新型卵巢癌標(biāo)記物HE4研究進展

1、美國美國2008現(xiàn)階段卵巢癌的診斷現(xiàn)階段卵巢癌的診斷腫瘤標(biāo)記物的定義腫瘤標(biāo)記物的定義有效的腫瘤標(biāo)記物有效的腫瘤標(biāo)記物臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 1999年年schummer等發(fā)現(xiàn)等發(fā)現(xiàn)he4 mrna在卵巢癌組在卵巢癌組織中高表達，而在癌旁組織中織中高表達，而在癌旁組織中 不表達。不表達。he4在在惡性腫瘤中的高表達多見于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌惡性腫瘤中的高表達多見于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌，少見于肺腺癌及間皮瘤。，少見于肺腺癌及間皮瘤。 he4在早期（在早期（i期）的卵巢癌中的敏感性及期）的卵巢癌中的敏感性及檢測卵巢癌總的敏感性均高于檢測卵巢癌總的敏感性均高于ca125，是卵，是卵巢癌敏感及特異的標(biāo)志物，可用于

2、對卵巢巢癌敏感及特異的標(biāo)志物，可用于對卵巢癌的早期診斷及輔助監(jiān)控卵巢癌患者的治癌的早期診斷及輔助監(jiān)控卵巢癌患者的治療情況。療情況。 chromosome 20q12- q13.1 contains a locus with several members of the wfdc family.amplified in several cancers: ovarian, breast, colon, pancreatic, lung cancerwfdc gene locushe4 mrna expression profilerestricted expression profile in n

3、ormal tissueexpressed in normal epididymis, and epithelia of the respiratory and reproductive tract tumor-restricted expression in ovarian cancer 90 % of serous ovarian cancerhe4 mrna highly expressed in lung adenocarcinomas 60 % high expression in adc 10 % high expression in sqcfrom galgano et al m

4、odern pathol (2006)19; 847 - 853expression of he4 mrna in cancerhe4 antigen expression in ovarian cancergalgano et al modern pathol (2006)19; 847 - 853he4 antigen is highly expressed in serous, endometroid and clear cell ovarian cancermucinous, germ cell or sex cord ovarian cancer barely express he4

5、drapkin et al cancer res (2005) 65;2162-2169he4 是一種適宜的卵巢癌血清標(biāo)志物是一種適宜的卵巢癌血清標(biāo)志物 he4 可分泌入體液可分泌入體液 正常卵巢不表達，而在卵巢癌高表達正常卵巢不表達，而在卵巢癌高表達-特異特異性好性好 在早期和晚期在早期和晚期he4表達均呈高度上調(diào)表達均呈高度上調(diào) 早早期病例具有高度敏感性期病例具有高度敏感性 he4的表達獨立于的表達獨立于ca125的表達的表達 聯(lián)合檢聯(lián)合檢測將較各自單獨檢測獲得更測將較各自單獨檢測獲得更 多的信息多的信息nhe4 eia試劑盒由瑞典試劑盒由瑞典fujirebio diagnostics a

6、b公司生產(chǎn)公司生產(chǎn)，已經(jīng)獲得了已經(jīng)獲得了fda認證和認證和ce認證，在美國、歐洲等多個國家認證，在美國、歐洲等多個國家上市銷售，現(xiàn)正在申請在中國上市注冊。上市銷售，現(xiàn)正在申請在中國上市注冊。 n fujirebio diagnostics ab公司研制的公司研制的he4 eia試劑是國外唯一用于定量檢測人血清中試劑是國外唯一用于定量檢測人血清中he4的試劑，國內(nèi)尚無任何檢測的試劑，國內(nèi)尚無任何檢測he4的試的試劑上市銷售。劑上市銷售。 he4 eia 方法的建立方法的建立 主要試劑：主要試劑：2h5 and 3d8 mab established using he4-mouse ig fusi

