22菌種的選育鑒定

1、從菌種保藏機構(gòu)直接購買所需從菌種保藏機構(gòu)直接購買所需的菌株的菌株從自然界分離篩選從自然界分離篩選從生產(chǎn)過程中發(fā)酵水平高的批從生產(chǎn)過程中發(fā)酵水平高的批號中重新進行分離篩選號中重新進行分離篩選國內(nèi)菌種保藏機構(gòu)國內(nèi)菌種保藏機構(gòu)國外菌種保藏機構(gòu)國外菌種保藏機構(gòu)菌種選育工作大幅度提高了微生物發(fā)酵菌種選育工作大幅度提高了微生物發(fā)酵的產(chǎn)量，促進了微生物發(fā)酵工業(yè)的迅速的產(chǎn)量，促進了微生物發(fā)酵工業(yè)的迅速發(fā)展。發(fā)展。通過菌種選育，抗生素、氨基酸、維生通過菌種選育，抗生素、氨基酸、維生素、藥用酶等產(chǎn)物的發(fā)酵產(chǎn)量提高了幾素、藥用酶等產(chǎn)物的發(fā)酵產(chǎn)量提高了幾十倍、幾百倍、甚至幾千倍。十倍、幾百倍、甚至幾千倍。菌種選育在提

2、高產(chǎn)品質(zhì)量、增加品種、菌種選育在提高產(chǎn)品質(zhì)量、增加品種、改善工藝條件和產(chǎn)生菌的遺傳學研究等改善工藝條件和產(chǎn)生菌的遺傳學研究等方面也發(fā)揮了重大作用。方面也發(fā)揮了重大作用。菌種選育的目的是改良菌種的特性，使菌種選育的目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)生產(chǎn)的要求。其符合工業(yè)生產(chǎn)的要求。在生產(chǎn)過程中，不經(jīng)過人工誘變在生產(chǎn)過程中，不經(jīng)過人工誘變處理，根據(jù)菌種的自發(fā)突變而進處理，根據(jù)菌種的自發(fā)突變而進行菌種篩選的過程，叫做行菌種篩選的過程，叫做自然選自然選育或自然分離。育或自然分離。自然選育：自然選育：從自然界分離獲得菌株從自然界分離獲得菌株根據(jù)菌種的自發(fā)突變進行篩選而獲得根據(jù)菌種的自發(fā)突變進行篩選而獲得

3、菌種。菌種。1. 從自然界分離獲得菌株從自然界分離獲得菌株樣品采集樣品采集樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理目的菌富集培養(yǎng)目的菌富集培養(yǎng)菌種初篩菌種初篩菌種復篩菌種復篩菌種發(fā)酵性能鑒定菌種發(fā)酵性能鑒定菌種保藏菌種保藏樣品來源要廣泛樣品來源要廣泛微生物代謝特點和生產(chǎn)目的相結(jié)合微生物代謝特點和生產(chǎn)目的相結(jié)合考慮微生物的生理類型考慮微生物的生理類型土壤樣品：有機質(zhì)含量和通風狀況，土壤樣品：有機質(zhì)含量和通風狀況，ph，水分，季節(jié)，地理條件等，水分，季節(jié)，地理條件等物理法：熱處理、膜過濾、離心物理法：熱處理、膜過濾、離心等等化學法：添加幾丁質(zhì)的培養(yǎng)基化學法：添加幾丁質(zhì)的培養(yǎng)基誘餌法：花粉、毛發(fā)等誘餌法：花粉、毛發(fā)等分

