中藥含藥血清藥理研究方法

1、in中藥含藥血清藥理研究方法Pharmacological method of the drug-contained serum for Chinese Materia Medica vitro概述中藥血清藥理研究方法：是指動(dòng)物灌胃給予中藥及制劑，經(jīng)吸收進(jìn)入機(jī)體血液循環(huán)，在一 定時(shí)間內(nèi)采取血液，分離所得血清，必定含有一定量的該藥物成分， 此時(shí)的血藥濃度反映了機(jī)體的真實(shí)血藥濃度， 以此血清加入到體外細(xì) 胞培養(yǎng)體系，觀察其藥理作用的體外實(shí)驗(yàn)方法。中藥血清藥理學(xué)研究方法的意義：1、 采取的含藥物血清與機(jī)體內(nèi)環(huán)境相一致且排除了中藥制劑的各種影響因素（如pH ,滲透壓等），將其加入到體外細(xì)胞 培養(yǎng)體系，

2、觀察其藥理作用，具有更好的科學(xué)性，可行性； 同時(shí)，使中藥的研究易于深入到 細(xì)胞分子水平，對(duì)于創(chuàng)建中 藥細(xì)胞分子藥理學(xué)研究具有重要的促進(jìn)作用。2、 于灌胃給藥后不同時(shí)間采取的血清，其體外藥理實(shí)驗(yàn)的效應(yīng) 及其變化，可以反映機(jī)體真實(shí)的血藥濃度及其變化， 無(wú)疑開(kāi) 創(chuàng)了對(duì)于許多成分不明或復(fù)方中藥制劑藥動(dòng)學(xué)研究的一種 新方法。3、 如采用中藥血清藥理學(xué)方法進(jìn)行中藥藥效學(xué)研究時(shí)， 同時(shí)分 析測(cè)定血清中藥物成分的含量，具有極強(qiáng)的針對(duì)住，可避免 盲目地篩選藥物有效成分的繁重工作，使中藥藥效與中藥成 分的研究更能協(xié)調(diào)一致。從1988年日本學(xué)者田代真一正式提出了 “血清藥理學(xué)”這一新概念，至今已有十余年時(shí)間。其研究

3、主要經(jīng)歷了三個(gè)階段：1、可行性探索研究2、方法學(xué)研究3、應(yīng)用研究階段?？尚行蕴剿餮芯恳院幯暹M(jìn)行體外的藥效學(xué)試驗(yàn)，早在上世紀(jì)五十年代國(guó)內(nèi)即 有所探索，白田代真一提出“血清藥理學(xué)”的概念以后，重新引起了 學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了廣泛的可行性探索研究。一. 抗菌、抗病毒的實(shí)驗(yàn)研究楊奎等應(yīng)用中藥血清藥理方法進(jìn)行了中藥體外抗菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)黃 苓、囊香正氣水、囊香正氣液的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑制 率高達(dá)70%以上。該研究發(fā)現(xiàn)一些含中藥血清相對(duì)于正常血清表現(xiàn) 為促進(jìn)細(xì)菌繁殖作用，表明一些中藥可以降低機(jī)體抗御外邪的能力。 同時(shí)，該研究還發(fā)現(xiàn)，不論是中藥復(fù)方，還是單味中藥，均可 出現(xiàn)多 個(gè)

4、抑菌高峰，表明中藥抗菌有效成分復(fù)雜，其吸收高峰不相一致，可 以對(duì)細(xì)菌給予多次打擊，有利于抑制其繁殖。崔曉蘭等應(yīng)用口飼桂枝湯的含藥血清進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)每日1次連續(xù)3天，末次給藥后2小時(shí)的血清有明顯抑制副流感病毒致細(xì)胞病變 的作用，該研究還發(fā)現(xiàn)，桂枝湯煎劑本身并無(wú)直接抗副流感病毒作用， 而口飼桂枝湯后的中藥血清則有明顯作用。 因此，血清藥理研究可以 防止假陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 的出現(xiàn)。二. 對(duì)單核細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)生致熱原的研究楊奎等觀察了 口飼黃苓、香蕾、羌活勝濕湯、九味羌活丸的含藥 血清對(duì)家兔單核細(xì)胞 內(nèi)生致熱原產(chǎn)生過(guò)程中單核細(xì)胞內(nèi) DNA、蛋白 質(zhì)合成速度及Ca2+內(nèi)流的影響。結(jié)果顯示，口飼黃苓的含藥血清能明

