絞股藍(lán)生產(chǎn)技術(shù)

1、絞股藍(lán)提取物技術(shù)要求編制說明、項(xiàng)目研究背景絞股藍(lán)，別名七葉膽、小母豬藤、遍地生根、南人參、公羅鍋底、五葉參、 小苦藥、小葉五爪龍等，為多年生攀援草本植物。多分布于亞熱帶和北亞熱帶地 區(qū)，我國主要分布于秦嶺和長江以南地區(qū)，如陜西安康、湖北神農(nóng)架、廣西金秀 等，其中陜西安康的平利縣、寧陜縣盛產(chǎn)絞股藍(lán)，平利還被列為中國絞股藍(lán)原產(chǎn) 地。全世界已知絞股藍(lán)屬植物有16種2變種，我國有14種2變種，主要生長于 海拔300 - 3200米的山谷密林、丘陵、山坡和石山地區(qū)的陰濕地帶。絞股藍(lán)生藥為干燥皺縮的全草。顏色為黃綠色，呈粒狀或段狀，具清香。衛(wèi) 生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)200251

2、號)的附件 2將絞股藍(lán)列入可用于保健食品的物品名單。因來源不同，口感有差異，一般可 分為苦味型、淡味型和甜味型。苦味型可作為醫(yī)藥或化工原料；淡味型可以作為 生產(chǎn)保健飲品和保健食品添加劑的原料；甜味型除上述用途外，還是生產(chǎn)葉型、 袋泡型飲品和保健煙、保健酒的最佳原料。絞股藍(lán)提取物(gynostemma extract)是以絞股藍(lán)為原料經(jīng)提取分離制成的 產(chǎn)品。本品從葫蘆科植物絞股藍(lán)gynostemma pentaphyllum ( thunb.) makino全 草中提取得到。目前，由于國內(nèi)從事絞股藍(lán)植物提取的企業(yè)大多規(guī)模小，設(shè)備落 后，缺乏市場研發(fā)和技術(shù)研發(fā)力量，造成產(chǎn)品質(zhì)量缺乏競爭力，加之缺乏

3、有效的 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，一些劣質(zhì)產(chǎn)品甚至摻偽產(chǎn)品進(jìn)入市場，影響了整個行業(yè)發(fā)展，并威脅 到以此為原料的保健食品質(zhì)量。有關(guān)的中成藥制劑主要有絞股藍(lán)總戒片、絞股藍(lán) 總昔顆粒、絞股藍(lán)總甘膠囊、絞股藍(lán)總昔軟膠囊等，在保健食品中主要用于輔助 降血脂、降血壓、降血糖等，目前多以茶劑形式存在。絞股藍(lán)及其提取物的檢測標(biāo)準(zhǔn)急需制定更新。中國藥典2005年版、2010 年版均未收載絞股藍(lán)藥材標(biāo)準(zhǔn)，最新的地方標(biāo)準(zhǔn)見于湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)>>(2009 年版)；絞股藍(lán)總戒標(biāo)準(zhǔn)為衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)【ws3z00693(z)】，該標(biāo)準(zhǔn)方法陳舊， 且絞股藍(lán)皂戒a對照品常年無供應(yīng)，已嚴(yán)重不適應(yīng)對絞股藍(lán)提取物的質(zhì)量控制, 造成市場上

4、絞股藍(lán)提取物總甘含量標(biāo)注虛高，非法摻偽、摻雜現(xiàn)象嚴(yán)重。在此背景下，國家食品藥品監(jiān)督管理局食品司組織陜西省食品藥品監(jiān)督管理 局、陜西省食品藥品檢驗(yàn)所對絞股藍(lán)提取物展開研究，制定符合先進(jìn)生產(chǎn)工藝及 產(chǎn)品的絞股藍(lán)提取物技術(shù)要求。二、儀器、試樣、試藥1、主要檢測儀器waters alliance ht高效液相色譜儀，empower工作站；奧泰2000型蒸發(fā)光 散射檢測器；quattro micro api三重四極質(zhì)譜儀；angilent 7890氣相色譜 儀；島津 gcms-qp2010; sartorius agme 235s 型電子分析天平，sartorius bs224s型電子分析天平；h660

5、25型超聲波清洗儀。2、試劑與試藥甲醇、乙睛（色譜純，美國tedia公司）；水為gb/t6682規(guī)定的一級水； 其它試劑除注明外均為分析純；硅膠g （青島海洋化工廠）。3、對照品該標(biāo)準(zhǔn)中用到的對照品為絞股藍(lán)皂昔xl ix （批號:20100619, elsd和uv 檢測，歸一化法含量均大于99.0%,陜西省食品藥品檢驗(yàn)所提供）。衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)【ws3z00693（z）】收錄有絞股藍(lán)皂戒a的薄層鑒別和以絞 股藍(lán)皂戒a為對照品進(jìn)行測定的總皂昔含量測定。但絞股藍(lán)皂武a對照品僅在 1994年中檢所發(fā)行過一批，且純度僅為87.55%,研究證實(shí)其有一同分異構(gòu)體難以 分離，多年來，再無法定單位提供。我所得到的

6、安康北醫(yī)大和安康正大提供的兩 種聲稱為“絞股藍(lán)皂忒的對照品，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證【色譜條件：流動相：乙騰水（ 35:65 ）; c18色譜柱；二極管陣列檢測器】，二者在液相色譜上出峰時間有較大 差異，可以肯定不是同一種化合物。查閱各種國內(nèi)外文獻(xiàn)，日本科學(xué)家“絞股藍(lán)之父”竹本常松于1984年在絞股 藍(lán)中發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)皂昔xlix（cas號：94987-08-3 ）,并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和確證。 藥理學(xué)研究表明，絞股藍(lán)皂昔xlix與絞股藍(lán)總皂昔藥理作用基本一致。多批次 試驗(yàn)證明，其含量在絞股藍(lán)提取物中高達(dá)6%-20%,且專屬性強(qiáng)，目前未見在 其他科屬植物中發(fā)現(xiàn)的報(bào)道。國際上諸多文獻(xiàn)如spectroscopic d

