藥物分析第二章藥物的鑒別試驗

1、藥物的鑒別試驗藥物的鑒別試驗Identification test of drugIdentification test of drug第二章第二章p 藥物的鑒別試驗p 藥物的雜質(zhì)檢查p 藥物定量分析與分析方法驗證藥品檢驗工作的基本規(guī)律藥品檢驗工作的基本規(guī)律Basic regularity of drug inspectionIdentification test of drugp 鑒別試驗的內(nèi)涵p 鑒別試驗的項目p 鑒別試驗的方法p 鑒別試驗的條件藥物的鑒別試驗藥物的鑒別試驗p 根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷其真?zhèn)?。生物學(xué)方法

2、來判斷其真?zhèn)巍?p 鑒別試驗用方法僅用于證實貯藏在有標簽容器鑒別試驗用方法僅用于證實貯藏在有標簽容器中的藥物是否為其所標示的藥物，而非對未知物中的藥物是否為其所標示的藥物，而非對未知物的鑒別。的鑒別。 p 鑒別試驗方法應(yīng)專屬，每個品種一般鑒別試驗方法應(yīng)專屬，每個品種一般2 23 3條。條。鑒別試驗的內(nèi)涵鑒別試驗的內(nèi)涵Test meaning ChP(2010)凡例中對藥物的鑒別凡例中對藥物的鑒別的定義為：鑒別項下規(guī)定的實驗的定義為：鑒別項下規(guī)定的實驗方法，僅反應(yīng)該藥品某些物理、方法，僅反應(yīng)該藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)特征，不完化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)特征，不完全代表對該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。全代

3、表對該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。性狀項和物理常數(shù)確認性狀項和物理常數(shù)確認 鑒別項下規(guī)定的試驗鑒別項下規(guī)定的試驗 原原料料藥藥鑒鑒別別制制劑劑鑒鑒別別鑒別試驗的項目鑒別試驗的項目 Test items 性性 狀狀 （Description）定義：定義： 反映藥物特有的物理性質(zhì)，如外觀、溶解反映藥物特有的物理性質(zhì)，如外觀、溶解度和物理常數(shù)等。度和物理常數(shù)等。外 觀溶解度物理常數(shù)外觀：指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。指藥物的聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。 如二巰基丁二鈉的描述為如二巰基丁二鈉的描述為“本品為白色至微黃色的本品為白色至微黃色的粉末；有類似蒜的特臭粉末；有類似蒜的特臭”。

4、 溶解度：溶解度：一定程度上反映了藥品的純度一定程度上反映了藥品的純度。藥品在不同溶劑。藥品在不同溶劑中的溶解性能用中的溶解性能用“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述。來描述。物理常數(shù)物理常數(shù)：用于藥品鑒別，反映其純雜程度用于藥品鑒別，反映其純雜程度。藥典收載的。藥典收載的物理常數(shù)包括：相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、物理常數(shù)包括：相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。 性性 狀狀 （Descriptio

5、n）熔熔 點點性 狀-固體熔化成液體的溫度 熔融同時分解的溫度 自初熔至全熔的一段溫度 物理常數(shù)物理常數(shù) ChP(2010)收載三種熔點的測定收載三種熔點的測定方法：方法： 第一法第一法 測定易碎固體藥品測定易碎固體藥品 第二法第二法 測定不易粉碎固體藥品測定不易粉碎固體藥品 （脂肪酸、石蠟）（脂肪酸、石蠟） 第三法第三法 測定凡士林或其他易碎物測定凡士林或其他易碎物要求報告初熔和終熔的溫度要求報告初熔和終熔的溫度比旋度比旋度：在一定波長：在一定波長(589.3nm)(589.3nm)與與溫度溫度(20(20)下，偏振光透過長下，偏振光透過長1dm1dm且且每每1ml1ml中含有旋光性物質(zhì)中含

6、有旋光性物質(zhì)1g1g的溶液的溶液時測得的旋光度。用時測得的旋光度。用 表示。表示。性 狀-物理常數(shù)物理常數(shù) CLD20 dLD20 例如：維生素例如：維生素C的比旋度測定：的比旋度測定： 取本品，精密稱定，加水溶解，并定取本品，精密稱定，加水溶解，并定量稀釋成量稀釋成C為為0.10g/ml的溶液，依法的溶液，依法測定旋光度為測定旋光度為+2.05至至2.15，求，求 =？ 吸收系數(shù)吸收系數(shù)：在給定的波長、溶劑和溫在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度稱為吸收系單位液層厚度時的吸收度稱為吸收系數(shù)。中國藥典收載是數(shù)。中國藥典收載