5、顯抑制單核細(xì)胞內(nèi)DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流，并推測(cè)出黃苓解熱機(jī) 理之一是通過(guò)抑制單核細(xì)胞內(nèi) DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流而阻斷內(nèi)生 致熱原的合成。含香蕾血清、含羌活勝濕湯血清、含九味羌活丸血清 三者對(duì)單核細(xì)胞內(nèi)DNA合成均有明顯抑制作用；對(duì)單核細(xì)胞 Ca2+內(nèi) 流的影響，香蕾和九味羌活丸均呈量效遞增性抑制作用；時(shí)效關(guān)系表 明，九味羌活丸對(duì) Ca2+內(nèi)流的抑制作用在給藥后 90min達(dá)高峰，對(duì) DNA合成的抑制作用在給藥后 30min和90min作用較明顯。三. 抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究王力倩等采用中藥血清藥理研究方法進(jìn)行離體試驗(yàn)，觀察了含苦參、仙鶴草的血清及其煎劑對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響。結(jié)果發(fā)

6、現(xiàn)苦 參、仙鶴草煎劑及含苦參血清均有明顯的抗腫瘤活性，而含仙鶴草血清則無(wú)效。初步證明苦參對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)確實(shí)有一定的細(xì)胞毒性 作用，而含仙鶴草血清及其煎劑出現(xiàn)了不同實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因，可能與中藥粗制劑因素有關(guān)，也可能受藥物在體內(nèi)代謝過(guò)程及血清等因素的 影響。該研究提示，含藥血清藥理研究對(duì)中藥抗腫瘤作用的評(píng)價(jià)有一 定的意義。四. 對(duì)造血系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究張英華等用血清藥理方法研究了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)造血祖細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)含當(dāng)歸補(bǔ)血湯的血清對(duì)小鼠粒系一巨系造血祖細(xì)胞（CFU-GM）、紅系造血祖細(xì)胞（CFU - E）的增殖有明顯的促進(jìn)作用，隨著 含藥血清量的增加，CFU - GM、CFU - E的增殖數(shù)越高。提

7、示當(dāng)歸 補(bǔ)血湯能刺激骨髓造血祖細(xì)胞，從而有可能增強(qiáng)粒系一巨系、紅系細(xì) 胞的生長(zhǎng)、成熟而達(dá)生血補(bǔ)血的作用。拆方研究表明當(dāng)歸補(bǔ)血湯刺激 粒系、巨系造血祖細(xì)胞增殖的作用主要源于當(dāng)歸，而對(duì)紅系造血祖細(xì) 胞的作用以黃芷為主。表明當(dāng)歸、黃芷對(duì)不同的造血祖細(xì)胞的作用各 有側(cè)重，又互相合作，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的造血補(bǔ)血機(jī)能。而當(dāng)歸補(bǔ)血湯 煎液對(duì)CFU - GM的生長(zhǎng)有抑制作用，劑量越大，抑制作用越強(qiáng)；同 時(shí)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯水煎液不能刺激 CFU - E的增殖。這與當(dāng)歸補(bǔ)氣補(bǔ)血 的作用不相符。由此可見(jiàn)，血清藥理體外實(shí)驗(yàn)方法克服了中藥粗提物 進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的弊端，是一種更為科學(xué)有效的中藥復(fù)方體外實(shí)驗(yàn)方 法。五. 對(duì)呼吸系統(tǒng)的

8、實(shí)驗(yàn)研究董白波等以金養(yǎng)麥片為供試藥物，觀察了含藥血清對(duì)離體豚鼠回 腸的松弛作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服臨床等劑量的金養(yǎng)麥片的含藥血清能 明顯抑制組胺引起的離體豚鼠回腸的收縮，表明金養(yǎng)麥片具有Hi受體阻斷劑的作用，能改善氣管炎過(guò)敏的臨床癥狀，時(shí)效關(guān)系表明等效 劑量的金養(yǎng)麥片給予豚鼠40分鐘出現(xiàn)效應(yīng)，80分鐘到達(dá)峰值，160 分鐘效應(yīng)開(kāi)始衰減，效應(yīng)至少可以維持 160分鐘。量效關(guān)系表明：3 倍與9倍臨床等效劑量效應(yīng)呈比例的增加。黃堅(jiān)等發(fā)現(xiàn)小青龍湯藥物 血清具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用，且呈良好的量效關(guān)系，與直接煎劑進(jìn)行離體藥理實(shí)驗(yàn)具有相似的藥理效應(yīng)。該實(shí)驗(yàn)提示小青龍湯中的抗組織胺的有效

