肝炎項(xiàng)目檢測(cè)

1、 肝炎病毒檢測(cè)肝炎病毒檢測(cè) 童效云童效云 2011.1.13肝炎病毒及分子生物學(xué)簡(jiǎn)介v肝炎病毒家族是一大類引起病毒性肝炎的病原體，根據(jù)其病毒特征并結(jié)合流行病學(xué)資料與臨床表現(xiàn)，可將肝炎病毒分為甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒、戊肝病毒及庚肝病毒。v病毒性肝炎的感染率和發(fā)病率都非常高，已稱為全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，在我國(guó)歸為法定的乙類傳染病。v隨著醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，肝炎病毒的分子生物學(xué)診斷也飛速發(fā)展，新的肝炎分子生物學(xué)診斷可以根據(jù)患者自身感染病毒的不同，歷史用藥情況的不同，因人而異的開展肝炎病毒的診斷和治療方案的制定。v目前肝炎病毒的的分子生物學(xué)檢測(cè)對(duì)于肝炎的早期診斷，病毒的分型，治療

2、方案的制定，藥物療效的監(jiān)控，以及抗病毒藥物的敏感性判斷，臨床用藥指導(dǎo)方面都有著無可比擬的優(yōu)勢(shì)。乙肝點(diǎn)擊v 我國(guó)乙肝病毒攜帶者約1.2億人，大約10個(gè)人中就有1人攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝患者約有3000萬例，每年有35萬人死于慢性乙肝的相關(guān)疾??；v hbv dna持續(xù)陽性超過6個(gè)月的會(huì)轉(zhuǎn)為慢性肝炎。50以上抗hbe陽性慢性肝病病人，經(jīng)平均4.5年發(fā)展為肝硬化，常與hbv dna持續(xù)陽性有關(guān)；v 拉米夫定等核苷類抗病毒藥，雖具有強(qiáng)烈的抑制hbv dna復(fù)制的作用，但長(zhǎng)期服用可出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，經(jīng)過研究證實(shí)其與乙肝病毒p區(qū)基因突變有關(guān)。公司情況v 艾迪康公司特檢中心利用自身的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，開展了全面完整的

3、肝炎診斷項(xiàng)目，為臨床診斷和治療提供可靠、具體、客觀的全方位服務(wù)。v 環(huán)境pcr實(shí)驗(yàn)室經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生部臨檢中心驗(yàn)收并獲驗(yàn)收合格證書；v 儀器美國(guó)abi公式生產(chǎn)的abi 7300熒光定量基因擴(kuò)增儀及abi 3100全自動(dòng)dna測(cè)序儀；v 質(zhì)控參加衛(wèi)生部和當(dāng)?shù)厥∈信R檢中心組織的室間質(zhì)評(píng)，并取得優(yōu)異的成績(jī)；v 人員由經(jīng)過衛(wèi)生部臨檢中心培訓(xùn)并獲pcr上崗證的專業(yè)人員進(jìn)行操作。艾迪康開展的項(xiàng)目v乙型肝炎 乙型肝炎病毒核酸檢測(cè) 乙型肝炎病毒基因分型檢測(cè) 乙型肝炎病毒錢c區(qū)/c區(qū)變異測(cè)序 乙型肝炎病毒p區(qū)耐藥基因測(cè)序 乙型肝炎病毒前s區(qū)/s區(qū)耐藥基因測(cè)序 乙型肝炎病毒細(xì)胞內(nèi)cccdna檢測(cè) 乙型肝炎病毒ymdd突

4、變檢測(cè) 乙型肝炎病毒基因分型檢測(cè) 乙型肝炎病毒c區(qū)/c區(qū)1896、1762、1764位點(diǎn)變異v丙型肝炎 丙型肝炎病毒核酸檢測(cè) 丙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)v其他型肝炎 甲型肝炎病毒核酸檢測(cè) 丁型肝炎病毒核酸檢測(cè) 戊型肝炎病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本類型及送檢要求檢測(cè)項(xiàng)目hbv-dna基因分型hbv p耐藥基因測(cè)序（包括ymdd突變位點(diǎn)檢測(cè)）hbv c區(qū)變異包括1896、1762、1764位點(diǎn)變異檢測(cè)）hbv s區(qū)變異高靈敏度乙肝病毒核酸檢測(cè)丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)丙型肝炎病毒基因分型甲型肝炎病毒核酸檢測(cè)丁/庚型肝炎病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本要求血清1ml血清1ml血清1ml血清1ml血清1mledta抗凝全血edta抗凝血

5、漿1mledta抗凝血漿1ml血清1mlv血清、血漿可0-20保存，全血要4 保存，不可冷凍，；組織保存要求請(qǐng)聯(lián)系本公司。v0冰上運(yùn)輸血液標(biāo)本，2-4 保存不超過24小時(shí)，-20 保存不超過一周；v24小時(shí)內(nèi)到達(dá)公司最好，最遲不能超過72小時(shí)；v標(biāo)本禁忌反復(fù)凍融。采集及送檢和單據(jù)填寫注意事項(xiàng)v 用于采集標(biāo)本的試管或容器需無菌，嚴(yán)禁使用肝素抗凝管；v 送檢標(biāo)本含量應(yīng)1000iu/ml;v 血清樣本：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），收集上清，如有沉沉行成，應(yīng)再次離心；v 血漿樣本：edta抗凝，無菌采集，混合均勻后離心1020分鐘后收集上清，如有沉淀