4、離前樣品加熱處理分離前樣品加熱處理處理條件處理條件樣品樣品分離的放線菌分離的放線菌40，216 h土壤、植物根土壤、植物根鏈霉菌鏈霉菌55，6 min水、土壤、糞便水、土壤、糞便小小單孢菌、鏈霉菌、紅球菌、單孢菌、鏈霉菌、紅球菌、嗜酸放線菌和嗜堿放線菌等嗜酸放線菌和嗜堿放線菌等55干熱，干熱，10 d土壤土壤高溫放線菌高溫放線菌100干熱，干熱，15 min土壤土壤馬杜拉放線菌馬杜拉放線菌100120干熱，干熱，1 h土壤土壤馬杜拉放線菌、小雙孢菌，小馬杜拉放線菌、小雙孢菌，小四孢菌，孢囊鏈霉菌四孢菌，孢囊鏈霉菌施加選擇性壓力分離法施加選擇性壓力分離法控制培養(yǎng)時的氧氣、溫度、控制培養(yǎng)時的氧氣、

5、溫度、ph、鹽濃度、碳、鹽濃度、碳源等源等添加抗生素添加抗生素隨機分離方法隨機分離方法生化誘導分析法（生化誘導分析法（bia）-誘導檢測法誘導檢測法-將大腸桿將大腸桿菌的菌的lacz基因連接在基因連接在噬菌體的噬菌體的pl啟動子下，當啟動子下，當dna損傷時，誘發(fā)損傷時，誘發(fā)阻遏蛋白阻遏蛋白ci分解，分解，pl啟動子啟啟動子啟動動lacz基因轉(zhuǎn)錄，測定表達的基因轉(zhuǎn)錄，測定表達的-半乳糖苷酶活性來半乳糖苷酶活性來檢測能損傷檢測能損傷dna的抗腫瘤藥物的存在。的抗腫瘤藥物的存在。q合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基精氨酸培養(yǎng)基，高氏合成一號培養(yǎng)基，天門冬精氨酸培養(yǎng)基，高氏合成一號培養(yǎng)基，天門冬素培養(yǎng)基，察氏培養(yǎng)

6、基等素培養(yǎng)基，察氏培養(yǎng)基等q有機培養(yǎng)基有機培養(yǎng)基waksman培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，bennett培養(yǎng)基培養(yǎng)基q幾丁質(zhì)培養(yǎng)基幾丁質(zhì)培養(yǎng)基只有放線菌能夠利用幾丁質(zhì)，生長的菌落小，只有放線菌能夠利用幾丁質(zhì)，生長的菌落小，白色，需轉(zhuǎn)接到產(chǎn)可溶性色素的適當培養(yǎng)基上加以區(qū)分白色，需轉(zhuǎn)接到產(chǎn)可溶性色素的適當培養(yǎng)基上加以區(qū)分qhv培養(yǎng)基培養(yǎng)基以土壤腐殖質(zhì)為唯一碳源和氮源的培養(yǎng)基以土壤腐殖質(zhì)為唯一碳源和氮源的培養(yǎng)基加入抗真菌試劑（制霉菌素、兩性霉素加入抗真菌試劑（制霉菌素、兩性霉素b b、放線菌酮、放線菌酮、丙酸鈉以及使真菌形成較小菌落的丙酸鈉以及使真菌形成較小菌落的rose rose bengalbengal等）

7、，等），抑制真菌生長；抑制真菌生長；加入抗細菌抗生素（青霉素、鏈霉素）抑制細菌生長，加入抗細菌抗生素（青霉素、鏈霉素）抑制細菌生長，增加放線菌的分出率；增加放線菌的分出率；加入某些抗生素也可抑制部分放線菌，有利于分離到加入某些抗生素也可抑制部分放線菌，有利于分離到一定種類的放線菌。如新生霉素有利于分離北里孢菌屬。一定種類的放線菌。如新生霉素有利于分離北里孢菌屬。2. 從自發(fā)突變體中獲得菌株從自發(fā)突變體中獲得菌株 變異是育種的基礎(chǔ)。變異是育種的基礎(chǔ)。 自然突變是指自然條件下出現(xiàn)的基因變化。自然突變是指自然條件下出現(xiàn)的基因變化。 自發(fā)突變的頻率較低，因此自然選育篩選出自發(fā)突變的頻率較低，因此自然選

