重新定義16q22.1連鎖的常染色性遺傳性小腦共濟(jì)失調(diào)的致病基因座位

1、重新定義16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟(jì)失調(diào)的致病基因座位（redefining the disease locus of 16q22.1-linked autosomal dominant cerebellar ataxia） 周琦o 2005年我們通過(guò)對(duì)52個(gè)臨床上表現(xiàn)為純小腦性癥狀的16q連鎖的常染色體顯性遺傳共濟(jì)失調(diào)的家系進(jìn)行微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)單倍體分析（16q上還連鎖有sca4(16q22.1-adca)的致病基因，但臨床表現(xiàn)除了純小腦性的癥狀外還有感覺(jué)神經(jīng)病變和椎體束征）發(fā)現(xiàn)所有家系患者共有16q22.1基因組400kb基因組區(qū)域，即微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)gata01和171ms

2、m之間，在這個(gè)區(qū)域中的puratrophin-1基因上存在與所有家系患者共分離的-16ct雜合突變，這表明這個(gè)突變與疾病強(qiáng)連鎖。研究背景o 最近研究發(fā)現(xiàn)一家系中除了一個(gè)患者的puratrophin-1基因上沒(méi)有攜帶-16ct突變，家系其他患者都攜帶有該突變。通過(guò)微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)單倍體分析發(fā)現(xiàn)該患者共享puratrophin-1基因-16ct突變位點(diǎn)著絲粒側(cè)的單體型（致病）表明真正的致病基因有可能不是puratrophin-1基因。立題依據(jù)o 單倍體分析確定16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟(jì)失調(diào)的致病基因座位的著絲粒端o 單倍體分析確定16q22.1連鎖的常染色體顯性遺傳性小腦共濟(jì)失調(diào)

3、的致病基因位點(diǎn)端粒端研究?jī)?nèi)容o本研究通過(guò)對(duì)依據(jù)臨床癥狀和攜帶-16ct突變位點(diǎn)診斷的16q-adca的64個(gè)家系所有患者的單體型分析，以發(fā)現(xiàn)所有家系患者共有的單倍體。查找并構(gòu)建ggaa05,d16s397 ggaa10和gata01四個(gè)多態(tài)標(biāo)記位點(diǎn)附近致病染色體特異的snps，通過(guò)對(duì)存在重復(fù)數(shù)變異微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)附近的snps的單體型分析以發(fā)現(xiàn)重組事件，從而確定致病基因座位的著絲粒端。o通過(guò)對(duì)臨床表現(xiàn)為純小腦共濟(jì)失調(diào)癥并排除攜帶sca1,2,3,6,7,8,12,14,17，和drpla突變基因且未攜帶-16ct突變位點(diǎn)22個(gè)家系23名患者的單體型分析，以發(fā)現(xiàn)是否存在患者共享-16ct突變位點(diǎn)著

4、絲粒側(cè)共有的致病單倍體，從而確定是否存在患者患有16-adca(根據(jù)純小腦共濟(jì)失調(diào)癥根據(jù)純小腦共濟(jì)失調(diào)癥已排除已排除sca4)研究方法實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（一）o 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)64個(gè)家系所有患者共有微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)ggaa05和171msm之間400kb基因組區(qū)域，并發(fā)現(xiàn)18個(gè)家系的患者ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個(gè)微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點(diǎn)存在重復(fù)數(shù)變異，尤其是ggaa05位點(diǎn)存在明顯的重復(fù)數(shù)變異(差異至少為差異至少為2）實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（二）o 在ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個(gè)微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)存在重復(fù)數(shù)變異的14個(gè)家系(另另4個(gè)家系個(gè)家系未分析）未分

5、析）的患者的snps（上述微衛(wèi)星位點(diǎn)附近)單體型分析發(fā)現(xiàn)家系t46未攜帶snp01,02,03,04,而其他患者攜帶所有一樣的snps.實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（三）o 研究結(jié)果還顯示u09家系的一例患者共享多態(tài)位點(diǎn)d13s3043至gata01之間的致病單倍體，而此單倍體未包括puratrophin-1基因的-16ct突變位點(diǎn)。討論o 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（一）發(fā)現(xiàn)的 14個(gè)家系的患者存在的ggaa05,d16s397，ggaa10和gata01四個(gè)微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點(diǎn)重復(fù)數(shù)變異提示可能存在重組事件，但這14個(gè)家系被檢患者后3個(gè)重復(fù)單位變異數(shù)為1的微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點(diǎn)附近的snp都一致，從而排除了后3微衛(wèi)星多態(tài)

6、標(biāo)記位點(diǎn)附近snp的重組事件，進(jìn)而提示后3個(gè)重復(fù)單位變異數(shù)為1的微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記位點(diǎn)緣于微衛(wèi)星的slippage mutation.o 同時(shí)從實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（一）可發(fā)現(xiàn)4個(gè)家系（p4，t3，t25，t46)微衛(wèi)星位點(diǎn)單倍體分析發(fā)現(xiàn)在多態(tài)位點(diǎn)ggaa05存在明顯的重復(fù)數(shù)變異，并且從實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果（二）可發(fā)現(xiàn)t46家系的患者未攜帶ggaa05 附近的snp01,02,03,04多態(tài)位點(diǎn)，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都強(qiáng)烈提示重組事件發(fā)生在snp04和snp05之間。o 從試驗(yàn)（三)的結(jié)果并考慮到ggaa05多態(tài)位點(diǎn)等位基因的稀有性和特異且頻率低的snps,結(jié)合u09家系的患者的臨床癥狀與16q22.1-adca一致，強(qiáng)烈提示u09家系的患者共享puratrophin-1基因-16ct突變位點(diǎn)著絲粒側(cè)的單體型，進(jìn)一步提示致病基因的端粒側(cè)邊界是-16ct突變位點(diǎn)（未包括-16ct突變位點(diǎn)）o 通過(guò)對(duì)一些16q-adca家系進(jìn)行微衛(wèi)星多態(tài)位點(diǎn)和snps單倍體分析， 16q-adca基因座位可以從新定位在snp04和puratrophin-1基因-16ct突變位點(diǎn)之間900kb基因組區(qū)域，這個(gè)基因座位與先前ohata等定位的區(qū)域重疊但不一致。總結(jié)o盡管我們?cè)趗09家系發(fā)現(xiàn)有一個(gè)不攜帶puratro