7、on protein as immunogen hellstrom et al, cancer research 63, 3695 3700, 2003 檢測原理：檢測原理：two-step forward sandwich immunoassay based on bio 2h5 mab for catching of he4 and hrp 3d8 mab for detectionhe4 用于監(jiān)測卵巢癌用于監(jiān)測卵巢癌約約 80%患者患者he4與與ca125相符，與病情一致相符，與病情一致080160240320400480560640720800880960104011201200128

8、0136014400.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.50801602403204004805606407208008809601040112012001280136014400100020003000400050006000700080009000100001100012000he4 eia (pm)architect ca125ii (u/ml)rsrmonths from initial drawca125 (u/ml)he4 (pm)study on 80 patients, 4,4 observations/patientme

9、asured concordance between biomarker change & clinical statuscompared he4 and ca125050010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800085000123456789101105001000150020002500300035004000450050005500600065007000750080008500010020030040050060070080090010001100120013001400150016001700180

10、019002000210022002300he4 eia (pm)architect ca125ii (u/ml)pdssrspdmonths from initial drawca125 (u/ml)he4 (pm)05101520253035404550556065707501234567891011121314151617181905101520253035404550556065707501002003004005006007008009001000110012001300he4 eia (pm)architect ca125ii (u/ml)spdspdpdpdmonths from

11、 initial drawca125 (u/ml)he4 (pm) he4 在卵巢癌的動態(tài)監(jiān)測中與在卵巢癌的動態(tài)監(jiān)測中與ca125具有良好的互補性具有良好的互補性conclusion: he4 and ca 125 show equivalent but complementary performance for monitoring of ovarian cancer051015202530354045505560657075808590951001050.00.40.81.21.62.02.42.83.23.64.04.44.85.25.60510152025303540455055606

12、570758085909510010505101520253035404550556065707580859095100105he4 eia (pm)architect ca125ii (u/ml)pdssmonths from initial drawca125 (u/ml)he4 (pm)臨床研究方案臨床研究方案n樣本量及樣本量確定的依據(jù)樣本量及樣本量確定的依據(jù)n根據(jù)國食藥監(jiān)械根據(jù)國食藥監(jiān)械2007240號發(fā)布的號發(fā)布的體外體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（以下（以下簡稱簡稱“臨床導(dǎo)則臨床導(dǎo)則”），），he4 eia屬于進口屬于進口三類體外診斷試劑。三類體外診斷

13、試劑。n臨床導(dǎo)則要求臨床驗證至少要在三家省級臨床導(dǎo)則要求臨床驗證至少要在三家省級以上醫(yī)院進行實施，總樣本數(shù)不少于以上醫(yī)院進行實施，總樣本數(shù)不少于1000人人份。份。 n樣本選擇依據(jù)樣本選擇依據(jù)nhe4 eia試劑屬于國內(nèi)首次申請注冊的用試劑屬于國內(nèi)首次申請注冊的用于定量檢測患者血清中的于定量檢測患者血清中的he4濃度，可用濃度，可用于于上皮性卵巢癌上皮性卵巢癌患者的輔助診斷和療效監(jiān)患者的輔助診斷和療效監(jiān)測。因此，臨床試驗收集的血清樣本包括：測。因此，臨床試驗收集的血清樣本包括：n上皮性卵巢癌上皮性卵巢癌樣本、盆腔包塊疑似樣本、樣本、盆腔包塊疑似樣本、正常健康人樣本、其他腫瘤樣本、良性疾正常健康

14、人樣本、其他腫瘤樣本、良性疾病樣本及干擾樣本等。同時包括臨床收集病樣本及干擾樣本等。同時包括臨床收集的跟蹤樣本。的跟蹤樣本。 n入選標(biāo)準(zhǔn)：入選標(biāo)準(zhǔn)：不同樣本組收集的血清，要求知道當(dāng)不同樣本組收集的血清，要求知道當(dāng)前受試者的臨床診斷。收集的血清樣本要求足夠前受試者的臨床診斷。收集的血清樣本要求足夠用于試劑盒的檢測。用于試劑盒的檢測。n樣本收集：樣本收集：根據(jù)樣本要求，醫(yī)院收集常規(guī)的血清根據(jù)樣本要求，醫(yī)院收集常規(guī)的血清樣本，要求標(biāo)記清楚。樣本，要求標(biāo)記清楚。n樣本保存：樣本保存：血清樣本在血清樣本在2-8條件下可以保存條件下可以保存3天，天，或者或者 - 40下長期保存。下長期保存。n 樣本運輸：