9、成分可通過(guò)胃腸道吸收， 進(jìn) 入血液而起作用，其有效成分的達(dá)峰時(shí)間約為2小時(shí)，表明血清藥效 實(shí)驗(yàn)的可靠性及可信度在某些方面優(yōu)于通常的藥理實(shí)驗(yàn) 。六. 對(duì)心血管系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究張群豪等采用血清藥理方法觀察到口飼血府逐瘀濃縮丸的含藥 血清對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化家兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 （SMC）增殖有明 顯抑制作用，并呈劑量依賴(lài)性。血府逐瘀湯煎劑直接加入培養(yǎng)基中也 呈現(xiàn)出對(duì)SME繁殖的抑制作用，且煎劑濃縮液作用強(qiáng)于含藥血清。 表明血府逐瘀濃縮丸在體內(nèi)外確均有抑制 SMC增殖的作用，血府逐 瘀濃縮丸確含抗SMC增殖的有效成分，并且此成分口服有效。 血府 逐瘀煎劑濃縮液的抑制作用比含藥血清強(qiáng)， 可能與某些有效成

10、分未能 從消化道吸收或經(jīng)體內(nèi)代謝失活有關(guān)。王偉等用血清藥理研究方法觀察到血府逐瘀膠囊、精制血府膠 囊、硫氮酮三組藥物的含藥血清可顯著降低缺氧缺糖心肌細(xì)胞乳酸脫 氫酶（LDH - L）、肌酸激酶（CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的釋放，且 精制血府膠囊組、硫氮酮組更為顯著。提示精制血府膠囊組對(duì)心肌細(xì) 胞的保護(hù)作用強(qiáng)于血府逐瘀膠囊。劉強(qiáng)等觀察了清心飲對(duì)大鼠心肌細(xì)胞感染柯薩奇B3病毒的影響，發(fā)現(xiàn)清心飲的含藥血清可明顯減輕實(shí)驗(yàn)性病毒心肌炎的細(xì)胞病 變，改善細(xì)胞搏動(dòng)，降低細(xì)胞上清液中的病毒滴度，減少感染心肌細(xì) 胞乳酸脫氫酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的釋放，顯著抑制柯薩奇Bi病毒核糖的復(fù)制。清心飲的水煎劑液體體外實(shí)

11、驗(yàn)也有上述藥理作用，由此提示清心飲中含抗病毒、保護(hù)心肌細(xì)胞的有效成分，口服有效。針對(duì)以往附子強(qiáng)心作用的研究均采用體外實(shí)驗(yàn)或靜脈直接給藥 的方法，而無(wú)口服給藥的結(jié)論。陳長(zhǎng)勛等采用中藥血清藥理方法觀察 了附子對(duì)離體豚鼠左心房收縮力的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未服藥動(dòng)物血 清比較，口服附子粗制劑后動(dòng)物血清有明顯增強(qiáng)心肌收縮力和加快心 肌收縮速度的作用，給藥后2小時(shí)血清作用達(dá)高峰。證明附子血清與 附子制劑直接給藥兩者對(duì)心肌的正性肌力作用基本相似，說(shuō)明其強(qiáng)心 有效成分確能經(jīng)胃腸吸收入血，且不會(huì)經(jīng)吸收立即被代謝失活。七. 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究劉國(guó)卿等采用具有典型神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞特征的 PC12細(xì)胞株為實(shí) 驗(yàn)?zāi)Ｐ停?/p>

12、用血清藥理方法觀察了口飼“李氏 5號(hào)方”的含藥血清對(duì)神 經(jīng)元的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)含藥血清作用 24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)時(shí)均 能劑量依賴(lài)性地促進(jìn)PC12細(xì)胞的增殖，對(duì)NaCN加缺糖致PC12細(xì) 胞缺血樣損傷模型表現(xiàn)出明顯的抑制和保護(hù)作用， 并呈現(xiàn)一定的量效 關(guān)系。江雪華等采用新生小鼠大腦皮層進(jìn)行體外神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，建立離體的神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸損傷模型，運(yùn)用血清方法，進(jìn)一步觀察了含“李 氏5號(hào)方”的血清對(duì)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸損傷的影響。結(jié)果表明“李氏5號(hào)方”水煎劑（含揮發(fā)油成分）雖能抑制原代培養(yǎng)皮層 神經(jīng)細(xì)胞損傷，但作用不如其含藥血清強(qiáng)，同時(shí)，含藥血清抑制神經(jīng) 損傷的藥理作用呈劑量依賴(lài)性，提示“李