7、ata of saponins the triterpenoid glycosides volume i、gypenoside xl ix, a naturally occurring gynosaponin.ppar-alpha dependently inhibits lps-induced tissue factor expression and activity in human thp-1 monocytic cells等報(bào)導(dǎo)的名稱均為 絞股藍(lán)皂昔xlixo鑒于絞股藍(lán)皂昔xlix國內(nèi)外均無法定單位提供，我所與西 安鴻程生物科技有限公司合作，提取精制出絞股藍(lán)總皂昔中的標(biāo)志性成分絞股藍(lán)

8、皂昔xl ix ( hplc-u v與h plc-elsd測定純度均大于99%)。該對照品與安康北 醫(yī)大提供的聲稱為“絞股藍(lán)皂昔a"的分子式、結(jié)構(gòu)以及cas號等完全一致，經(jīng)實(shí) 驗(yàn)比對驗(yàn)證，二者為同一化合物，僅在純度上有所區(qū)別，我所提取精制的對照品 溶解性、純度均高于后者。為了與國際統(tǒng)一，避免混淆，我們采用絞股藍(lán)皂昔 xl ix作為其標(biāo)志性成分。經(jīng)鑒定：絞股藍(lán)皂昔xl ix為白色結(jié)晶性粉末。根據(jù)i3c-nmr, dept, ms及 元素分析確定分子式為c52h86o21,分子量為1047.23, liebermann反應(yīng)陽性。ir cm" : 3418,1044有強(qiáng)的輕基吸收

9、；在1701處有一炭基吸收峰；1379,1260有四 環(huán)三菇的特征吸收峰。其乙酰化物的ir譜無軽基吸收。1h-nmr譜在低場區(qū)8 5.02 ppm( lh,d,j = 7.89 hz)處多一質(zhì)子信號，歸屬于葡萄糖的端基質(zhì)子。叱nmr譜 中c21 5 66.87向低場位移至76.36,說明分子中c21輕基與糖結(jié)合成式。8 46.13,76.31及36.70各信號分別歸屬于eco及c22。由于c?】輕基武化的影響，各 碳原子分別位#-0.06, -0.20和+0.05 ppm,多出一組葡萄糖信號,分別為6 106.25, 75.54, 78.65, 71.82, 7&71 和62.93 p

10、pm。»» oh圖1絞股藍(lán)皂試xl ix結(jié)構(gòu)式另外，在部分研究文獻(xiàn)或標(biāo)準(zhǔn)中，有使用人參皂昔rbl或人參皂昔re作為 絞股藍(lán)產(chǎn)品對照的情況。但是，研究表明，測定絞股藍(lán)及其制劑中總皂昔的含量, 不宜用人參皂蒼rbl或人參皂蒼re作對照品進(jìn)行測定。我們在所測定的絞股藍(lán) 提取物中均未檢出人參皂甘rbl或人參皂甘re,檢出絞股藍(lán)皂甘xl ix以及絞 股藍(lán)皂-ao4、試樣鑒于我省安康地區(qū)為絞股藍(lán)主產(chǎn)地，我所于2010年4月13日赴安康地區(qū)對 絞股藍(lán)品種基源、資源、生產(chǎn)加工狀況進(jìn)行了考察，并收集了安康、四川絞股藍(lán) 原料各1批。同時，委托西安盛興中藥飲片有限公司從湖北、湖南、安徽各購進(jìn) 了

11、 2批絞股藍(lán)原料（各200 kg ）（按照湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2009年版）檢驗(yàn), 安徽產(chǎn)地的2批絞股藍(lán)不符合規(guī)定，作退貨處理，其余6批原料符合規(guī)定），并 委托陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司加工。與此同時，搜集購買絞股藍(lán)提取物樣 品20余批。三、工藝制法絞股藍(lán)提取物主要功效成分為絞股藍(lán)皂并，國內(nèi)多數(shù)生產(chǎn)廠家對企業(yè)工藝嚴(yán) 格保密，僅提供粗略工藝，核心技術(shù)不外泄；生產(chǎn)工藝的不同導(dǎo)致不同企業(yè)的絞 股藍(lán)總皂芽含量、重金屬、溶劑殘留等差異較大。我們根據(jù)不同廠家提供的生產(chǎn) 工藝及文獻(xiàn)資料，研究可行的制法。制法不同于生產(chǎn)工藝，只需規(guī)定工藝中的主 要步驟和必要的技術(shù)參數(shù)即可，一般只明確提取溶劑的名稱和提取、分離、

12、濃縮、 干燥等步驟及必要的條件制法1:絞股藍(lán)干燥全草，經(jīng)揀選、洗滌、切制后，水煎煮3次，合并提取 液過濾后，采用水飽和的正丁醇萃取三次，合并正丁醇液，過濾后用水洗滌，濃 縮正丁醇液，干燥、收粉，即得。制法2:絞股藍(lán)干燥全草，經(jīng)揀選、洗滌、切制后，水煎煮3次，合并提取 液過濾后，通過大孔吸附樹脂，水洗后用甲醇（或乙醇）洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、 干燥、收粉，即得。制法3:絞股藍(lán)干燥全草，經(jīng)揀選、洗滌、切制后，10倍量75%乙醇浸泡 12 h,超聲提取3次，每次80分鐘，合并提取液，過濾，回收乙醇，加水稀釋 至含醇量在5%以下，過濾，通過d101大孔吸附樹脂，水洗后用甲醇（或乙醇） 洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、

