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1、-作者xxxx-日期xxxx羥自由基清除率測(cè)定【精品文檔】抗氧化活性的測(cè)定(參考)測(cè)定活性物質(zhì)對(duì)羥自由基的清除率(羥自由基清除試驗(yàn))采用Fenton試劑:過氧化氫/亞鐵鹽。原理:H2O2與亞鐵離子反應(yīng)生成·OH,·OH自由基一般存活時(shí)間比較短,具有較高的反應(yīng)活性。當(dāng)在反應(yīng)體系中添加水楊酸,便能快速的捕捉·OH而產(chǎn)生紫色化合物(2,3-二羥基苯甲酸),該有色化合物在510nm處有較大吸收峰,測(cè)其吸光度可表示羥自由基(OH)的多少,吸光度與羥自由基(OH)的量成正比。反應(yīng)體系中若加入羥自由基(OH)清除劑后,被氧化的水楊酸減少,則體系顏色變淺甚至消失,吸光度變小。操作
2、:樣品處理:蔬菜水果切分,榨汁(切分后可放在2%的鹽酸或草酸溶液中護(hù)色)。將蔬菜汁或果汁放入50ml離心管中(如有顏色加適量活性炭或白陶土),在3000 4000rpm下離心10min 20min后(若樣品蛋白含量較高,需加適量乙酸鋅,亞鐵氰化鉀)快速過濾,濾液備用。取25ml比色管2支(樣品管、空白管),分別加入5ml1mmol/L硫酸亞鐵溶液、5ml3mmol/L H2O2溶液,樣品管中加入1ml樣品溶液,空白管中加入1ml蒸餾水,混合均勻后用3mmol/L水楊酸溶液定容至刻度,在37(0.1±)的恒溫水中反應(yīng)15min后,用分光光度計(jì)在510nm的波長下測(cè)定各管的吸光
3、度。以3mmol/L水楊酸溶液調(diào)零。其對(duì)OH自由基的清除率SA(%),可根據(jù)下式進(jìn)行計(jì)算:式中:A0不加樣品的吸光度; A1加入樣品的吸光度 #【以往經(jīng)驗(yàn),不一定全適用】:若樣品不進(jìn)行脫色處理,則操作如下:在3支25ml的比色管中(樣品管、空白管、樣品本底管)依次加入5ml1mmol/L硫酸亞鐵溶液,空白管和樣品管中各加入5ml3mmol/L H2O2溶液,本底管中H2O2溶液用蒸餾水代替。本底管和樣品管分別加入1ml樣品溶液,空白管中加入1ml蒸餾水,混合均勻后用3mmol/L水楊酸溶液定容至刻度。在37(0.1±)的恒溫水中反應(yīng)15min后用分光光度計(jì)在510nm的波長下測(cè)定吸光度??瞻坠転锳0,樣品管為A1,本底管為A2。其對(duì)·OH自由基的清除率SA(%),可根據(jù)下式進(jìn)行計(jì)算:清除率SA(%) =(A0(A1- A2) /
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