多孔彈力血管夾的研制及在腎血管性高血壓犬中的應用

1、多孔彈力血管夾的研制及在腎血管性高血壓犬中的應用（1廣州醫(yī)科大學衛(wèi)生職業(yè)學院廣東廣州510180）（2廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院廣東廣州510120）（3廣州醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院廣東廣州511447）【摘要】目的：探索彈力多孔血管夾的研制及其在腎血管性高血壓犬中的 應用。方法：選用高純硬度的304不銹鋼片和線，經(jīng)寧波線切割機和自動彈簧機 分別加工成血管夾支撐架和彈簧，再組裝，電解而制成含有1.0,1.3和1.6mm三 個孔徑的彈力血管夾。將血管夾用于縮窄7只beagle犬的雙側腎動脈；與5只 假手術犬相對照，觀察1年后兩組犬血壓、心、腎及頸動脈的差別。結果：多孔 彈力血管夾操作簡單、方便，能將變

2、異血管縮窄至理想的狹窄程度。在實驗早期， 連續(xù)有2只犬雙側腎動脈狹窄>80%后，4天內(nèi)死亡，該方法被放棄。其余5 只犬雙側腎動脈縮窄至70%80%之間，均存活至術后1年。縮窄犬自第2月始 血壓升高并持續(xù)1年。成功建成腎血管性高血壓模型。假手術犬各項指標未見明 顯異常。結論：應用木研宄之彈力多孔血管夾成功建立了穩(wěn)定的腎血管性高血壓 犬模型；亦有望在豬、猴等其它大動物縮窄血管的研究中有廣闊的應用前景?！娟P鍵詞】血管夾；腎血管性高血壓；動物模型【中圖分類號】r55【文獻標識碼】a【文章編號】2095-1752 （2016） 30-0395-03高血壓及其并發(fā)的心腦血管疾病是人類主要致死

3、性疾病之一，對其進行研究 有重要臨床意義。以前常用的模型之一是腎血管性高血壓大鼠1,越來越多的 實驗用建立犬、豬等大動物的腎血管性高血壓模型來研究心腦血管疾病。目前，國內(nèi)外在大動物實驗中縮窄血管常以臨時制作人工袖套、線圈或單孔 夾等方法來實現(xiàn)2-4。為了解決實驗中這些面臨的這些難題，我們研制了多孔彈 力血管夾，用來解決犬、豬等大動物實驗中變異血管縮窄不確定性的難題，并成 功建立了 beagle犬的腎血管性高血壓模型，申請了專利5,現(xiàn)予以報道。1. 多孔彈力血管夾的研制1.1血管夾的構成及工作原理本發(fā)明所述血管夾是：由1個鉗形夾和1個彈簧組成。鉗嘴張開后，上下兩 側分別有3個不同口徑的半圓孔，鉗

4、嘴閉合后即合成1.0,1.3和1.6mm三個不同 u徑的圓孔。鉗嘴的外側也是由和內(nèi)側相對泣半圓形構成。鉗的兩手柄之間的近 端連有彈性支撐片，遠端鑲嵌著1彈簧。在3個圓孔之間間隔一定的距離，鉗嘴 閉合吋是面接觸，能有效避免閉合過程中對組織的剪切作用，見圖1。1.2材料和制作方法選擇純度及硬度比較高304不銹鋼片（長2.0cm,寬1.0cm,厚1.0mm）及不 銹鋼線為材料，按照事先設計好的參數(shù)；再將不銹鋼線固定到己設計好參數(shù)的自 動彈簧機（廣州自強彈簧廠生產(chǎn)，0.2mm1.0mm）加工成（直徑 0.6mm×2.8mm外徑,5.8 cm×5.5圈）彈簧；然后

