分光光度法在藥品中應(yīng)用

1、紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度法在可見(jiàn)分光光度法在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述一一.概述：概述：l 分光光度法是通過(guò)測(cè)定物質(zhì)在某些特定波分光光度法是通過(guò)測(cè)定物質(zhì)在某些特定波長(zhǎng)處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)物長(zhǎng)處或一定范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。紫外- -可見(jiàn)分可見(jiàn)分光光度法具有操作簡(jiǎn)便快速、專屬性和靈敏度光光度法具有操作簡(jiǎn)便快速、專屬性和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。因此在藥品的分析檢

2、驗(yàn)中被廣泛采高等優(yōu)點(diǎn)。因此在藥品的分析檢驗(yàn)中被廣泛采用。在各國(guó)藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢用。在各國(guó)藥典中藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢查和含量測(cè)定等各個(gè)項(xiàng)目中都能見(jiàn)到紫外查和含量測(cè)定等各個(gè)項(xiàng)目中都能見(jiàn)到紫外- -可可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。一一.概述：概述：l吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢吸收光譜：發(fā)射連續(xù)光譜的光源（如氘燈和鎢絲燈）發(fā)出的光通過(guò)透明物質(zhì)（固體、液體或絲燈）發(fā)出的光通過(guò)透明物質(zhì)（固體、液體或氣體）后，一些波長(zhǎng)的單色光成分被該物質(zhì)選氣體）后，一些波長(zhǎng)的單色光成分被該物質(zhì)選擇吸收，在原來(lái)的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗線擇吸收，在原來(lái)的連續(xù)光譜上出現(xiàn)若干條暗

3、線或暗帶，這種光譜叫做吸收光譜?；虬祹?，這種光譜叫做吸收光譜。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述二二.分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理在紫外和可見(jiàn)光區(qū)，靈敏度和精密度較高，在紫外和可見(jiàn)光區(qū)，靈敏度和精密度較高，一般每一般每1 1mlml溶液中含有幾微克（溶液中含有幾微克（ g g）的物質(zhì)的物質(zhì)即可測(cè)定，誤差約為即可測(cè)定，誤差約為1-2%1-2%，在此區(qū)域內(nèi)，在此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對(duì)光的吸收主要系分子中電子的能級(jí)物質(zhì)對(duì)光的吸收主要系分子中電子的能級(jí)躍遷所致，同時(shí)伴有分子的

4、振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能躍遷所致，同時(shí)伴有分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，級(jí)的變化，電子吸收光譜一般比較平緩，選擇性不如紅外光區(qū)，選擇性不如紅外光區(qū)，故紫外故紫外- -可見(jiàn)光區(qū)主可見(jiàn)光區(qū)主要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測(cè)定。要用于定量分析以及作為物理常數(shù)的測(cè)定。紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要紅外光區(qū)的靈敏度和精密度較低，一般需要數(shù)百微克（數(shù)百微克（ g g）的供試品進(jìn)行測(cè)定，此區(qū)域的供試品進(jìn)行測(cè)定，此區(qū)域內(nèi)，物質(zhì)對(duì)光的吸收系由分子中振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)內(nèi)，物質(zhì)對(duì)光的吸收系由分子中振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，能級(jí)的躍遷引起，紅外光譜的特征性很強(qiáng)，特別是在特別是在7-

5、157-15 m m（稱為稱為“指紋區(qū)指紋區(qū)”），吸收），吸收峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會(huì)峰很多，而且尖銳。除光學(xué)異構(gòu)體外，不會(huì)遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸遇到兩種不同的化學(xué)物質(zhì)完全相同的紅外吸收光譜，收光譜，故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)故紅外區(qū)主要用于鑒別和分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。的結(jié)構(gòu)。透光率（透光率（T T）：?jiǎn)紊馔ㄟ^(guò)一物質(zhì)的溶液時(shí)，）：?jiǎn)紊馔ㄟ^(guò)一物質(zhì)的溶液時(shí)，透過(guò)光的強(qiáng)度（透過(guò)光的強(qiáng)度（I I）與入射光的強(qiáng)度（與入射光的強(qiáng)度（I I0 0）之之比。即：比。即：T=I/IT=I/I0 0。吸 光 度 （吸 光 度 （ A A ） ：） ： 透 光 率 的 負(fù) 對(duì) 數(shù) 值

