測記錄。3.采樣時，盡量用大小一致的無菌棉簽，并將棉簽通過采 樣管壁擠壓，去除多余的采樣液，使之處于濕潤狀態(tài)，而 不是浸泡狀態(tài)，然后按30角度輕輕地有序地用力均勻地 涂抹采樣品，禁用干棉簽采樣。醫(yī)療器材：菌落總數(shù)應(yīng)20

30、cfu/件（/g或/100cm2）,不得檢出致病性微生物。 ：菌落總數(shù)應(yīng)200cfu/件（/g或/100cm2）,不得檢出致病性微生物。詳見下頁樣品類型樣品類型樣本制備方法樣本制備方法可整件放入無菌可整件放入無菌試管的試管的用洗脫液浸沒后震蕩30s以上,取洗脫液1.0ml接種平皿，將冷至4045的熔化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15ml20ml，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)（cfu/件），必要時分離致病性微生物?？捎闷茐男苑椒捎闷茐男苑椒ㄈ拥娜拥脑?00級超凈工作臺稱取1g10g樣品，放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0ml接種平皿，計數(shù)菌落數(shù)（cfu/g），必要時分離

31、致病性微生物。不可用破壞性方不可用破壞性方法取樣的法取樣的在100級超凈工作臺，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面100cm2，取全部表面，被采表面100cm2，取100cm2，然后將除去手接觸部分的棉拭子進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.0ml接種平皿，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注，361恒溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)（cfu/cm2），必要時分離致病性微生物。消毒后內(nèi)鏡消毒后內(nèi)鏡取清洗消毒后內(nèi)鏡，采用無菌注射器抽取50ml含相應(yīng)中和劑的洗脫液，從活檢口注入沖洗內(nèi)鏡管路，并全量收集（可使用蠕動泵）送檢?；靹蚝笕∠疵撘簝A皿培養(yǎng)。將剩余洗脫液在無菌條件下采用濾膜濾膜（0.45m）過濾濃縮

32、，將濾膜接種于凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），培養(yǎng)計數(shù)。v 采樣前準(zhǔn)備無菌手套，采樣前準(zhǔn)備無菌手套，80ml容量的螺口瓶，及中和劑容量的螺口瓶，及中和劑 。v 螺口瓶我們用的是螺口瓶我們用的是“hxbl”和星玻璃和星玻璃 ，可以高溫高壓，可以高溫高壓，刻度為刻度為80ml。v 采樣前需要瓶口酒精燈燒灼消毒采樣前需要瓶口酒精燈燒灼消毒 。特此感謝陸燁提供的相關(guān)資料。特此感謝陸燁提供的相關(guān)資料。v 抽取中和劑，需要用抽取中和劑，需要用50ml的一次性注射器抽取，注意無的一次性注射器抽取，注意無菌操作。菌操作。 v 將中和劑從內(nèi)鏡注水口緩緩注入，避免噴濺，注意無菌將中和劑從內(nèi)鏡注水口緩緩注

33、入，避免噴濺，注意無菌操作，手不能接觸到操作，手不能接觸到“推柱推柱”內(nèi)側(cè)。內(nèi)側(cè)。 v 同時將出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。同時將出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。 v特此感謝陸燁提供的相關(guān)資料。特此感謝陸燁提供的相關(guān)資料。v 培養(yǎng)方法：傾皿法和培養(yǎng)方法：傾皿法和濾膜法濾膜法。49必要時分離致病微生物：必要時分離致病微生物：將送檢液用充分震蕩，取0.2ml分別接種90mm血平皿、中國蘭平皿和ss平皿，均勻涂布（），35培養(yǎng)48小時，觀察有無致病菌生長。 庫存消毒劑庫存消毒劑v有效成分含量應(yīng)依照有效成分含量應(yīng)依照消毒技術(shù)規(guī)范消毒技術(shù)規(guī)范或或產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。測。 使用中

34、消毒液使用中消毒液v使用中消毒液的有效使用中消毒液的有效濃度測定可用前述方濃度測定可用前述方法，也可使用經(jīng)國家法，也可使用經(jīng)國家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度試紙（卡）消毒劑濃度試紙（卡）進(jìn)行監(jiān)測。進(jìn)行監(jiān)測。采取更換前使用中消毒液與無菌器械保存液。用無菌吸管（或一次性滅菌注射器2.0ml-2.5ml）吸取消毒液1.0ml，加入到9.0ml中混勻。傾注法傾注法，用無菌吸管吸取一定稀釋比例的中和后混合液1.0ml接種平皿，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注，361恒溫箱培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)；必要時分離致病性微生物（金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、銅綠假單胞菌 ）。 gb15982-2012、 消

