肺炎病原學(xué)診斷PPT課件

1、社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué)社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué) 病毒病原 合胞病毒、腺病毒 流感病毒A和B 副流感病毒1、2、3 偏肺病毒、鼻病毒 細(xì)菌病原 肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌 金黃色葡萄球菌 軍團(tuán)菌屬、結(jié)核桿菌等第1頁/共35頁社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué)社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué) 非典型性病原 肺炎支原體 肺炎衣原體 沙眼衣原體 病毒感染為25 % 35%，細(xì)菌感染為2154 % ,非典型病原如支原體、衣原體感染為7 % ,兩種以上病原混合11%。第2頁/共35頁不同年齡組兒童的常見微生物病原不同年齡組兒童的常見微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)出生至20 日B 族鏈球菌 早發(fā)型敗血癥的肺部表現(xiàn)。G- 腸道細(xì)菌 常為院

2、內(nèi)感染,經(jīng)常在生后1 周才發(fā)現(xiàn)。巨細(xì)胞病毒 全身巨細(xì)胞病毒感染的肺部表現(xiàn),伴先天性感染的其他體征存在。3 周至3 月 沙眼衣原體 由母體生殖道感染,出現(xiàn)發(fā)熱及進(jìn)展性、亞急性間質(zhì)性肺炎。RSV 發(fā)病的高峰在27 月齡,常以喘息為特點(diǎn),在各季或早春多見。副流感病毒3 同RSV 感染非常相似,在嬰兒晚期影響很小,在冬季不流行。肺炎鏈球菌 最常見的細(xì)菌性肺炎病原。嬰幼兒年齡組 百日咳桿菌 主要引起支氣管炎,但在嚴(yán)重病例也引起肺炎。金黃色葡萄球菌 可引起重癥肺炎常合并滲出。第3頁/共35頁不同年齡組兒童的常見微生物病不同年齡組兒童的常見微生物病原原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)4 月至4歲RSV、腺病毒、副流

3、感流感病毒、鼻病毒是引起年幼兒肺炎的最常見病因。 肺炎鏈球菌 最常引起大葉性肺炎,但也可引起其他形式的肺炎。流感嗜血桿菌其他血清型和不定型株在發(fā)展中國家可引起肺炎肺炎支原體 在這一年齡組中的年長兒中主要引起肺炎結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染高度流行地區(qū)是肺炎的重要病因。第4頁/共35頁不同年齡組兒童的常見微生物病原不同年齡組兒童的常見微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)5 至15 歲 肺炎支原體 這一年齡組兒童肺炎的主要病因肺炎衣原體 可能是這一年齡組年長兒童肺炎的一個(gè)重要病因肺炎鏈球菌 大葉性肺炎的最主要病原,但可能也引起其他形式肺炎。結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染的高發(fā)地區(qū)是肺炎的常見病因,并可能在

4、青春期和妊娠期病情惡化 第5頁/共35頁兒童兒童CAP 病原學(xué)診斷方法病原學(xué)診斷方法 病原菌分離培養(yǎng) 免疫學(xué)方法檢測(cè)病原的特異性抗原抗體 分子生物學(xué)診斷方法第6頁/共35頁病原培養(yǎng)分離病原培養(yǎng)分離 標(biāo)本種類 血液 胸水 支氣管肺泡灌洗 痰液，咽、鼻分泌物第7頁/共35頁血液培養(yǎng)血液培養(yǎng) 肺炎伴發(fā)菌血癥機(jī)會(huì)510，重癥和免疫抑制患者則較高。 血標(biāo)本采集方便、安全，且污染機(jī)會(huì)少、特異性高，它們?cè)诓≡瓕W(xué)診斷上具有特殊意義。 重癥特別是免疫抑制宿主肺炎，應(yīng)盡早、多次采血作細(xì)菌和真菌培養(yǎng)。 第8頁/共35頁血液培養(yǎng)血液培養(yǎng) 血培養(yǎng)標(biāo)本要求 采集必須在使用抗菌藥物之前 采用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀配備的兒童專用血培