8、育篩選出來的菌種，不能滿足育種工作的需要。因而來的菌種，不能滿足育種工作的需要。因而不能僅停留在不能僅停留在“選選”種，還要進行種，還要進行“育育”種。種。如通過誘變劑處理菌株，就可以大大提高菌如通過誘變劑處理菌株，就可以大大提高菌種的突變頻率，擴大變異幅度，從中選出具種的突變頻率，擴大變異幅度，從中選出具有優(yōu)良特性的變異菌株有優(yōu)良特性的變異菌株誘變育種。誘變育種。計算機應(yīng)用計算機應(yīng)用形態(tài)、生理生化特征形態(tài)、生理生化特征細胞壁、細胞壁、細胞膜組成和結(jié)構(gòu)等細胞膜組成和結(jié)構(gòu)等dna，rna等利用微生物利用微生物多種不同的多種不同的信息，包括信息，包括表型的、基表型的、基因型的和系因型的和系統(tǒng)發(fā)育的

9、信統(tǒng)發(fā)育的信息，綜合起息，綜合起來研究微生來研究微生物分類和系物分類和系統(tǒng)進化的過統(tǒng)進化的過程。程。形態(tài)學特征形態(tài)學特征生理生化特征生理生化特征血清學試驗和噬菌體分型血清學試驗和噬菌體分型特征特征分析方法分析方法觀察點觀察點菌體染色反應(yīng)菌體染色反應(yīng)革蘭氏染色法革蘭氏染色法g g，紫色；，紫色；g-g-，紅色，紅色菌體大小和形菌體大小和形狀狀光學顯微鏡，測微尺；光學顯微鏡，測微尺；透射電鏡透射電鏡菌體排列或分支情況菌體排列或分支情況鞭毛鞭毛鞭毛染色（銀染法）；鞭毛染色（銀染法）；透射電鏡透射電鏡有無，著生部位，數(shù)目有無，著生部位，數(shù)目芽胞芽胞芽胞染色（孔雀綠染色芽胞染色（孔雀綠染色法，簡單染色法

10、等）；法，簡單染色法等）；透射電鏡透射電鏡有無，芽胞位置和形狀，有無，芽胞位置和形狀，孢囊是否膨大孢囊是否膨大細胞內(nèi)含物細胞內(nèi)含物染色；染色；透射電鏡透射電鏡內(nèi)含物類別（聚內(nèi)含物類別（聚-羥基羥基丁酸顆粒或硫磺顆粒等）丁酸顆?；蛄蚧穷w粒等）莢膜莢膜負染法負染法與細胞結(jié)合度與細胞結(jié)合度在觀察細菌的個體形態(tài)時，應(yīng)注意有些細菌在生活周期中有多形性變化，要注意在觀察細菌的個體形態(tài)時，應(yīng)注意有些細菌在生活周期中有多形性變化，要注意觀察其幼齡菌體（小時）、生長對數(shù)期的菌體及老齡菌體的形態(tài)變化及革觀察其幼齡菌體（小時）、生長對數(shù)期的菌體及老齡菌體的形態(tài)變化及革蘭氏染色反應(yīng)的變化。蘭氏染色反應(yīng)的變化。細胞內(nèi)含物細胞內(nèi)含物孢子孢子（1）微生物遺傳型鑒定微生物遺傳型鑒定dna 堿基組成（堿基組成（g+c mol%）分析）分析dna-dna雜交雜交rrna同源性分析同源性分析以以dna為基礎(chǔ)的分型方法為基礎(chǔ)的分型方法（2）細胞化學成分特征分類法）細胞化學成分特征分類法細胞壁的化學組成細胞壁的化學組成 全細胞水解液的糖型和氨基酸類型全細胞水解液的糖型和氨基酸類型分支菌酸分析分支菌酸分析脂肪酸組成及磷脂成分分析脂肪酸組成及磷脂成分分析醌類的分析醌類的分析可溶性蛋白的質(zhì)譜分析可溶性蛋白的質(zhì)譜分析非極性尾則由長鏈脂肪酸通非極性尾則由長鏈脂肪酸通過酯鍵連接在甘油的過酯鍵連接在甘油的c1和和c2