13、干燥、收粉，即得。制法4:取絞股藍(lán)全草，經(jīng)揀選、洗滌后，切成24cm段，加乙醇加熱回 流提取兩次，提取液濾過，合并濾液，采用d101大孔吸附樹脂和lsi-010脫鹽 樹脂吸附凈化，回收乙醇，濃縮成浸膏，70°c減壓干燥，粉碎，過篩，裝袋，封 口，即得。結(jié)果顯示，制法1生產(chǎn)出的樣品顏色為棕褐色，溶解性差，皂甘含量低，溶 劑殘留量大，但得率高；制法2生產(chǎn)出的樣品顏色為棕褐色，溶解性差，得率較 低；制法3較制法2略好，得率有所提高；制法4生產(chǎn)出的絞股藍(lán)提取物感官指 標(biāo)及溶解性、重金屬、溶劑殘留以及總皂昔含量等各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于前三種制法, 故技術(shù)要求中以此為準(zhǔn)。另外，由于各個廠家所用凈化樹脂以

14、及生產(chǎn)設(shè)備不同，所以技術(shù)要求中沒有 規(guī)定具體的樹脂種類以及浸膏的相對密度。表1不同制法試制樣品的主要差別顏色溶解性（乙醇）總皂昔含量（）得率（）制法1棕褐色微溶605.8制法2黃褐色溶解702.1制法3棕黃色溶解852.8制法4黃白色易溶952.7制法確立后，我所委托陜西昂勝生物醫(yī)藥科技有限公司按照制法4生產(chǎn)絞股 藍(lán)提取物，我所技術(shù)人員全程參與生產(chǎn)過程，最終制備出4批合格的產(chǎn)品（批號 分別為 20100930、20101001. 20101002. 20101003 ）,以供技術(shù)要求研究用。四、感官要求32批樣品感官特征相同點(diǎn)是滋味、氣味、性狀和雜質(zhì)特征類似；不同點(diǎn)是 顏色差異較大，從棕褐色-

15、黃褐色-淡黃色-黃白色-類白色；分析認(rèn)為主要是 因?yàn)楣に嚥顒e較大，有醇提和水提、脫色和未脫色、正丁醇萃取或大孔樹脂凈化 之分，并且所用樹脂類型差異較大。根據(jù)樣品實(shí)際情況、絞股藍(lán)皂昔的特點(diǎn)以及我所委托加工的樣品的特征暫定 如下，見表2。表2項(xiàng)目要求色澤為黃白色至淡黃色的粉末滋味、氣味氣微，味苦，無片味性狀干燥均勻的粉末雜質(zhì)無肉眼可見的外來雜質(zhì)五、理化指標(biāo)1、溶解性皂蒼類成分大多為白色或乳白色的無定形粉末，味苦而辛辣，具吸濕性，能 刺激粘膜而引起噴嚏，無明顯的熔點(diǎn)。可溶于水，易溶于熱水、熱甲醇、熱乙醇, 不溶于乙瞇、苯等極性小的有機(jī)溶劑。皂昔易溶于水飽和的丁醇或戊醇，因此常 從水溶液中用丁醇或戊醇

16、提取，借以與糖、蛋白質(zhì)等親水性成分分開。絞股藍(lán)提 取物中主要成分為絞股藍(lán)皂芽，同樣具備皂并的溶解特性。我們參照衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)【ws3z00693（z）】項(xiàng)下規(guī)定，依照中華人民共 和國藥典2010年版一部中凡例第二十一條測定，結(jié)果大部分樣品由于工藝落 后或摻偽等原因在甲醇及乙醇中溶解性略差，僅有部分樣品易溶于甲醇及乙醇。 考慮到已有標(biāo)準(zhǔn)以及大多數(shù)廠家絞股藍(lán)提取物標(biāo)稱總皂昔含量在90%以上，本著 促進(jìn)企業(yè)改進(jìn)生產(chǎn)工藝、提高產(chǎn)品競爭力的原則，我們將溶解性規(guī)定為：在甲醇及乙醇中易溶，在乙瞇或氯仿中幾乎不溶，在石油瞇（3060°c ）中 不溶。2、粒度參照中國藥典2010年版一部凡例“計(jì)量”項(xiàng)下

17、有關(guān)粉末的定義、提取物標(biāo) 準(zhǔn)，樣品制法以及樣品實(shí)際粒度大小，特制訂如下操作方法和限度，以期達(dá)到中 細(xì)粉的要求。根據(jù)測試結(jié)果規(guī)定，本品在100目篩的通過率應(yīng)大于90%。3、泡沫試驗(yàn)此為皂昔泡沫試驗(yàn)，泡沫試驗(yàn)是檢查皂昔的經(jīng)典方法，可迅速初步判斷樣品 中是否含有皂昔類成分。操作方法：取粉末0.1 g,置試管中，加水2ml,用力振搖，如產(chǎn)生持久性 泡沫（15min以上）即為陽性反應(yīng)。結(jié)果32批樣品均呈陽性反應(yīng)，均符合規(guī)定。4、化學(xué)反應(yīng)當(dāng)前，植物提取物行業(yè)由于缺乏檢測標(biāo)準(zhǔn)以及有效管理，在生產(chǎn)后期以及銷 售領(lǐng)域，為增加產(chǎn)量或制備比例提取物，存在摻入淀粉或糊精的行為，為遏制此 類行為，制定本檢測方法。該方法

