化學(xué)原料藥質(zhì)量研究及原始記錄常見問題討論余立

1、特性研究特性研究-理化、穩(wěn)定性理化、穩(wěn)定性對(duì)照品研究對(duì)照品研究- -標(biāo)化、校正因子標(biāo)化、校正因子方法研究方法研究- -建立、驗(yàn)證建立、驗(yàn)證原料藥研究的特點(diǎn)原料藥研究的特點(diǎn) 雜質(zhì)研究雜質(zhì)研究- -工藝、殘留溶劑工藝、殘留溶劑1432建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問題建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問題200820072006 200520042003 200220012000 常見研究誤區(qū)以及供參常見研究誤區(qū)以及供參考的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)考的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì) 新版藥典動(dòng)態(tài)對(duì)化學(xué)原新版藥典動(dòng)態(tài)對(duì)化學(xué)原料藥質(zhì)量研究的影響料藥質(zhì)量研究的影響 研發(fā)原始記錄中常見問研發(fā)原始記錄中常見問題及改進(jìn)建議題及改進(jìn)建議 主要討論內(nèi)容主要討論內(nèi)容click

2、 to edit title style雜質(zhì)控制雜質(zhì)控制微?？刂莆⒘？刂瓢踩园踩钥刂瓶刂谱⑸鋭┧玫脑o料應(yīng)從注射劑所用的原輔料應(yīng)從來源及來源及工藝等工藝等生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格控制并生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格控制并應(yīng)符合注射用的質(zhì)量要求。應(yīng)符合注射用的質(zhì)量要求。標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)增項(xiàng)增項(xiàng)雜質(zhì)譜的比較雜質(zhì)譜的比較供注射用原料質(zhì)控變化重點(diǎn)提示供注射用原料質(zhì)控變化重點(diǎn)提示雜質(zhì)控制力度大幅度提高雜質(zhì)控制力度大幅度提高 未修訂品種未修訂品種有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)（常規(guī)）（常規(guī)）增項(xiàng)增項(xiàng)增指標(biāo)增指標(biāo)嚴(yán)限度嚴(yán)限度改方法改方法tlchplc等度等度 梯度梯度理論板數(shù)理論板數(shù) 分離度分離度特定雜質(zhì)特定雜質(zhì)增訂單列項(xiàng)增訂單列項(xiàng)鹽酸阿糖胞苷

3、鹽酸阿糖胞苷項(xiàng)目項(xiàng)目20052005年版年版20102010年版年版含量限度含量限度97.097.0103.0103.0鑒別鑒別3 3項(xiàng)項(xiàng)檢查檢查干燥失重干燥失重-含量測(cè)定含量測(cè)定uvuv吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法* 性狀項(xiàng)下還有熔點(diǎn)和比旋度項(xiàng)性狀項(xiàng)下還有熔點(diǎn)和比旋度項(xiàng)，第一次飛躍第一次飛躍第二次飛躍第二次飛躍純度控制純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜控制控制有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)的的研究研究 雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷雜質(zhì)譜的定義雜質(zhì)譜的定義 impurity profile （雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜）: a description of the identified and unidentified

4、 impurities present in a drug substance. 對(duì)存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)對(duì)存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。的總的描述。 company logo名詞解釋已鑒定雜質(zhì)已鑒定雜質(zhì)identified impurity特定雜質(zhì)特定雜質(zhì)specified impurity潛在雜質(zhì)潛在雜質(zhì)potentialimpurity雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜impurity profile已確證了已確證了結(jié)構(gòu)特征結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)的雜質(zhì)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查中規(guī)定檢查并有自己限并有自己限度標(biāo)準(zhǔn)的雜度標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)。已鑒定質(zhì)。已鑒定或未鑒定或未鑒定按照理論推按照理論推測(cè)在

5、生產(chǎn)或測(cè)在生產(chǎn)或貯藏過程中貯藏過程中可能產(chǎn)生的可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，實(shí)際雜質(zhì)，實(shí)際產(chǎn)品中不一產(chǎn)品中不一定存在定存在存在于藥存在于藥品中的雜品中的雜質(zhì)組成或質(zhì)組成或模式模式click to edit title style選擇最優(yōu)選擇最優(yōu)多種互補(bǔ)多種互補(bǔ)結(jié)構(gòu)確證結(jié)構(gòu)確證比較雜質(zhì)的比較雜質(zhì)的數(shù)數(shù)與與量量，一致或基本一致，一致或基本一致，物質(zhì)基礎(chǔ)相同決定可否橋接已上市藥品物質(zhì)基礎(chǔ)相同決定可否橋接已上市藥品的安全有效性結(jié)果的安全有效性結(jié)果雜質(zhì)譜雜質(zhì)譜比較比較雜質(zhì)譜的比較雜質(zhì)譜的比較新方法新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）舒巴坦鈉）原方法原方法在對(duì)各國藥典方法比較的基礎(chǔ)