6、透 光 率 的 負(fù) 對(duì) 數(shù) 值 . .即即: :A=log1/T= -logTA=log1/T= -logT比耳比耳- -郎伯定律（郎伯定律（Beer -Lamberts LawBeer -Lamberts Law）：）：吸光度（吸光度（A A）與）與溶液的濃度溶液的濃度（C C）和）和光路長(zhǎng)光路長(zhǎng)（L L）是成正比例的。即：是成正比例的。即：A=ECLA=ECL比耳比耳- -郎伯定律適用范圍：郎伯定律適用范圍：l1.1.溶液的濃度不能過(guò)高或過(guò)低，使測(cè)溶液的濃度不能過(guò)高或過(guò)低，使測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差最小的最佳透射率定結(jié)果的相對(duì)誤差最小的最佳透射率為為T=37%T=37%左右。左右。l2.2.所用

7、溶劑不得與測(cè)定物質(zhì)有分子間所用溶劑不得與測(cè)定物質(zhì)有分子間締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸締合，生成復(fù)合物、異構(gòu)化或出現(xiàn)酸堿平衡堿平衡。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外分光光度計(jì)的使用紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述三三.紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用l1.1.基本構(gòu)造：基本構(gòu)造：穩(wěn)壓電源光源波長(zhǎng)選擇裝置樣品池檢測(cè)器記錄裝置2.2.儀器的校正和檢定儀器的校正和檢定l（1 1）波長(zhǎng)的校正：由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分）波長(zhǎng)的校正：由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除的影

8、響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)應(yīng)定期對(duì)所用儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。l鈥玻璃在鈥玻璃在279.4279.4nmnm、287.5nm287.5nm、333.7nm333.7nm、 360.9nm360.9nm、418.5nm418.5nm、460.0nm460.0nm、484.5nm484.5nm、536.2nm536.2nm與與637.5637.5nmnm的波長(zhǎng)處有尖銳的吸收的波長(zhǎng)處有尖銳的吸收峰，可作為波長(zhǎng)校正用。峰，可作為波長(zhǎng)校正用。 取在取在120120 C C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約干燥至恒重

9、的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約6060mgmg，精密稱定，用精密稱定，用0.0050.005mol/Lmol/L硫酸溶液溶解硫酸溶液溶解并稀釋至并稀釋至10001000mlml，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并計(jì)算其吸收系數(shù)。并計(jì)算其吸收系數(shù)。（2 2）吸光度的準(zhǔn)確度：）吸光度的準(zhǔn)確度：波長(zhǎng)波長(zhǎng)（nmnm）235235（最小）（最?。?57257（最大）（最大）313313（最?。ㄗ钚。?50350（最大）（最大）吸收系數(shù)吸收系數(shù)（E E1%1%1cm1cm）124.5124.5144144.0.048.648.6106.6106.6許可范圍許可范圍123.0-126.0123.0-12

10、6.0142.8-146.2142.8-146.247.0-50.347.0-50.3105.5-108.5105.5-108.5 （3 3）雜散光的檢查：）雜散光的檢查： 按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。試劑試劑濃度濃度%（g/ml）波長(zhǎng)波長(zhǎng)（nmnm）透光率透光率（%）碘化鈉碘化鈉1.00 1.00 220220 0.8亞硝酸鈉亞硝酸鈉5.00 5.00 340340 0.83.3.紫外分光光度法對(duì)溶劑的要求紫外分光光度法對(duì)溶劑的要求 用用1 1cmcm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測(cè)石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白，測(cè)定

11、其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)滿足以下要求：要求：波長(zhǎng)波長(zhǎng) 吸光度要求吸光度要求220220nm-240nmnm-240nm不得超過(guò)不得超過(guò)0.400.40241241nm-250nmnm-250nm不得超過(guò)不得超過(guò)0.200.20251251nm-300nmnm-300nm不得超過(guò)不得超過(guò)0.100.10300300nmnm以上以上 不得超過(guò)不得超過(guò)0.050.054.4.紫外分光光度法測(cè)定法紫外分光光度法測(cè)定法測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用為空白對(duì)照，采用1 1