18、為淀粉或糊精的特征化學(xué)反應(yīng)，可有效判斷樣品中是否摻雜有糊精或 淀粉，該反應(yīng)與泡沫試驗(yàn)可用于現(xiàn)場打假。操作方法：取本品0.1 g,置試管中，加水5ml,用力振搖，加碘試液12 滴，不得顯藍(lán)紫色或紫紅色。結(jié)果：檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)有3批樣品呈陽性反應(yīng)，不符合規(guī)定；其余29批樣品均 呈陰性反應(yīng)，符合規(guī)定。該法檢測靈敏度較高，可滿足摻偽5%以上淀粉或2%以上糊精的絞股藍(lán)提取 物的檢測。5、干燥失重：按中華人民共和國藥典2010年版一部附錄ix g測定。根據(jù)表6測試結(jié) 果規(guī)定，規(guī)定本品干燥失重不得過5.0%。6、熾灼殘?jiān)喊粗腥A人民共和國藥典2010年版一部附錄ix j測定。根據(jù)表6測試結(jié) 果規(guī)定，規(guī)定本品熾灼

19、殘?jiān)坏眠^1.0%。7、薄層色譜在原衛(wèi)生部絞股藍(lán)皂戒標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上建立此薄層鑒別方法，并采用絞股藍(lán)皂并 xlix代替絞股藍(lán)皂-ao絞股藍(lán)皂昔xlix是絞股藍(lán)提取物中的主要和特征成 分之一，采用此薄層方法可有效鑒別絞股藍(lán)提取物的真?zhèn)?。方法：取本?.2 g,加甲醇10 ml,超聲處理10 min,濾過，濾液濃縮至約1 ml,作為供試品溶液。另取絞股藍(lán)皂昔xlix對照品，加甲醇制成每iml含2 mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄vib）試 驗(yàn)，吸取上述二種溶液各5gl,分別點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上，以三氯甲烷乙酸 乙酯甲醇水（ 15:40:22:10） 10

20、76;c以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 °c加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫 外光燈（ 365 nm ）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光 下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果：32批樣品中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑 點(diǎn)，紫外光燈下顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。該方法專屬性強(qiáng)，rf值適中，列入技術(shù) 要求正文。8、溶劑殘留絞股藍(lán)提取物因主要成分為絞股藍(lán)皂甘，各生產(chǎn)廠方工藝不同，有的采用大 孔樹脂凈化、有的用正丁醇萃取，有的企業(yè)為了降低成本使用二類溶劑甲醇提取, 甚至還有一些未知的

21、特殊提取方法。各種提取方法都可能帶來一些有害的溶劑殘 留，所以必須對其殘留量加以控制。本文基于上述工藝以及國家食品藥品監(jiān)督管理局2005年發(fā)布的“應(yīng)用大孔吸 附樹脂分離純化工藝生產(chǎn)的保健食品申報(bào)與審評規(guī)定（試行）"（國食藥監(jiān)注 2005202號）的規(guī)定，并采用毛細(xì)管氣相色譜法、毛細(xì)管氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法, 配以頂空進(jìn)樣，研究可能存在的幾種殘留物即甲醇、正丁醇、正己烷、苯、甲苯、 鄰二甲苯、對二甲苯、1,2二乙基苯、苯乙烯、二乙烯苯進(jìn)行研究，通過gc-ms 實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)有異丁醇、三氯甲烷等溶劑殘留，并經(jīng)gc-ms確證。該法操作簡便, 重現(xiàn)性好，可滿足本品的質(zhì)量控制。（1）儀器與試劑agil

22、ent 7890氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（fid）, g1888頂空進(jìn)樣器; 北京中惠普分析技術(shù)研究所gck 3308全自動空氣源；gcms-qp2010氣相色譜. 質(zhì)譜聯(lián)用儀；甲醇、正丁醇、異丁醇、正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、對二甲苯、 1,2二乙基苯、苯乙烯、二乙烯苯、三氯甲烷以及n,n二甲基甲酰胺均為色譜純。（2）色譜和頂空條件試驗(yàn)中考察了db-624. db5、db-wax三款毛細(xì)管色譜柱，并對程序升溫 條件進(jìn)行優(yōu)化；考慮到以上溶劑的沸點(diǎn)不一，如甲苯、正丁醇、異丁醇沸點(diǎn)均超 過100c,故對頂空瓶平衡溫度進(jìn)行優(yōu)化，為使殘留組分在樣品基質(zhì)中達(dá)到與系 列標(biāo)準(zhǔn)溶液一致的蒸氣壓，并兼顧高

23、溫加熱條件下樣品熱降解的可能性，最終確 定如下色譜和頂空條件。色譜柱：以鍵合/交聯(lián)聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱（柱長為30m,內(nèi)徑為 0.32 mm,膜厚度為0.50 pm ）;柱溫為程序升溫，起始溫度為40 °c,保持5 min, 以每分鐘10 °c升溫至150 °c,保持1 mim再以每分鐘20 °c升溫至200 °c,保持2 min;用氫火焰離子化檢測器檢測，檢測器溫度250 °c;進(jìn)樣口溫度200 °c;載氣 為氮?dú)?，流速?.5 ml/min;頂空進(jìn)樣，頂空瓶平衡溫度為90 °c,平衡時間為30 min。理

24、論板數(shù)以鄰二甲苯峰計(jì)算應(yīng)不低于50000o對一甲狀宓二甲苯正丁 s?j一 a.1 .a異丁醇-一j 圖3絞股藍(lán)提取物分離示意圖(止丁醇萃取法)hw 乙傅, h _ h _八一一 . 1 圖4絞股藍(lán)提取物分離示意圖(人孔樹脂法)(3) 對照品溶液的制備精密稱取甲醇、正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、苯、甲苯、對二甲苯、鄰 二甲苯、苯乙烯、1,2二乙基苯和二乙烯苯對照品適量，加50% n,n-二甲基甲酰 胺溶液制成每ln)l中分別含甲醇、正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、苯、甲苯、 對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2二乙基苯和二乙烯苯500 pg、500 pg、500 pg、 5(ig、5(ig、1 pg

