醫(yī)學(xué)研究生開題報(bào)告

1、蒞蒞研究生研究生: 導(dǎo)導(dǎo) 師師: 教授教授1. 1.選題的目的選題的目的2. 2.選題的理論和實(shí)際意義選題的理論和實(shí)際意義7. 7.目前進(jìn)展情況目前進(jìn)展情況3. 3.主要研究內(nèi)容主要研究內(nèi)容5. 5.主要研究方法主要研究方法4. 4.主要技術(shù)路線主要技術(shù)路線6. 6.預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果選題目的選題目的HCC是多血管實(shí)體瘤，本實(shí)驗(yàn)擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察參雄抗癌丸對(duì)小鼠H22移植性實(shí)體腫瘤的抑瘤效果及該藥物對(duì)荷瘤H22小鼠腫瘤血管形成情況和肝癌瘤組織中VEGF及MVD表達(dá)的影響，為臨床應(yīng)用該藥治療肝癌提供客觀而科學(xué)的理論依據(jù)。選題的理論和意義選題的理論和意義原發(fā)性肝癌簡稱肝癌，我國每年約有23萬人死于該

2、病，占全球肝癌死亡人數(shù)的53。被列為我國重點(diǎn)研究的癌癥之一。目前中醫(yī)藥治療中晚期肝癌發(fā)揮的作用越來越大，可以明顯改善患者的生活質(zhì)量和延長其生存期。原發(fā)性肝癌是典型的血供豐富的實(shí)體腫瘤，生長速度快，易轉(zhuǎn)移，與其強(qiáng)大的血管生成能力有關(guān)。血管生成是腫瘤生長及轉(zhuǎn)移必不可少的條件，1971年Folkman提出腫瘤生長及轉(zhuǎn)移是血管依賴性的理論，阻斷血管的生成可以作為抑制腫瘤生長的一種治療策略。迄今多數(shù)學(xué)者充分肯定了MVD與腫瘤的生長轉(zhuǎn)移預(yù)后的密切關(guān)系，認(rèn)為它是一個(gè)反映惡性腫瘤生物學(xué)行為的重要參數(shù)。 腫瘤在其生長過程中可分泌大量的促血管生成因子。VEGF是一種分子量為34-50 KD的二聚體蛋白,由正?；蚰[

3、瘤細(xì)胞產(chǎn)生,是一個(gè)重要的促血管生成因子，甚至被認(rèn)為是最強(qiáng)的血管形成因子，VEGF表達(dá)水平反映了腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移和血管構(gòu)建的水平,直接反映腫瘤生長的速度和轉(zhuǎn)移的傾向。在人類許多腫瘤中檢測到VEGF的高表達(dá)，在腫瘤進(jìn)展中血管生成可能是原癌基因激活和抑癌基因失活的結(jié)果。國內(nèi)外研究表明，運(yùn)用抗血管生成因子如內(nèi)皮抑素等可有效地抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，降低腫瘤組織MVD，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的目的。MVD的檢測可用于腫瘤患者的預(yù)后估計(jì),MVD值是反映腫瘤血供的客觀指標(biāo)。因此在治療原發(fā)性肝癌中聯(lián)合檢測VEGF表達(dá)情況和MVD值,對(duì)于判斷腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能,及時(shí)干預(yù)治療,減少轉(zhuǎn)移,對(duì)于提高治愈

4、率具有重要價(jià)值。 主要研究內(nèi)容主要研究內(nèi)容（2 2）通過對(duì)移植模型中治療組與模型對(duì)照組腫瘤體積變化、腫瘤重量變化及正常組與模型對(duì)照組、各治療組之間胸腺指數(shù)與脾指數(shù)的變化，研究參雄抗癌丸的作用機(jī)制。 （3 3）本實(shí)驗(yàn)采用腫瘤組織HE常規(guī)染色，從形態(tài)學(xué)上觀察各組間腫瘤細(xì)胞密度，腫瘤壞死程度（1 1）動(dòng)物移植性腫瘤模型的成功制備（4 4）用流式細(xì)胞儀檢測各組的腫瘤細(xì)胞凋亡率；用免疫組化技術(shù)觀察該藥物對(duì)腫瘤組織VEGF及MVD表達(dá)的實(shí)驗(yàn)影響（5 5） 本項(xiàng)研究采用腹腔種植H22瘤株制造肝癌模型，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究參雄抗癌丸對(duì)荷瘤鼠VEGF及MVD表達(dá)的實(shí)驗(yàn)影響，從分子水平探討參雄抗癌丸對(duì)腫瘤的影響機(jī)制。