6、上確定分析方法項(xiàng)目項(xiàng)目原研廠標(biāo)準(zhǔn)原研廠標(biāo)準(zhǔn)擬定標(biāo)準(zhǔn)擬定標(biāo)準(zhǔn)ep7.0ep7.0usp34usp34jp15jp15含量限度按干燥品計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于150單位按干燥品計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于150單位按干燥品計(jì)算，每1mg效價(jià)不得少于150i.u.（非口服制劑），每1mg效價(jià)不得少于120i.u.（口服制劑按干燥品計(jì)算，每1mg中效價(jià)不得少于180usp 肝素單位每1mg的效價(jià)不得少于110單位。性狀白色或類白色的粉末，有引濕性白色或類白色的粉末，極具引濕性白色或幾乎白色的粉末，有適度的引濕性白色到灰棕色的粉末或顆粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在

7、乙醚中不溶比旋度不小于+35(40mg/ml,水)應(yīng)不小于+50(40mg/ml,水)鑒別1、電泳法2、鈉鹽1、電泳法2、鈉鹽a、具有抗凝血作用b、比旋度c、電泳法：d. 鈉鹽a、h-nmrb、ic法c、抗xa/抗iia：d、鈉鹽酸堿度5.07.5（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）5.58.0（0.10g到10ml水）5.07.5（0.10g到10ml水）6.08.0雜質(zhì)譜的比較多種互補(bǔ)雜質(zhì)譜的比較多種互補(bǔ) 不同色譜系統(tǒng)（流動(dòng)相、色譜柱、波長）不同色譜系統(tǒng)（流動(dòng)相、色譜柱、波長） 不同檢測(cè)器（不同檢測(cè)器（uv、dad） 不同原理的方法不同原理的方法 -分離或檢測(cè)分

8、離或檢測(cè) 雜質(zhì)譜的比較多種互補(bǔ)雜質(zhì)譜的比較多種互補(bǔ) 柱串聯(lián)技術(shù)柱串聯(lián)技術(shù) 適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過將一根通過將一根scxscx（陽離子交換）短柱與一根（陽離子交換）短柱與一根mg mg c c1818長柱串聯(lián)長柱串聯(lián)就可以簡(jiǎn)單達(dá)到將其分離的目的。就可以簡(jiǎn)單達(dá)到將其分離的目的。 原理：原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會(huì)由于正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會(huì)由于scxscx短柱的離子交換短柱的離子交換作用而被保留在短柱

9、中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會(huì)毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入質(zhì)）與中性物質(zhì)則會(huì)毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入c18c18長柱中，從長柱中，從而成功分離；然后由于而成功分離；然后由于mgc18mgc18長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作用而對(duì)中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對(duì)帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留用而對(duì)中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對(duì)帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡(jiǎn)單被分開了作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡(jiǎn)單被分開了 如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可

10、在陽離子交換短柱與短柱與c c1818長柱前接一根長柱前接一根nhnh2 2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。 雜質(zhì)雜質(zhì)揮發(fā)性雜質(zhì)揮發(fā)性雜質(zhì)有機(jī)雜質(zhì)有機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)殘留溶劑其它rp-hplc不同檢測(cè)器不同檢測(cè)器icp-ms離子色譜離子色譜互補(bǔ)方法互補(bǔ)方法hpcehptlcgc- mshs-gc梯度洗脫梯度洗脫hpgpc顏色控制顏色控制雜質(zhì)譜分析的基本途經(jīng)雜質(zhì)譜分析的基本途經(jīng)新雜質(zhì)的研究新雜質(zhì)的研究 藥物雜質(zhì)的可能來

11、源藥物雜質(zhì)的可能來源1.原料：原料：紅霉素紅霉素 a、紅霉素、紅霉素 b、紅霉素、紅霉素 c、紅霉素、紅霉素d、紅霉素、紅霉素 e、紅霉素、紅霉素 f、阿奇霉素阿奇霉素b、阿奇霉素、阿奇霉素c、阿奇霉素、阿奇霉素e、阿奇霉素、阿奇霉素f2.中間體：中間體：紅霉素紅霉素a肟（肟（z）、）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素亞胺醚、氮紅霉素a、紅霉素、紅霉素a肟（肟（e）、紅）、紅霉素霉素 c肟（肟（e）、）、9，11-亞胺醚、紅霉素亞胺醚、紅霉素c 6，9-亞胺醚、紅霉素亞胺醚、紅霉素a內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：副產(chǎn)物：紅霉素紅霉素-n-氧化物、氧化物、n-去甲基紅霉素去甲基紅霉素a、n-去甲基阿奇霉素去

12、甲基阿奇霉素a、氨基阿奇霉素氨基阿奇霉素a、n-甲?；柞；?n去甲基阿奇霉素去甲基阿奇霉素a、n-去甲基去甲基-n-苯磺?；⑵姹交酋；⑵婷顾?、阿奇霉素霉素、阿奇霉素n-氧化物、氧化物、3-去（二甲氨基）去（二甲氨基）- 3,4-去氫阿奇霉素、去氫阿奇霉素、 o-甲苯甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素磺?；t霉素肟、紅霉素z肟重排物、氮紅霉素肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、硼酸酯、 n，n-去去二甲基二甲基n-甲?；⑵婷顾丶柞；⑵婷顾豠、丙基阿奇霉素、丙基阿奇霉素、3-n， n-去二甲基氨基去二甲基氨基-酮酮基阿奇霉素基阿奇霉素a、阿奇霉素、阿奇霉素11，12-硼酸酯硼酸酯4.降解產(chǎn)物：