7、是 。 這兩種物理常數(shù)可用以區(qū)別藥品、檢這兩種物理常數(shù)可用以區(qū)別藥品、檢查純度或測定制劑的含量。查純度或測定制劑的含量。 %1cm1E吸收系數(shù)吸收系數(shù) 吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度層厚度時的吸收度 摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù) 溶液濃度溶液濃度 液層厚度液層厚度 百分吸收系數(shù)百分吸收系數(shù) 溶液濃度溶液濃度 液層厚度液層厚度L/mol1cm1cm1 ml/g%1%11 cmE A=ECL E=A/CL C=1%或或1mol/L例如例如 鹽酸甲氧明鹽酸甲氧明 “取本品，精密稱定，加水溶解并定量取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每稀釋成每1ml含含30ug的溶

8、液，照分光的溶液，照分光光度法，在光度法，在290nm波長處測定吸收度，波長處測定吸收度，吸收系數(shù)（為吸收系數(shù)（為 133-141）%11cmE依依 據(jù)據(jù)： 某一類藥物組成中的陰離子和陽離子的特殊某一類藥物組成中的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)或典型的有機官能團反應(yīng)。反應(yīng)或典型的有機官能團反應(yīng)。中國藥典附錄收載一般鑒別試驗中國藥典附錄收載一般鑒別試驗：無機金屬鹽類、無機酸鹽、有機酸鹽、無機金屬鹽類、無機酸鹽、有機酸鹽、 丙二酰丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機氟化脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機氟化物類等物類等General identification test一般鑒別試驗一般鑒別

9、試驗無機物無機物有機物有機物陰陽離子的特殊反應(yīng)陰陽離子的特殊反應(yīng)酸根酸根名稱名稱 檢驗試劑檢驗試劑 現(xiàn)現(xiàn) 象象 反應(yīng)方程式反應(yīng)方程式 SO42- BaCl2溶液溶液 白色白色加酸不溶加酸不溶 SO42-+Ba2+BaSOBaSO4 4 CO32- 稀酸，稀酸，Ca(OH)2 氣體使石灰水變混氣體使石灰水變混 CO32-+2H+COCO2 2+H+H2 2O OCaCa2+2+CO+CO3 32-2-CaCOCaCO3 3 HCO3- 稀酸，稀酸，Ca(OH)2氣體使石灰水變混氣體使石灰水變混 Cl- AgNO3試試液液 白白溶于氨水不溶溶于氨水不溶稀硝酸稀硝酸 Cl-+ Ag+AgClAgCl

10、 Br- AgNO3試試液液 黃黃微溶氨水不溶微溶氨水不溶稀硝酸稀硝酸 Br-+ Ag+AgBrAgBr 陰陽離子的特殊反應(yīng)陰陽離子的特殊反應(yīng)離子離子鑒別方法鑒別方法鑒別原理鑒別原理現(xiàn)現(xiàn) 象象Na+焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)光譜主要譜線光譜主要譜線589nm可見可見光區(qū)光區(qū)鮮黃色（實例見鮮黃色（實例見）K+焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)光譜主要譜線光譜主要譜線766nm，769nm紫色（實例見紫色（實例見）Ca2+焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)光譜主要譜線光譜主要譜線622nm可見可見光區(qū)光區(qū)磚紅色磚紅色Ba2+焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)光譜主要譜線光譜主要譜線553nm，500nm黃綠色黃綠色Li+焰色反應(yīng)焰色反應(yīng)光譜主要譜線光譜主要譜線

