藥品的無菌檢查技術(shù)

1、藥品的無菌檢查技術(shù)藥品的無菌檢查技術(shù)授課人:汪穗福汪穗福(高級(jí)講師高級(jí)講師) 蘇惠虹蘇惠虹(助理講師助理講師) 廣州市醫(yī)藥中專學(xué)校廣州市醫(yī)藥中專學(xué)校2005年年3月月教學(xué)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo)1、學(xué)會(huì)直接接種法無菌檢查的操作。學(xué)會(huì)直接接種法無菌檢查的操作。2、懂得無菌檢查供試品溶液的制備。、懂得無菌檢查供試品溶液的制備。 3、熟知無菌檢查的結(jié)果判斷。、熟知無菌檢查的結(jié)果判斷。4、學(xué)習(xí)薄膜無菌檢查法的使用。學(xué)習(xí)薄膜無菌檢查法的使用。5、掌握影響無菌檢驗(yàn)的因素和解決辦法。、掌握影響無菌檢驗(yàn)的因素和解決辦法。教學(xué)重點(diǎn)：教學(xué)重點(diǎn)：直接接種法無菌檢查的操作。直接接種法無菌檢查的操作。教學(xué)難點(diǎn)：教學(xué)難點(diǎn)：薄膜無菌檢

2、查法的使用。薄膜無菌檢查法的使用。 第五節(jié)第五節(jié) 直接接種檢查技術(shù)直接接種檢查技術(shù) 藥品無菌檢查法的具體操作方法可分為直接接種法和薄膜藥品無菌檢查法的具體操作方法可分為直接接種法和薄膜過濾法。中國(guó)藥典（過濾法。中國(guó)藥典（20052005年版）指出：年版）指出：如供試品性狀如供試品性狀允許，應(yīng)優(yōu)先采用薄膜過濾法。進(jìn)行供試品無菌檢查時(shí)允許，應(yīng)優(yōu)先采用薄膜過濾法。進(jìn)行供試品無菌檢查時(shí)，所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。直接所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。直接接種法即每支（或瓶）供試品按規(guī)定量分別接種至各接種法即每支（或瓶）供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

3、和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中，除另有乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中，除另有規(guī)定外，規(guī)定外，每個(gè)每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的積不得大于培養(yǎng)基體積的1010，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基養(yǎng)基每管裝量不少于每管裝量不少于1515mlml，改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量每管裝量不少不少于于1010mlml。培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證；培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證；每種每種培養(yǎng)基接培養(yǎng)基接種的管數(shù)同種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。 由于直接接種法具有操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，特由于直接接種

4、法具有操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，特別適宜無抑菌和防腐作用藥品的無菌檢查。據(jù)別適宜無抑菌和防腐作用藥品的無菌檢查。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)藥典（統(tǒng)計(jì)，中國(guó)藥典（20052005年版年版( (二部二部) )共有共有5757種單列品種（占種單列品種（占39.339.3）采用該法規(guī)定。）采用該法規(guī)定。 操作時(shí)，用適當(dāng)?shù)南疽簩?duì)供試品容器表面或操作時(shí)，用適當(dāng)?shù)南疽簩?duì)供試品容器表面或外包裝采用浸沒或擦試的方法徹底消毒。如果外包裝采用浸沒或擦試的方法徹底消毒。如果容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針頭），向供試品容器（如帶有除菌過濾器的針頭），向供試品容器內(nèi)導(dǎo)入

5、無菌空氣，再按無菌操作啟開容器取出內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。內(nèi)容物。 無論使用何種檢查法，無論使用何種檢查法，其檢查操作過程均包括其檢查操作過程均包括供試品的處理及接種供試品的處理及接種與與培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)及觀察兩大步驟。兩大步驟。 除另有規(guī)定外，除另有規(guī)定外，供試品處理按照樣品的不同用以下方法供試品處理按照樣品的不同用以下方法處理與接種。處理與接種。 1 1混懸液等非澄清水溶液供試品混懸液等非澄清水溶液供試品 該類供試品操作最簡(jiǎn)單，該類供試品操作最簡(jiǎn)單，取規(guī)定量的供試品直接無菌操作接種至各管培養(yǎng)基中取規(guī)定量的供試品直接無菌操作接種至各管培養(yǎng)基中。 2 2固體制劑供試品固體