13、氏5號(hào)方”可拮抗興奮性氨 基酸神經(jīng)毒性。八. 對(duì)肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究劉成海等觀察了扶正化瘀方對(duì)培養(yǎng)大鼠貯脂細(xì)胞功能的影響，結(jié) 果表明，該復(fù)方血清能明顯抑制貯脂細(xì)胞增殖， 且抑制程度與藥物劑 量及其血清濃度有關(guān)，而且對(duì)貯肝細(xì)胞內(nèi)外膠原生成也有一定的抑制 作用。季光等研究發(fā)現(xiàn)，扶正化瘀方血清能顯著促進(jìn)正常及損傷肝細(xì)胞 培養(yǎng)上清液中ALT、AST活性，抑制正常及損傷肝細(xì)胞的膠原生成 率。劉成海等采用扶正化瘀方的血清直接添加于培養(yǎng)的肝纖維化病理 形成的重要細(xì)胞一大鼠肝細(xì)胞及星狀細(xì)胞。結(jié)果表明：含藥血清能抑 制星狀細(xì)胞增殖、促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。提示扶正化瘀方有利于損傷肝細(xì) 胞的修復(fù)、有助于抑制舌狀細(xì)胞活化及其細(xì)

14、胞基質(zhì)生成，顯示該方的 抗纖維化作用機(jī)理之一。王曉玲等采用血清藥理方法進(jìn)一步研究了扶正化瘀方抗肝纖維 的配伍作用，結(jié)果表明，扶正化瘀方及其拆方含藥血清均可抑制星狀 細(xì)胞的活化、增殖，抑制其膠原、TGF 6 i的基因表達(dá)與蛋白生成。 其中化瘀組抑制增殖和活化的作用最為突出，扶正組抑制膠原的作用 最顯著，蟲(chóng)草菌絲的抑制 TGF6 i作用最強(qiáng)。證實(shí)了 “藥有個(gè)性之特 長(zhǎng)，方有合群妙用”。九. 對(duì)免疫功能調(diào)節(jié)的研究曾南等23觀察了含蟲(chóng)草的血清對(duì)IL - 2活性的影響，發(fā)現(xiàn)1.25g/kg劑量組能增強(qiáng)IL 2活性，但7.5g/kg、3.5g/kg劑量組作用 不明顯，相反3.5g/kg劑量組卻出現(xiàn)抑制作用

15、，這可能與血清的稀釋 度及其內(nèi)容物有關(guān)。陰赧宏等應(yīng)用血清藥理方法觀察了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)小鼠白細(xì)胞的 活化作用。時(shí)效關(guān)系研究表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯13.2g飲片/kg體重灌胃小鼠后660min等不同時(shí)相的含藥血清對(duì)小鼠白細(xì)胞均具有活化作 用，量效關(guān)系表明，當(dāng)歸補(bǔ)血湯 6.6033.0g飲片/kg體重分別灌胃 小鼠后的含藥血清對(duì)小鼠白細(xì)胞均具有活化作用。十.對(duì)泌尿系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究趙宗江等用血清藥理方法，觀察了含溫陽(yáng)降濁湯藥物成分的大鼠 血清對(duì)體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞（MsC）增殖有明顯的抑制作用， 且與血清中的藥物含量成正比例關(guān)系，提示溫陽(yáng)降濁湯抑制MsC增殖可能是該藥防治腎小球硬化、延緩慢性腎功能衰竭進(jìn)展的

16、重要機(jī)理 之一。由此可見(jiàn)，中藥血清藥理研究方法開(kāi)辟了中藥研究的新思路，拓寬了研究領(lǐng)域，提高了中藥（尤其是中藥復(fù)方）體外實(shí)驗(yàn)的可信度。 在一定程度上揭示了中藥和復(fù)方在胃腸內(nèi)處置過(guò)程中活性成分的轉(zhuǎn) 化和改變。中藥含藥血清藥理的方法學(xué)研究盡管在上世紀(jì)九十年代中期以前，對(duì)含藥血清的藥理作用及其價(jià) 值作了探討，但對(duì)其實(shí)驗(yàn)方法的各個(gè)環(huán)節(jié)尚缺乏系統(tǒng)地研究； 九十年 中期以來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)中藥含藥血清藥理進(jìn)行了較系統(tǒng)的方法學(xué)研究，包括：1、建立中藥含藥血清體外藥理實(shí)驗(yàn)方法意義的論證。2、含藥血清制備技術(shù)的規(guī)范化研究。3、血清藥理方法體外反應(yīng)體系確定的規(guī)范化技術(shù)研究。 為采用中藥血清藥理方法開(kāi)展研究提出初步技術(shù)規(guī)范。