6、，應(yīng)再次離心；v 如果是組織或是其他特殊樣本，請(qǐng)?zhí)崆芭c中心聯(lián)系，以便確認(rèn)正確的保存以及運(yùn)送條件；v 血液標(biāo)本采集是注意無菌操作，避免污染；v 溶血中、脂血標(biāo)本影響定量、突變類檢測(cè)成功率，但是不影響檢出率，病毒含量越高，影響越小。v 單據(jù)使用專用申請(qǐng)單（正在印刷中，乙肝/丙肝分子診斷學(xué)綜合檢查申請(qǐng)單）單據(jù)上注明臨床用藥情況，服用時(shí)間，病程、病史、病毒含量。v 任何標(biāo)本和原始申請(qǐng)單必須同時(shí)到達(dá)杭州特檢部。v 首次送檢的標(biāo)本打印報(bào)告單時(shí)一定要將格式、內(nèi)容跟杭州出具的報(bào)告單核對(duì)，備注內(nèi)容是否齊全，（參考范圍、項(xiàng)目順序、箭頭指示等).報(bào)告時(shí)間計(jì)算v 起止時(shí)間自標(biāo)本到達(dá)杭州特檢實(shí)驗(yàn)室起算； 非浙江區(qū)域要加

7、上物流的路途時(shí)間 例如： 某項(xiàng)目報(bào)告時(shí)間是三個(gè)工作日 杭州1月3日接收標(biāo)本 ，三個(gè)工作日 ，1月6日出報(bào)告； 安慶1月3日接收標(biāo)本，3日晚到達(dá)合肥，4日托運(yùn)至杭州，5日早上到達(dá)杭州特檢實(shí)驗(yàn)室，三個(gè)工作日，8號(hào)出報(bào)告；v 工作日： 每周一到周六上班，周日和固定假日為非工作日；v 標(biāo)本延遲原因 標(biāo)本擴(kuò)增失敗，復(fù)查； 交接延遲，項(xiàng)目不清； 病毒含量低； 交接臨床情況詢問：病程病史，用藥換藥情況；v 報(bào)告單打印格式v 有a4和a5兩種版式，醫(yī)院首次送檢的標(biāo)本須保證查詢單據(jù)正確。 hbsag、hbeag全定量檢測(cè)v 意義 ：研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合定量檢測(cè)血清hbsag、hbeag的水平可識(shí)別活動(dòng)性hbv攜帶者；v

8、 hbsag與hbeag的變化是乙肝治療的重要指標(biāo)與停藥節(jié)點(diǎn)；v hbsag與hbeag的全定量指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化與變化趨勢(shì)是乙肝個(gè)性化治療的重要依據(jù)，可確定療程及治療終點(diǎn)；v 適用人群v 初診病人預(yù)后判斷及病情確定v 干擾素以及其他藥物療效預(yù)測(cè)v e s抗原全定量檢測(cè)需要進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，方能獲得最大意義。乙肝病毒p區(qū)耐藥檢測(cè)v 臨床意義： 耐藥變異株不僅抗藥性增加，而且可能加重肝損害，引起病情反復(fù)，甚至加重；v 耐藥病毒的出現(xiàn)使后續(xù)治療的藥物療效降低v 耐藥病毒的出現(xiàn)抵消了之前獲得的臨床益處v 使用核苷類似物治療的慢性乙肝患者，必須定期檢測(cè)耐壓情況；v 根據(jù)耐藥情況及時(shí)換藥加藥或更改治療方案，使病

9、人獲得更好的治療效果；v 適用人群v 治療發(fā)生原發(fā)性不應(yīng)答的患者建議進(jìn)行p區(qū)耐藥檢測(cè)v 治療過程中發(fā)生部分病毒學(xué)應(yīng)答的患者建議進(jìn)行p區(qū)耐藥檢測(cè)v 建議使用核苷類似物治療的患者均應(yīng)每三個(gè)月檢測(cè)一次p區(qū)耐藥，從而及時(shí)調(diào)整對(duì)病人的用藥方案v 對(duì)于更改治療方案的病人（如加藥、換藥等），均應(yīng)每三個(gè)月檢測(cè)p區(qū)耐藥情況，確認(rèn)病毒是否發(fā)生新的變異。高靈敏度乙肝病毒核酸檢測(cè)v 臨床意義v 普通的hbv dna 靈敏度較低，無法監(jiān)控低載量病毒復(fù)制情況，高靈敏度hbv dna檢測(cè)靈敏度很高，檢測(cè)下限可以達(dá)到50-70copy/ml，對(duì)于乙肝治療終點(diǎn)以及停藥時(shí)間的確定有著非常重要的意義，并且可很好的對(duì)低載量病毒患者進(jìn)