15、樣本運輸：血清樣本的運輸需要在血清樣本的運輸需要在2-8條件下進條件下進行，樣本的使用不能超過限定時間。所有人體來行，樣本的使用不能超過限定時間。所有人體來源的樣本必須按照國家和國際的運輸規(guī)章運送。源的樣本必須按照國家和國際的運輸規(guī)章運送。n金標(biāo)準(zhǔn)的確立：金標(biāo)準(zhǔn)的確立：臨床采用病理檢測結(jié)果作為卵巢臨床采用病理檢測結(jié)果作為卵巢癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。n質(zhì)量控制方法：質(zhì)量控制方法：n嚴(yán)格按照產(chǎn)品的說明書要求進行操作，要求質(zhì)控嚴(yán)格按照產(chǎn)品的說明書要求進行操作，要求質(zhì)控品品c1和和c2結(jié)果在標(biāo)示范圍內(nèi)；結(jié)果在標(biāo)示范圍內(nèi)；n嚴(yán)格執(zhí)行編盲的原則，避免主觀判斷影響產(chǎn)品的嚴(yán)格執(zhí)行編盲的原則，避免主觀判

16、斷影響產(chǎn)品的檢測結(jié)果；檢測結(jié)果；n產(chǎn)品檢測過程中，為了避免人為試驗誤差，在產(chǎn)產(chǎn)品檢測過程中，為了避免人為試驗誤差，在產(chǎn)品解盲后，如果研究試劑和金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果不一致，品解盲后，如果研究試劑和金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果不一致，要求進行重復(fù)測定。要求進行重復(fù)測定。n臨床研究觀察指標(biāo)臨床研究觀察指標(biāo)n cut-off值值n匯總正常健康女性樣本的檢測結(jié)果，給出匯總正常健康女性樣本的檢測結(jié)果，給出p95結(jié)果結(jié)果作為作為cut-off值。參考試劑盒提供的值。參考試劑盒提供的cut-off值，對中國健康人群的值，對中國健康人群的cut-off值進行評價。值進行評價。n靈敏度、特異性、總符合率、陽性預(yù)期值和陰性靈敏度、特異性、總符

17、合率、陽性預(yù)期值和陰性預(yù)期值。預(yù)期值。n臨床療效監(jiān)測臨床療效監(jiān)測n將濃度變化和病程發(fā)展匯總到將濃度變化和病程發(fā)展匯總到 2x2 表格中，分析表格中，分析he4在療效跟蹤上的有效性。在療效跟蹤上的有效性。n 臨床試驗中的精密度、重復(fù)性的檢測。臨床試驗中的精密度、重復(fù)性的檢測。多中心臨床研究多中心臨床研究檢測樣本分布檢測樣本分布中國人群中國人群cut-off值的評價值的評價n臨床檢測正常健康人群樣本臨床檢測正常健康人群樣本363例，例，he4濃度檢測值范圍為：濃度檢測值范圍為：22.8-106.0pmn73.7pm：中國健康人組（中國健康人組（p95）的參考）的參考值。值。n150pm：試劑盒提供

18、的參考值。試劑盒提供的參考值。各中心健康人各中心健康人cut-off值的評價值的評價各分中心評價中國健康人群的各分中心評價中國健康人群的cut-off值基本一致，可以選擇值基本一致，可以選擇73.7pm作為中國作為中國正常健康人群的參考范圍正常健康人群的參考范圍。 不同的不同的cutoff值值對卵巢惡性腫瘤的診斷能力對卵巢惡性腫瘤的診斷能力結(jié)論：結(jié)論：以以73.7 pm作為作為cut-off值時，可以大大提高對上皮性卵巢癌病人的診斷率，避值時，可以大大提高對上皮性卵巢癌病人的診斷率，避免漏檢。免漏檢。 以以150 pm作為作為cut-off值時，值時，he4在健康人群及良性疾患等對照組中的具高