12、cmcm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)長(zhǎng) 2 2nmnm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，以核對(duì)供試品的吸收以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。峰波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。應(yīng)以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。應(yīng)以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸光度會(huì)偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬測(cè)得的吸光度會(huì)偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。度時(shí)供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品由于吸收池和溶

13、劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度計(jì)的使用紫外分光光度計(jì)的使用紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法在藥檢中應(yīng)用在藥檢中應(yīng)用content概述概述四四.紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度法可見(jiàn)分光光度法在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用l藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用紫外- -可見(jiàn)分光光可見(jiàn)分光光度法的項(xiàng)目有度法的項(xiàng)目有吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、吸收系數(shù)、鑒別、顏色檢查、純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含純度檢查、溶出度、含量均勻度檢查和含量測(cè)定量測(cè)

14、定等等。等等。1.吸收系數(shù)：吸收系數(shù)：l 藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，藥品的吸收系數(shù)是藥品的理化特性常數(shù)，可作為藥品生產(chǎn)過(guò)程中精制純化的一種指標(biāo)?？勺鳛樗幤飞a(chǎn)過(guò)程中精制純化的一種指標(biāo)。對(duì)紫外區(qū)一定波長(zhǎng)的光有特征吸收的藥物進(jìn)對(duì)紫外區(qū)一定波長(zhǎng)的光有特征吸收的藥物進(jìn)行精制時(shí)，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長(zhǎng)測(cè)定行精制時(shí)，應(yīng)進(jìn)行到產(chǎn)品在其特定波長(zhǎng)測(cè)定吸收系數(shù)達(dá)到一個(gè)吸收系數(shù)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的最大值穩(wěn)定的最大值時(shí)為止，因時(shí)為止，因此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為此吸收系數(shù)同其它物理常數(shù)一樣，也可作為判斷藥品純度的依據(jù)。判斷藥品純度的依據(jù)。2.鑒別：鑒別：l藥物對(duì)光輻射的吸收特點(diǎn)（即其吸收光譜）藥物對(duì)

15、光輻射的吸收特點(diǎn)（即其吸收光譜）可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別可與其它化學(xué)的或物理的方法配合作為鑒別的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線的一種手段，即繪制出藥物的吸收光譜曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對(duì)。與標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜互相核對(duì)。l對(duì)于具有兩個(gè)以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一對(duì)于具有兩個(gè)以上最大吸收的藥物可以進(jìn)一步簡(jiǎn)化操作，無(wú)需費(fèi)時(shí)作吸收光譜曲線，只步簡(jiǎn)化操作，無(wú)需費(fèi)時(shí)作吸收光譜曲線，只要測(cè)出各最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度，要測(cè)出各最大吸收波長(zhǎng)處的吸收度，求出這求出這些吸收度的比值些吸收度的比值，測(cè)出它們相對(duì)位置的比值，測(cè)出它們相對(duì)位置的比值即可即可。維生素維生素B12B12的鑒別規(guī)定每的鑒別規(guī)

16、定每1 1mlml中含維生素中含維生素B B12122525 g g的水溶液，照分光光度法測(cè)定，在的水溶液，照分光光度法測(cè)定，在278278、361361與與550550nmnm的波長(zhǎng)處有最大吸收。的波長(zhǎng)處有最大吸收。 A361nmA361nm/ /A278nmA278nm應(yīng)為應(yīng)為1.70-1.881.70-1.88。 A361nmA361nm/ /A A550550nmnm應(yīng)為應(yīng)為3.15-3.453.15-3.45。 維生素B2水溶液的吸收光譜3.純度檢查：純度檢查：l若一種化合物對(duì)紫外光和可見(jiàn)光區(qū)的某一若一種化合物對(duì)紫外光和可見(jiàn)光區(qū)的某一波段呈光學(xué)透明（即不吸收或幾乎不吸波段呈光學(xué)透明（