17、一.建立中藥含藥血清體外藥理實(shí)驗(yàn)方法意義的論證（一）含藥血清和原藥液體外試驗(yàn)的比較研究用原藥液和用含藥血清在體外實(shí)驗(yàn)中取得的比較研究發(fā)現(xiàn)，有的結(jié)果一致，有的結(jié)果不一致。如桂枝湯原藥液及含桂枝湯血清均有明 顯抑制HSV-1病毒增殖作用；血府逐瘀濃縮丸原藥液及其兔含藥血清 對(duì)家兔主動(dòng)脈SMC DN整成均有明顯抑制作用。用原藥液和用含藥 血清在體外實(shí)驗(yàn)中亦可見(jiàn)不相一致結(jié)果，如當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)小鼠肝過(guò)氧 化脂質(zhì)的生成具有明顯的抑制作用，而當(dāng)歸補(bǔ)血湯水煎液對(duì)小鼠肝過(guò) 氧化脂質(zhì)生成則呈現(xiàn)明顯的促進(jìn)作用；當(dāng)歸補(bǔ)血湯原藥液體外對(duì)小鼠 NK細(xì)胞無(wú)激活作用，含藥血清及整體實(shí)驗(yàn)均有激活作用；桂枝湯原 藥液在體外無(wú)直接抑

18、制副流感病毒致細(xì)胞病變的作用，而給藥后2小 時(shí)采集的含桂枝湯家兔血清則有明顯抑制作用。用原藥液和用含藥血清所得結(jié)果的不一致，究竟何種結(jié)果更接近 整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)際，這需要積累更多的對(duì)比性實(shí)驗(yàn)結(jié)果予以澄 清。但從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，用含藥血清所得的結(jié)果似更符合中醫(yī)傳 統(tǒng)的認(rèn)識(shí)和臨床或整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。（二）含藥血清和整體給藥藥效相關(guān)性研究含藥血清的體外藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果與該中藥給予動(dòng)物所得得整體藥效反應(yīng)是否具有相關(guān)性，是評(píng)價(jià)含藥血清體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)實(shí)應(yīng)用性的 關(guān)鍵。研究結(jié)果提示：（1）在相應(yīng)藥效指標(biāo)上，用含藥血清所得的體 外實(shí)驗(yàn)結(jié)果與該藥口飼后所得的結(jié)果具有相似性。（2）用含藥血清體 外實(shí)驗(yàn)與整體口

19、飼給藥，對(duì)特定藥理指標(biāo)進(jìn)行量效和時(shí)效的對(duì)比， 發(fā) 現(xiàn)二者在藥效動(dòng)力學(xué)上有良好的相關(guān)性。（3）用含藥血清給予模型動(dòng) 物可以呈現(xiàn)該藥口飼模型動(dòng)物的相同藥效。（三）含藥血清藥效和臨床療效相關(guān)性研究用血府逐瘀丸含藥血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)和用血府逐瘀丸進(jìn)行臨床治療前后相關(guān)指標(biāo)觀察，二者在抑制血小板粘附聚集性及增加紅細(xì)胞 變形性方面的作用基本一致，也即用含藥血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)所反映的 結(jié)果基本和臨床療效相吻合。二.含藥血清制備技術(shù)的規(guī)范化研究（一）米血時(shí)間的確定藥物灌胃給動(dòng)物后，血藥濃度呈現(xiàn)由低到高、由高到低的時(shí)量過(guò) 程，何時(shí)采血，是含藥血清制備技術(shù)中至關(guān)重要的一步，直接影響藥 效的呈現(xiàn)。采血時(shí)間過(guò)早過(guò)晚，不僅不

20、能很好的反映藥效，而且也與 方便實(shí)驗(yàn)操作有關(guān)。因此，通過(guò)實(shí)驗(yàn)摸索出一個(gè)較為準(zhǔn)確而易行的采血時(shí)間是含藥血清制備技術(shù)中的重要一環(huán)。經(jīng)典方法建議，方劑給藥后可設(shè)定4-5個(gè)時(shí)間點(diǎn)采血，觀察藥效的時(shí)效過(guò)程，選擇藥效峰值時(shí) 作為以后實(shí)驗(yàn)的采血時(shí)間。另一方面，許多研究顯示，雖然不同方劑 藥效具有各白不同的時(shí)效過(guò)程，但藥效峰值一般在給藥后0.5-4h之間；各實(shí)驗(yàn)中，給藥后1-2小時(shí)采集的含藥血清均反應(yīng)出藥效。也可 以連續(xù)5個(gè)半衰期給藥達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后采血。（二）口飼給藥劑量的確定實(shí)驗(yàn)顯示，以相當(dāng)于臨床等效劑量的 0.8-10倍口飼給動(dòng)物0.5-2 小時(shí)所采集的含藥血清，在體外進(jìn)行相應(yīng)實(shí)驗(yàn)，能呈現(xiàn)藥理作用?；?/p>