25、、5 pg、5 pg、5 pg、5(ig、5pg 和 l(ig 的溶液，作為對照品貯 備液。(4) 線性關(guān)系考察精密吸取上述對照品貯備液適量，置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻,制成系列濃度對照品溶液。精密量取5ml,置20 ml頂空瓶中，密封，即得。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程。二乙 烯苯以其同分異構(gòu)體的峰面積之和計(jì)。結(jié)果見表3。（5）檢測限試驗(yàn)精密吸取上述對照品貯備液適量，加水稀釋逐級稀釋，當(dāng)信噪比（s/n=3） 時得到12種溶劑的最低檢測限，見表3。（6）重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取上述貯備液1 ml,置50 ml量瓶中，加5% n,n-二甲基甲酰胺溶 液稀釋

26、至刻度，搖勻（甲醇、正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、苯、甲苯、對二 甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2二乙基苯和二乙烯苯），精密量取5ml,置20 ml 頂空瓶中（共6份），密封，測定，計(jì)算各對照品峰面積積分值的rsd%,見表 3。（7）樣品處理方法的選擇確認(rèn)及方法檢測限本品主要為皂芽類成分，在水中溶解性較好，故選擇以水作溶劑，但由于本 品主含皂昔類成分，皂昔類成分在振搖中會產(chǎn)生大量持久性泡沫，故取樣量不宜 過大,且不宜振搖，測試中選擇了取樣0.1 g、0.2 g、0.3 g、0.4 g、0.5 g、1.0 g, 加水密封后，采用超聲處理以利于充分溶解?？紤]到該產(chǎn)品特性，最終確立方法 如下：取本品約

27、0.1 g,精密稱定，置20 ml頂空瓶中，精密加入純化水5n）l,密封, 超聲處理10 min,置入頂空進(jìn)樣器中，測定，即得。方法檢測限見表3?！咎貏e說明：國家食品藥品監(jiān)督管理局2005年發(fā)布的“應(yīng) 用大孔吸附樹脂分離純化工藝生產(chǎn)的保健食品申報(bào)與審評規(guī)定（試行）”（國食 藥監(jiān)注2005202號）第四條規(guī)定“對用苯乙烯骨架型樹脂制備的原料中二乙烯苯 含量要求為小于50 mg/kgo但是由于該品種的特殊性，在本品種中二乙烯苯殘留 的方法檢測限只能達(dá)到0.4 mg/kg,雖然不能確認(rèn)生產(chǎn)中是否使用了苯乙烯骨架 型樹脂。】表3線性關(guān)系和檢測限結(jié)果表組分線性范圍(u g.ml'1)回歸方程r檢

28、測限(ng.ml-1)方法檢測限（mg/kg）重復(fù)性(rsd) /%卬醇500 1y=0.1025x-0.07560.9999400201.3正丁醇100 0.2y=0.5022x-0.16500.9999200102.5異丁醇100 0.2y=0.6967x-0.23990.9999200101.2氯仿1000. 2y=0.7257x-0.91830.9996200104正己烷100. 04y=3.7932x-0.70990.9995201.04.9苯100. 02y=9.3018x-1.12430.999780.41.6甲苯100. 02y=9.8338x-0.90470.999780.4

29、3.2對二甲苯100. 02y=10.2470x-0.87850.999780.42.9鄰二甲苯100. 02y=10.2370x-0.82470.999780.42苯乙烯100. 02y=9.5698x-0.61320.999880.43.61,2 二乙基苯100. 02y=11.0530x-0.72220.999880.42.8二乙烯苯100. 02y=9.4015x-0.36440.999980.44.3（7）回收率試驗(yàn)精密稱取已知溶劑殘留量的絞股藍(lán)提取物（批號：20101001 ）0.1 g（共6份）, 精密加入“重復(fù)性試驗(yàn)”項(xiàng)下配制的對照品溶液5ml,密封，測定，計(jì)算回收率, 見表4

30、。表41111收率試驗(yàn)結(jié)果組分平均回收率（）rsd (%)甲醇90.21.6正丁醇93.13.5異丁醇94.22.2氯仿91.83.8正己烷88.53.6苯95.32.7甲苯99.52.5對二甲苯95.41.2鄰二甲苯94.61苯乙烯92.73.91,2 二乙基苯94.61.6二乙烯苯85.64.6（8）限度制定及樣品測定參照中國藥典2010年版附錄“殘留溶劑測定法' 人用藥品注冊技術(shù)要求 國際協(xié)調(diào)會（ich）以及國家食品藥品監(jiān)督管理局2005年發(fā)布的“應(yīng)用大孔吸附樹 脂分離純化工藝生產(chǎn)的保健食品申報(bào)與審評規(guī)定（試行嚴(yán)（國食藥監(jiān)注2005202 號）的有關(guān)規(guī)定及要求，并結(jié)合保健食品的長

31、期食用特點(diǎn)，暫定限度如下：表5絞股藍(lán)提取物屮溶劑殘留限度表溶劑名稱溶劑類別本技術(shù)要求 限度（mg/kg）ich規(guī)定(mg/kg)中國藥典2010年版一部有關(guān)提 取物大孔樹脂殘留的限度（mg/kg）甲醉/(mg/kg)一類w5003000/il :丁 醇/(mg/kg)三類w5005000/異丁 醉/(mg/kg)三類w5005000/氯仿 /(mg/kg)二類w560/正己烷/(mg/kg)二類w529020甲苯/(mg/kg)二類w589020對一甲苯/( mg/kg)/w5未單獨(dú) 規(guī)定20鄰二甲苯/(mg/kg)/w520苯乙烯/(mg/kg)/w5/201,2二乙基苯/( mg/kg)/