6、制劑供試品 取規(guī)定量的供試試品，無菌操作直接取規(guī)定量的供試試品，無菌操作直接接種至各管培養(yǎng)基中；或供試品中加入適宜的溶劑溶解，或接種至各管培養(yǎng)基中；或供試品中加入適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說明復(fù)溶后，取規(guī)定量無菌操作接種至各管培養(yǎng)基中按標(biāo)簽說明復(fù)溶后，取規(guī)定量無菌操作接種至各管培養(yǎng)基中。 3 3- -內(nèi)酰胺類或磺胺類供試品內(nèi)酰胺類或磺胺類供試品 取規(guī)定量供試品，混合，取規(guī)定量供試品，混合，加入適量的無菌加入適量的無菌-內(nèi)酰胺酶溶液或?qū)Π被郊姿崛芤菏怪泻?，?nèi)酰胺酶溶液或?qū)Π被郊姿崛芤菏怪泻?，接種至各管培養(yǎng)基中，或直接接入含接種至各管培養(yǎng)基中，或直接接入含-內(nèi)酰胺酶或?qū)Π被絻?nèi)酰胺酶或?qū)Π被郊?/p>

7、酸的各管培養(yǎng)基中。甲酸的各管培養(yǎng)基中。 4 4非水溶性供試品非水溶性供試品 取規(guī)定量供試品，混合，加入適量的聚取規(guī)定量供試品，混合，加入適量的聚山梨酯山梨酯8080或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，接種至各或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，接種至各管培養(yǎng)基中?；蛑苯咏臃N至含聚山梨酯管培養(yǎng)基中?；蛑苯咏臃N至含聚山梨酯8080或其它適宜乳化劑或其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。的各管培養(yǎng)基中。 一、供試品的處理及接種一、供試品的處理及接種 5 5敷料敷料供試品供試品 取規(guī)定數(shù)量，取規(guī)定數(shù)量，每個(gè)包裝每個(gè)包裝以以無菌操作拆開，于不同部位剪取約無菌操作拆開，于不同部位剪取約100 100 mgmg或或

8、cmcm3cm3cm的供試品；接種于的供試品；接種于各管各管足以浸沒供試足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。品的適量培養(yǎng)基中。 6 6腸線、縫合線等腸線、縫合線等供試品供試品腸線、縫合線腸線、縫合線及其它一次性的及其它一次性的醫(yī)用材料按規(guī)定量醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，取最小包裝，無菌拆開包裝，接種于無菌拆開包裝，接種于各管各管足以浸沒供試品的足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。適量培養(yǎng)基中。 7 7滅菌醫(yī)用器具供試品滅菌醫(yī)用器具供試品 取規(guī)定量，必要取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎塊，接種于各管足以時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎塊，接種于各管足以侵沒供試品的適量培養(yǎng)基中。侵沒供試品的適量培養(yǎng)基中。 8 8放

9、射性藥品放射性藥品 取供試品取供試品1 1瓶（支），接種于瓶（支），接種于裝量為裝量為7 75 5mlml的的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基馬丁培養(yǎng)基中。中。每每管接種量為管接種量為0 02 2mlml。接種陰性對(duì)照接種陰性對(duì)照 與此同時(shí)另取與此同時(shí)另取1 1支硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基管，支硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基管，加入上述同一容器內(nèi)的供試品稀釋液或加入上述同一容器內(nèi)的供試品稀釋液或0.90.9滅菌氯化鈉溶液滅菌氯化鈉溶液1 1 mlml，作陰性對(duì)照。（作陰作陰性對(duì)照。（作陰性對(duì)照的目的是說明未接檢品前的培養(yǎng)基和性對(duì)照的目的是說明未接檢品前的培養(yǎng)基和供試品稀釋液及無菌檢查操作

10、都是無菌生長(zhǎng)供試品稀釋液及無菌檢查操作都是無菌生長(zhǎng)的，而供試品陽(yáng)性檢出的菌確是來自檢品。）的，而供試品陽(yáng)性檢出的菌確是來自檢品。） 如供試品液未經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)，可同步進(jìn)行，方如供試品液未經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)，可同步進(jìn)行，方法見第五節(jié)的直接接種法的驗(yàn)證試驗(yàn)法見第五節(jié)的直接接種法的驗(yàn)證試驗(yàn) 。接種陽(yáng)性對(duì)照接種陽(yáng)性對(duì)照 根據(jù)根據(jù)gmpgmp和中國(guó)藥典要求，接種陽(yáng)性對(duì)和中國(guó)藥典要求，接種陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)在陽(yáng)性對(duì)照室中進(jìn)行，以防交叉污染。接照應(yīng)在陽(yáng)性對(duì)照室中進(jìn)行，以防交叉污染。接種時(shí)應(yīng)按驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果選擇陽(yáng)性對(duì)照菌。方種時(shí)應(yīng)按驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果選擇陽(yáng)性對(duì)照菌。方法是：在相應(yīng)的培養(yǎng)基中接入小于法是：在相應(yīng)的培養(yǎng)基中接入小于100