5、養(yǎng)瓶 每次2瓶，在不同部位采血 采血量，兒童3-5ml，嬰幼兒1-2ml。 采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送往實(shí)驗(yàn)室第9頁/共35頁采血份數(shù)與陽性率之間的關(guān)系采血份數(shù)與陽性率之間的關(guān)系Blood Culture Positivity Rates91.699.399.6868890929496981001st2nd3rdCulture SetsBlood Cultures Positive (% )Weinstein et al., 1983第10頁/共35頁采血量與陽性率的關(guān)系采血量與陽性率的關(guān)系第11頁/共35頁胸水胸水 對(duì)大多數(shù)伴有胸腔積液的肺炎，無論確診與否，應(yīng)該行胸腔穿刺術(shù)采集標(biāo)本。胸腔積液或

6、膿胸均應(yīng)做厭氧培養(yǎng)。 胸水是無污染標(biāo)本，不論被檢測(cè)出的微生物數(shù)量多少，都被認(rèn)為是病原體。 細(xì)胞計(jì)數(shù)和pH測(cè)定，腺苷脫氨酶（ADA）測(cè)定對(duì)鑒別結(jié)核胸膜炎具有較好價(jià)值。 胸水的抗原檢測(cè)用于疾病診斷，如流感嗜血桿菌b型、肺炎鏈球菌、軍團(tuán)菌或新型隱球菌。 第12頁/共35頁痰標(biāo)本痰標(biāo)本 痰培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、直接鏡檢、細(xì)胞學(xué)篩選、定量或半定量培養(yǎng)以及所發(fā)現(xiàn)的微生物的致病力等加以解釋。 可用于普通細(xì)菌、分枝桿菌、真菌的檢測(cè)，但不適于檢測(cè)厭氧菌。 在無菌條件下，用負(fù)壓吸引法吸取患兒會(huì)咽部以下的下呼吸道的分泌物，置滅菌三通管內(nèi)。第13頁/共35頁痰標(biāo)本痰標(biāo)本 痰涂片鏡檢每低倍鏡視野25個(gè)中性粒細(xì)胞。 痰

7、標(biāo)本也可以用直接免疫熒光法快速檢測(cè)出下呼吸道的病毒感染。第14頁/共35頁支氣管肺泡灌洗液支氣管肺泡灌洗液 對(duì)于不能咳出或誘導(dǎo)出足夠的痰液患者，支氣管肺泡灌洗液可作為獲取標(biāo)本進(jìn)行病原菌培養(yǎng)的一種方法。 支氣管肺泡灌洗液在檢測(cè)需氧菌、真菌、軍團(tuán)菌和分枝桿菌等感染時(shí)可提高陽性檢出率。有研究表明特異性高達(dá)89100%。 支氣管肺泡灌洗液經(jīng)低速在玻片上制成細(xì)胞標(biāo)本涂片，可以用直接免疫熒光法快速檢測(cè)出下呼吸道的病毒感染的8種病毒。 鱗狀上皮細(xì)胞1中性粒細(xì)胞80為合格標(biāo)本。第15頁/共35頁標(biāo)本采集和送檢標(biāo)本采集和送檢 痰和支氣管肺泡灌洗液必須在使用抗菌藥物之前或停藥1天后留取標(biāo)本。標(biāo)本采集后1h內(nèi)必須立

8、即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理。室溫下延擱2h會(huì)降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的分離率，銅綠假單胞菌等革蘭陰性桿菌則過度生長。第16頁/共35頁我院呼吸道分離的主要細(xì)菌我院呼吸道分離的主要細(xì)菌（2008-2009） 肺炎鏈球菌869株（14 % ） 金黃色葡萄球菌692株（11%） 流感嗜血桿菌662株（10%） 肺炎支原體878株（16.3%）第17頁/共35頁細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài)細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài) 肺炎鏈球菌 、金黃色葡萄球菌 第18頁/共35頁細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài)細(xì)菌培養(yǎng)菌落形態(tài)第19頁/共35頁MP培養(yǎng)培養(yǎng)第20頁/共35頁MP培養(yǎng)培養(yǎng)第21頁/共35頁MFA檢測(cè)呼吸道病毒檢測(cè)呼吸道病毒第22頁/共35