19、特在健康人群及良性疾患等對照組中的具高特異性，能有效的鑒別診斷卵巢良、惡性腫瘤，為臨床上皮性卵巢癌的輔助診斷提異性，能有效的鑒別診斷卵巢良、惡性腫瘤，為臨床上皮性卵巢癌的輔助診斷提供有力幫助。供有力幫助。入組患者血清入組患者血清he4水平分布水平分布說明：在干擾樣本中，提示高膽紅素可能對說明：在干擾樣本中，提示高膽紅素可能對he4的檢測有干擾，與國外研究結(jié)果的檢測有干擾，與國外研究結(jié)果 一致。一致。he4在卵巢癌惡性腫瘤中的在卵巢癌惡性腫瘤中的動態(tài)監(jiān)測的評價動態(tài)監(jiān)測的評價n動態(tài)監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測he4濃度變化要求：濃度變化要求：n為了為了避免試劑檢測中存在的偏差，避免試劑檢測中存在的偏差，選擇選擇2

20、.5倍的最大精密倍的最大精密度度(cv)作為作為he4濃度變化的指標(biāo)。濃度變化的指標(biāo)。he4的陽性變化（陽轉(zhuǎn)）的陽性變化（陽轉(zhuǎn)）/陰性變化（陰轉(zhuǎn)）為當(dāng)前結(jié)果比前一測試結(jié)果的測定值陰性變化（陰轉(zhuǎn)）為當(dāng)前結(jié)果比前一測試結(jié)果的測定值升高或者降低至少升高或者降低至少2.5倍最大倍最大cv。n動態(tài)監(jiān)測樣本：動態(tài)監(jiān)測樣本：n 多中心臨床動態(tài)監(jiān)測評價，共收集多中心臨床動態(tài)監(jiān)測評價，共收集34例上皮性卵巢癌患例上皮性卵巢癌患者的者的64份血清。份血清。n 32例患者同時收集了術(shù)前、術(shù)后樣本。例患者同時收集了術(shù)前、術(shù)后樣本。n 2例患者動態(tài)監(jiān)測均為術(shù)后樣本。例患者動態(tài)監(jiān)測均為術(shù)后樣本。he4濃度變化與病程發(fā)展情

21、況統(tǒng)計濃度變化與病程發(fā)展情況統(tǒng)計臨床動態(tài)監(jiān)測符合率臨床動態(tài)監(jiān)測符合率: 61/64=95.3%，he4 可以用于上皮性卵巢可以用于上皮性卵巢癌的療效監(jiān)測。癌的療效監(jiān)測。32例患者術(shù)前例患者術(shù)前/ /術(shù)后術(shù)后he4he4濃度變化圖濃度變化圖 備注：備注：he4he4濃度變化值濃度變化值= =（手術(shù)后（手術(shù)后he4he4濃度濃度- -手術(shù)前手術(shù)前he4he4濃度）濃度）/ /手術(shù)前手術(shù)前he4he4濃度濃度100%100% 其中其中1-251-25號為陰轉(zhuǎn)樣本，號為陰轉(zhuǎn)樣本，26-3226-32號為非陰轉(zhuǎn)樣本。號為非陰轉(zhuǎn)樣本。 -120.00%-100.00%-80.00%-60.00%-40.0

22、0%-20.00%0.00%20.00%123456 789 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32卵巢癌患者姓名he4濃度變化值（%）he4 eia精密度的評價精密度的評價 n三家臨床醫(yī)院測定的三家臨床醫(yī)院測定的3份高、中、低臨床樣份高、中、低臨床樣本結(jié)果分別進行匯總分析本結(jié)果分別進行匯總分析n每份樣本有每份樣本有30次檢測結(jié)果，分別計算次檢測結(jié)果，分別計算cv值，值，cv值均低于值均低于15%n符合臨床試驗方案要求。符合臨床試驗方案要求。he4在交界性腫瘤的濃度分布在交界性腫瘤的濃度分布n臨床