10、行病毒監(jiān)控。v 使用人群v 對(duì)慢性乙肝患者體內(nèi)的病毒數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)；v 服用抗病毒藥物的慢性乙肝患者檢測(cè)藥物療效情況；v 長(zhǎng)期服用抗病毒藥物療效較好的患者進(jìn)行停藥時(shí)機(jī)的判斷；v 對(duì)已經(jīng)停藥的患者進(jìn)行體內(nèi)病毒含量的檢測(cè)，確認(rèn)再次開始治療的時(shí)機(jī)。乙肝病毒基因分型檢測(cè)v 臨床意義v 根據(jù)hbv全基因核苷酸序列異源性85或s基因區(qū)核苷酸序列異源性4 ，將不同的病毒株分為不同的基因型，迄今為止，hbv可以分為8個(gè)基因型，即a 、b 、c、 d 、e 、f、 g 、h 型，hbv基因型的分布有一定的地域性，我國(guó)是以b、 c 型為主。不同的基因型的病毒可能具有不同的毒力，hbv基因分型對(duì)乙肝臨床和分子流行病學(xué)

11、至關(guān)重要，不同的基因分型，臨床癥狀，病情轉(zhuǎn)歸，藥物治療效果等均不相同。v 適用人群v 判斷患者病情進(jìn)展情況，建議檢測(cè)基因分型；v 對(duì)于治療方案適應(yīng)干擾素的患者，必須檢測(cè)基因分型；v 預(yù)測(cè)病情，判斷病毒致病性，判斷病程及轉(zhuǎn)歸，建議檢測(cè)基因分型。乙肝病毒前c區(qū)/c區(qū)變異及1762、1764、1896位點(diǎn)變異檢測(cè)v 并非所有的hbeag陽轉(zhuǎn)陰的感染者病情都趨于好轉(zhuǎn)，相當(dāng)部分的慢性肝炎患者都檢測(cè)到hbeag陰性，但是感染者的 hbv dna卻呈現(xiàn)高載量，這是由于這部分患者前c區(qū)或者c區(qū)發(fā)生變異，使得hbeag分泌減少或停止分泌。c區(qū)變異的病人使得病毒更容易逃逸機(jī)體的細(xì)胞免疫、體液免疫作用，造成肝細(xì)胞持

12、續(xù)損傷，炎癥反應(yīng)加重。v 適用人群v hbeag含量降低但hbv dna高載量的病人，建議檢測(cè)c區(qū)變異，判明病因；v 臨床觀察發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換的病人，檢驗(yàn)檢測(cè)c區(qū)變異，避免誤診、漏診；v 長(zhǎng)期使用核苷類藥物，但是病毒載量始終維持在103-106之間不能繼續(xù)下降的病人，建議檢測(cè)c區(qū)變異；v 重癥肝炎，炎癥反應(yīng)劇烈，肝臟病情進(jìn)展迅速的病人，檢驗(yàn)檢測(cè)c區(qū)變異。乙肝病毒前s區(qū)和s區(qū)變異檢測(cè)v 臨床意義v 前s1基因突變可導(dǎo)致前s2蛋白缺失，前s區(qū)/s區(qū)變異可使疫苗或免疫球蛋白保護(hù)無效，使hbv逃避干擾素治療和宿主免疫清除，s區(qū)變異會(huì)導(dǎo)致hbsag表達(dá)受到影響，臨床表現(xiàn)為hbsag陰性而hbsab陽性、h

13、bv dna陽性的隱匿性肝炎，前s區(qū)/s區(qū)變異可使肝炎的癥狀進(jìn)展更加迅速，與肝硬化、肝癌的發(fā)生有一定關(guān)系。v 適用人群v 乙肝兩對(duì)半定性結(jié)果全陰hbv dna 的患者v hbsag陰性而hbsab陽性、 hbv dna陽性確定是否隱匿性肝炎，防止誤診漏診；v 經(jīng)免疫球蛋白治療后的孕婦，建議檢測(cè)s區(qū)變異觀察免疫球電白對(duì)病毒的阻斷作用。白介素28b基因多態(tài)性檢測(cè)v 臨床意義v 染色體19上的白介素28b（il-28b）基因多態(tài)性與患者對(duì)聚乙二醇化干擾素a（長(zhǎng)效干擾素）與利巴韋林治療具有持續(xù)病毒學(xué)反應(yīng)有關(guān)。v 適用人群v 適用于所有治療方案為干擾素+利巴韋林的病人判斷藥物應(yīng)答和預(yù)后情況，以便在效果不佳時(shí)更改治療方案。丙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)v 臨床意義v 不同基因型感染者的臨床表現(xiàn)有差異，血清抗體反應(yīng)有差異，肝臟受損程度有差異；v 不同基因型感染者對(duì)干擾素的診療效果有差異；v 不同的基因型和基因亞型的hcv對(duì)肝臟的損害程度不同；v hcv基因型