35、毒技術(shù)規(guī)范消毒技術(shù)規(guī)范2002版版3.17.9.21.采集消毒液樣品時應(yīng)在消毒液內(nèi)沒有物品或放入物品消毒作用到規(guī)定時間之后進(jìn)行采樣。2. 不同消毒劑使用與之中和，以中和被檢液的殘效作用。3.樣品標(biāo)識一定要清楚，不僅要注明采樣地點，且需要注明消毒液名稱和有效濃度等信息，確保。如：該院13手術(shù)室潔冠牌75%乙醇消毒液（20140902）常德市漢輔醫(yī)用消毒劑有限公司。滅菌用消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)為0cfu/ml；皮膚粘膜消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求（如）；其他使用中消毒液的菌落總數(shù)100cfu/ml，不得檢出致病性微生物。52消毒液類別醇酚類含氯、含碘、過氧化物氯己定（洗必泰）季胺鹽類醛類含有表面

36、活性劑的各種復(fù)方消毒液相相應(yīng)應(yīng)的的中中和和劑劑普通普通營養(yǎng)營養(yǎng)肉湯肉湯在肉湯在肉湯中加入中加入中和劑中和劑0.1%0.1%硫硫代硫酸代硫酸鈉鈉在肉湯中在肉湯中加入加入3%3%（w/vw/v）吐）吐溫溫8080和和0.3%0.3%卵磷卵磷脂脂在肉湯在肉湯中加入中加入0.3%0.3%甘甘氨酸氨酸在肉湯中在肉湯中加入加入3%3%（w/vw/v）吐）吐溫溫8080n本標(biāo)準(zhǔn)適用于完整皮膚和破損皮膚消毒的消毒劑，不適用于手消毒劑。n完整皮膚常用消毒劑的種類：完整皮膚常用消毒劑的種類：醇、碘、胍、季銨鹽、酚、過氧化物等。n微生物污染指標(biāo)微生物污染指標(biāo)：完整皮膚消毒劑菌落總數(shù) 10cfu/ml(g)，霉菌和酵

37、母菌，不得檢出致病菌；破損皮膚的消毒劑應(yīng)。n禁用、限量：禁用、限量：鉛汞砷v總結(jié)：總結(jié)：v滅菌用消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)為滅菌用消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)為0 cfu/ml；v破損皮膚的消毒劑菌落總數(shù)應(yīng)為破損皮膚的消毒劑菌落總數(shù)應(yīng)為0 cfu/ml；v完整皮膚黏膜消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)完整皮膚黏膜消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)10cfu/ml；v其他使用中消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)其他使用中消毒液的菌落總數(shù)應(yīng)100cfu/ml。v致病菌：不得檢出。致病菌：不得檢出。1.應(yīng)采用常規(guī)的微生物檢驗方法(傾注平板法)獲得細(xì)菌總數(shù)計數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)皿計數(shù))。培養(yǎng)基應(yīng)為胰蛋白酶大豆瓊脂或等價物，計算菌落數(shù)目應(yīng)在 35 37 下培養(yǎng) 后進(jìn)行。48h

38、 后若呈陰性，可于后再檢查。這是2.應(yīng)用鱟試劑法檢查內(nèi)毒素，測定是否有致熱原。每月1次。若采樣結(jié)果超標(biāo)時，須重復(fù)檢查，懷疑或確定病人在治療中有熱原反應(yīng)和菌血癥時，應(yīng)隨時檢測。應(yīng)在按比例配制透析液裝置的入口處或在混合罐的入口處，收集處理水的試樣。 血液透析相關(guān)治療用水yy0572-2005中國藥典2015年版1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法試樣應(yīng)在收集后 30 min 內(nèi)進(jìn)行化驗，或立即放在 1 5下儲存，并按常規(guī)程序在收集后24 h內(nèi)化驗。1.處理水所含細(xì)菌總數(shù)，應(yīng)不得超過 。2.在水處理裝置的輸出端的細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)不得超過 ;在血液透析裝置人口的輸送點上的細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)不得超過 。5 鱟試劑鱟試劑2

39、 2支支（陰性對照管陰性對照管）+ +各各100ul100ul細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水+ +各各100ul100ul無熱原水無熱原水37371h1h；鱟試劑鱟試劑2 2支支（陽性對照管陽性對照管）+ +各各100ul100ul細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水+ +各各100ul100ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液37371h1h；鱟試劑鱟試劑2 2支支（樣品陽性對照管樣品陽性對照管）+ +各各100ul100ul標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋液+ +各各100ul100ul樣液樣液37371h1h。鱟試劑鱟試劑2 2支支（樣品管樣品管）+ +各各100ul100ul細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水+ +各各100ul100ul樣液樣液3

