人免疫球蛋白G(IgG)ELISA檢測(cè)方法及步驟

1、信息來源環(huán)保英才網(wǎng)：人免疫球蛋白g(igg) elisa檢測(cè)方法及步驟人(human) 免疫球蛋白g (igg) elisa檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗(yàn)原理：igg 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(elisa). 已知 igg 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將igg 和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的hrp。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物a、b，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中igg 的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份 (2-8保存 )96孔配置 48孔配置配制96/48人份

2、酶標(biāo)板 1塊板 (96t)半塊板 (48t)即用型塑料膜板蓋 1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品： 80g/l1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml) 按說明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照 1瓶 (1.0ml)1 瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1 瓶(2.5ml) 即用型生物素標(biāo)記的抗igg 抗體 1瓶(6ml)1 瓶(3.0ml) 即用型親和鏈酶素 -hrp1瓶(10ml)1 瓶(5.0ml) 即用型洗滌緩沖液 1瓶(20ml)1 瓶(10ml) 按說明書進(jìn)行稀釋底物 a1瓶(6.0ml)1 瓶 (3.0ml)即用型底物 b1瓶(6.0ml)1 瓶 (3.0ml)即用型終止液 1瓶(6.0ml)1瓶

3、 (3.0ml) 即用型標(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml)1 瓶(6.0ml) 即用型自備材料信息來源環(huán)保英才網(wǎng)：1蒸餾水。2加樣器： 5ul、10ul、50ul、 100ul、200ul、500ul、1000ul。3振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1避免直接接觸終止液和底物a、b。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)1試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4使

4、用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物a、b 液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。5使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7底物 a 應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物b 對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取od 值。8加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清 -操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000 g 離心 10分鐘將血

5、清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿 -edta 、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000 g 離心 30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液-1000g 離心 10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿 -將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000 g 離心 10分鐘，取上清液信息來源環(huán)保英才網(wǎng)：5、保存 - 如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表

6、中進(jìn)行：80 g/l(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40 g/l(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )100ul 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20 g/l(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )100ul 的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10 g/l(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )100ul 的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0 g/l(2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )100ul 的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5 g/l(1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 )100ul 的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0 g/l(空白對(duì)照 )原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2洗滌緩沖液(50 )的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操

7、作步驟1使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入 50ul 于反應(yīng)孔內(nèi)。3加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul 于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul 于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul 的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37溫育 1小時(shí)。4甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3信息來源環(huán)保英才網(wǎng)：次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5每孔加入 80ul 的親和鏈酶素-hrp，輕輕振蕩混勻，37溫育 30分鐘。6甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次