HPLC中的手性固定相

1、HPLC中的手性固定相 較之GC、SFC、TLC、CE、CEC，HPLC是最為重要的手段，尤其是在制備級(jí)別。 過去20年，是HPLC手性固定相快速發(fā)展的時(shí)期。迄今，已經(jīng)商品化的HPLC手性固定相約有110余種。 通常，手性固定相的制備都較為一致，即選擇一個(gè)單一對(duì)映體固定化在色譜基質(zhì)上，當(dāng)被分析物通過時(shí)，因?yàn)榻Y(jié)合后的穩(wěn)定性或保留性的差異，而實(shí)現(xiàn)分離。 手性識(shí)別與對(duì)映體的分離是自然界及技術(shù)領(lǐng)域的基本現(xiàn)象。手性固定相的分子識(shí)別機(jī)理與對(duì)應(yīng)的選擇性結(jié)構(gòu)，一直受到研究者的關(guān)注。但是，其內(nèi)在的分子機(jī)理至今仍未得到闡明。 三點(diǎn)作用模型，仍然是解釋分子識(shí)別機(jī)理時(shí)使用最多的理論。 三點(diǎn)作用原理在理論和應(yīng)用上也有了

2、一些新的觀念，如：具有類似于受體選擇性的手性固定相，可提供更為有力的分子水平上的主-客體聯(lián)合相互作用；對(duì)來源于自然界的手性選擇固定相，其手性識(shí)別能力大多來源于氫鍵，不僅涉及到分子結(jié)構(gòu)的問題，相關(guān)氫鍵的能量信息也起重要作用。 常見商業(yè)來源的HPLC中手性固定相的主要結(jié)構(gòu)、識(shí)別機(jī)理、限制與應(yīng)用，將是本節(jié)主要內(nèi)容。 經(jīng)典的手性固定相通常被分為配基交換、環(huán)糊精、Pirkle型、合成多聚物、多糖、蛋白質(zhì)、大環(huán)抗生素和冠醚類。除此之外，還有許多其他的具有潛在發(fā)展前景的手性固定相，但還未達(dá)到前述的商業(yè)化程度，如環(huán)果聚糖、金屬復(fù)合物、硼包含物等。 色譜手性分離技術(shù)的合理設(shè)計(jì)，以及基于高通量篩選與計(jì)算化學(xué)的新技

3、術(shù)在HPLC手性固定相研制中，極有可能成為未來發(fā)展的方向。 現(xiàn)有的經(jīng)典手性固定相，已可滿足小分子藥物分析領(lǐng)域內(nèi)的多數(shù)手性分離的需要，主要包括藥物分析與對(duì)映體拆分制備等。 根據(jù)手性固定相的不同來源，可以分為自然來源的、半合成的、全合成等3大類。 配體交換型手性固定相：配體交換型手性固定相： 1960年代末，最早采用色譜方法對(duì)消旋體進(jìn)行拆分，即為使用一種配體交換型的手性固定相分離氨基酸對(duì)映體。 將脯氨酸固定化在聚苯乙烯載體上，在流動(dòng)相中加入Cu（II），由于脯氨酸、金屬離子及被分析的氨基酸間非對(duì)映的三重復(fù)合結(jié)構(gòu)，被分析氨基酸被吸附在中心離子的配位層。 通過對(duì)該手性分離現(xiàn)象的研究，后來陸續(xù)研制出基于

4、硅膠載體的固定相，以及連接其他類型手性固定相的多聚物類型的色譜柱。由環(huán)氧樹脂作用的（L）脯氨酸結(jié)合硅膠是最早上市的手性鍵合固定相（Chiral Procu，Serva，Heidelberg，Germany）。 配體交換型手性固定相：配體交換型手性固定相： 配體交換型手性固定相：配體交換型手性固定相： 配體結(jié)合型的手性固定相主要用于生物相關(guān)性物質(zhì)的手性分離，如氨基酸和羥基酸。只有那些具有2個(gè)或以上可供螯合的基團(tuán)的對(duì)映體，才能在這一類固定相上分離。 常見的金屬離子，有Cu（II）、Zn（II）、Ni（II）等，其中以Cu（II）為多用，Zn（II）分離含羥基的氨基酸效果最好。 如分子結(jié)構(gòu)中含有芳香

