紙層析ppt課件

1、1.1. 了解紙層析的基本原理；了解紙層析的基本原理；2.2. 初步掌握紙層析的基本操作技術(shù)；初步掌握紙層析的基本操作技術(shù)；3.3. 學(xué)會(huì)用紙層析方法進(jìn)行氨基酸的分離和鑒定。學(xué)會(huì)用紙層析方法進(jìn)行氨基酸的分離和鑒定。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模?;.1.1.色譜法：物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中的分配系數(shù)差異而被分離。色譜法：物質(zhì)在流動(dòng)相與固定相兩相中的分配系數(shù)差異而被分離。 二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理：v紙層析法是以濾紙為載體，紙上吸附的水為固定相，與水不相混溶的有機(jī)溶劑為紙層析法是以濾紙為載體，紙上吸附的水為固定相，與水不相混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的一種層析方法。流動(dòng)相通常稱為展開劑。流動(dòng)相的一種

2、層析方法。流動(dòng)相通常稱為展開劑。2;.v所需分離的樣品點(diǎn)在濾紙的一端，再把濾紙放在一個(gè)乘有展開劑的密閉容器中，原所需分離的樣品點(diǎn)在濾紙的一端，再把濾紙放在一個(gè)乘有展開劑的密閉容器中，原點(diǎn)（點(diǎn)樣點(diǎn)）以下的部分浸在展開劑中。點(diǎn)（點(diǎn)樣點(diǎn)）以下的部分浸在展開劑中。v通過(guò)纖維的毛細(xì)管作用，展開劑在含水的濾紙上通過(guò)纖維的毛細(xì)管作用，展開劑在含水的濾紙上移動(dòng)。樣品在隨展開劑移動(dòng)的過(guò)程中，以被分離移動(dòng)。樣品在隨展開劑移動(dòng)的過(guò)程中，以被分離物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)不同而被分開。物質(zhì)在兩相的分配系數(shù)不同而被分開。3;.a a+b b|樣品經(jīng)層析展開后，被分離的化合物可通過(guò)比移值（樣品經(jīng)層析展開后，被分離的化合物可通過(guò)

3、比移值（Rf）來(lái)鑒定。）來(lái)鑒定。Rf 原點(diǎn)到溶劑前沿的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離|各種化合物的值各種化合物的值Rf隨結(jié)構(gòu)、濾紙的種類、展開劑、溫度等隨結(jié)構(gòu)、濾紙的種類、展開劑、溫度等的不同而異。但上述條件固定的情況下，對(duì)于某一化合物的不同而異。但上述條件固定的情況下，對(duì)于某一化合物來(lái)說(shuō)，來(lái)說(shuō)， Rf值是一個(gè)常數(shù)。故值是一個(gè)常數(shù)。故Rf值可作為定性鑒定的依據(jù)。值可作為定性鑒定的依據(jù)。4;.2Rf 定性鑒定定性鑒定應(yīng)用廣泛的一種微量分析技術(shù)應(yīng)用廣泛的一種微量分析技術(shù)色譜系統(tǒng)的層析條件色譜系統(tǒng)的層析條件 (流動(dòng)相組成、流動(dòng)相蒸汽飽和程度、展開溫度流動(dòng)相組

4、成、流動(dòng)相蒸汽飽和程度、展開溫度 濕度等濕度等)3顯色劑顯色劑 噴霧或浸漬噴霧或浸漬 禁用腐蝕性顯色劑禁用腐蝕性顯色劑5;.邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng)托尾現(xiàn)象托尾現(xiàn)象展開劑選擇不當(dāng)展開劑選擇不當(dāng)流動(dòng)相比例流動(dòng)相比例點(diǎn)樣量點(diǎn)樣量展開劑蒸汽飽和程度展開劑蒸汽飽和程度6;.三、儀器試劑三、儀器試劑樣樣 品：丙氨酸，丙氨酸品：丙氨酸，丙氨酸:亮氨酸亮氨酸1:1，亮氨酸，亮氨酸展開劑：正丁醇展開劑：正丁醇:醋酸醋酸:乙醇乙醇:水水4:1:1:2顯色劑：顯色劑：1茚三酮溶液茚三酮溶液1. 試劑試劑層析濾紙、層析缸、毛細(xì)管、電吹風(fēng)、鉛筆、直尺層析濾紙、層析缸、毛細(xì)管、電吹風(fēng)、鉛筆、直尺2. 器材器材7;.濾紙：質(zhì)地均

5、勻?yàn)V紙：質(zhì)地均勻 平整無(wú)折痕平整無(wú)折痕 邊緣整齊邊緣整齊 始終手持層析濾紙邊緣始終手持層析濾紙邊緣標(biāo)記：起點(diǎn)線標(biāo)記：起點(diǎn)線 終點(diǎn)線終點(diǎn)線 樣品樣品 (點(diǎn)間距，點(diǎn)邊距點(diǎn)間距，點(diǎn)邊距1cm)四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 準(zhǔn)備準(zhǔn)備2. 點(diǎn)樣點(diǎn)樣毛細(xì)管吸取樣品點(diǎn)于標(biāo)記點(diǎn)，樣品點(diǎn)毛細(xì)管吸取樣品點(diǎn)于標(biāo)記點(diǎn)，樣品點(diǎn) (d3mm)量不要多，點(diǎn)一個(gè)樣待干后再點(diǎn)另一個(gè)樣。量不要多，點(diǎn)一個(gè)樣待干后再點(diǎn)另一個(gè)樣。終點(diǎn)線終點(diǎn)線起點(diǎn)線起點(diǎn)線2cm7.5cm1 28;.3.展開：展開：|濾紙掛在層析缸蓋上，濾紙下端浸入展開劑中濾紙掛在層析缸蓋上，濾紙下端浸入展開劑中1cm。v展開劑不要淹沒(méi)起點(diǎn)線。展開劑不要淹沒(méi)起點(diǎn)線。v濾紙不要和玻璃缸壁接觸。濾紙不要和玻璃缸壁接觸。v濾紙與展開劑的接觸線和起點(diǎn)線平行。濾紙與展開劑的接觸線和起點(diǎn)線平行。|展開劑上升到距終點(diǎn)線約展開劑上升到距終點(diǎn)線約0.5cm時(shí)，將濾紙條取出，劃出展開劑前沿位置，電吹時(shí)，將濾紙條取出，劃出展開劑前沿位置，電吹風(fēng)吹干。風(fēng)吹干。9;.4.顯色：顯色：噴上茚三酮溶液，熱風(fēng)吹干至看到紫紅色斑點(diǎn)。噴上茚三酮溶液，熱風(fēng)吹干至看到紫紅色斑點(diǎn)。10;.計(jì)算計(jì)算 Rf 測(cè)測(cè) =？ab五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Rf 原點(diǎn)到溶劑前沿的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中