11、670nm胭脂紅色胭脂紅色NH4+NaOH 石石蕊試液蕊試液NH4+OH-NHNH3 3+H+H2 2O O有刺鼻氣味，濕石蕊試有刺鼻氣味，濕石蕊試紙變蘭紙變蘭有機氟化物有機氟化物 樣品經(jīng)氧瓶燃燒法進行有機破壞后，樣品經(jīng)氧瓶燃燒法進行有機破壞后，用水和堿氫氧化鈉溶液吸收為無機氟用水和堿氫氧化鈉溶液吸收為無機氟化物，與化物，與茜素氟藍和硝酸亞鈰茜素氟藍和硝酸亞鈰在在PH=4.3溶液中形成藍紫色絡(luò)合物。溶液中形成藍紫色絡(luò)合物。反應(yīng)原理反應(yīng)原理F+OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOHCe3+PHOOOHCH2NOCH2COOCH2COOCeFOHFeCl3 反應(yīng)反應(yīng)加稀HCl，沉淀分解，

12、生成游離COOH白色COONa73FeCl32OH-中性溶液COO6Fe3(OH)2OOC7NaCl2Cl-堿式苯甲酸鐵鹽（堿式苯甲酸鐵鹽（赭色沉淀赭色沉淀）酒石酸鹽酒石酸鹽 取供試品的中性溶液于試管中，加氨制硝取供試品的中性溶液于試管中，加氨制硝酸銀溶液幾滴，于水浴中加熱，有銀鏡生酸銀溶液幾滴，于水浴中加熱，有銀鏡生成。成。OHOHCOOHCOOHAg(NH3)OH+2OHOHCOONH4COONH4NH3+22Ag+2H2O綜上所述，一般鑒別試驗只能證實是哪綜上所述，一般鑒別試驗只能證實是哪一類藥物，而不能證實是哪一種藥物一類藥物，而不能證實是哪一種藥物依依 據(jù)據(jù)：每種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異

13、及引起的每種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及引起的 物物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)鑒別藥物的真?zhèn)?。的定性反?yīng)鑒別藥物的真?zhèn)?。是證實是證實某一種某一種藥物的依據(jù)。藥物的依據(jù)。 Specific identification test專屬鑒別試驗專屬鑒別試驗例子例子 巴比妥類藥物：苯巴比妥含有苯環(huán)，司可巴比巴比妥類藥物：苯巴比妥含有苯環(huán)，司可巴比妥含有雙鍵，硫噴妥鈉含有硫原子。根據(jù)取代妥含有雙鍵，硫噴妥鈉含有硫原子。根據(jù)取代基的不同，采用各自專屬的反應(yīng)進行鑒別?；牟煌捎酶髯詫俚姆磻?yīng)進行鑒別。CHCHCH2+CH3NaBr2CBrOCNCNHCH

14、3OCCHCHCH2CH3NaCOCNCNHCH3OCBr例子例子 甾體激素類藥物含有環(huán)戊烷并多氫菲甾體激素類藥物含有環(huán)戊烷并多氫菲母核，主要差別在母核，主要差別在A A環(huán)和環(huán)和D D環(huán)的取代基環(huán)的取代基不同，可利用這些結(jié)構(gòu)特征確證。不同，可利用這些結(jié)構(gòu)特征確證。生物學(xué)法生物學(xué)法 HPLC、GC鑒別法鑒別法 薄層色譜鑒別法薄層色譜鑒別法 紙色譜鑒別法紙色譜鑒別法 呈色反應(yīng)鑒別法呈色反應(yīng)鑒別法 紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法 紅外光譜鑒別法紅外光譜鑒別法 沉淀生成反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法 色譜鑒別法色譜鑒別法 氣體生成反應(yīng)鑒別法氣體生成反應(yīng)鑒別法 測定生成物的熔點測定生成物的熔點熒光反應(yīng)鑒別法

15、熒光反應(yīng)鑒別法 1.1.呈色反應(yīng)鑒別法呈色反應(yīng)鑒別法 指供試品溶液中加入適當?shù)脑囍腹┰嚻啡芤褐屑尤脒m當?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進行反應(yīng)，生成易于觀測的劑溶液，在一定條件下進行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。有色產(chǎn)物。（1 1）三氯化鐵呈色反應(yīng)：）三氯化鐵呈色反應(yīng)： 用于酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基用于酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基（2 2）異羥肟酸鐵反應(yīng)：）異羥肟酸鐵反應(yīng)： 多用于芳酸及其酯類、酰胺類多用于芳酸及其酯類、酰胺類（3 3）茚三酮呈色反應(yīng)：）茚三酮呈色反應(yīng)： 用于結(jié)構(gòu)中含有脂肪氨基藥物用于結(jié)構(gòu)中含有脂肪氨基藥物（4 4）重氮化）重氮化- -偶合顯色反應(yīng)：偶合顯色反應(yīng)： 用于芳伯氨基或潛在芳伯氨