5、基團(tuán)或雜原子時(shí)，分離情況會(huì)有所不同。 環(huán)糊精型手性固定相：環(huán)糊精型手性固定相： 環(huán)糊精從1970年代開始被嘗試用于手性分離。 環(huán)糊精是一類由環(huán)形低聚糖構(gòu)成的杯狀化合物，通常由淀粉經(jīng)環(huán)糊精轉(zhuǎn)糖基酶催化得來，含有6（-環(huán)糊精）、7（-環(huán)糊精）或8（-環(huán)糊精）個(gè)經(jīng)-（1,4）-糖苷鍵連接而得到的吡喃型葡萄糖單位。 環(huán)糊精杯狀結(jié)構(gòu)的腔內(nèi)部，不含有羥基，呈疏水性，而杯狀的外沿則是親水性的。 環(huán)糊精型手性固定相：環(huán)糊精型手性固定相： 環(huán)糊精類的手性識(shí)別能力，不僅與外沿的親水性基團(tuán)有關(guān)，而且與被分析物的疏水性基團(tuán)（尤其是芳香疏水基團(tuán)）被杯腔包含有關(guān)。 在環(huán)糊精杯腔外沿的C-2、C-3上的羥基，差異性產(chǎn)生氫鍵

6、、偶極-偶極作用，也是手性識(shí)別的因素。通過對(duì)羥基進(jìn)行化學(xué)改性，可以增強(qiáng)環(huán)糊精的手性分離能力。 -環(huán)糊精是HPLC中使用最多的手性分離物質(zhì)。 環(huán)糊精型手性固定相：環(huán)糊精型手性固定相： 環(huán)糊精型手性固定相：環(huán)糊精型手性固定相： 大多數(shù)環(huán)糊精手性固定相只適用于反相色譜，分析極性有機(jī)化合物。 部分改性后的環(huán)糊精手性固定相可以被用于正相色譜，如Cyclobond I RN或SN，因其可作為電子供體，具有電子接受能力的被分析物可以正相色譜的方式保留在這種手性固定相上。 環(huán)糊精型手性固定相：環(huán)糊精型手性固定相： 多類化合物通過環(huán)糊精得以成功完成手性分離，如-阻斷劑、生物堿、羧酸及其他中性分子等。 -阻斷劑類

7、藥物，可以直接在天然-環(huán)糊精或-環(huán)糊精固定相上分離。 將環(huán)糊精進(jìn)行磺基化后，可以利用其多重相互作用（如疏水性或靜電力），分離中性物質(zhì)、陰離子或陽離子，該類手性固定相在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用非常廣泛。 氨基甲?；蚨蓟沫h(huán)糊精固定相，用于分離環(huán)己烯巴比妥、氯苯吡胺（撲爾敏）等 Pirkle型手性固定相：型手性固定相： Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle課題組研制。 該類手性固定相是將小分子手性選擇物質(zhì)鍵合到固體載體（如硅膠）上得到，通常被稱作Pirkle型、刷型或電子給予或電子接受型手性固定相。 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基質(zhì)的表面，容易接觸到被分析物質(zhì)。在被分離物

8、與固定相間的主要相互作用是-相互作用，同時(shí)也存在其他類型的相互作用，如氫鍵、偶極-偶極作用、空間位阻等。 Pirkle型手性固定相：型手性固定相： Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirkle課題組研制。該類手性固定相是將小分子手性選擇物質(zhì)鍵合到固體載體（如硅膠）上得到，通常被稱作Pirkle型、刷型或電子給予或電子接受型手性固定相。 刷型固定相的手性分子主要分布在惰性基質(zhì)的表面，容易接觸到被分析物質(zhì)。在被分離物與固定相間的主要相互作用是-相互作用，同時(shí)也存在其他類型的相互作用，如氫鍵、偶極-偶極作用、空間位阻等。 由于良好的載樣能力，Pirkle型固定相非常適用于臨床前少量藥物

9、的HPLC手性分離制備。 Pirkle型手性固定相：型手性固定相： 由于Pirkle型固定相的主要相互作用是-相互作用，因而其主要用于分離含芳香基團(tuán)的對(duì)映體。 Pirkle型固定相大都適用于正相HPLC。 大多Pirkle型固定相用于分離氨基酸、氨基醇、胺類及某些酸性手性化合物時(shí)，可得到較好的拆分能力。 人工合成多聚體型手性固定相人工合成多聚體型手性固定相： 通過模仿天然多聚物的手性識(shí)別原理，某些人工合成的化學(xué)物質(zhì)也成功具備了天然多聚物的手性識(shí)別能力。人工合成多聚物具有高柱容量、高柱效和對(duì)流動(dòng)相的廣泛適應(yīng)性等優(yōu)點(diǎn)。 有3類不同的多聚物被使用，分別是加聚物、縮聚物和交聯(lián)聚合物。螺旋狀聚丙烯酸酯、

