探究培養(yǎng)液中酵種群數(shù)量的動態(tài)變化 及血球計數(shù)板的構造和使用

1、探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化 探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化是一項有著多方面探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化是一項有著多方面意義和價值的探究活動。在這個探究活動中用到了意義和價值的探究活動。在這個探究活動中用到了4個科學方個科學方法：（法：（1）數(shù)學模型法；（）數(shù)學模型法；（2）抽樣檢測法；（）抽樣檢測法；（3）顯微觀察法；）顯微觀察法；（4）微生物培養(yǎng)法。此外，學生通過親自研究一個真實的種）微生物培養(yǎng)法。此外，學生通過親自研究一個真實的種群，加深了對種群數(shù)量變化知識的理解，并且培養(yǎng)了收集、群，加深了對種群數(shù)量變化知識的理解，并且培養(yǎng)了收集

2、、整理、分析數(shù)據(jù)的能力。整理、分析數(shù)據(jù)的能力。1.基基 礎礎 回回 扣扣（1）酵母菌）酵母菌 酵母菌是單細胞真核生物。 生長周期短，增殖速度快， 還可以用酵母菌作為實驗材料研究（探究酵母菌的呼吸方式，判斷細胞的死活探究膜的透性）（2）種群數(shù)量的變化）種群數(shù)量的變化 種群數(shù)量的變化包括增長、波動、穩(wěn)定、下降種群數(shù)量的變化包括增長、波動、穩(wěn)定、下降等等 “s”型曲線有一個型曲線有一個k值，即環(huán)境容納量。值，即環(huán)境容納量。 種群數(shù)量的增長也受到許多環(huán)境因素（如溫度種群數(shù)量的增長也受到許多環(huán)境因素（如溫度、培養(yǎng)液的、培養(yǎng)液的ph、培養(yǎng)液的養(yǎng)分種類和濃度、代謝產、培養(yǎng)液的養(yǎng)分種類和濃度、代謝產物等）的影

3、響。物等）的影響。（3）血球計數(shù)板）血球計數(shù)板 血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大單細胞微生物的一血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大單細胞微生物的一種儀器。種儀器。 計數(shù)時，常采用樣方法。計數(shù)時，常采用樣方法。（4）探究性實驗）探究性實驗 探究實驗設計時要遵循的原則：科學探究實驗設計時要遵循的原則：科學性原則、可行性原則、對照原則、單一變量性原則、可行性原則、對照原則、單一變量原則和平行重復原則。原則和平行重復原則。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量與時間的變化關系培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量與時間的變化關系（1）實驗原理：）實驗原理： 種群的數(shù)量變化有一定的規(guī)律。在理想條件下，種種群的數(shù)量變化有一定的規(guī)律。在理想

4、條件下，種群呈群呈“j”型增長，在有限的環(huán)境下，種群呈型增長，在有限的環(huán)境下，種群呈“s”型增長型增長。 酵母菌生長周期短，增殖速度快且世代間不重疊，酵母菌生長周期短，增殖速度快且世代間不重疊，在實驗室條件下，用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以觀察在實驗室條件下，用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母菌，可以觀察酵母菌種群數(shù)量隨時間變化的情況。酵母菌種群數(shù)量隨時間變化的情況。對于壓在小方格界線上的酵母菌應取相鄰兩邊及頂角對于壓在小方格界線上的酵母菌應取相鄰兩邊及頂角計數(shù)。計數(shù)。 （2）引出培養(yǎng)液配制、滅菌、接種和培養(yǎng)等步驟）引出培養(yǎng)液配制、滅菌、接種和培養(yǎng)等步驟l培養(yǎng)液配制：配制質量分數(shù)為培養(yǎng)液配制：配制質量分數(shù)為5

5、的葡萄糖溶液的葡萄糖溶液（葡萄糖（葡萄糖20g，1000ml水），分裝到水），分裝到5個燒杯中個燒杯中（200ml/燒杯）燒杯）l滅菌：用高壓蒸汽滅菌鍋將培養(yǎng)液和取樣、計數(shù)滅菌：用高壓蒸汽滅菌鍋將培養(yǎng)液和取樣、計數(shù)時所用的滴管分別滅菌。貼標簽。時所用的滴管分別滅菌。貼標簽。l接種：接種時要在酒精燈附近，用滅菌干凈的接種：接種時要在酒精燈附近，用滅菌干凈的1ml刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1ml酵母菌母液，往每個燒杯酵母菌母液，往每個燒杯中加入。（中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌數(shù)過多。注意滴加量不要太多，避免初始菌數(shù)過多。）l培養(yǎng)：將燒杯置于培養(yǎng)：將燒杯置于28的恒溫箱中培養(yǎng)的

6、恒溫箱中培養(yǎng)（3）設計實驗：）設計實驗：a組為實驗組，裝培養(yǎng)液組為實驗組，裝培養(yǎng)液10 ml，酵母菌母液，酵母菌母液0.1ml,環(huán)境溫度環(huán)境溫度28。b組裝培養(yǎng)液組裝培養(yǎng)液10 ml，酵母菌母液，酵母菌母液0.1ml,環(huán)境溫度環(huán)境溫度5，與，與a組形成溫度條件對照。組形成溫度條件對照。c組不裝培養(yǎng)液，只裝無菌水組不裝培養(yǎng)液，只裝無菌水10ml,酵母菌母液酵母菌母液0.1ml,環(huán)境溫度環(huán)境溫度28，與，與a組形成營養(yǎng)條件對照。組形成營養(yǎng)條件對照。（4）計數(shù)）計數(shù)計數(shù)：首先取樣，每計數(shù)：首先取樣，每 天取樣時間大體一致，并要遵守無天取樣時間大體一致，并要遵守無菌操作規(guī)范。菌操作規(guī)范。每次取樣前要試