13、降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素去克拉克定糖阿奇霉素a、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水脫水-6，9-半縮酮、紅霉素半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種種company logo結(jié)構(gòu)確證常用的方法熱分析熱分析粉末衍射粉末衍射核磁核磁元素分析元素分析質(zhì)譜質(zhì)譜紫外紫外紅外紅外模擬色譜圖色譜圖實(shí)際色譜圖實(shí)際色譜圖毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái) 斑馬魚斑馬魚毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)，對(duì)雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 雜質(zhì)用量少雜質(zhì)用量少 無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu) 實(shí)驗(yàn)周期短實(shí)驗(yàn)周期短（

14、34天一個(gè)周期）天一個(gè)周期）藥物耳毒性檢測(cè)藥物耳毒性檢測(cè)利用一種特殊染料對(duì)斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測(cè)毛細(xì)胞的利用一種特殊染料對(duì)斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測(cè)毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測(cè)物的耳毒性。存活狀態(tài)，來判斷檢測(cè)物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給藥后藥后1神經(jīng)丘消失。神經(jīng)丘消失。給藥后給藥后系統(tǒng)對(duì)照組系統(tǒng)對(duì)照組（正常幼體）（正常幼體）增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控 結(jié)合藥品的制法和工藝特點(diǎn)，以及雜質(zhì)的結(jié)合藥品的制

15、法和工藝特點(diǎn)，以及雜質(zhì)的特殊性特殊性設(shè)立設(shè)立特色有針對(duì)性特色有針對(duì)性檢測(cè)項(xiàng)目，最大限度解決安全檢測(cè)項(xiàng)目，最大限度解決安全隱患。隱患。 人尿制品增加人尿制品增加乙肝表面抗原乙肝表面抗原檢查：如檢查：如尿激酶、尿尿激酶、尿促性素、絨促性素、烏司他丁促性素、絨促性素、烏司他丁等等 重組品種增加重組品種增加菌體蛋白殘留量、外源性菌體蛋白殘留量、外源性dnadna殘留殘留量量如如重組人生長激素、重組人胰島素重組人生長激素、重組人胰島素等。等。 含不飽和脂肪酸的品種增加含不飽和脂肪酸的品種增加甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值檢查：檢查：如如多烯酸乙酯（多烯酸乙酯（p p272272）等。等。增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)增設(shè)有

16、效項(xiàng)目指標(biāo)-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 含有含有不飽和脂肪酸不飽和脂肪酸的藥物在生產(chǎn)和貯藏過程的藥物在生產(chǎn)和貯藏過程中易被氧化，初級(jí)氧化產(chǎn)物一般不穩(wěn)定，又可中易被氧化，初級(jí)氧化產(chǎn)物一般不穩(wěn)定，又可進(jìn)一步生成進(jìn)一步生成醛類醛類等化合物，而甲氧基苯胺值等化合物，而甲氧基苯胺值（也稱（也稱p-茴香胺值）就是茴香胺值）就是iso推薦的一種對(duì)此推薦的一種對(duì)此類降解產(chǎn)物進(jìn)行評(píng)價(jià)的手段，歐洲藥典附錄類降解產(chǎn)物進(jìn)行評(píng)價(jià)的手段，歐洲藥典附錄2.5.36收載了此測(cè)定方法。藥物的甲氧基苯胺收載了此測(cè)定方法。藥物的甲氧基苯胺值越高，說明其劣變程度越嚴(yán)重。值越高，說明其劣變程度越嚴(yán)重。 測(cè)定原理：測(cè)定原理：甲氧基苯胺甲氧

17、基苯胺與與醛醛反應(yīng)生成醇胺，反應(yīng)生成醇胺，醇胺脫水生成的醇胺脫水生成的醛亞胺醛亞胺可采用紫外可采用紫外-可見分光可見分光光度法在光度法在350nm波長處測(cè)定。波長處測(cè)定。 增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)-甲氧基苯胺值甲氧基苯胺值 注意：注意： 甲氧基苯胺試劑為無色結(jié)晶，具有一定毒性，使用時(shí)甲氧基苯胺試劑為無色結(jié)晶，具有一定毒性，使用時(shí)應(yīng)應(yīng)避免接觸皮膚避免接觸皮膚，一旦失誤，需用水沖洗，一旦失誤，需用水沖洗1515分鐘以上。甲分鐘以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不穩(wěn)定，氧基苯胺的冰醋酸溶液不穩(wěn)定，需當(dāng)天配制使用需當(dāng)天配制使用。以異。以異辛烷作空白做基線校正時(shí)，如果測(cè)得的甲氧基苯胺冰醋辛烷作空白做基