21、 者遵照新藥藥效學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物給藥劑量計(jì)算方法確定給藥劑量。含藥血清的劑量表述也是一個(gè)值得探討的問(wèn)題，這里涉及血清供 體動(dòng)物的口飼給藥量以及體外試驗(yàn)時(shí)的含藥血清稀釋后終濃度量。為了更確切的表示劑量，在敘述結(jié)果時(shí)，應(yīng)說(shuō)明供體動(dòng)物的口飼給藥劑 量以及體外試驗(yàn)時(shí)含藥血清的終濃度或稀釋倍數(shù)，并以g生藥/kg體重/U表示劑量（如以含桂枝湯的大鼠血清對(duì) HSV-1病毒的作用實(shí)驗(yàn) 為例：動(dòng)物口飼給藥量為10g生藥/kg體重，實(shí)驗(yàn)時(shí)所用含藥血清的 終濃度為1:12稀釋?zhuān)瑒t含藥血清的劑量為10/12=0.83g生藥/kg體 重/U,這里U表不是血清在體外系統(tǒng)中終濃度時(shí)的稀釋倍數(shù)。（三）給藥次數(shù)、給藥天數(shù)對(duì)藥效的影響

22、重復(fù)給藥是臨床常用的治療方法，給藥次數(shù)、給藥天數(shù)與含藥血 清的藥效有關(guān)。確定一個(gè)有效而又簡(jiǎn)單易行的給藥方案，有利于血清 藥理學(xué)的推廣和應(yīng)用。研究顯示， 同一劑量一次給藥優(yōu)于分次給藥， 同一劑量多次給藥優(yōu)于單次給藥，多日給藥優(yōu)于一日給藥。分析比較 多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，參照中醫(yī)臨床用藥習(xí)慣，現(xiàn)代藥理學(xué)中關(guān)于血藥濃度 和現(xiàn)有藥動(dòng)學(xué)中半衰期數(shù)值的實(shí)際，為了方便多次給藥后含藥血清的 采集，可每日給藥二次，連續(xù)二天，第三天上午給藥后1-2小時(shí)采血, 以便獲得藥效作用強(qiáng)的含藥血清。（四）采血部位對(duì)含藥血清藥效的影響選擇適當(dāng)?shù)牟裳课皇菫榱俗畲笙薅取⒆罘奖愕孬@得含藥血清， 從一些對(duì)比實(shí)驗(yàn)看，分別從動(dòng)脈、靜脈采血對(duì)藥

23、效似無(wú)明顯影響。如 果藥效物質(zhì)利用、代謝速度快的從動(dòng)靜脈中采集的血清， 在藥效上可 能會(huì)有所差異，由此，能否給我們對(duì)藥物作用維持時(shí)間的認(rèn)識(shí)有所啟 示。另外，從門(mén)靜脈和肝靜脈分別采集含藥血清，比較他們的活性， 能否也可給我們就肝臟對(duì)該藥物代謝的影響有所啟？這些是含藥血 清應(yīng)用研究上應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行的工作。（五）動(dòng)物種屬的差異性通過(guò)對(duì)大鼠、小鼠、兔、犬、豚鼠及正常人血清及含藥血清對(duì)不 同反應(yīng)體系作用的結(jié)果顯示，不同種屬動(dòng)物血清在不同實(shí)驗(yàn)體系尋求 合適的血清添加量（指含藥血清在反應(yīng)體系中的終濃度） 對(duì)正確判斷 實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不可忽視的因素之一，應(yīng)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中予于探討。一般來(lái)說(shuō), 提供含藥血清的動(dòng)物種屬與提供反

24、應(yīng)體系的動(dòng)物種屬越接近，血清的添加量越大。（六）供血的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)采集含藥血清所需動(dòng)物數(shù)應(yīng)遵循動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的一般原則，如大鼠、 小鼠或豚鼠每組動(dòng)物數(shù)應(yīng)不少于 10只，家兔應(yīng)不少于8只，以避免 動(dòng)物個(gè)體差異所致不均勻性?？梢砸粋€(gè)動(dòng)物一份血清，做個(gè)體含藥血 清藥效測(cè)定，亦可將同組個(gè)體血清混合后作為一個(gè)樣本使用。（七）含藥血清的保存含藥血清經(jīng)低溫保存后是否對(duì)藥效產(chǎn)生影響與所觀察的藥效指標(biāo)和藥物本身有效成分的穩(wěn)定性有關(guān)。如抗病毒實(shí)驗(yàn)，血清可在4C保存5天或-20 C保存二月，藥效不受影響；在一些生化反應(yīng)體系中，含藥血清-20 C保存二月后，有的對(duì)藥效無(wú)明顯影響，有的對(duì)藥效能產(chǎn)生明顯影響，因此以采用新鮮血清為