5、從而為該藥提供技術(shù)支持，并為其產(chǎn)品開發(fā)和走向市場提供理論依據(jù)。主要技術(shù)路線主要技術(shù)路線選購SPF級(jí)小鼠動(dòng)物造模及分組參雄抗癌丸高劑量組參雄抗癌丸中劑量組參雄抗癌丸低劑量組5-FU組模型對(duì)照組正常組給藥、標(biāo)本采集和處理檢測：1 肉眼觀察2 抑瘤率的測定3 HE常規(guī)染色4 細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的測定5 免疫組化檢測VEGF和MVD 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，撰寫論文主要研究方法主要研究方法1.1.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料1)1)瘤株 H22北京藥物研究所引進(jìn)，甘肅醫(yī)學(xué)科學(xué)院傳代保種。2 2）實(shí)驗(yàn)藥品參雄抗癌丸由甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院制成水蜜丸劑，每包2克；5-FU注射液3 3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄

6、各半，體重1820g, 56w齡，由甘肅省中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供2.實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)方法：（1）造模：從H22瘤株傳代小鼠的腹腔抽取乳白色的瘤液，用生理鹽水稀釋至瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)為2106個(gè)/ml，胎盤藍(lán)染色證實(shí)活細(xì)胞數(shù)達(dá)到96%，將瘤細(xì)胞懸液注射到小鼠右前肢腋窩部皮下0.2ml只，接種的瘤細(xì)胞數(shù)約為5106個(gè)只。均在無菌條件下進(jìn)行（2）動(dòng)物分組及給藥方法:接種次日，將除正常組外的80只小鼠隨機(jī)分為5組: A組為模型對(duì)照組，每日用蒸餾水灌胃；B組為陽性對(duì)照組，每天5-FU 10/kg腹腔注射；C組為藥物高劑量組1560/kg灌胃。D組為藥物中劑量組780/kg 灌胃。E組為藥物低劑量組390/kg灌

7、胃。每天一次，連續(xù)灌胃10天。(4)標(biāo)本采集及處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后第二天，將禁食12小時(shí)的所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脫頸處死取脾臟、胸腺和瘤組織。v3.觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)（2）計(jì)算相關(guān)免疫器官指數(shù)及抑瘤率分別按以下公式計(jì)算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和抑瘤率（單位：單位：mg/l0gmg/l0g）胸腺指數(shù)=胸腺重量（mgmg）/體重(g g)脾指數(shù)=脾臟重量（mg）/體重(g)（3）抑瘤率完整剝離腫瘤, 用1/1000電子天平稱取瘤重。抑瘤率( %) = (1 - T/C)100 % ,( T/ C: 治療組平均瘤重/ 對(duì)照組平均瘤重) 。（4）病理形態(tài)學(xué)觀察瘤組織塊以4甲醛固定，石蠟包埋，切片，經(jīng)HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察

8、瘤組織病理變化（1）造模后，觀察各組小鼠局部瘤組織情況，小鼠活動(dòng)、進(jìn)食、精神狀態(tài)等情況。（ （5）細(xì)胞凋亡率的測定 根據(jù)試劑盒上的說明書具體步驟進(jìn)行（6）標(biāo)本切取:停藥次日小鼠頸椎脫臼處死，完整剝離腫瘤，10中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，石蠟切片厚5um。各組計(jì)量資料輸入計(jì)算機(jī)，采用SPSS16.0 for windows 統(tǒng)計(jì)軟件包，以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差(X士S)表示，各組間的比較采用單因素方差分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 參雄抗癌丸對(duì)參雄抗癌丸對(duì)荷瘤小鼠的腫荷瘤小鼠的腫瘤生長有抑制瘤生長有抑制作用，治療后作用，治療后抑瘤率較模型抑瘤率較模型組有顯著差異組有顯著差異 參雄抗癌丸參雄抗癌丸可提

9、高腫瘤可提高腫瘤細(xì)胞的凋亡細(xì)胞的凋亡率，具有促率，具有促進(jìn)或誘導(dǎo)腫進(jìn)或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用。凋亡的作用。參雄抗癌丸可抑制參雄抗癌丸可抑制肝癌組織肝癌組織VEGF的的表達(dá)水平，同時(shí)降表達(dá)水平，同時(shí)降低肝癌組織低肝癌組織MVD。（各治療組的（各治療組的MVD和和VEGF水平水平與病理模型組比較與病理模型組比較均有明顯的下降。）均有明顯的下降。） 預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果目前進(jìn)展情況目前進(jìn)展情況目前已完成文獻(xiàn)檢索經(jīng)費(fèi)預(yù)算 1.材料購置費(fèi) 2000元 2.試劑購置費(fèi)3000元 3.檢測勞務(wù)費(fèi)2500元 4.文獻(xiàn)檢索費(fèi)200元 5.論文打印及版面發(fā)表1500元 6.論文答辯1500元 共計(jì)：10700元 實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)為研究生科研經(jīng)費(fèi)研究進(jìn)度及具體時(shí)間安排研究進(jìn)度及