18、線校正時(shí)，如果測(cè)得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超過了酸溶液的吸光度超過了0.20.2，則需重新配制試劑。，則需重新配制試劑。 供試品溶液中加入供試品溶液中加入0.250.25的的4-4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后甲氧基苯胺冰醋酸溶液后應(yīng)注意應(yīng)注意避光避光，在，在350nm350nm波長處的吸光度隨時(shí)間的延長緩慢波長處的吸光度隨時(shí)間的延長緩慢增加，需準(zhǔn)確放置增加，需準(zhǔn)確放置1010分鐘后測(cè)定，盡量減小誤差。分鐘后測(cè)定，盡量減小誤差。 本試驗(yàn)受水分影響較大，樣品及試劑中水分的存在會(huì)導(dǎo)本試驗(yàn)受水分影響較大，樣品及試劑中水分的存在會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)不完全，測(cè)定值偏低，當(dāng)樣品中水分含量超過致反應(yīng)不完全，測(cè)定值偏低

19、，當(dāng)樣品中水分含量超過0.1%0.1%時(shí)，可按時(shí)，可按10g10g樣品加樣品加1 12 g2 g無水硫酸鈉無水硫酸鈉的比例脫除水的比例脫除水分后測(cè)定。另外，應(yīng)取用分后測(cè)定。另外，應(yīng)取用新開啟包裝新開啟包裝的供試品。的供試品。2-2-乙基己酸乙基己酸 -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)生產(chǎn)工藝過程中使用對(duì)生產(chǎn)工藝過程中使用2-2-乙基乙基己酸己酸的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測(cè)定；的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測(cè)定；方法增訂為附錄方法增訂為附錄20102010年版藥典二部（附錄年版藥典二部（附錄 l l）；）； 如如: :頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉

20、、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉西林鈉等。等。2-2-乙基己酸乙基己酸 勘誤：勘誤： -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)生產(chǎn)工藝過程中使用對(duì)生產(chǎn)工藝過程中使用2-2-乙基乙基己酸己酸的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測(cè)定；的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測(cè)定；方法增訂為附錄方法增訂為附錄20102010年版藥典二部（附錄年版藥典二部（附錄 l l）；）； 如如: :頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉西林鈉等。等?？闭`：勘誤： 目前中國不僅接受目前中國不僅接受了了ichich對(duì)化學(xué)藥品中殘留溶對(duì)化學(xué)藥品中殘留溶劑控制的理念，而且結(jié)合中國國情，

21、建立了具劑控制的理念，而且結(jié)合中國國情，建立了具有中國特色的殘留溶劑檢查方法。有中國特色的殘留溶劑檢查方法。中國藥典中國藥典20052005版中，對(duì)殘留溶劑的分類及限度標(biāo)版中，對(duì)殘留溶劑的分類及限度標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)與準(zhǔn)已經(jīng)與ichich的要求完全一致，但僅在附錄中作為原的要求完全一致，但僅在附錄中作為原則性統(tǒng)一要求。則性統(tǒng)一要求。 中國藥典中國藥典20102010版中，原料藥要求在各論項(xiàng)下根據(jù)版中，原料藥要求在各論項(xiàng)下根據(jù)其生產(chǎn)工藝制定殘留溶劑檢查方法其生產(chǎn)工藝制定殘留溶劑檢查方法抗生素原料藥幾乎所有品種均在各論項(xiàng)下增訂了詳細(xì)抗生素原料藥幾乎所有品種均在各論項(xiàng)下增訂了詳細(xì)的殘留溶劑檢查方法的殘留溶劑檢

22、查方法p 從附錄走向各論從附錄走向各論殘留溶劑殘留溶劑 如：頭孢泊肟酯如：頭孢泊肟酯 殘留溶劑殘留溶劑 照殘留溶劑測(cè)定法（附錄照殘留溶劑測(cè)定法（附錄 p p）測(cè)定。）測(cè)定。 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、異丙醇、丁酮、乙酸乙酯、甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、異丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙酸丁酯、四氫呋喃、乙酸丁酯、1,2-1,2-二氯乙烷、乙酸異丙酯、苯、四氯二氯乙烷、乙酸異丙酯、苯、四氯化碳、環(huán)己烷、二氧六環(huán)、甲基異丁基酮、吡啶、甲苯化碳、環(huán)己烷、二氧六環(huán)、甲基異丁基酮、吡啶、甲苯 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 略略 內(nèi)標(biāo)溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基

23、亞砜稀釋制成每取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每1ml1ml中約含中約含200g200g的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。殘留溶劑殘留溶劑殘留溶劑檢查方法及驗(yàn)證殘留溶劑檢查方法及驗(yàn)證 ！ 除正文已明確列有除正文已明確列有“殘留溶劑殘留溶劑”檢查的檢查的品種必須依法進(jìn)行檢查外，其他未在品種必須依法進(jìn)行檢查外，其他未在“殘留溶劑殘留溶劑”項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑與未在正文中列有此項(xiàng)的品種，如生產(chǎn)與未在正文中列有此項(xiàng)的品種，如生產(chǎn)過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑，均過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑，均應(yīng)按附錄應(yīng)按附錄“殘留溶劑測(cè)定法殘留溶劑測(cè)定法”檢查并應(yīng)檢查并應(yīng)符合相應(yīng)