11、100個(gè)個(gè)cfucfu的的陽(yáng)性對(duì)照菌（菌液的制備和同培養(yǎng)基靈敏度檢陽(yáng)性對(duì)照菌（菌液的制備和同培養(yǎng)基靈敏度檢查菌液的制備相同）。供試品用量同供試品無查菌液的制備相同）。供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量（見表菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量（見表6 62 2、表表6 63 3）相同。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)）相同。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)4872 4872 h h應(yīng)生應(yīng)生長(zhǎng)良好。長(zhǎng)良好。二、培養(yǎng)及觀察二、培養(yǎng)及觀察培培養(yǎng)養(yǎng)基基按規(guī)定的溫度培養(yǎng)按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 14 d d逐日觀察并記錄逐日觀察并記錄渾濁渾濁新鮮培養(yǎng)新鮮培養(yǎng)基或劃線基或劃線斜面培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基基培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢

12、判斷是否有菌判斷是否有菌 三、結(jié)果判斷三、結(jié)果判斷供試品符供試品符合規(guī)定合規(guī)定培養(yǎng)基管均澄清，或雖顯渾濁但培養(yǎng)基管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長(zhǎng)經(jīng)確證無菌生長(zhǎng)供試品供試品不符合不符合規(guī)定規(guī)定培養(yǎng)基管中任何培養(yǎng)基管中任何1 1管顯渾濁并確證管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)有菌生長(zhǎng) 除非能充分證明生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)滿足下列至除非能充分證明生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)滿足下列至少一個(gè)條件時(shí)，判試驗(yàn)結(jié)果無效：少一個(gè)條件時(shí)，判試驗(yàn)結(jié)果無效： 對(duì)無菌檢查試驗(yàn)相關(guān)設(shè)施對(duì)無菌檢查試驗(yàn)相關(guān)設(shè)施的微生物監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)表明其不符合規(guī)定。的微生物監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)表明其不符合規(guī)定。 對(duì)無菌試驗(yàn)過程的回對(duì)無菌試驗(yàn)過程的回顧，揭示了

13、本操作程序是錯(cuò)誤的。顧，揭示了本操作程序是錯(cuò)誤的。 陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。 供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證微生物生長(zhǎng)是因無菌供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證微生物生長(zhǎng)是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。 試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長(zhǎng)，判供試品符合量供試品，依法重試，若無菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。直接接種法圖示直接接種法圖示無抗菌無抗菌作用的作

14、用的供試品供試品抽抽樣樣接種于培養(yǎng)基接種于培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管 培培養(yǎng)養(yǎng)每天觀察每天觀察觀察觀察14天天報(bào)告報(bào)告澄清無混濁澄清無混濁合格合格混濁（疑混濁（疑似情況）似情況）鏡檢鏡檢重新重新培養(yǎng)培養(yǎng)確證確證無菌無菌有菌有菌不合格不合格培培養(yǎng)養(yǎng)基基直接接種法教學(xué)片第六節(jié)第六節(jié) 薄薄膜過濾法檢查技術(shù)膜過濾法檢查技術(shù) 該法是各國(guó)藥典和中國(guó)藥典規(guī)定的第二種該法是各國(guó)藥典和中國(guó)藥典規(guī)定的第二種無菌檢查的方法，適用于任何類型藥品的無菌檢無菌檢查的方法，適用于任何類型藥品的無菌檢查。具有適用性廣，準(zhǔn)確性強(qiáng)的特點(diǎn)。查。具有適用性廣，準(zhǔn)確性強(qiáng)的特點(diǎn)。中