25、好。含藥血清藥理方法體外反應(yīng)體系確定的規(guī)范化技術(shù)（一）嚴(yán)格執(zhí)行正常血清對(duì)照含藥血清中除藥物的成分、藥物的代謝產(chǎn)物和藥物引起的反應(yīng)產(chǎn) 物外，還有血清中固有的生物活性成分和其他的干擾因素， 能對(duì)體外 系統(tǒng)起作用。為排除干擾，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)設(shè)正常血清對(duì)照組。正常血清 可在給藥前采集或另設(shè)一組動(dòng)物采集， 含藥血清的作用強(qiáng)度，應(yīng)與正 常血清比較而確定。（二）反應(yīng)體系中含藥血清添加量（即反應(yīng)體系中含藥血清的終 濃度）含藥血清在體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，一般常和反應(yīng)液或培養(yǎng)液共同培 育。由于種系不同，正常血清對(duì)反應(yīng)對(duì)象（細(xì)胞、酶等）會(huì)產(chǎn)生程度 不同的影響，就需要有合適的血清添加量。一般而言，在一定范圍內(nèi) 含藥血清的添加量

26、與藥效物質(zhì)的含量成正比。 與藥效強(qiáng)度成正比。但 達(dá)到足夠添加量后，繼續(xù)增加含藥血清用量，或引起藥效強(qiáng)度的降低 或引起反應(yīng)系統(tǒng)損傷。從現(xiàn)有研究結(jié)果可見(jiàn)，反應(yīng)體系中含藥血清終 濃度一般在20源以下較宜。增加口飼給藥劑量后，含藥血清的添加 量應(yīng)相應(yīng)減少。（三）血清凍干技術(shù)的應(yīng)用為了增加血清的添加量以更好的反映藥效， 可將含藥血清制成凍 干粉，使用時(shí)以維持液溶化。含藥血清制成凍干粉后可顯著增加反應(yīng) 體系中血清添加量。（四）含藥血清的滅活正常血清中含有大量生物活性物質(zhì)，它們?cè)诤幯宓姆磻?yīng)體系 是否產(chǎn)生干擾，血清經(jīng)56 C 30min滅活后是否可排除這些干擾，而 且在排除干擾的同時(shí)對(duì)藥效有否影響，值得關(guān)

27、注。研究結(jié)果提示，血 清滅活后對(duì)藥效的影響與選擇的反應(yīng)體系及正常血清是否含有相關(guān) 的活性物質(zhì)有關(guān)。在目前一些生化反應(yīng)體系中，血清對(duì)藥效似未產(chǎn)生 顯著影響。在細(xì)胞培養(yǎng)的抗病毒實(shí)驗(yàn)中，由于正常血清中含有補(bǔ)體等 生物活性物質(zhì)，可以較強(qiáng)干擾細(xì)胞和病毒的生長(zhǎng)和繁殖， 滅活后使這 些作用下降約50%含藥血清中既有上述的生物活性物質(zhì)又有藥物的 有效成分，滅活后排除了正常血清中的生物活性物質(zhì)， 雖然使藥物作 用強(qiáng)度下降，但可體現(xiàn)藥物本身作用，因此， 在體外進(jìn)行抗病毒實(shí)驗(yàn) 時(shí)應(yīng)米用滅活血清。（五）預(yù)處理方法對(duì)血清活性的影響有些體外實(shí)驗(yàn)和分析研究中需要去除血清中的蛋白， 但血液中的 藥物成分一部分是與血漿蛋白結(jié)合