7、管振蕩搖勻每次取樣前要試管振蕩搖勻，正確地使用，正確地使用1ml刻度吸管將刻度吸管將lml酵母菌培養(yǎng)液移入酵母菌培養(yǎng)液移入1支干凈的試管里，支干凈的試管里，然后然后用滴管吸取用滴管吸取1滴培養(yǎng)液滴在已蓋在血球計數(shù)板網(wǎng)格上滴培養(yǎng)液滴在已蓋在血球計數(shù)板網(wǎng)格上的蓋玻片的邊緣，待培養(yǎng)液自行滲入并充滿網(wǎng)格后的蓋玻片的邊緣，待培養(yǎng)液自行滲入并充滿網(wǎng)格后，再放，再放在顯微鏡下進行細胞計數(shù)，后立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中在顯微鏡下進行細胞計數(shù)，后立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中。如。如 記數(shù)時發(fā)現(xiàn)，細胞數(shù)較多，不易分辨，吸取的樣液應記數(shù)時發(fā)現(xiàn)，細胞數(shù)較多，不易分辨，吸取的樣液應當稀釋。當稀釋。參考參考1：一次實驗數(shù)據(jù)記錄

8、表：一次實驗數(shù)據(jù)記錄表 參考參考2：出：出a、b、c各個處理的曲線圖各個處理的曲線圖 3.討論討論（1）在計數(shù)前，還應有哪些步驟？需注意些什么？）在計數(shù)前，還應有哪些步驟？需注意些什么？（2）針對）針對“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化化”，有人提出了新的問題，某同學按下表完成了有，有人提出了新的問題，某同學按下表完成了有關實驗。關實驗。血球計數(shù)板的構造和使用血球計數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的血球計數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的.玻片玻片中有四條下凹的槽中有四條下凹的槽,構成三個平臺構成三個平臺.中間的平臺較寬中間的平臺較寬,其中間又被其

9、中間又被一短橫槽隔為兩半一短橫槽隔為兩半,每半邊上面每半邊上面,刻有一個方格網(wǎng)刻有一個方格網(wǎng).方格網(wǎng)上刻有方格網(wǎng)上刻有9個大方格個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室,供微生物計供微生物計數(shù)用數(shù)用.這一大方格的長和寬各為這一大方格的長和寬各為1mm,深度為深度為0.1mm,其體積為其體積為0.1mm3.計數(shù)室通常有兩種規(guī)格計數(shù)室通常有兩種規(guī)格.一種是大方格內分為一種是大方格內分為16中格中格,每一中格每一中格又分為又分為25小格小格;另一種是大方格內分為另一種是大方格內分為25中格中格,每一中格又分為每一中格又分為16小格小格.但是不管計數(shù)室是哪一種構造但是

10、不管計數(shù)室是哪一種構造;它們都有一個共同的特它們都有一個共同的特點點,即每一大方格都是由即每一大方格都是由1625=2516=400個小方格組成個小方格組成,見見圖圖.以計數(shù)酵母菌為例以計數(shù)酵母菌為例(1)用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù)用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù).(2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù),以每小以每小方格內含有方格內含有4-5個酵母細胞為宜個酵母細胞為宜,一般稀釋一般稀釋10倍即可倍即可.(3)將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦凈將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數(shù)室上加在中央的計數(shù)室上加蓋專用的厚玻片蓋專用的厚玻片.(4)將稀釋

11、后的酵母菌懸液將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣片的邊緣,使菌液緩緩滲入使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內.血球計數(shù)板的使用血球計數(shù)板的使用(5)計數(shù)時計數(shù)時,如果使用如果使用16格格25格規(guī)格的計數(shù)室格規(guī)格的計數(shù)室,要按要按對角線位對角線位,取左上取左上,右上右上,左下左下,右下右下4個中格個中格(即即100個個小格小格)的酵母菌數(shù)的酵母菌數(shù).如果規(guī)格為如果規(guī)格為25格格16格的計數(shù)板格的計數(shù)板,除了取其除了取其4個對角方位外個對角方位外,還需再數(shù)

12、中央的一個中格還需再數(shù)中央的一個中格(即即80個小方格個小方格)的酵母菌數(shù)的酵母菌數(shù).(6)當遇到位于大格線上的酵母菌當遇到位于大格線上的酵母菌,一般只計數(shù)大方一般只計數(shù)大方格的格的上上方和方和右右方線上的酵母細胞方線上的酵母細胞(或只計數(shù)或只計數(shù)下下方和方和左左方線上的酵母細胞方線上的酵母細胞).(7)對每個樣品計數(shù)三次對每個樣品計數(shù)三次,取其平均值取其平均值,按下列公式計按下列公式計算每算每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù)菌液中所含的酵母菌個數(shù).3.計算公式計算公式(1)16格格25格的血球計數(shù)板計算公式格的血球計數(shù)板計算公式:酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=100小格內酵母細胞個數(shù)小格內酵母細胞個數(shù)/100400104稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)(2)25格格x16格的血球計數(shù)板計算公式格的血球計數(shù)板計算公式:酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=80小格內酵母細胞個數(shù)小格內酵母細胞個數(shù)/80400104稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)4.血球計數(shù)板的清潔血球計數(shù)板的清潔血球汁數(shù)板使用