15、國(guó)藥中國(guó)藥典（典（2005年版）規(guī)定：如供試品性狀允許，應(yīng)年版）規(guī)定：如供試品性狀允許，應(yīng)優(yōu)先采用薄膜過濾法。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)藥典優(yōu)先采用薄膜過濾法。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)藥典（2005年版二部）共有年版二部）共有88種單列規(guī)定品種（占種單列規(guī)定品種（占60.7）規(guī)定采用該法。薄膜過濾法可采用封閉）規(guī)定采用該法。薄膜過濾法可采用封閉式薄膜過濾器（圖式薄膜過濾器（圖62）或一般薄膜過濾器（圖）或一般薄膜過濾器（圖63），但應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過濾器。），但應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過濾器。 待過濾 的 液待過濾 的 液體體濾膜濾膜接負(fù)壓吸引抽接負(fù)壓吸引抽濾機(jī)濾機(jī)圖圖6-4：hty微孔濾膜孔徑測(cè)定儀微孔濾膜孔徑測(cè)定儀

16、 圖：濾膜阻擋的細(xì)菌圖：濾膜阻擋的細(xì)菌 一般新購(gòu)得一批濾膜，因各廠家生產(chǎn)相同規(guī)格一般新購(gòu)得一批濾膜，因各廠家生產(chǎn)相同規(guī)格的濾膜其質(zhì)量不盡一致，應(yīng)對(duì)濾膜任選以下三種的濾膜其質(zhì)量不盡一致，應(yīng)對(duì)濾膜任選以下三種方法中的一種進(jìn)行孔徑大小的測(cè)試，符合規(guī)定的方法中的一種進(jìn)行孔徑大小的測(cè)試，符合規(guī)定的濾膜才能用于無菌檢查濾膜才能用于無菌檢查。 （一）（一） 氣泡法氣泡法 其原理是測(cè)濾膜孔徑的大小，其原理是測(cè)濾膜孔徑的大小，可用氣泡壓力方法（可用氣泡壓力方法（圖圖6-46-4）測(cè)定。先將濾膜浸入）測(cè)定。先將濾膜浸入水中，使完全濕潤(rùn)，然后用鑷子夾住一片濾膜放水中，使完全濕潤(rùn)，然后用鑷子夾住一片濾膜放于氣泡點(diǎn)測(cè)定

17、裝置上于氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置上( (硬聚氯乙烯氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置，硬聚氯乙烯氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置，上海化工廠生產(chǎn)上海化工廠生產(chǎn)dydy25)25)或或?yàn)V膜孔徑測(cè)定儀濾膜孔徑測(cè)定儀上，膜上，膜上放一塊與濾膜大小相同的尼龍篩網(wǎng)，再加上多上放一塊與濾膜大小相同的尼龍篩網(wǎng)，再加上多孔板，將螺旋固定圈旋緊，在多孔板上加孔板，將螺旋固定圈旋緊，在多孔板上加3 35 5 mmmm深的水深的水( (注意排除氣泡注意排除氣泡) )關(guān)閉放氣閥，啟動(dòng)空壓關(guān)閉放氣閥，啟動(dòng)空壓機(jī)或氮?dú)忾y，使壓力緩緩上升，注意觀查水面上機(jī)或氮?dú)忾y，使壓力緩緩上升，注意觀查水面上產(chǎn)生第一個(gè)氣泡時(shí)，記錄壓力表的壓力，氣泡點(diǎn)產(chǎn)生第一個(gè)氣泡時(shí)，記錄壓力表的壓力

18、，氣泡點(diǎn)壓力不應(yīng)小于壓力不應(yīng)小于0.2 0.2 mpa(2.2 kg/cm2)mpa(2.2 kg/cm2)。（二）水流量法（二）水流量法 其原理是在一定的壓力下，定量的水在單其原理是在一定的壓力下，定量的水在單位時(shí)間內(nèi)通過濾膜的流量與孔徑及孔隙率有關(guān)。位時(shí)間內(nèi)通過濾膜的流量與孔徑及孔隙率有關(guān)。將濾膜裝于除菌濾器上，開動(dòng)真空泵，壓力在將濾膜裝于除菌濾器上，開動(dòng)真空泵，壓力在93 kpa(700 mm hg)下，抽濾已濾清的水約下，抽濾已濾清的水約500 ml，計(jì)算出每計(jì)算出每1 mim的濾速。中國(guó)藥典的濾速。中國(guó)藥典對(duì)濾膜的濾速未明確規(guī)定，而對(duì)濾膜的濾速未明確規(guī)定，而sp()規(guī)定在規(guī)定在93