9、頁MFA法檢測(cè)呼吸道病毒法檢測(cè)呼吸道病毒第23頁/共35頁病原微生物的抗體檢測(cè)病原微生物的抗體檢測(cè) 血清學(xué)檢查通常用于檢測(cè)非典型病原體如肺炎支原體（MP）、肺炎衣原體（CP）、軍團(tuán)菌。 常用方法有間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、放射免疫法（RIA）、顆粒凝集試驗(yàn)（PA）等。 第24頁/共35頁MP血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查 ELISA法 檢測(cè)MP-IgM、 MP-IgG 定性或定量 PA法 檢測(cè)MP-IgM 確診MP急性感染則應(yīng)強(qiáng)調(diào)雙份血清(間隔2周)恢復(fù)期抗體滴度上升4倍或下降至原來的1/4或抗體滴度持續(xù)1:160。 第25頁/共35頁CP血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查 微量免疫

10、熒光法(MIF)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 抗體檢測(cè)3種：IgM,IgG和IgA 初次感染(原發(fā)感染)時(shí)，IgM于發(fā)病后3周出現(xiàn)，IgG于發(fā)病后6一8周出現(xiàn)，而IgA反應(yīng)較弱或不出現(xiàn)。 再次感染(重復(fù)感染)時(shí)，IgG常在1一2周內(nèi)出現(xiàn)，且效價(jià)可以很高，但往往沒有IgM出現(xiàn)或其效價(jià)很低。第26頁/共35頁軍團(tuán)菌血清抗體檢測(cè)軍團(tuán)菌血清抗體檢測(cè) 尿軍團(tuán)菌抗原檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病人痰或尿液的嗜尿軍團(tuán)菌抗原檢測(cè)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病人痰或尿液的嗜肺軍團(tuán)菌抗原。肺軍團(tuán)菌抗原。 血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查: 間接免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)特異性間接免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)特異性IgM

11、抗體，如效價(jià)抗體，如效價(jià)1：128或雙份血清效價(jià)呈或雙份血清效價(jià)呈4倍以上升高可倍以上升高可做出確定診斷。做出確定診斷。第27頁/共35頁軍團(tuán)菌檢測(cè)軍團(tuán)菌檢測(cè)分類分類檢材檢材方法方法注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)細(xì)菌學(xué)基因?qū)W (PCR)血清學(xué)尿抗原檢測(cè)尿抗原檢測(cè)痰培養(yǎng)分泌物支氣管肺泡灌洗液陽性率低下陽性率低下同上Leg基因mip 基因軍團(tuán)菌特異性嗜肺軍團(tuán)菌特異性血清微量凝集IFA, DFA雙份血清效價(jià)呈4倍增長單份血清效價(jià) 256尿液ImmunochlomatographyELISARIA嗜肺軍團(tuán)菌嗜肺軍團(tuán)菌1型特異性型特異性發(fā)病60天內(nèi)，但免疫缺陷病人可延長第28頁/共35頁IFA檢測(cè)呼吸道病原抗體檢測(cè)呼

12、吸道病原抗體第29頁/共35頁分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù) 優(yōu)點(diǎn)直接從臨床標(biāo)本中快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出包括苛養(yǎng)菌在內(nèi)的細(xì)菌.檢測(cè)耐藥基因?qū)δ退幘M(jìn)行流行病學(xué)研究PCR方法 方法隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性分析限制性片段長度多態(tài)性分析PCR多重PCR PFGE第30頁/共35頁MP分子生物學(xué)檢測(cè)分子生物學(xué)檢測(cè) PCR檢測(cè)MPP1粘附蛋白：根據(jù)肺炎支原體P1粘附蛋白設(shè)計(jì)PCR引物： P1: 5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3 P2: 5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3 擴(kuò)增產(chǎn)物209bp第31頁/共35頁雙重雙重PCR簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)軍團(tuán)菌簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)軍團(tuán)菌 根據(jù)軍團(tuán)菌16SrRNA基因和mip基因序列設(shè)計(jì)合成引物，可以擴(kuò)增