10、聚丙烯酰胺和聚甲基丙烯酰胺、聚烯烴、聚苯乙烯衍生物、聚乙烯基醚、聚醚等都曾被用于手性分析。 基于分子印跡技術(shù)得到的采用模板聚合方式的交聯(lián)膠類，因?yàn)槠渌哂械闹T多優(yōu)點(diǎn)，如易于制備、易于擴(kuò)展、低成本、穩(wěn)定性和相對(duì)于溶劑的廣泛適用性，而尤其受人關(guān)注。 人工合成多聚體型手性固定相人工合成多聚體型手性固定相： 通過加聚反應(yīng)制備的含手性基團(tuán)的線性聚合單螺旋聚丙烯酸酯和聚（甲基）丙烯酰胺，是這類手性固定相的主要代表，最早的該類手性固定相是1979年合成的單螺旋三苯甲基-甲基丙烯酸酯。 螺旋形是該類固定相產(chǎn)生手性識(shí)別能力的主要原因，碳水化合物、醚類、胺類、鹵化物和有機(jī)含磷化合物都有在該類固定相上分離的成功例子

11、。 人工合成多聚體型手性固定相人工合成多聚體型手性固定相： 人工合成多聚體型手性固定相人工合成多聚體型手性固定相： 通過交聯(lián)聚合凝膠得到的具有手性識(shí)別能力空洞的分子印跡手性固定相，最早見于1972年。 分子印跡多聚物的制備，常被分為2部分（功能性單體的聚合反應(yīng)和圍繞印跡分子的交聯(lián)單體聚合反應(yīng)，微粒的磨碎及被印跡分子的提?。?。最被廣泛使用的功能性單體是甲基丙烯酸，而最普遍使用的交聯(lián)單體是乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）。 分子印跡聚合物用作手性固定相還面臨著制備出一致性、均勻性和穩(wěn)定性固定相顆粒方面的諸多問題，而且該類固定相還存在傳質(zhì)阻力大而導(dǎo)致的分離效能問題。 多糖類手性固定相多糖類手性固定相

12、： 該類手性固定相可以通過連接各種取代基團(tuán)到羥基上，而得到各種不同手性識(shí)別能力的HPLC固定相。 該類物質(zhì)的手性識(shí)別能力，被歸因到具有手性的碳水化合物單體及其很長的螺旋形二級(jí)結(jié)構(gòu)。 多糖含有眾多的可能作用位點(diǎn)，因而可用于分析種類眾多的待測物。多糖使用非常廣泛，在所有手性固定相中，其可分離物質(zhì)的種類僅次于蛋白質(zhì)，但其載樣量遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)類固定相。 多糖類手性固定相多糖類手性固定相： 在2003年統(tǒng)計(jì)的文獻(xiàn)中，85%的手性HPLC使用多糖類手性固定相；而2005年的文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)中，90%的手性HPLC固定相為多糖類。 大約200種不同的基于纖維素、直鏈淀粉、幾丁質(zhì)、殼聚糖、半乳糖胺、凝乳、右旋糖酐、木聚

13、糖和菊糖等的衍生物被用于制備具有手性識(shí)別能力的HPLC固定相。纖維素和直鏈淀粉衍生物，體現(xiàn)了更高的手性識(shí)別能力，尤其是苯基氨基甲酸酯和安息香酸酯類衍生物。 1970年，微晶纖維素三醋酸酯成為第一個(gè)被用于實(shí)踐的多糖類手性固定相，并在1984年采用表面涂覆在大孔二氧化硅基質(zhì)上的方式，制備了首個(gè)商品化多糖類手性固定相。 多糖類手性固定相多糖類手性固定相： 蛋白質(zhì)類手性固定相蛋白質(zhì)類手性固定相： 用于手性分析的蛋白質(zhì)，通常都來源于自然界。由于氨基酸的排列順序和糖基化程度的不同，蛋白質(zhì)具有不同的三維結(jié)構(gòu)，并在三維結(jié)構(gòu)的不同位點(diǎn)上，存在著各類相互作用的位點(diǎn)，這一結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是蛋白質(zhì)具備手性識(shí)別能力的主因。 牛