19、kpa(700 mm hg)壓力下，濾膜直徑壓力下，濾膜直徑47 mm；流速流速5575 mm/min。此法操作簡(jiǎn)單，此法操作簡(jiǎn)單，但誤差大。但誤差大。（三）（三） 細(xì)菌過濾法細(xì)菌過濾法 其原理是利用細(xì)菌細(xì)胞大小穩(wěn)定的特性，可將標(biāo)其原理是利用細(xì)菌細(xì)胞大小穩(wěn)定的特性，可將標(biāo)準(zhǔn)菌株制備的菌液，用待測(cè)濾膜過濾，其濾液經(jīng)培準(zhǔn)菌株制備的菌液，用待測(cè)濾膜過濾，其濾液經(jīng)培養(yǎng)無菌生長(zhǎng)，則該濾膜孔徑符合規(guī)定。常用的細(xì)菌養(yǎng)無菌生長(zhǎng)，則該濾膜孔徑符合規(guī)定。常用的細(xì)菌為粘質(zhì)沙雷菌為粘質(zhì)沙雷菌( (cmcc(b)41002)cmcc(b)41002)，將該菌的斜面培養(yǎng)將該菌的斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，物，接種

20、于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，30303535培養(yǎng)培養(yǎng)18 1820 20 h h，用用0.90.9氯化鈉溶液稀釋至氯化鈉溶液稀釋至10 10-3-3( (約相當(dāng)于約相當(dāng)于7 7x10 x105 5cfu/ml)cfu/ml)取此菌液取此菌液1 1 mlml加至加至50 50 ml 0.9ml 0.9氯化鈉溶氯化鈉溶液中，按薄膜過濾法過濾，取該濾液液中，按薄膜過濾法過濾，取該濾液5 5 mlml接種于營(yíng)接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基40 40 mlml中，中，30303535培養(yǎng)培養(yǎng)24 24 h h，應(yīng)無應(yīng)無菌生長(zhǎng)，而將濾膜加至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基管中應(yīng)有菌菌生長(zhǎng)，而將濾膜加至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基管中應(yīng)有菌生長(zhǎng)

21、，證明該濾膜濾效合格。生長(zhǎng)，證明該濾膜濾效合格。三、三、薄薄膜過濾法檢查的操作膜過濾法檢查的操作 應(yīng)根據(jù)不同供試品而用不同的樣品處理法來進(jìn)行。應(yīng)根據(jù)不同供試品而用不同的樣品處理法來進(jìn)行。 應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過濾器應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過濾器，濾膜孔徑不大于，濾膜孔徑不大于0.450.45m m，直徑為直徑為4747mmmm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。擇濾膜材質(zhì)。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。 水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤(rùn)濕

22、濾水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤(rùn)濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100100mlml，且總過濾量不宜太大，以避免濾膜上的微生物受損傷。且總過濾量不宜太大，以避免濾膜上的微生物受損傷。下面就不同供試品的處理操作介紹如下：下面就不同供試品的處理操作

23、介紹如下：1水溶液供試品水溶液供試品 取規(guī)定量，直接過濾，或混合至含適量稀釋液取規(guī)定量，直接過濾，或混合至含適量稀釋液的無菌容器內(nèi)，混勻，立即過濾。如供試品具有的無菌容器內(nèi)，混勻，立即過濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑，須用適量的沖洗液沖洗濾抑菌作用或含防腐劑，須用適量的沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)不得少于三次。膜，沖洗次數(shù)不得少于三次。 沖洗后，如用封閉式過濾器，分別將沖洗后，如用封閉式過濾器，分別將100ml硫硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)。如果僅用薄膜過濾器，則無菌操作取的濾筒內(nèi)。如果僅用薄膜過濾器，則無菌操作取出濾膜，將其剪

24、成出濾膜，將其剪成3等份；分別置于含等份；分別置于含50ml硫乙硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基容器中，其醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基容器中，其中中1份接種陽(yáng)性對(duì)照值做陽(yáng)性對(duì)照用。份接種陽(yáng)性對(duì)照值做陽(yáng)性對(duì)照用。2可溶于水的固體制劑供試品可溶于水的固體制劑供試品 取規(guī)定量，加取規(guī)定量，加適宜的溶劑溶解或按標(biāo)簽說明復(fù)溶，然后照水適宜的溶劑溶解或按標(biāo)簽說明復(fù)溶，然后照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。 3-內(nèi)酰胺類供試品取規(guī)定量，按水溶液內(nèi)酰胺類供試品取規(guī)定量，按水溶液或固體制劑供試品的處理方法處理，立即過濾，或固體制劑供試品的處理方法處理，立即過濾，用適宜的沖洗液沖洗濾