5、將血管夾支撐漿和彈 簧組裝成血管夾。1.3電解選用通用性好，市場應用最廣泛的磷酸基溶液為電解液。主要成分為85% 的磷酸6580ml, 98%的硫酸1520ml,鉻酐56ml，水154ml;密度1.70 1.74g/cm3；溫度6090°c，電流密度為2060a/dm2;吋間15min。將血管 夾放到磷酸基溶液中電解制成本發(fā)明之多孔彈力血管夾。2. 血管夾在beagle犬腎血管性高血壓模型中的應用2.1材料及方法2.1.1模型的制作從廣東高要康達實驗動物科技冇限公司購買雄性beagle 犬12只，犬齡11.5年，體重2030公斤。用3%的戊巴比妥鈉（0.5lmg/kg） 腹腔注射麻醉

6、。將腎動脈表面的軟組織分離干浄，采用多孔彈力血管夾按雙腎雙 夾法制作模型1-6。撒入青霉素80萬單位，逐層縫合。實驗早期，連續(xù)冇2只 犬雙側腎動脈狹窄>80%后，4天內(nèi)死亡，故放棄該組；保留雙側腎動脈狹窄 70%80%和假手術組，各5只犬。以標準犬飲料飼養(yǎng)，飲用自來水。2.1.2血壓的測量用omron hem-816指式電子血壓計測量犬尾巴的血壓。術前1天及術后1月開始，每月末3天連續(xù)監(jiān)測收縮壓及舒張壓，每次連續(xù)測量 3次，取9次血壓平均值作為血壓的值，連續(xù)測量1年。2.1.3腎動脈超聲的檢測以荷蘭philips iu 22彩色超聲診斷儀，中間頻率3. 5mhz的探頭檢測腎動脈。

7、狹窄率=(遠端內(nèi)徑一狹窄處內(nèi)徑)/遠端內(nèi)徑。2.1.4 數(shù)學減影血管造影(digital subtraction angiography, dsa)術后 1 年，將犬 腹腔麻醉、消毒、鋪巾后，在右股動脈近端置入4f鞘，在超滑導絲引導下以4f 豬尾及椎動脈造管行雙側腎動脈造影，了解血管夾的位置及縮窄后腎動脈的供血 情況。2.1.5腎功能檢測在術前1天，術后第2天，及第4、8及12個月分別檢 測犬外周血的尿素氮(blood urea nitrogen, bun)及肌酉干(creatinine, cr)的水平。2.2統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x-±s)表

8、示，兩組間均數(shù)的比較用成組 t檢驗，術后與術前的均數(shù)比較用配對t檢驗。統(tǒng)計經(jīng)spss 11.5軟件處理，以p <0.05為有統(tǒng)計學意義。3.結果3.1血壓的比較術前縮窄犬的平均sbp和dbp分別為138.80&plusmn;9.20和 79.80&plusmn;12.83mmhgo術后2月開始升高，至術后12月，sbp和dbp仍保 持在 168.60&plusmn;8.88 和 10960&plusmn;17.24mmhg 水平，與術前及假手術犬 相比均達統(tǒng)計學差異(p<0.01或p<0.05)。見圖2。3.2血清bun和cr的比較縮窄犬術前b

9、un及cr分別為5.18&plusmn;0.92mmol/l和 74.50&plusmn;9.95umol/l，術后 1 年兩者分別為 6.10&plusmn;0.92mmol/l 和 94.36&plusmn;17.22umol/l,術后與術前及假手術犬相比均未達統(tǒng)計學差異。模 型組中2只死亡犬，術后第2天bun及cr分別升為45.50&plusmn;5.16mmol/l 和505.00&plusmn;9.40umol/l,急性腎功能衰竭而死。3.3腎動脈彩超的結果術后1周腎動脈彩超顯示，狹窄遠端腎動脈的內(nèi)徑在3.65 mm4.98mm之 間，

