實(shí)驗(yàn)一X染色質(zhì)標(biāo)本制備與觀察ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 X染色質(zhì)標(biāo)本制備與察看染色質(zhì)標(biāo)本制備與察看 目的要求目的要求1掌握掌握X染色質(zhì)標(biāo)本制備方法及其原理。染色質(zhì)標(biāo)本制備方法及其原理。2掌握掌握X染色質(zhì)的形狀特征及其臨床意義。染色質(zhì)的形狀特征及其臨床意義。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理一個(gè)個(gè)體不論其細(xì)胞中有幾條一個(gè)個(gè)體不論其細(xì)胞中有幾條X X染色體，均只染色體，均只需一條具有轉(zhuǎn)錄活性，其他的需一條具有轉(zhuǎn)錄活性，其他的X X染色體均失活染色體均失活構(gòu)成異固縮的構(gòu)成異固縮的X X染色質(zhì)。正常女性間期細(xì)胞核染色質(zhì)。正常女性間期細(xì)胞核中中X X染色質(zhì)陽性率普通約為染色質(zhì)陽性率普通約為1010一一3030，有的，有的可高達(dá)可高達(dá)5050以上。其出現(xiàn)率的高低與

2、個(gè)體不同以上。其出現(xiàn)率的高低與個(gè)體不同生理形狀、染色方法、染色技術(shù)以及生理形狀、染色方法、染色技術(shù)以及X X染色體染色體在細(xì)胞核中的位置不同有關(guān)。在男性間期細(xì)胞在細(xì)胞核中的位置不同有關(guān)。在男性間期細(xì)胞核中那么平均低于核中那么平均低于1 1。普通檢查。普通檢查X X染色質(zhì)確定染色質(zhì)確定性別時(shí)，察看性別時(shí)，察看200200個(gè)細(xì)胞，個(gè)細(xì)胞，X X染色質(zhì)出現(xiàn)染色質(zhì)出現(xiàn)5 5以以上者為女性。如今，上者為女性。如今，X X染色質(zhì)檢查已廣泛運(yùn)用染色質(zhì)檢查已廣泛運(yùn)用于臨床，作為性別測定和性染色體數(shù)目異常的于臨床，作為性別測定和性染色體數(shù)目異常的一種輔助診斷方法。一種輔助診斷方法。實(shí)驗(yàn)用品實(shí)驗(yàn)用品(1)器材：顯

3、微鏡、載玻片、牙簽。器材：顯微鏡、載玻片、牙簽。 (2)試劑試劑 ：Giemsa染液、染液、0.2甲苯胺藍(lán)甲苯胺藍(lán)染液染液 、5mol/L HCl溶液溶液 、95乙醇、乙醇、pH 6.8 PBS (3)資料：人口腔黏膜上皮細(xì)胞。資料：人口腔黏膜上皮細(xì)胞。 方法與步驟方法與步驟一 Giemsa染色法(1)取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細(xì)胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。(2)固定：將帶有標(biāo)本的載玻片置入裝有新配置的甲醇-冰醋酸固定液3：1的染色缸中固定10min后取出，空氣枯燥。(3)水解：玻片標(biāo)本置于5mol/L

4、 HCl中，室溫水解20 min。用新穎蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。(4)染色：置Giemsa染液中染色10min ，蒸餾水沖洗后晾干，酒精燈上過火脫水，以二甲苯透明(1-2min)，樹膠封片。 二甲苯胺藍(lán)染色法 (1)取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細(xì)胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。(2)固定：用95%乙醇固定30分鐘。(3)水解：玻片標(biāo)本置于5mol/L HCl中，室溫水解20 min。用新穎蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。(4)染色：0.2甲苯胺藍(lán)染液染色510min。(5)鏡檢：自來水漂洗

5、，空氣枯燥后油鏡下察看。 察看與結(jié)果察看與結(jié)果 高倍鏡下可見許多染成藍(lán)色的細(xì)胞核，高倍鏡下可見許多染成藍(lán)色的細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)不著色或不明顯。選擇核較大，細(xì)胞質(zhì)不著色或不明顯。選擇核較大，染色明晰，輪廓完好，核質(zhì)呈均勻細(xì)網(wǎng)染色明晰，輪廓完好，核質(zhì)呈均勻細(xì)網(wǎng)狀的細(xì)胞進(jìn)展察看。找到核膜內(nèi)側(cè)緣有狀的細(xì)胞進(jìn)展察看。找到核膜內(nèi)側(cè)緣有藍(lán)色濃染小體的細(xì)胞核后，換油鏡進(jìn)一藍(lán)色濃染小體的細(xì)胞核后，換油鏡進(jìn)一步察看。油鏡下步察看。油鏡下X X染色質(zhì)為藍(lán)色平凸形、染色質(zhì)為藍(lán)色平凸形、三角形、扁平形的濃染小體。三角形、扁平形的濃染小體。 本卷須知本卷須知(1)取材前要漱口，以免口腔中的雜質(zhì)影取材前要漱口，以免口腔中的雜質(zhì)影響察看效果。響察看效果。 (2)HCl水解要充分，使水解要充分，使X染色質(zhì)易于顯染色質(zhì)易于顯現(xiàn)?，F(xiàn)。 (3)臨床檢查時(shí)要選擇形狀好的細(xì)胞察看，臨床檢查時(shí)要選擇形狀好的細(xì)胞察看，計(jì)算計(jì)算100個(gè)細(xì)胞中個(gè)細(xì)胞中X染色質(zhì)出現(xiàn)的頻率。染色質(zhì)出現(xiàn)的頻率。 作業(yè)作業(yè)書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，繪制書寫實(shí)驗(yàn)