16、基用于芳伯氨基或潛在芳伯氨基（5 5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)2.2.沉淀生成反應(yīng)鑒別法沉淀生成反應(yīng)鑒別法 （1 1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)（2 2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)（3 3）其它沉淀反應(yīng)。）其它沉淀反應(yīng)。 多用于生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機堿及其鹽。常用的熒光發(fā)射形式：常用的熒光發(fā)射形式：（1 1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光；）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光；（2 2）藥物溶液加硫酸后，在可見光下發(fā)射熒光；）藥物溶液加硫酸后，在可見光下發(fā)射熒光；（3 3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光

17、下發(fā)射出熒光；）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；3.3.熒光反應(yīng)鑒別法熒光反應(yīng)鑒別法（4 4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。（1 1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣。產(chǎn)生氨（胺）氣。（2 2）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體。加熱，發(fā)生硫化氫氣體。（3 3）含碘有機藥物，經(jīng)直火加熱，可生成紫色

18、）含碘有機藥物，經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味。4.4.氣體生成反應(yīng)鑒別法氣體生成反應(yīng)鑒別法 紫外法紫外法在指定溶劑中測定在指定溶劑中測定2-3個特定波長處的吸收度個特定波長處的吸收度比值（峰值與峰值比，峰谷與峰谷比），以比值（峰值與峰值比，峰谷與峰谷比），以提高專屬性。提高專屬性。例例 地蒽酚的鑒別地蒽酚的鑒別取含量測定下的溶液，照分光光度法測定，于取含量測定下的溶液，照分光光度法測定，于240-400nm的波長范圍測定吸收度的波長范圍測定吸收度,在在25

19、7,289,356處有最大吸收處有最大吸收.規(guī)定規(guī)定A257/= A289為為1.06-1.10 A356/= A289為為0.90-0.94.紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法 (1) 最大吸收波長和最小吸收波長最大吸收波長和最小吸收波長 (2) - A (3) -吸收系數(shù)吸收系數(shù) (4) - A1/A2 (5) 化學(xué)處理后測定產(chǎn)物的吸光度值化學(xué)處理后測定產(chǎn)物的吸光度值不同國家測定方法略有不同不同國家測定方法略有不同 USP(32)USP(32) 采用對照品法采用對照品法, ,把樣品與對照品按把樣品與對照品按同法處理同法處理, ,在在200-400nm200-400nm波長范圍掃描，要求波長范圍掃

20、描，要求相同波長處有最大吸收，最小吸收，相同的相同波長處有最大吸收，最小吸收，相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的限度內(nèi)。吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的限度內(nèi)。 JP(15)JP(15)與與ChP(2010)ChP(2010)的的UVUV測定方法相似。測定方法相似。 BP(2009)BP(2009)規(guī)定在一定波長范圍內(nèi)掃描，尋找規(guī)定在一定波長范圍內(nèi)掃描，尋找最大吸收，測定吸收系數(shù)。最大吸收，測定吸收系數(shù)。 紅外光譜法是一種專屬性很強，應(yīng)用紅外光譜法是一種專屬性很強，應(yīng)用較廣（固、液、氣）的鑒別方法，主較廣（固、液、氣）的鑒別方法，主要應(yīng)用于要應(yīng)用于組分單一，結(jié)構(gòu)明確的原料組分單一，結(jié)構(gòu)明確的原料藥藥，特別適合于其他方法不易區(qū)分的，特別適合于其他方法不易區(qū)分的同類藥物，如磺胺類、甾體激素類、同類藥物，如磺胺類、甾體激素類、半合成抗勝素。半合成抗勝素。 ChP和和BP均采用標準圖譜法均采用標準圖譜法例中國藥典對某藥物的鑒別：本品的紅外例中國藥典對某藥物的鑒別：本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集XX圖）圖）一致。一致。USP采用對照品法采用對照品法例阿莫西林的鑒別試驗：取本品，經(jīng)干燥例阿莫西林的鑒別試驗：