32、w5/20二乙烯苯/(mg/kg)/w1/20苯/(mg/kg)-類w122表6樣品溶劑殘留測定結(jié)果表編號檢出主耍溶劑種類超標(biāo)溶劑可能的工藝1正丁醇、異丁醇/制法12甲醇、乙醇/制法23甲醇、乙醇/制法34卬醇、乙醇/制法45甲醇、乙醇/制法46甲醇、乙醇/制法47甲醇、乙醇/制法48甲醇、乙醇/制法49甲醇、乙醇/制法410正己烷、乙醇、氯仿、正丁醇氯仿制法1+其他11正己烷、乙醇、氯仿、正丁醇氯仿制法1+其他12止己烷、乙醇、氯仿、止丁醇氯仿制法1+其他13正己烷、乙醉、氯仿、正丁醇氯仿制法1+其他14正己烷、乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇、1,2二乙基苯、二乙烯苯氯仿制法1+其他15正己烷、

33、乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇、對二甲苯正丁醇制法1+其他16止己烷、乙醇、氯仿、異丁醇、匸丁醇、對二甲苯氯仿制法1+其他17正己烷、乙醇、氯仿、界丁醇、正丁醇、苯乙烯異丁醇、正丁 醇制法1+其他18甲醇、乙醇/制法419乙醇、氯仿、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他20乙醇、氯仿、止丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他21乙醇、氯仿、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他22正己烷、乙醇、氯仿、異丁醇、正醇、鄰二甲苯氯仿、正丁醇制法1+其他23正己烷、乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇、鄰二甲苯氯仿、正丁醇制法1+其他24正己烷、乙醇、氯仿、界丁醇、正丁醇、鄰二甲苯氯仿、正丁醇制法1+其他25乙醇、正丁醇正丁醇制法126乙

34、醇、止丁醇正丁醇制法127乙醇、正丁醇正丁醇制法128乙醇、正丁醇正丁醇制法129正己烷、乙醇、氯仿、界丁醇、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他30乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他31乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其他32乙醇、氯仿、異丁醇、正丁醇氯仿、正丁醇制法1+其 他結(jié)果顯示：32批樣品中溶劑檢出種類差別較大，主要原因是采用工藝制法不 一致。采用正丁醇萃取工藝的樣品均檢出正丁醇，且大部分超標(biāo)，這是由于正丁 醇沸點(diǎn)高（達(dá)117 °c）以及干燥工藝不完善所致，該工藝制法成本較低，但由于 正丁醇對人體具有刺激和麻醉作用，加之高沸點(diǎn)難揮發(fā)對環(huán)境會造成一定積

35、蓄污 染，因此建議該工藝限制使用。部分樣品中檢出甲醇，甲醇為二類溶劑，主要為 乙醇中的甲醇?xì)埩艋驗(yàn)榻档统杀局苯邮褂煤罅考状嫉墓I(yè)酒精提取甚至直接 使用甲醇提取。乙醇由于是工藝中正常引入，為三類溶劑，毒性較小，環(huán)境污染 小，并且在32批樣品中未見較高殘留，故未將其納入技術(shù)要求。檢出二類溶劑氯 仿，原因暫時不明，有待研究。9、重金屬（鉛、鎘、種、汞）分別按gb 5009.12食品中鉛的測定、gb/t 5009.15食品中鎘的測定、 gb/t5009.11食品中總神及無機(jī)神的測定、gb/t 5009.17食品中總汞及有機(jī) 汞的測定規(guī)定的方法進(jìn)行測定。根據(jù)樣品測定結(jié)果，參照wm/t 2-2004藥用

36、 植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、gb 2762-2005食品中污染物限量標(biāo)準(zhǔn)、gb 16740-1997保?。üδ埽┦称吠ㄓ脴?biāo)準(zhǔn)，制定如下限度。見表7。表7鉛、鎘、神、汞測定結(jié)果及限度指標(biāo)重金屬限度(mg/kg)鉛/ (以 pb 計(jì)，mg/kg)w0.5鎘/(以cd計(jì)，mg/kg)w0.3砂/ (以as計(jì)，mg/kg)w0.3汞/ (以hgih mg/kg)w0.210、農(nóng)藥殘留測定按gb/t 50099食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測定規(guī)定的方法進(jìn)行 測定。32批樣品測定后均未檢出六六六、滴滴涕和五氯硝基苯。根據(jù)wm/t 2-2004 藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、gb 2763-200

37、5食品中農(nóng)藥最大殘留限量， 確定限度如下，見表8。表8絞股藍(lán)提取物何機(jī)氯農(nóng)藥殘留限度表六六六/（ mg/kg）w0. 1滴滴涕/ (mg/kg)w0. 1五氯硝基苯/（ mg/kg）<0. 111、特征圖譜目前研究證實(shí)，絞股藍(lán)中含有80多種皂昔類成分,絞股藍(lán)提取物中成分復(fù)雜, 為了有效鑒別提取物的真?zhèn)?，我們對其開展特征圖譜研究，以尋找不同產(chǎn)區(qū)、采 收時間、提取部位的絞股藍(lán)采用不同工藝制法生產(chǎn)的絞股藍(lán)提取物之間的共同特 征。（1）儀器與試劑waters alliance ht高效液相色譜儀，empower工作站；奧泰2000型蒸發(fā)光散 射檢測器，紫外2487檢測器；甲醇，分析純；乙惰，色譜

38、純；水，高純水；絞股 藍(lán)皂甘xlix對照品由陜西省食品藥品檢驗(yàn)所與西安鴻程生物科技有限公司合作 提取精制（uv和elsd檢測器測定歸一化法含量均大于99.0% ）。（2）色譜條件的選擇與優(yōu)化由于絞股藍(lán)提取物中以皂甘成分為主，且組分較多，試驗(yàn)中我們選擇了 krromasilc18,迪馬c18,艾杰爾c18,安捷倫c18等多款色譜柱，均不能達(dá)到 有效分離，而資生堂capcell pakc18 mg ii可滿足檢測需求，故作為試驗(yàn)用 色譜柱。由于特征圖譜不同于一般含量測定，相對保留時間會因固定相規(guī)格、品 牌等的不同產(chǎn)生變化，故在本項(xiàng)試驗(yàn)中我們確定資生堂capcellpakc18 mg ii作為試驗(yàn)用