24、溶劑的規(guī)定符合相應(yīng)溶劑的規(guī)定 檢測(cè)方法進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整：檢測(cè)方法進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整： 頂空進(jìn)樣甲烷氣體，記錄死時(shí)間頂空進(jìn)樣甲烷氣體，記錄死時(shí)間(t(t0 0) ) 頂空進(jìn)樣供試品溶液，記錄色譜圖，按公式計(jì)算諸色譜峰的保頂空進(jìn)樣供試品溶液，記錄色譜圖，按公式計(jì)算諸色譜峰的保留時(shí)間留時(shí)間( ( t tr r ) )相對(duì)于參考物質(zhì)保留時(shí)間相對(duì)于參考物質(zhì)保留時(shí)間( ( ttr r ) )的相對(duì)調(diào)整保留的相對(duì)調(diào)整保留時(shí)間時(shí)間( relative adjustment retention time( relative adjustment retention time，rartrart) )法替代法替代rr

25、trrt法法 tr為組分的保留時(shí)間為組分的保留時(shí)間;tr為參比物的保留時(shí)間。為參比物的保留時(shí)間。 t0為為甲烷甲烷保留時(shí)間。保留時(shí)間。00ttttrartrr殘留溶劑殘留溶劑 檢測(cè)方法選擇：檢測(cè)方法選擇： 直接進(jìn)樣？頂空進(jìn)樣？限度比較？對(duì)照品法？標(biāo)準(zhǔn)直接進(jìn)樣？頂空進(jìn)樣？限度比較？對(duì)照品法？標(biāo)準(zhǔn)加入法？?jī)?nèi)標(biāo)？外標(biāo)？加入法？?jī)?nèi)標(biāo)？外標(biāo)？ 驗(yàn)證項(xiàng)目確定驗(yàn)證項(xiàng)目確定： 回收試驗(yàn)？最低定量限？最低檢測(cè)限？線性？耐用回收試驗(yàn)？最低定量限？最低檢測(cè)限？線性？耐用性試驗(yàn)？性試驗(yàn)？ 原始記錄較常發(fā)現(xiàn)的問題原始記錄較常發(fā)現(xiàn)的問題 連帶問題：連帶問題：按無水無溶劑計(jì)算按無水無溶劑計(jì)算殘留溶劑方法建立、驗(yàn)證與常見問題

26、殘留溶劑方法建立、驗(yàn)證與常見問題高聚物高聚物凝膠色譜法（凝膠色譜法（20102010年版新增的年版新增的1919個(gè)標(biāo)準(zhǔn)）個(gè)標(biāo)準(zhǔn)）原料原料 制劑制劑 頭孢唑肟鈉頭孢唑肟鈉 注射用頭孢唑肟鈉注射用頭孢唑肟鈉 頭孢替唑鈉頭孢替唑鈉 注射用頭孢替唑鈉注射用頭孢替唑鈉 頭孢尼西鈉頭孢尼西鈉注射用頭孢尼西鈉注射用頭孢尼西鈉 頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉 注射用頭孢噻吩鈉注射用頭孢噻吩鈉 磺芐西林鈉磺芐西林鈉 注射用磺芐西林鈉注射用磺芐西林鈉 阿洛西林鈉阿洛西林鈉 注射用阿洛西林鈉注射用阿洛西林鈉 美洛西林鈉美洛西林鈉 注射用美洛西林鈉注射用美洛西林鈉 氯唑西林鈉氯唑西林鈉 注射用氯唑西林鈉注射用氯唑西林鈉 苯唑西

27、林鈉苯唑西林鈉 注射用苯唑西林鈉注射用苯唑西林鈉 普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素 高聚物高聚物2010版：品種增加版：品種增加,方法多元化方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠g-10（sephadex g 10）；短柱子的使用，減少分離時(shí)間）；短柱子的使用，減少分離時(shí)間 2、 商品凝膠柱商品凝膠柱tsk-gel g2000swxl ：頭孢地嗪（北京所）：頭孢地嗪（北京所） 3、ods柱，聚合物柱，聚合物-氨芐西林鈉舒巴坦鈉（浙江所氨芐西林鈉舒巴坦鈉（浙江所) 4、柱切換、柱切換（中檢所），實(shí)現(xiàn)凝膠色譜與反相色譜的（中檢所），實(shí)現(xiàn)凝膠色譜與

28、反相色譜的統(tǒng)一統(tǒng)一高聚物高聚物鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比較較sephadex g-10系統(tǒng)系統(tǒng)tsk-gel g2000swxl系統(tǒng)系統(tǒng) 0.8ml/min供注射用原料可見異物檢查供注射用原料可見異物檢查 頭孢他啶：頭孢他啶： 取本品取本品5 5份，每份份，每份3.0g3.0g，加，加1%1%碳酸鈉溶液（經(jīng)碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45m0.45m濾膜濾膜濾過）濾過）溶解，依法檢查（附錄溶解，依法檢查（附錄 h h），應(yīng)符合規(guī)定。），應(yīng)符合規(guī)定。 頭孢地嗪鈉：頭孢地嗪鈉： 取本品取本品5 5份，每份份，每份2.02.0g g，分別加，分別加微粒檢查用水微粒檢查用水溶解

