S007紅細胞ABO血型(正反定型)、RhD鑒定標(biāo)準化操作規(guī)程

1、標(biāo)準化操作規(guī)程 作業(yè)指導(dǎo)書 SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科 第 8 頁 共 8 頁文件名紅細胞ABO血型（正反定型）、RhD鑒定標(biāo)準化操作規(guī)程編制人審核人批準人批準日期修改日期簽 字修改日期簽 字復(fù)審日期簽 字復(fù)審日期簽 字紅細胞ABO血型（正反定型）、RhD鑒定標(biāo)準化操作規(guī)程一、目的為保證血液及血液成分的紅細胞ABO血型與RhD血型在臨床上同型輸注，確保臨床輸血安全、有效，根據(jù)臨床輸血技術(shù)規(guī)范第十五條特制定本標(biāo)準化操作規(guī)程。二、方法采用微柱凝膠凝集試驗檢測紅細胞ABO血型（正反定型）與RhD血型。三、原理將人紅細胞血型抗原與相應(yīng)的抗體發(fā)生的凝集反應(yīng)在微柱檢測系統(tǒng)中進行。微柱檢測

2、系統(tǒng)的上端為反應(yīng)室，將葡萄聚糖凝膠作為凝集反應(yīng)的介質(zhì)裝入檢測卡微柱凝集檢測管中，卡片上從左向右順序第一支至第三支微管凝膠中均分別充以抗A、抗B、抗D單克隆抗體IgM試劑，檢測人紅細胞ABO、RhD抗原。第四支至第六支微管中只有凝膠，第四支微管作陰性對照管，第五支和第六支微管作為ABO血型反定型管。微柱凝集檢測管中的凝膠的間隙起分子篩作用。凝集反應(yīng)陽性的紅細胞凝決留在微柱凝集檢測管的上面或中間，反應(yīng)陰性未凝集的紅細胞將通過凝膠的間隙，沉積在微柱凝集檢測管的底部。四、適用范圍適用于輸血前患者紅細胞ABO血型（正反定型）確認與RhD血型復(fù)查。五、儀器設(shè)備普通離心機；血型血清學(xué)多用離心機；37免疫微柱

3、孵育器；六、試劑1、試劑名稱：ABO、RhD血型試劑卡（單克隆抗體）；試劑生產(chǎn)廠家：長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司；批準文號：國藥準字S20063037；包裝規(guī)格：聚丙烯卡12檢測人份/盒；貯藏條件；18-25避光保存；有效期：自檢定合格之日起12個月；試劑單克隆抗體效價：抗A效價128；抗B效價128；抗D效價32；特異性試驗合格。2、試劑名稱：人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒；試劑生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限公司；批準文號：國藥準字S20060059；包裝規(guī)格：A1、B、O試劑各1支， 10ml /支；貯藏條件；2-8保存，不能冰凍；有效期：自檢定合格之日起2個月；試劑性能：外觀、溶血率%

4、、特異性、抗原性均符合檢定規(guī)程要求。七、檢測樣本要求1、標(biāo)本類型：靜脈血(EDTA抗凝劑:血液=1:10)。2、標(biāo)本采集：見輸血科標(biāo)本管理標(biāo)準化操作規(guī)程。3、標(biāo)本儲存和運輸：新鮮血28貯存時間不超過72小時。4、標(biāo)本拒收狀態(tài)：標(biāo)識不準確、標(biāo)本稀釋、細菌污染，嚴重溶血等不能測定。八、操作步驟1、將被檢者血樣標(biāo)本在3400r/min（1200g）離心5分鐘；2、將微柱凝膠試劑卡進行標(biāo)編號；3、待檢者與標(biāo)準紅細胞稀釋懸液的制備：采用塑料試管將被檢者紅細胞（10ul壓積紅細胞加入1.2ml生理鹽水中）及標(biāo)準紅細胞（0.5ml標(biāo)準紅細胞試劑+3.0ml生理鹽水）配制成0.50.8%紅細胞生理鹽水懸液。4

5、、將待檢者紅細胞稀釋懸液分別加入第一至第四管中，每管50ul；5、將待檢者血清分別加入第五支和第六支微管中，每管50ul；6、將A型和B型稀釋標(biāo)準紅細胞懸液分別加入第五支和第六支微管中，每管50ul；7、即刻使用血型血清學(xué)多用離心機離心5分鐘，2分鐘900rpm，3分鐘1500rpm，取出肉眼判定結(jié)果。8、結(jié)果判定：見表1。（1）陽性結(jié)果：紅細胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。反應(yīng)強度：特異性紅細胞抗原抗體復(fù)合物位于膠表面，為強陽性反應(yīng)；復(fù)合物在膠中為弱陽性反應(yīng)；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。（2）陰性結(jié)果：被檢紅細胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，