23、試驗過程中共檢測了臨床試驗過程中共檢測了10例交界性腫瘤，例交界性腫瘤，其中其中2例例he4濃度分布為濃度分布為150-300pm，3例為例為73.7-150pm，5例低于例低于73.7pm。研究結(jié)果研究結(jié)果n當(dāng)以當(dāng)以73.7 pm作為作為cut-off值時，臨床在進行診值時，臨床在進行診斷中如果能結(jié)合其它的臨床診斷方法，可以大大斷中如果能結(jié)合其它的臨床診斷方法，可以大大提高對上皮性卵巢癌病人的診斷率，避免漏檢，提高對上皮性卵巢癌病人的診斷率，避免漏檢，以免貽誤患者的治療。以免貽誤患者的治療。 n當(dāng)以當(dāng)以150 pm作為作為cut-off值時，值時，he4在健康人群在健康人群及良性疾患等對照組

24、中的具高特異性，能有效的及良性疾患等對照組中的具高特異性，能有效的鑒別診斷卵巢良、惡性腫瘤，為臨床上皮性卵巢鑒別診斷卵巢良、惡性腫瘤，為臨床上皮性卵巢癌的輔助診斷提供有力幫助。癌的輔助診斷提供有力幫助。nhe4濃度變化與病情發(fā)展間的一致性為濃度變化與病情發(fā)展間的一致性為95.3% (61/64)，說明，說明he4 eia可以用于上皮性卵巢癌的可以用于上皮性卵巢癌的療效監(jiān)測。療效監(jiān)測。n精密度試驗結(jié)果提示證明試劑盒性能可靠、方法精密度試驗結(jié)果提示證明試劑盒性能可靠、方法穩(wěn)定。穩(wěn)定。 1 out of 5 women will be diagnosed with an adnexal mass d

25、uring their lifetime15 - 10% of women will have surgery for an ovarian neoplasm 13 - 21% of these masses will be malignant由婦科腫瘤?？漆t(yī)生施行手術(shù)將改善卵巢癌的預(yù)后由婦科腫瘤?？漆t(yī)生施行手術(shù)將改善卵巢癌的預(yù)后問題是：問題是：how do we identify malignant pelvic masses from benign masses?術(shù)前確診可改善卵巢癌預(yù)后術(shù)前確診可改善卵巢癌預(yù)后improved survival with surgery by ovaria

26、n cancer specialistspaulsen et al, int j gynecol ca, 2006: 16; 11-17c- 45c- 45th: teaching hospitalnth: nonteaching hospitalntype of surgeon impacts survival ratesntype of hospital impacts survival rates romapremenopausal women predictive index (pi) = -12.0 + 2.38*lnhe4 + 0.0626*lnca125 postmenopaus

27、al womenpredictive index (pi) = -8.09 + 1.04*lnhe4 + 0.732*ln ca125 roma value = exppi / 1 + exppi x 100 risk of ovarian malignancy algorithm (roma) valueestimate of the risk of ovarian cancer given that the patient had a pelvic mass; their he4 and ca125 values; and their menopausal status biomarker

28、 and roma scatterplotbenign he4lmp he4epith he4stage i/ii he4stage iii/iv he4010020030040050060070080090010001100120013001400150016001700180019002000200030004000500050007500100001250015000he4 (pm)benign ca 125lmp ca 125epith ca 125stage i/ii ca125 stage iii/iv ca 125010020030040050060070080090010001

29、10012001300140015001600170018001900200020003000400050005000750010000125001500017500ca 125 (u/ml)b9 lmp eoc i/ii iii/iv b9 lmp eoc i/ii iii/ivhe4ca125benign pplmp ppepith ppstage i/ii ppstage iii/iv pp0102030405060708090100predictive probability (%)b9 lmp eoc i/ii iii/ivromaroma validation trial - co

30、nclusionsat a specificity of 75%, the overall sensitivity for eoc+lmp was 89% overall sensitivity for eoc was 94% pre-menopausal women 89% post-menopausal women 95%npv 94% for eoc+lmp in pre- and postmenopausal women combinednpv 97% for eoc 17/279 (6%) patients classified as low risk had eoc or lmp