29、，依法溶解，依法檢查（附錄檢查（附錄 h h），應(yīng)符合規(guī)定。），應(yīng)符合規(guī)定。有些品種如堿性藥物與玻璃容器久置起反有些品種如堿性藥物與玻璃容器久置起反應(yīng)，產(chǎn)生白點(diǎn)、白塊和玻璃屑應(yīng)，產(chǎn)生白點(diǎn)、白塊和玻璃屑有些品種如甲硝唑等與重金屬發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)有些品種如甲硝唑等與重金屬發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生不溶物生不溶物有些品種如喹諾酮類藥物對(duì)金屬設(shè)備產(chǎn)生有些品種如喹諾酮類藥物對(duì)金屬設(shè)備產(chǎn)生腐蝕，易有金屬屑腐蝕，易有金屬屑有些品種如胰島素等提取的生化大分子易有些品種如胰島素等提取的生化大分子易產(chǎn)生蛋白沉淀產(chǎn)生蛋白沉淀有些品種如頭孢噻肟鈉等成鹽不完全，溶有些品種如頭孢噻肟鈉等成鹽不完全，溶解度太低，產(chǎn)生白點(diǎn)、白塊解度太低，產(chǎn)生白

30、點(diǎn)、白塊引發(fā)不合格的部分原因引發(fā)不合格的部分原因供注射用原料不溶性微粒檢查供注射用原料不溶性微粒檢查 頭孢他啶：頭孢他啶： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸鈉溶液（經(jīng)碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45m0.45m濾膜濾過）溶解濾膜濾過）溶解制成制成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法檢查（附錄的溶液，依法檢查（附錄 c c），每），每1g1g樣品中含樣品中含10m10m以上的微粒不得過以上的微粒不得過60006000個(gè)，含個(gè)，含25m25m以上以上的微粒不得過的微粒不得過600600個(gè)。個(gè)。 頭孢曲松鈉：頭孢曲松鈉： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒檢查用水微粒檢查用水溶解并制

31、成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50mg的的溶液，依法檢查（附錄溶液，依法檢查（附錄 c c），每），每1g1g樣品中含樣品中含10m10m以上以上的微粒不得過的微粒不得過60006000個(gè)，含個(gè)，含25m25m以上的微粒不得過以上的微粒不得過600600個(gè)。個(gè)。供注射用的原料藥增加不溶性微粒檢查以保證制供注射用的原料藥增加不溶性微粒檢查以保證制劑能符合注射劑的要求劑能符合注射劑的要求由于光阻法測(cè)定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)樣品溶由于光阻法測(cè)定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)樣品溶液成正比，故標(biāo)準(zhǔn)給出了不溶性微粒檢查液成正比，故標(biāo)準(zhǔn)給出了不溶性微粒檢查供試品供試品溶液濃度溶液濃度制劑最多有制劑最

32、多有1111個(gè)規(guī)格，個(gè)規(guī)格，均按均按每每1g1g樣品中含樣品中含1010 m m以以上的微粒不得過上的微粒不得過60006000粒，含粒，含2525 m m以上微粒不得過以上微粒不得過600600粒；粒； 強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制供注射用原料不溶性微粒檢查供注射用原料不溶性微粒檢查可見異物可見異物/ /不溶性微粒檢查不溶性微粒檢查 原始記錄問題原始記錄問題 不詳細(xì)不詳細(xì) 無趨勢(shì)無趨勢(shì) 缺方法摸索及分析缺方法摸索及分析 原始記錄建議原始記錄建議控制生產(chǎn)環(huán)境和過程中的污染控制生產(chǎn)環(huán)境和過程中的污染- -外源異物外源異物考察藥物

33、與容器的兼容性考察藥物與容器的兼容性- -內(nèi)源異物內(nèi)源異物考察活性成分的穩(wěn)定性以及與溶劑考察活性成分的穩(wěn)定性以及與溶劑/ /添加添加物的穩(wěn)定性物的穩(wěn)定性- -內(nèi)源異物內(nèi)源異物深刻理解深刻理解“藥品的質(zhì)量源于設(shè)計(jì)藥品的質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”認(rèn)真做好認(rèn)真做好處方研究處方研究/ /工藝驗(yàn)證和穩(wěn)定性考工藝驗(yàn)證和穩(wěn)定性考察察！可見異物檢查的目的可見異物檢查的目的 標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一、規(guī)范、明確、嚴(yán)謹(jǐn)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一、規(guī)范、明確、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)湫晚?xiàng)目典型項(xiàng)目- -無菌檢查方法無菌檢查方法無菌檢查是藥物安全性風(fēng)險(xiǎn)控制的重要項(xiàng)目之一，無菌檢查是藥物安全性風(fēng)險(xiǎn)控制的重要項(xiàng)目之一，但具體檢查方法以前標(biāo)準(zhǔn)中均不給出，由檢驗(yàn)者自但具體檢查方法以前標(biāo)準(zhǔn)