14、血清白蛋白是最早用于手性分離的蛋白質(zhì)，之后出現(xiàn)了固定化的牛血清白蛋白和-酸性糖蛋白HPLC固定相。 盡管易于獲得，蛋白質(zhì)類手性固定相存在載樣量小、低分離效能、容易變性等特點(diǎn)，同時(shí)其流動(dòng)相的pH值、離子強(qiáng)度和有機(jī)相組成等也受到限制。 蛋白質(zhì)類手性固定相蛋白質(zhì)類手性固定相： 最早的基于牛血清白蛋白的色譜柱，曾被成功用于N-衍生化氨基酸、芳香氨基酸、不帶電荷物等。 -酸性糖蛋白類手性固定相則被報(bào)道用于青霉胺類對(duì)映體的制備和分析。 基于人血清白蛋白的手性固定相，則被用于分離布洛芬、酮洛芬和苯并二氮雜卓類藥物的分析。 大環(huán)抗生素類手性固定相大環(huán)抗生素類手性固定相： 1994年，大環(huán)抗生素類首次作為手性固

15、定相，用于分離氨基酸類對(duì)映體。大環(huán)抗生素類手性固定相也是常用固定相之一，次于多糖類和環(huán)糊精類。 與其他手性選擇體不同，大環(huán)抗生素類在結(jié)構(gòu)上具有顯著的多樣性，如大環(huán)多烯-多羥基化合物、柄狀化合物、大環(huán)糖肽、多肽和肽雜環(huán)類化合物。結(jié)構(gòu)上的多樣性，使得該類固定相有可能提供多種相互作用方式，如疏水作用、偶極-偶極作用、-相互作用、氫鍵連接及立體位阻等。 大環(huán)抗生素類手性固定相大環(huán)抗生素類手性固定相： 大環(huán)抗生素類光譜特性使得其可適應(yīng)幾乎所有的色譜模式。 安莎霉素類和糖肽類是使用最多的手性選擇體。 冠醚類手性固定相冠醚類手性固定相： 冠醚最早用于1967年，是一種大環(huán)聚醚，其分子立體結(jié)構(gòu)中具有一個(gè)特定大

16、小的空腔。冠醚結(jié)構(gòu)上的氧，作為受電子基團(tuán)，分布在空腔的內(nèi)側(cè)壁，使得金屬或銨離子可以進(jìn)入到該空腔內(nèi)。 1979年，有人將雙（1,19-聯(lián)萘）-22-冠-6固定化到聚苯乙烯和硅膠基體上，得到首個(gè)基于冠醚的手性 固定相。 通過將多種手性芳香環(huán)連接到冠醚骨架上形成手性屏障，可以得到多種手性冠醚，如含聯(lián)萘、聯(lián)菲單位、手性螺旋衍生，以及某些自然產(chǎn)生的手性分子，如酒石酸或碳水化合物。 冠醚類手性固定相冠醚類手性固定相： 冠醚手性固定相主要用于分離含初級(jí)胺基手性中心的物質(zhì)，如氨基酸及其衍生物。主要有2種冠醚類固定相被廣泛應(yīng)用，而且有商品化的供應(yīng)，如下表。 一個(gè)結(jié)合了3,3-聯(lián)苯-1,1-聯(lián)萘，其他的結(jié)合了酒石

17、酸。前者曾被用于分離-氨基酸、1-苯基-乙胺及3-氨基己內(nèi)酰胺、-氨基酸、芳基-氨基酮及氟代喹諾酮等，而后者則被用于分離-氨基酸、丙氨酸-萘胺、氨基醇、1-（1-萘基）乙胺、-甲基-色胺等。 現(xiàn)有的可以獲得的手性固定相，其中涉及到的設(shè)計(jì)與手段，比上述更多。 然而，特定的結(jié)構(gòu)類型和新的手性固定相的觀念，在其發(fā)展過程中仍十分重要，如某些化合物立體中心是非極性的，不能提供氫鍵連接或其他相互作用基團(tuán)，某些化合物含有多個(gè)手性中心，以及相當(dāng)數(shù)量的手性胺等。 擴(kuò)展手性選擇體的種類，一直是手性研究的重點(diǎn)。隨著藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)對(duì)手性化合物了解深入的需要，手性固定相研發(fā)吸引了全世界研究者的熱情與努力，也使得一批新的手性