39、色譜柱，不代表我們認(rèn)可或推薦該品牌，檢測時也可使用其他類型 相當(dāng)?shù)纳V柱進(jìn)行。a. 色譜柱耐用性試驗(yàn)圖5同一類型色譜柱，不同批次，資生堂色譜柱比對b. 檢測器選擇試驗(yàn)圖6檢測器選擇試驗(yàn)(上為uv,下為elsd)c. 色譜條件的確定圖7同一根資牛堂色譜柱，不同流動相洗脫體系比對(上為最終確定體系)由 a、b 實(shí)驗(yàn)可以看出，capcell pak c18 mg ii (3.0><100mm, 3um )可 以滿足檢測要求，并且檢測時間短，分離效能高，耐用性良好。蒸發(fā)光散射檢測 器基線較紫外檢測器略為平穩(wěn)，但考慮到方法的普遍適用性，最終選擇紫外檢測 器。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱ca

40、pcell pakc18 mg ii 3.0x100mm, 3um;流動相：以乙睛為流動相a,以水為流動相b,按表16中的規(guī)定進(jìn)行梯度 洗脫；檢測波長為203nm;理論塔板數(shù)按絞股藍(lán)皂昔xlix峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。表9流動相梯度表時間(min)流速(ml/min)流動相a (%)流動相b (%)00.52575150.53565350.54555400.54555410.52575(3) 參照物溶液的制備取絞股藍(lán)皂昔xl ix對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.5 mg的 溶液，即得。(4) 供試品溶液的制備取本品50 mg,精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理5m

41、in, 放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 gm)濾過，取續(xù)濾 液，即得。(5) 測定方法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液5pl,注入高效液相色譜儀，測定,1.501.005，從aa060、0001.401.200.800.400.200.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16 00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28 00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.000.700.50即得。見圖8、90 90圖8部分樣品特征圖譜401201 0

42、0ajw070.0 600 50-0 30-0.101 i i i i i 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12 00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32 00 34.00 36.00 3800 40.00 42.00 44.00 w圖9部分樣品特征圖譜(6) 結(jié)果判斷綜合比較分析，各地絞股藍(lán)提取物雖然原料產(chǎn)地、產(chǎn)期，提取物生產(chǎn)工藝等 有所不同，但其皂昔類成分特征仍十分明顯，多批樣品特征峰吻合。該方法可作 為絞股藍(lán)提取物真?zhèn)舞b別方法。最終確定特征峰及要求如下：供試品特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)6個特

43、征峰，與參照物峰相應(yīng)的為s峰，計(jì)算各特 征峰與s峰的相對保留時間，應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍之內(nèi)。相對保留時間規(guī)定值 為:0.59 （峰 1 ）、1.00 （峰 s）、1.27 （峰 2）、1.42 （峰 3 ）、2.08 （峰 4）、2.60 （峰 5）o（7）參照峰的選擇及樣品溶液穩(wěn)定性我們對同一份絞股藍(lán)提取物樣品溶液（批號：20101001 ）進(jìn)行穩(wěn)定性研究, 結(jié)果表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。24 h后絞股藍(lán)皂昔xlix峰依舊無明顯變化，但絞股藍(lán)皂昔a開始明顯出圖11峰轉(zhuǎn)化示意圖（h上向下檢測時間依次為30h、35h、40h、45 h、50h、60 h）12、微生物指標(biāo)菌落總

44、數(shù)按gb 4789.2規(guī)定的方法檢驗(yàn)；大腸菌群按gb 4789.3規(guī)定的方法檢 驗(yàn)；霉菌和酵母菌按gb 4789.15規(guī)定的方法檢驗(yàn)。32批樣品均符合規(guī)定。六、功效成分/標(biāo)志性成分1、絞股藍(lán)皂昔xlix該項(xiàng)目色譜條件、對照品溶液配制（即參照物溶液配制）、樣品處理方法等 均同【特征圖譜】項(xiàng)下，不再贅述。（1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用【特征圖譜】項(xiàng)下色譜條件，絞股藍(lán)皂昔xl ix與其他色譜峰完全達(dá) 到基線分離。見圖12、13。oo 4.00 g.oo 8.00 10.00 13.00 i 4.00 1 g.oo 1 8.0020.0022.0024.002g.003b.0030.0032.0034.00

45、36.003b.0040.00 42.0044.00圖12絞股藍(lán)皂昔xl ix對照站示意圖.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18*00 20.00 22*00 24.00 26*00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00圖13絞股藍(lán)皂琶xl ix對照品示意圖(2) 線性考察精密稱取絞股藍(lán)皂昔xl ix對照品，加甲醇配制成每1 ml分別含絞股藍(lán)皂 昔 xl ix 0.050mg、o.lomg、0.20 mg、0.50 mg、1.00 mg> 2.00 mg 的溶液，進(jìn)樣

46、 5pl,測定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（囲）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線，結(jié)果表明絞股藍(lán)皂昔xlix在進(jìn)樣量為0.02510.0 |ig范圍內(nèi)呈良好的線性 關(guān)系,線性方程為：y=7.070x105x+4004.3, 丫=0.9999。（3）精密度考察精密吸取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次,測定峰面積積分值,rsd為0.55%。 表明本方法精密度良好。(4 )穩(wěn)定性考察精密吸取供試品溶液，每隔一定時間進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積 積分值，結(jié)果rsd為0.94%,表明供試液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。(5) 重復(fù)性試驗(yàn)取樣品(批號為20101001 ) 6份，進(jìn)行測定，結(jié)果rsd為1.7%,表