34、中均不給出，由檢驗(yàn)者自己摸索?？股仃栃跃x用不注意抗菌譜，存在試己摸索。抗生素陽性菌選用不注意抗菌譜，存在試驗(yàn)的有效性、一次成功率等問題驗(yàn)的有效性、一次成功率等問題對(duì)每個(gè)品種均要求經(jīng)過驗(yàn)證，確定樣品使用的最適對(duì)每個(gè)品種均要求經(jīng)過驗(yàn)證，確定樣品使用的最適宜宜方法方法（直接接種法？薄膜過濾法），最佳（直接接種法？薄膜過濾法），最佳溶解方溶解方式式、最佳、最佳沖洗液沖洗液、沖洗方式?jīng)_洗方式、敏感的、敏感的陽性對(duì)照菌陽性對(duì)照菌等等操作關(guān)鍵因素，并將上述內(nèi)容按統(tǒng)一規(guī)范格式在質(zhì)操作關(guān)鍵因素，并將上述內(nèi)容按統(tǒng)一規(guī)范格式在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中單獨(dú)立項(xiàng)表述詳細(xì)。量標(biāo)準(zhǔn)中單獨(dú)立項(xiàng)表述詳細(xì)。供注射用原料無菌檢查供注射用原料

35、無菌檢查供注射用原料無菌檢查供注射用原料無菌檢查 頭孢呋辛鈉：頭孢呋辛鈉： 取本品取本品3 3份，加份，加1%1%碳酸鈉溶液（經(jīng)碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45m0.45m濾膜濾過）溶解制濾膜濾過）溶解制成成每每1ml1ml中含中含30mg30mg的溶液，依法檢查（附錄的溶液，依法檢查（附錄 c c），每），每1g1g樣樣品中含品中含10m10m以上的微粒不得過以上的微粒不得過60006000個(gè)，含個(gè)，含25m25m以上的微粒以上的微粒不得過不得過600600個(gè)。個(gè)。 頭孢曲松鈉：頭孢曲松鈉： 取本品取本品3 3份，加份，加微粒檢查用水微粒檢查用水溶解并制成溶解并制成每每1ml1ml中含中含50mg50

36、mg的溶的溶液，依法檢查（附錄液，依法檢查（附錄 c c），每），每1g1g樣品中含樣品中含10m10m以上的微以上的微粒不得過粒不得過60006000個(gè)，含個(gè)，含25m25m以上的微粒不得過以上的微粒不得過600600個(gè)。個(gè)。無菌檢查方法規(guī)范表述方式舉例無菌檢查方法規(guī)范表述方式舉例氧氟沙星氯化鈉注射液：氧氟沙星氯化鈉注射液： 無菌無菌 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用0.1%無菌蛋無菌蛋白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于500ml），每管培），每管培養(yǎng)基中加入養(yǎng)基中加入0.1mol/l硫酸錳溶液硫酸錳溶液1ml，以大腸埃希菌為，以大腸埃希菌為

37、陽性對(duì)照菌，依法檢查（附錄陽性對(duì)照菌，依法檢查（附錄 h），應(yīng)符合規(guī)定。），應(yīng)符合規(guī)定。乙酰谷酰胺注射液：乙酰谷酰胺注射液： 無菌無菌 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用0.1%0.1%無菌蛋無菌蛋白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于100ml100ml），以金黃色），以金黃色葡萄球菌為陽性對(duì)照菌，依法檢查（附錄葡萄球菌為陽性對(duì)照菌，依法檢查（附錄 h h），應(yīng)），應(yīng)符合規(guī)定符合規(guī)定。注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示 純度要高、雜質(zhì)要少、生物純度要高、雜質(zhì)要少、生物負(fù)荷要負(fù)荷要低低 從源頭控制雜質(zhì)的數(shù)和量、染菌的數(shù)和量、熱從源頭

38、控制雜質(zhì)的數(shù)和量、染菌的數(shù)和量、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素原或細(xì)菌內(nèi)毒素 重點(diǎn)品種為營養(yǎng)性、無抑菌性、制劑有注射劑型重點(diǎn)品種為營養(yǎng)性、無抑菌性、制劑有注射劑型 注射劑用原料注重?cái)?shù)量注射劑用原料注重?cái)?shù)量 口服原料也要限定菌屬種類（沙門氏菌）口服原料也要限定菌屬種類（沙門氏菌）原料藥微生物限度檢查原料藥微生物限度檢查注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示 胰島素（制劑為注射劑）胰島素（制劑為注射劑） 取本品取本品0.2g,依法檢查（附錄依法檢查（附錄 j），每），每1g中含中含細(xì)菌數(shù)不得過細(xì)菌數(shù)不得過300個(gè)。個(gè)。 胰酶（制劑為口服制劑，來源于動(dòng)物提?。┮让福ㄖ苿榭诜苿瑏碓从趧?dòng)物提?。?