18、固定相商品產(chǎn)生。這些新商品，一方面是新的手性選擇體的拓展，另一方面，對(duì)現(xiàn)有選擇體的固定化方式及載體材料等也有新的發(fā)展。 傳統(tǒng)手性固定相的改進(jìn)傳統(tǒng)手性固定相的改進(jìn)： 傳統(tǒng)手性固定相本身多具有較好特異性和立體選擇性，經(jīng)衍生化改進(jìn)后，該方面特性得以進(jìn)一步彰顯。 基于多糖的手性固定相，纖維素三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯），可同時(shí)分離23種氨基酸衍生物中的19種； 幾丁質(zhì)三（3-氯苯基氨基甲酸酯）衍生物分離速度，較常用的Chiralcel OD-H和Chiralpak AD-H更快； 單-6-脫氧-（2,4-二氫苯甲亞胺）-環(huán)糊精手性固定相，可用于在反相HPLC中分離1-苯-2-硝基乙醇； 多種類

19、型的環(huán)糊精手性固定相，均可使用氫化硅烷化的方式連接到多孔硅膠。 環(huán)果聚糖類環(huán)果聚糖類： 此類手性固定相來源于環(huán)果聚糖衍生化。該類化合物易于制備，對(duì)某些特定化合物具有優(yōu)良的手性識(shí)別能力，且在分離時(shí)對(duì)條件適應(yīng)性好，解決了以往某些化合物手性拆分方面缺少合適手性固定相的不足。 環(huán)果聚糖類環(huán)果聚糖類： 最早見于報(bào)道的環(huán)果聚糖用于手性分離，見于2009年。 環(huán)果聚糖的載樣潛力大，可用于對(duì)某些對(duì)映體的純化制備。環(huán)果聚糖是包含-2,1-糖苷鍵的（D）-呋喃果糖單位的環(huán)狀低聚糖，含有6-8個(gè)果糖單位的聚合體分別以CF6、CF7或CF8的簡寫形式表達(dá)。其手性識(shí)別能力，來源于其復(fù)合結(jié)構(gòu)，每一個(gè)呋喃果糖單位中含有4個(gè)

20、立體異構(gòu)中心。 衍生化后的環(huán)果聚糖選擇體能對(duì)手性分離效果產(chǎn)生影響，尤其是分子結(jié)構(gòu)中含有伯胺官能團(tuán)時(shí)（如氨基酸、氨基醇和二胺等）。環(huán)果聚糖最早的應(yīng)用是在CF6和CF7上分離氨基酸酯。 金屬復(fù)合物鍵合手性固定相金屬復(fù)合物鍵合手性固定相：1981年，將金屬螯合物吸附到膠性粘土上來分離手性化合物，使用被吸附到高嶺石上的-釕（1,10-鄰二氮雜菲）金屬螯合物，分離了芳香化合物2,3-二苯基吡嗪和聯(lián)萘類化合物，這是該類手性固定相的首次使用。Cu（II）復(fù)合物用作手性選擇體分離氨基酸也于2003年報(bào)道?；诠枘z的釕復(fù)合物鍵合手性固定相最近已被開發(fā)出來。 金屬復(fù)合物鍵合手性固定相金屬復(fù)合物鍵合手性固定相：這種

21、新的手性固定相在正相色譜中，對(duì)聯(lián)萘類物質(zhì)有很好的分離度，其原因可能是手性識(shí)別中-相互作用有較大影響。在極性模式中對(duì)酸性物質(zhì)作手性識(shí)別時(shí)，氫鍵、靜電與偶極作用可能起主要作用。 含硼手性固定相含硼手性固定相：基于硼霉素的手性固定相于2007年被報(bào)道為有效的手性選擇體。作為大環(huán)抗生素，硼霉素含有硼酸和一個(gè)手性多羥基大環(huán)配體，尤其適合用于分離一大類含伯胺化合物的手性分離。該類手性固定相的識(shí)別機(jī)理，與手性選擇性連接位點(diǎn)的屬性和位置相關(guān)。其中，硼是立體屬性中心，對(duì)手性分子識(shí)別至關(guān)重要。 離子性液體手性固定相離子性液體手性固定相：離子性液體指一類熔點(diǎn)接近室溫的準(zhǔn)有機(jī)鹽類，包括多原子無機(jī)陰離子（如六氟磷酸根P