47、明本方 法重復(fù)性良好。(6) 回收率取已知含量的樣品(批號：20101001 ),進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)，取樣品約50 mg, 精密稱定，置10 ml量瓶中，精密加入濃度為6.02 mg/ml的絞股藍(lán)皂昔xl ix 對照品溶液iml,再加甲醇適量，超聲處理5mim放冷至室溫，加甲醇稀釋至 刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 pim)濾過，取續(xù)濾液，即得，進(jìn)行測定，計(jì)算 回收率。結(jié)果平均回收率為9&69%, rsd為0.62%。(7) 樣品測定取32批絞股藍(lán)提取物樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試液，進(jìn)行測 定。結(jié)果顯示樣品中絞股藍(lán)皂甘xl ix含量測定結(jié)果相差較大，考慮到不同工藝 的差別以及

48、原料產(chǎn)地差異，暫將含量測定限度定為每100 g絞股藍(lán)提取物中含絞 股藍(lán)皂昔xl ix不得少于7.0 go2、絞股藍(lán)總皂昔絞股藍(lán)提取物主要成分為絞股藍(lán)皂昔，市場上銷售的一般分有80%、90%、 98%等規(guī)格，衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)【ws3z00693(z)】上測定絞股藍(lán)總武的方法為香 草醛冰乙酸顯色法。(1) 儀器與試劑試藥島津uv-2550紫外可見分光光度計(jì)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。(2) 方法選擇采用三種方法即衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)【ws3z00693（z）】中總皂昔處理方法、文 獻(xiàn)方法和我所起草的方法進(jìn)行比對。取4批絞股藍(lán)提取物，進(jìn)行測定，結(jié)果見表 23。a. 部標(biāo)方法：精密稱取本品100 mg,加

49、甲醇溶解，制成每iml含2 mg的溶 液，作為供試品溶液。b. 文獻(xiàn)方法：稱取供試品100 mg,用濾紙包好,放于索氏提取器中，乙瞇回 流提取lh,揮干濾紙包，力plml水，潤濕樣品后，加20 ml水飽和正丁醇，超聲 30 min,共4次，合并正丁醇提取液，加2倍量水萃取，棄去水層，正丁醇層水浴 揮干，甲醇定容至i0mloc. 起草方法：精密稱取本品100 mg,置離心管中，加石油瞇（3060 °c） 10ml,超聲處理10 min,離心（5000 i以上）5 min,棄去上清液，殘?jiān)鼡]干， 加甲醇分次溶解，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45pm）濾過

50、，取續(xù)濾液，即得。絞股藍(lán)皂昔xl ix對照品溶液：取60 °c減壓干燥3 h的絞股藍(lán)皂昔xl ix 對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每iml含2 mg的溶液。測定方法：精密吸取對照品溶液及供試品溶液各100 pl,分別置15 ml具塞 試管中，揮干，精密加入新配制的含5%香草醛冰乙酸溶液與高氯酸（2: 8）的 混合液2ml,搖勻，密塞，置60 °c水浴中加熱15 min,取出，立即放入冷水中 冷卻2 min,精密加入冰乙酸10 ml,搖勻，以試劑作空白，照紫外可見分光光 度法（中國藥典2010年版一部附錄va）試驗(yàn)，在555±5 nm波長處測定吸收度， 計(jì)算，即得

51、。表10處理方法比較批號a 方法(g/100 g)b 方法(g/100 g)c 方法(g/100 g)2010100194. 4991.7992. 702010100295. 1093. 1093. 202007060187. 9866. 2467. 982010031266. 6454. 1853.01對于批號為20100312的樣品，我們采用b法進(jìn)一步做了萃取后水的檢查試 驗(yàn)，即將水揮干，甲醇定容，取適量按人參皂昔測試法操作，發(fā)現(xiàn)，當(dāng)加入顯色 劑后，試管中的液體即變成翠綠色，加熱后則變?yōu)樯罴t色，其吸收值很高，這種 敏物質(zhì)可能是影響測試的主要因素。檢測結(jié)果可以看出，a方法測定結(jié)果虛高，可將一

52、些摻雜樣品總皂甘含量測 定值人為增大；b法與c法結(jié)果接近，故采用更為簡單、回收率更高的c法作 為本技術(shù)要求方法。由于絞股藍(lán)提取物成分復(fù)雜，許多雜質(zhì)對顯色反應(yīng)影響較大，采用直接稱量 定容比色法(a法)，測得值較高，加標(biāo)回收率為121.2%,因此在顯色處理前 增加石油瞇處理精制，精制后定容比色，測得值較為合理，此步處理后的樣品 干擾小，加標(biāo)回收率95.1%,測定值更接近真值。本方法中采用絞股藍(lán)皂芽xlix 為對照，代替絞股藍(lán)皂(3) 線性關(guān)系考察取60 °c減壓干燥3h的絞股藍(lán)皂昔xlix對照品適量，精密稱定，加甲醇 制成每1 ml含1 mg的溶液。精密吸取上述絞股藍(lán)皂昔xl ix對照品溶液50 pl、100此、200(1l、400此、600 |il分別置10 ml具塞試管中，揮干，精密加入新配制的含5%香草醛冰乙酸 溶液與高氯酸(2:8)的混合液2ml,搖勻，密塞，置60 °c水浴中加熱15 min, 取出，立即放入冷水中冷卻2 min,冰乙酸定容至10 ml,搖勻，以試劑作空白， 照紫外可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄va)試驗(yàn)，在555±5nm 波長處測定吸收度，以絞股藍(lán)皂昔xl ix質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)制標(biāo)準(zhǔn) 曲線，結(jié)果線性范圍