40、7371h1h。共8支鱟試劑支鱟試劑，封閉管口，震蕩混勻試管內(nèi)容物，垂直放入371水浴中保溫60602min2min，溫育期間避免振動，輕輕取出，觀察結(jié)果。 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法。凝膠法分為和半定量試驗，適用于：一次性使用輸液器、輸血器、注射器、透析水。、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、電熱干燥箱、漩渦混合器。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時，除另有規(guī)定外，以凝膠限度試驗結(jié)果為準(zhǔn)。試驗器械試驗器械v 移液管（或刻度吸管、微量加樣器及無熱原吸頭）、凝集管移液管（或刻度吸管、微量加樣器及無熱原吸頭）、凝集管（1075mm）、試管、試管架、洗耳球、封口膜、計時器、）、試管、試管架、洗耳球、封

41、口膜、計時器、75%酒精棉、剪刀、砂輪。酒精棉、剪刀、砂輪。v 試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。常試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。常用的方法是在用的方法是在250 干烤至少干烤至少30分鐘，也可采用其他確證不干擾分鐘，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。v 若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選若使用塑料器械，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗操作過程應(yīng)防止用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗操作過程應(yīng)防止微生物是污染。微生物是污染。細(xì)菌內(nèi)毒

42、素國家標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋制備：制備：v取細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品或取細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，加入規(guī)定量工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置旋渦混合器上混合置旋渦混合器上混合15分鐘。分鐘。v然后進(jìn)行稀釋，制備成然后進(jìn)行稀釋，制備成4個濃個濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液,即即2.0、1.0、0.5、0.25（為所復(fù)核的鱟試劑的標(biāo)示靈敏為所復(fù)核的鱟試劑的標(biāo)示靈敏度），每稀釋一步均應(yīng)在旋渦度），每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合混合器上混合30秒鐘。秒鐘。v

43、堅實凝膠堅實凝膠v陽性陽性“+”v未形成凝膠未形成凝膠 凝膠不堅實凝膠不堅實 v陰性陰性“”供試品溶液供試品溶液 供試品陽性對照供試品陽性對照 陰性對照陰性對照 陽性對照陽性對照 供試品溶液供試品溶液 供試品陽性對照供試品陽性對照 陰性對照陰性對照 陽性對照陽性對照 此透析用水的內(nèi)毒素含量小于1eu/ml或者5eu/ml，符合規(guī)定此透析用水的內(nèi)毒素含量不小于1eu/ml或者5eu/ml，不符合規(guī)定供試品溶液供試品溶液 供試品陽性對照供試品陽性對照 陰性對照陰性對照 陽性對照陽性對照 復(fù)試時，供試品溶液需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判供試品符合規(guī)定；四管中如有一管為陽性，即可判供試品不符

44、合規(guī)定。供試品溶液供試品溶液供試品陽性對照供試品陽性對照陰性對照陰性對照陽性對照陽性對照 須復(fù)試總余氯：總余氯：采用含氯消毒劑消毒時，接觸池出口總余氯每日監(jiān)測不得少于每日監(jiān)測不得少于2次次（采用間歇式消毒處理的，每次排放前監(jiān)測）。糞大腸菌群：糞大腸菌群：每月每月檢測不得少于1 次次。致病菌：致病菌：檢測沙門菌（每季度不少于1次）和志賀菌（每年不少于2次），結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)根據(jù)需要檢測結(jié)核桿菌。污水監(jiān)測項目：污水監(jiān)測項目：總余氯、糞大腸菌群、腸道致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌）；結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)增測結(jié)核桿菌。gb18466-2005.附錄a、b、c、e標(biāo)準(zhǔn)4.1.2中明確指出：排入終端已建有正常運(yùn)行城

45、鎮(zhèn)二級污水處理廠的下水道的污水，執(zhí)行預(yù)處理標(biāo)預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)。參照gb18466-2005：詳見后頁 醫(yī)院醫(yī)院類型類型分類分類總余氯總余氯糞大腸菌群糞大腸菌群消毒接觸池的接觸時間1.5h,接觸池出口總余氯6.510 mgl100 mpnl100 mpnl排放排放標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)消毒接觸池的接觸時間1h,接觸池出口總余氯310 mgl500 mpnl預(yù)處理預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)消毒接觸池的接觸時間1h,接觸池出口總余氯28 mgl5000 mpnl（沙門氏菌、志賀氏菌、結(jié)核桿菌）總余氯的檢測總余氯的檢測鄰聯(lián)甲苯胺比色法鄰聯(lián)甲苯胺比色法1日常監(jiān)測一般采用比色計：在含5ml樣品的比色管內(nèi)滴加鄰聯(lián)甲苯胺溶液2滴3滴，混勻