22、F6-）和陽離子（如吡啶鹽）。在1914年報(bào)道的硝酸乙銨是首個(gè)低熔點(diǎn)有機(jī)鹽，其在室溫條件下為液體。離子性液體最近被視為化學(xué)反應(yīng)與分離過程中的綠色物質(zhì)，這些新的物質(zhì)有許多優(yōu)點(diǎn)，如寬液體范圍、低揮發(fā)性、良好的耐熱性、導(dǎo)電性能、寬粘度范圍、可調(diào)節(jié)的混合性能、可重復(fù)使用、無可燃性等。以往的研究中，多考慮采用離子性液體作流動(dòng)相，而用其作為手性固定相的研究很少。 離子性液體手性固定相離子性液體手性固定相：通過將1,2-二甲基咪唑或1-氨基-1,2,3-三唑處理的6-甲苯磺?；?環(huán)糊精鍵合到硅膠基質(zhì)，可分離數(shù)十種芳香醇衍生物。與-環(huán)糊精手性固定相相比，在分離相當(dāng)部分的消旋體藥物時(shí)，包含有離子性組分的手性固定

23、相表現(xiàn)出更好的手性分離能力。 不對(duì)稱有機(jī)催化劑不對(duì)稱有機(jī)催化劑：與人工合成的金屬催化劑相比，該類催化劑易于制備，且成本較低。有機(jī)催化劑在不對(duì)稱合成中應(yīng)用廣泛，其導(dǎo)致手性的機(jī)理是否源于與載體鍵合的有機(jī)催化劑可用HPLC方法來探索。金剛烷基和新戊基衍生化的奎寧（AN-QN）和奎尼?。ˋN-QD）曾被用于分離6個(gè)消旋化的-氨基酸衍生物。奎寧的三丁基氨基甲酸酯被固定化到硅膠表面后可分離扁桃酸及其衍生物。該類手性固定相同時(shí)有效分離和良好的載樣量，在手性分離過程中十分穩(wěn)定。 整體柱整體柱技技術(shù)：術(shù)：整體柱的優(yōu)勢在于其一次成型結(jié)構(gòu)中的孔道網(wǎng)絡(luò)類型。整體柱的制備是通過色譜柱內(nèi)的聚合反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)，通常是在毛細(xì)管柱

24、內(nèi)，因此，這些色譜柱有遠(yuǎn)高于常規(guī)柱的孔洞率，顆粒填充更為致密，背壓更小，從而實(shí)現(xiàn)更高的分離效率。其組成主要有2類物質(zhì)：有機(jī)聚合物和基于硅膠的鍵合物，其中后者的使用更多。手性整體柱研究多使用純硅膠或經(jīng)烷基或氨基修飾后的硅膠整體柱，但沒有實(shí)現(xiàn)商品化的該類手性固定相出現(xiàn)。 對(duì)于手性分離而言，正確的選擇或合理的設(shè)計(jì)一個(gè)手性選擇性好、高效率手性固定相是最為關(guān)鍵的一步。 手性固定相的合理設(shè)計(jì)是自手性分離工作被提出之時(shí)，即已吸引大量研究者投身于手性固定相的開發(fā)，并作出了許多卓有成效的工作。但是，目前為止，對(duì)合適色譜柱及其適宜的操作條件的可靠預(yù)測，仍然是一個(gè)尚未實(shí)現(xiàn)的科學(xué)目標(biāo)。 合理的設(shè)計(jì)準(zhǔn)則合理的設(shè)計(jì)準(zhǔn)則：官能團(tuán)具有高的方向性，氫鍵結(jié)合的受或供體位置常在立體屬性要素的鄰近區(qū)域，可以部分地產(chǎn)生高立體選擇性；構(gòu)象的同質(zhì)性對(duì)手性選擇性識(shí)別有利；手性選擇體被固定化在基質(zhì)上，組成熱學(xué)上、化學(xué)上、以及立體化學(xué)上的穩(wěn)定連接（可保證較寬泛的流動(dòng)相通用性和低的柱流失），而將活性位點(diǎn)暴漏到流動(dòng)的流動(dòng)相中去； 合理的設(shè)計(jì)準(zhǔn)則合理的設(shè)計(jì)準(zhǔn)則：手性片段的幾何排列應(yīng)使得其中一種對(duì)映體獲得最大保留特性；原