6、不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細胞沉于微柱凝膠的底部。（3）對于紅細胞RhD血型陰性的樣本，應(yīng)進一步作紅細胞RhD陰性確認試驗。表1 微柱凝膠凝集試驗檢測紅細胞ABO、RhD血型結(jié)果鑒定血型抗A抗B抗D陰性對照A1細胞B細胞D陽性A+-+-+B-+-+-O-+-+AB+-D陰性A+-+B-+-+-O-+AB+-九、質(zhì)量控制 1、對新進批號的試劑應(yīng)作抗體效價驗定。2、此檢測項目應(yīng)參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)評，且成績合格；3、每次做血型鑒定應(yīng)做室內(nèi)質(zhì)量控制，且要求在控。4、嚴格執(zhí)行查對制度，判斷結(jié)果后應(yīng)仔細核對、記錄，避免筆誤等引起的差錯。5、檢測標(biāo)本應(yīng)在28保存留一周，以備復(fù)查。十、生物

7、參考區(qū)間 ABO血型：A型，B型，O型，AB型；RhD血型：陽性，陰性。十一、干擾因素1、冷凝集素：在惡性腫瘤或病原體感染后有時冷反應(yīng)性自身抗體可異常增高造成溶血。2、自身抗體：紅細胞被自身抗體強烈致敏后將干擾ABO定型，且自身抗體的存在會導(dǎo)致交叉配血不合。3、弱凝集：當(dāng)患者紅細胞上抗原異?？赡軙?dǎo)致減弱的或缺少的凝集反應(yīng)，如亞型紅細胞抗原性較弱、新生兒、老年人及少數(shù)惡病質(zhì)患者紅細胞抗原形成不足或敏感性降低。4、細菌性凝集：常見有類B凝集，A型或O型病人因大腸桿菌O86感染，從而使紅細胞上獲得類B抗原，能與抗B抗體發(fā)生凝集，表現(xiàn)為B 或AB型。其不受溫度影響，病情好轉(zhuǎn)類B凝集即消失。另外紅細胞

8、被細菌或細菌酶污染，紅細胞上的T抗原被激活，與供血者中抗T抗體發(fā)生凝集。5、混合外觀凝集現(xiàn)象：主要見于患者有近期輸血史、骨髓移植、胎盤出血、白血病或其他原因如嵌合現(xiàn)象、A3亞型及Tn多凝集反應(yīng)。 6、不規(guī)則抗體：可通過測定唾液中的血型物質(zhì)來鑒定ABO血型。7、亞型： 亞型紅細胞抗原性較弱易產(chǎn)生弱凝集；8、假凝集：常見于某些肝病、傳染病、多發(fā)性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等??；9、血漿樣本血型鑒定時應(yīng)注意排除纖維蛋白原和補體的干擾；十二、注意事項1、檢測標(biāo)本必須正確有標(biāo)識，其血液量、紅細胞或血漿的質(zhì)量符合實驗要求和受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的

9、血樣（預(yù)防受血者在輸血前的3個月之內(nèi)可能有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)則抗體）。3、標(biāo)本血液離體后要求盡快送檢，至檢測完畢最長不能超過3d，每次檢測后受血者和供血者的血標(biāo)本應(yīng)在28保存7天；4、每批次試劑均應(yīng)進行效價測定，試劑使用前應(yīng)仔細檢查試劑的貯存條件是否符合要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度紅細胞濃度及抗原抗體的比例對試驗結(jié)果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：如果使用右旋糖酐、PVP等治療，應(yīng)注意將紅細胞洗滌；如果受者使用肝素治療，則應(yīng)用硫酸魚精蛋白對抗，使樣本凝結(jié)；7、疑存在冷凝集素的病人標(biāo)本的血型鑒定時應(yīng)用37生理鹽水洗滌3次再測定,并放37免疫微柱孵育器10分鐘后觀察

10、結(jié)果。8、疑存在自身抗體的病人標(biāo)本的正定型血型鑒定時應(yīng)用3745生理鹽水洗滌紅細胞三次或者用放散后的紅細胞（放散方法需不破壞紅細胞結(jié)構(gòu)）；9、疑為亞型應(yīng)通過亞型定型試劑來具體定型。鑒定血型時要注意正反定型的結(jié)合，加用抗H和抗A、B型標(biāo)準血清、A2紅細胞等檢查唾液中的血型物質(zhì)，必要時作吸收放散試驗以確定。若血清中存在不規(guī)則抗體可在反定型用O細胞加以鑒定，有些亞型因為抗原的某些位點缺失，也會產(chǎn)生相對于缺失抗原位點的抗體，這些抗體的產(chǎn)生有助于亞型的判定。10、疑為紅細胞被細菌或細菌酶污染產(chǎn)生的假凝集可置37免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果，此種凝集在4和37之間隨著溫度的升高凝集程度逐漸減弱，在37時最弱或消失。11、出現(xiàn)混合外觀凝集的情況時一般要核對標(biāo)本，必要時可重新抽取血樣；12、紅細胞出現(xiàn)弱凝集、假凝集應(yīng)進行紅細胞形態(tài)顯微鏡鏡檢，假凝集用生理鹽水稀釋或洗滌紅細胞可使凝集消失。13、對于初篩為D陰性的供血者，要分別用不同批次的IgG抗D試劑間接抗人球法進行Rh陰性確認，供血者弱D型血作為D陽性血發(fā)放。14、受血者一般只做IgM抗D試驗，若為陰性應(yīng)輸注D陰性血。15、注意血漿因抗凝不完全而出現(xiàn)小的纖維蛋白對凝集反應(yīng)結(jié)果的判讀