10、狹窄處內(nèi)徑在0.951.44 mm;狹窄率在69.59%80.92%。見表1。3.4 dsa的結果術后1年，經(jīng)血管夾縮窄后腎動脈及腎臟仍顯影清晰；未能在dsa片上計 算狹窄率。見圖3。3.5病理結果的比較大體觀察未見縮窄犬腎臟明顯異常，見圖3。切片上，縮窄犬可見部分腎小 球及腎小管慢性缺血壞死，見圖3;左心室后壁心肌肥厚；假手術犬未見異常病 理改變。見圖4。表1術后1周彩超對縮窄犬和假手術犬腎動脈內(nèi)徑的觀察4. 討論自goldblatt等6于1934年報道了其先驅(qū)工作腎血管性高血壓犬模型以來, 臨吋制作人工袖套及線圈等多種方法被報道用于制作高血壓模型。本研究彩超結 果提示狹窄遠端腎動脈的內(nèi)徑在

11、3.26mm4.99mm之間，平均為4.28mm，變異 較大?？s窄70%后剩余血管的平均直徑為1.28mm。狹窄率相差10%吋，血管的 直徑僅相差0.43mm，且血管壁本身還有一定的厚度，約0.1mm0.2mm，這個 厚度在術中是未知的?？赡馨l(fā)生術后犬很快死亡，血壓不升或升而復降等事件 7-8o實驗早期，有2只犬雙側直徑約為4.5mm的腎動脈均縮窄至血管夾直徑 為1.3mm的孔中后，分別在術后第3天和第4天發(fā)生急性腎動脈衰竭而死亡。 故在其后的模型組5只犬中腎動脈多縮窄至直徑為1.6mm的孔中，僅有2只犬 的單側腎動脈較細，被縮窄至直徑1.3mm的孔中。術后1周經(jīng)彩超檢測證實縮 窄犬腎動脈狹窄

12、率在69.59%80.92%之間，達到實驗0的。術后觀察1年以上， 解決了將變異較大的大動物血管縮窄到不同狹窄程度技術難題。本研究中，模型組血壓在術后2月出現(xiàn)血壓升高，術后3月達峰值，較術前 及對照組相比升高20mmhg以上，高血壓模型建成。至術后1年，模型組sbp 及dbp仍保持血壓在較高水平，未見明顯下降。本研究中動態(tài)觀察模型組和對照組血清中的bun及cr水平，結果發(fā)現(xiàn)兩組間血清bun及cr水平在術前、術 后4月、8月及12月均無統(tǒng)計學意義；腎臟病理上可見部分腎組織慢性缺血改 變，透明變性；這些也從病因上解釋了該模型的穩(wěn)定性。也下是由于高血壓模型 穩(wěn)定，才能在心臟病理中可見左心室后壁心肌肥

13、厚；頸內(nèi)動脈發(fā)現(xiàn)內(nèi)膜破損、斑 塊形成。這些慢性高血壓的特征性改變，與國內(nèi)相關報道結果類似。本研究的不中之處是樣本量較小及未能設立高膽固醇組作對照。但本研究中 模型組動物的多種病理特征均從實驗角度證實用本研究所發(fā)明之血管夾可以制 作穩(wěn)定的腎血管性高血壓犬模型；可見本研究之血管夾亦有望在豬、猴等蘇它大 動物縮窄血管的研究中冇廣闊的應用前景?！緟⒖嘉墨I】1 zeng j, et al.two-kidney'two clip renovascular hypertensive rats can be used as stroke-prone rats.stroke, 1998, 29(8).2

14、 anderson wp,development of hypertension from unilateral renal arterystenosis in conscious dogs. hypertension, 19903 anderson wpjakata m development of hypertension from unilateral renalartery stenosis in conscious dogs. hypertension, 1990.4 buranakarl c, et al.norepinephrine kinetics in dogs with e

15、xperimentallyinduced renal vascular hypertension. am j vet res, 2000.5】田作軍，多孔彈力血管夾.中華人民共和國國家知識產(chǎn)權局.專利號：zl200920194267.3.6 goldblatt h,summerville ww studies on experimental hypertension: i.theproduction of persistent elevation of systolic blood pressure by means of renalischemia j exp med, 1934.7 cimprich re,et al.experiment