31、9/17 had lmp tumor 1 (0.4%) had late stage (iii/iv) cancer roma effectively stratifies patients with pelvic mass into groups with low and high risk of having epithelial ovarian cancerc- 50roma vs rmirisk of malignancy index (rmi)rmi = u x m x serum ca 125 levelu= 0 for imaging score of 0= 1 for imag

32、ing score of 1= 3 for imaging score of 2-5m= 1 if premenopausal= 3 if postmenopausaljacobs i et al. br j obstet gynecol.1990; 97:992-929.roma has increased sensitivity compared with rmipre & postmenopausalbenign (n = 315) vs eoc (n = 124)sensitivity* (95% ci)specificity (95% ci)rmi85% (77% to 90

33、%)75% (70% to 80%)roma94% (89% to 98%)75% (70% to 80%)benign and eoc: all stages*two sample test of equality of proportions p=0.0129ci: confidence intervalroma has increased sensitivity vs rmi for early stage cancerpre & postmenopausalbenign (n=315) vs stage i-ii eoc (n=35)sensitivity* (95% ci)s

34、pecificity (95% ci)rmi66% (48% to 81%)75% (70% to 80%)roma86% (70% to 95%)75% (70% to 80%)benign and eoc: stage i & ii*two sample test of equality of proportions p=0.0510ci: confidence interval表表 患者被患者被roma劃分為高危組和低危組的分布劃分為高危組和低危組的分布 月經(jīng)狀態(tài)月經(jīng)狀態(tài) 疾病疾病 高危高危(例例 ) 低危低危(例例) 合計合計(例例) 敏感性敏感性(%) 特異性特異性(%) p

35、pv (%) npv (%) 絕經(jīng)后絕經(jīng)后 惡性惡性 35 2 37 eoc 28 0 28 良性良性 4 8 12 合計合計a 32 8 40 100.0 66.7 87.5 100.0 合計合計b 39 10 49 94.6 66.7 89.7 80.0 絕經(jīng)前絕經(jīng)前 惡性惡性 12 4 16 eoc 8 0 8 良性良性 23 103 126 合計合計a 31 103 134 100.0 81.7 25.8 100.0 合計合計b 35 107 142 75.0 81.7 22.9 96.3 全部全部 惡性惡性 47 6 53 eoc 36 0 36 良性良性 27 111 138 合計

36、合計a 63 111 174 100.0 80.4 57.1 100.0 合計合計b 74 117 191 88.7 80.4 63.5 94.9 a：指：指eoc與良性腫瘤的合計，與良性腫瘤的合計，b：指惡性腫瘤與良性腫瘤的合計：指惡性腫瘤與良性腫瘤的合計 he4 clinical investigationsnitalynmestre-venice pelvic massnmilano pelvic massnbrescia endometrial cancernroma ongoing real life studynnorwaynoslo many biobank studiesnsw

37、edennstockholm biobank pelvic massnbrasilnsao paolo ovarian cancernbelgiumnleuven pelvic masshe4 clinical investigationsnhe4用于卵巢癌的動態(tài)監(jiān)測和對復(fù)發(fā)的診斷用于卵巢癌的動態(tài)監(jiān)測和對復(fù)發(fā)的診斷n血清血清he4與與ca125聯(lián)合檢測用于鑒別卵巢癌聯(lián)合檢測用于鑒別卵巢癌和卵巢子宮內(nèi)膜異位癥和卵巢子宮內(nèi)膜異位癥n血清血清he4 檢測用于子宮內(nèi)膜癌的診斷和隨訪檢測用于子宮內(nèi)膜癌的診斷和隨訪n血清血清he4用于肺癌的診斷用于肺癌的診斷 he4聯(lián)合聯(lián)合ca125鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥和卵巢癌鑒別診斷子宮內(nèi)膜異位癥和卵巢癌nhe4的編碼基因的編碼基因wfdc2主要在卵巢子宮內(nèi)主要在卵巢子宮內(nèi)膜樣癌、子宮內(nèi)膜癌中有表達膜