17、即不吸收或幾乎不吸收），而不純雜質(zhì)有吸收時(shí)，則該物質(zhì)的收），而不純雜質(zhì)有吸收時(shí)，則該物質(zhì)的生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到生產(chǎn)精制應(yīng)當(dāng)進(jìn)行到規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)降到最低時(shí)為止。數(shù)降到最低時(shí)為止。有些藥物就以此作為有些藥物就以此作為雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)限度檢查的依據(jù)。此外，有些藥物的雜質(zhì)是通過(guò)比色法與雜質(zhì)對(duì)照品比較進(jìn)行雜質(zhì)是通過(guò)比色法與雜質(zhì)對(duì)照品比較進(jìn)行控制的?？刂频摹z查檢查腎上腺素腎上腺素中的酮體：取腎上腺素，加中的酮體：取腎上腺素，加0.10.1mol/Lmol/L鹽酸溶液，制成每鹽酸溶液，制成每1 1mlml中含中含2 2mgmg的溶液，的溶液，照分光光度法，在照

18、分光光度法，在310310nmnm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過(guò)不得過(guò)0.050.05。4.含量測(cè)定：含量測(cè)定：l藥典中含量測(cè)定方法可分為：藥典中含量測(cè)定方法可分為：l（1）對(duì)照品比較法）對(duì)照品比較法l（2）吸收系數(shù)法）吸收系數(shù)法l（3）比色法）比色法（1）對(duì)照品比較法：）對(duì)照品比較法：l應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍： 單一成分藥劑的測(cè)定。單一成分藥劑的測(cè)定。 混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組分混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組分的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有吸收的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有吸收 測(cè)定要求測(cè)定要求分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液所含對(duì)照品

19、的量應(yīng)為供試品溶液中被對(duì)照品溶液所含對(duì)照品的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)組分標(biāo)示量的測(cè)組分標(biāo)示量的 10%以內(nèi)。以內(nèi)。所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持所用溶劑、其它試劑、操作方法和條件都應(yīng)保持一致。一致。計(jì)算公式：計(jì)算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs：供試品溶液的濃度供試品溶液的濃度 As：供試品溶液的吸光度供試品溶液的吸光度 Cr：對(duì)照品溶液的濃度對(duì)照品溶液的濃度 Ar：對(duì)照品溶液的吸光度對(duì)照品溶液的吸光度（2）吸收系數(shù)法：）吸收系數(shù)法：l應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍：?jiǎn)我怀煞炙巹┑臏y(cè)定。單一成分藥劑的測(cè)定?；旌衔锘驈?fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組混合物或復(fù)方制劑，但其它成分在被測(cè)組分的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)

20、有或幾乎沒(méi)有吸收分的測(cè)定波長(zhǎng)沒(méi)有或幾乎沒(méi)有吸收測(cè)定要求：測(cè)定要求：通常為測(cè)定最大吸收峰波長(zhǎng)處的吸光度通常為測(cè)定最大吸收峰波長(zhǎng)處的吸光度供試品溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處濃度與吸光度嚴(yán)格遵供試品溶液在測(cè)定波長(zhǎng)處濃度與吸光度嚴(yán)格遵循比耳循比耳-郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。郎伯定律，具有良好的線性關(guān)系。測(cè)定條件和操作應(yīng)與測(cè)定吸收系數(shù)時(shí)完全一致。測(cè)定條件和操作應(yīng)與測(cè)定吸收系數(shù)時(shí)完全一致。吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過(guò)校正的不同吸收系數(shù)是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別在經(jīng)過(guò)校正的不同型號(hào)分光光度計(jì)上進(jìn)行多次測(cè)定求得的平均值。型號(hào)分光光度計(jì)上進(jìn)行多次測(cè)定求得的平均值。特別注意儀器的校正和檢定特別注意儀器的校正和檢定計(jì)算公式：計(jì)算公式： A=ECL以中國(guó)藥典以中國(guó)藥典2000年版氯霉素含量測(cè)定為例年版氯霉素含量測(cè)定為例: 精密稱取氯霉素精密稱取氯霉素0.1009g，置置100ml量瓶中，量瓶中，加乙醇加乙醇10ml振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取精密量取2ml，置置100ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至