25、膜。再用含適量用適宜的沖洗液沖洗濾膜。再用含適量-內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺酶的沖洗液清除殘留在濾筒、濾膜上的抗生素后酶的沖洗液清除殘留在濾筒、濾膜上的抗生素后接種培養(yǎng)基，必要時(shí)培養(yǎng)基中可加入少量的接種培養(yǎng)基，必要時(shí)培養(yǎng)基中可加入少量的-內(nèi)內(nèi)酰胺酶；或?qū)V膜直接接入含適量酰胺酶；或?qū)V膜直接接入含適量-內(nèi)酰胺酶的內(nèi)酰胺酶的培養(yǎng)基中。接種培養(yǎng)基的方法照水溶液供試品項(xiàng)培養(yǎng)基中。接種培養(yǎng)基的方法照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。下的方法操作。4非水溶性制劑供試品非水溶性制劑供試品 取規(guī)定量，直接過濾；或混取規(guī)定量，直接過濾；或混合溶于含聚山梨酯合溶于含聚山梨酯80或其它適宜乳化劑的稀釋液中，或其它適宜乳化劑的稀釋液中

26、，充分混合，過濾。用含充分混合，過濾。用含01%1%聚山梨酯聚山梨酯80的沖的沖洗液沖洗濾膜至少三次。濾膜于含或不含聚山梨酯洗液沖洗濾膜至少三次。濾膜于含或不含聚山梨酯80的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基接種照水溶液供試品項(xiàng)下的的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基接種照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。方法操作。 5可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品 取取規(guī)定量，混合至適量的無菌十四烷酸異丙酯（無菌十四規(guī)定量，混合至適量的無菌十四烷酸異丙酯（無菌十四烷酸異丙酯的制備：采用薄膜過濾法過濾除菌。選用孔烷酸異丙酯的制備：采用薄膜過濾法過濾除菌。選用孔徑為徑為0.22m的脂溶性濾膜

27、，并經(jīng)的脂溶性濾膜，并經(jīng)140干熱滅菌干熱滅菌2 h）中，）中， 劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，但溫度不得超過但溫度不得超過44），趁熱迅速過濾。若無法過濾，），趁熱迅速過濾。若無法過濾，應(yīng)加入不少于應(yīng)加入不少于100ml的稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取的稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗及培養(yǎng)基接下層水相作為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗及培養(yǎng)基接種照非水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。種照非水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。6無菌氣（噴）霧劑供試品無菌氣（噴）霧劑供試品 取規(guī)定量，將各容器取規(guī)定量，將各容器

28、置冰室冷凍約置冰室冷凍約1 h。以無菌操作迅速在溶器上端鉆一。以無菌操作迅速在溶器上端鉆一小孔，釋放拋射劑后再無菌開啟容器，然后照水溶小孔，釋放拋射劑后再無菌開啟容器，然后照水溶性制劑或非水溶性制劑項(xiàng)下的方法操作。性制劑或非水溶性制劑項(xiàng)下的方法操作。 7裝有藥物的注射器供試品裝有藥物的注射器供試品 取規(guī)定量，裝上無取規(guī)定量，裝上無菌針頭（非包裝中所配帶的），若需要可吸入稀釋菌針頭（非包裝中所配帶的），若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解，然后照水溶性制劑或非液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解，然后照水溶性制劑或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)

29、行包裝中所配帶的無菌針頭的無菌檢查。法進(jìn)行包裝中所配帶的無菌針頭的無菌檢查。 8具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供試品取規(guī)定量，每個(gè)最小包狀用供試品取規(guī)定量，每個(gè)最小包狀用50100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法于無菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無菌檢查。帶的針頭的無菌檢查。四、培養(yǎng)及觀察同直接接種檢查法。四、培養(yǎng)及觀察同直接接種檢查法。五、結(jié)果判斷同直接接種檢查法。五、結(jié)果判斷同直接接種檢查法。開開放放式式薄薄膜膜過過濾濾法法操操作作將藥品加入無菌稀釋劑溶液中將藥品加入無菌稀釋劑溶液中無菌稀釋劑溶劑分無菌稀釋劑溶劑分3次洗滌濾膜次洗滌濾膜取下濾膜取下濾膜除去掉上層濾紙除去掉上層濾紙將濾膜分成將濾膜分成3份份加加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管按規(guī)定溫度和時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)按規(guī)定溫度和時(shí)間進(jìn)