28、而存在， 去蛋白的不同預(yù)處理后對(duì) 藥效產(chǎn)生何種影響值得關(guān)注。以抗Ach收縮支氣管平滑肌為例，可見(jiàn) 正常血清經(jīng)乙醇、丙酮、甲殼素處理去蛋白后，顯著降低其作用，而 56C 30分鐘使蛋白變性則無(wú)明顯影響。也有研究發(fā)現(xiàn)，含小青龍湯 血清經(jīng)丙酮處理后對(duì)支氣管平滑肌抗 His和Ach的抑制無(wú)明顯影響。 血清去蛋白后，對(duì)特定的生理生化、效能指標(biāo)產(chǎn)生不同的影響，其重 要因素是這些生物活性物質(zhì)和藥效物質(zhì)同血清蛋白的結(jié)合能力。我們似乎有可能用含藥血清去蛋白前后藥效的變化，來(lái)估算有效成分不單一、不清楚的中藥復(fù)方藥效成分的蛋白結(jié)合率。含藥血清藥理的應(yīng)用研究一.含藥血清藥物動(dòng)力學(xué)研究已有的實(shí)驗(yàn)工作表明，中藥復(fù)方含有多

29、種有效成分，用通常的檢 測(cè)某一種成分的血藥濃度經(jīng)時(shí)變化，不能代表全方的藥代動(dòng)力學(xué)參 數(shù)，多個(gè)成分之間還會(huì)發(fā)生相互影響。用含藥血清研究他們對(duì)藥效的 經(jīng)時(shí)變化，有可能對(duì)我們了解中藥復(fù)方作用的動(dòng)力學(xué)過(guò)程， 指導(dǎo)臨床 給藥方案，了解中藥復(fù)方的作用特點(diǎn)有所裨益。 通過(guò)當(dāng)歸補(bǔ)血湯和大 川萼丸含藥血清對(duì)不同藥效的動(dòng)力學(xué)研究過(guò)程可發(fā)現(xiàn)，同一復(fù)方不同藥效間的效應(yīng)消除半衰期數(shù)值比較接近， 效應(yīng)達(dá)峰時(shí)間彼此間有相當(dāng) 差異。已知消除半衰期是動(dòng)力學(xué)參數(shù)中重要的數(shù)值， 對(duì)制定給藥方案 有很大影響，是否有可能通過(guò)對(duì)該方某一藥效的效應(yīng)半衰期的估測(cè)， 大體可作為確定給藥方案的參考； 達(dá)峰時(shí)間的差異，如與血清藥物化 學(xué)相結(jié)合，能

30、否作為研究確定不同藥效活性成分的參考，也是以后值得研究的內(nèi)容。此外，目前在中藥復(fù)方藥物動(dòng)力學(xué)研究中，還常采用 以整體動(dòng)物藥理效應(yīng)為測(cè)試指標(biāo)的藥理效應(yīng)法和以整體動(dòng)物毒理效 應(yīng)為測(cè)試指標(biāo)的藥物累積法。但以中藥血清藥理方法研究中藥復(fù)方藥 物動(dòng)力學(xué)有以下特點(diǎn)：1.由于采用體外實(shí)驗(yàn)方法，可以進(jìn)行大量的藥 理效應(yīng)試驗(yàn)觀察，較整體動(dòng)物易于控制。2.同一批試驗(yàn)，分離出的含 藥血清可以進(jìn)行多項(xiàng)藥理效應(yīng)試驗(yàn)指標(biāo)觀察， 求出多個(gè)藥理效應(yīng)的藥 動(dòng)學(xué)參數(shù)。3.如同步檢測(cè)含藥血清中的某一成分的血藥濃度， 可以分 析它與哪一項(xiàng)藥理效應(yīng)指標(biāo)有關(guān)聯(lián)。 需要注意的是，在時(shí)間一效應(yīng)實(shí) 驗(yàn)中所用劑量過(guò)小或過(guò)大，可能會(huì)干擾藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的測(cè)定，加之藥理 效應(yīng)法較血藥濃度法測(cè)定誤差大，建議采用35種有效劑量（其中一 種相當(dāng)于臨床等效劑量）平行地進(jìn)行時(shí)效測(cè)定與比較。二. 中藥血清藥化學(xué)研究“中藥血清藥化學(xué)”和“中藥血清藥理學(xué)”是 80年代末由日本 學(xué)者田代真一同時(shí)提出的，但發(fā)展速度較后者緩慢。除可見(jiàn)沿用傳統(tǒng) 經(jīng)典的血藥濃度測(cè)定外，尚無(wú)獨(dú)具特征的研究新方法和思路。 有人提 出以構(gòu)建血清指紋圖方法來(lái)開(kāi)展研究，但相關(guān)具體研究報(bào)道較少。由于含藥血清中的化學(xué)成分與含藥血清的藥理效應(yīng)密切相關(guān)，因而中藥血清藥化學(xué)與中藥血清藥理協(xié)同研究， 可能有助于研究的開(kāi)展和深 入。采用建立血清指