39、取本品取本品,依法檢查（附錄依法檢查（附錄 j），每），每1g供試品中細(xì)菌數(shù)不供試品中細(xì)菌數(shù)不得過得過10000個(gè)，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過個(gè)，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過100個(gè)。并不得個(gè)。并不得檢出大腸埃希菌；每檢出大腸埃希菌；每10g供試品中不得檢出供試品中不得檢出沙門菌。沙門菌。原料藥微生物限度檢查原料藥微生物限度檢查注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示 必要時(shí)必要時(shí)應(yīng)增設(shè)相應(yīng)的安全性檢查，如異常毒性、過敏反應(yīng)、應(yīng)增設(shè)相應(yīng)的安全性檢查，如異常毒性、過敏反應(yīng)、溶血與凝聚、降壓物質(zhì)、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素等溶血與凝聚、降壓物質(zhì)、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素等 因?yàn)橛行┧幬锍煞謴?fù)雜、組分結(jié)構(gòu)不清晰（如

40、多組分抗生素因?yàn)橛行┧幬锍煞謴?fù)雜、組分結(jié)構(gòu)不清晰（如多組分抗生素動(dòng)物來源提取的生化藥等）、采用化學(xué)手段難于監(jiān)控雜質(zhì)動(dòng)物來源提取的生化藥等）、采用化學(xué)手段難于監(jiān)控雜質(zhì) 異常毒性：有可能污染異常毒性：有可能污染生物毒性生物毒性物質(zhì)的品種物質(zhì)的品種（發(fā)酵）（發(fā)酵） 過敏反應(yīng)：有可能污染過敏反應(yīng)：有可能污染異源蛋白異源蛋白或未知過敏反應(yīng)物質(zhì)的品種或未知過敏反應(yīng)物質(zhì)的品種 降壓物質(zhì)：有可能污染組胺、類組胺樣物質(zhì)的品種降壓物質(zhì)：有可能污染組胺、類組胺樣物質(zhì)的品種（腐?。ǜ瘮。┕┳⑸溆迷习踩詸z查供注射用原料安全性檢查增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控 用化學(xué)手段不能控制組成、

41、雜質(zhì)無法控制的生物用化學(xué)手段不能控制組成、雜質(zhì)無法控制的生物來源品種均增加了來源品種均增加了異常毒性、過敏反應(yīng)異常毒性、過敏反應(yīng)等動(dòng)物試等動(dòng)物試驗(yàn)：如驗(yàn)：如硫酸魚精蛋白硫酸魚精蛋白等等硫酸魚精蛋白硫酸魚精蛋白 魚精蛋白主要存在于魚類的成熟精巢組織中，與魚精蛋白主要存在于魚類的成熟精巢組織中，與dnadna緊密結(jié)合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一緊密結(jié)合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一種小而簡(jiǎn)單的球形堿性蛋白質(zhì)，分子量在種小而簡(jiǎn)單的球形堿性蛋白質(zhì)，分子量在1 1萬以下，萬以下，由由3030個(gè)左右的氨基酸組成，其中個(gè)左右的氨基酸組成，其中2/ 32/ 3以上是精氨酸，以上是精氨酸，幾乎不含

42、芳香族氨基酸。幾乎不含芳香族氨基酸。 吸光度吸光度 參照參照bp2008/ep6.0bp2008/ep6.0增訂。根據(jù)本品組成，增訂。根據(jù)本品組成，如果純化步驟將核酸和雜蛋白均去除的話，在如果純化步驟將核酸和雜蛋白均去除的話，在260260 280nm280nm的波長范圍內(nèi)吸光度應(yīng)很小，但考察結(jié)果的波長范圍內(nèi)吸光度應(yīng)很小，但考察結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過bp2008/ep6.0bp2008/ep6.0所規(guī)定的所規(guī)定的0.10.1。 峰峰1. 1. 縮宮素；峰縮宮素；峰2. 2. 三氯叔丁醇，三氯叔丁醇，其余均為雜質(zhì)峰其余均為雜質(zhì)峰min051015202530mau 01020304012 4.63

43、2 5.438 6.300 6.820 7.063 7.461 8.621 9.139 9.668 9.998 10.603 10.962 11.855 12.181 12.743 13.577 15.421 19.188 25.374縮宮素注射液縮宮素注射液hplc檢查色譜圖檢查色譜圖編號(hào)編號(hào)單個(gè)最大雜質(zhì)（單個(gè)最大雜質(zhì)（%）總雜質(zhì)（總雜質(zhì)（%）18.928.328.333.339.224.748.325.056.727.666.122.175.520.089.431.299.331.0109.431.31117.333.31217.532.61317.632.5148.523.6158.02

44、4.7163.720.4178.429.8188.229.7198.129.7增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控 成分復(fù)雜、雜質(zhì)無法控制但質(zhì)量與顏色相關(guān)度高成分復(fù)雜、雜質(zhì)無法控制但質(zhì)量與顏色相關(guān)度高的品種增加的品種增加溶液的顏色，溶液的顏色，如如糜蛋白酶糜蛋白酶等。等。溶液顏色檢查的目的 自身自身性質(zhì)性質(zhì) 純度純度 雜質(zhì)雜質(zhì)含量含量- -簡(jiǎn)易、直觀、快速、綜合的對(duì)有色雜質(zhì)進(jìn)行檢查簡(jiǎn)易、直觀、快速、綜合的對(duì)有色雜質(zhì)進(jìn)行檢查穩(wěn)定性差穩(wěn)定性差質(zhì)量與顏色聯(lián)系緊密的質(zhì)量與顏色聯(lián)系緊密的安全性要求高安全性要求高用儀器定量測(cè)雜質(zhì)困難用儀器定量測(cè)雜質(zhì)困難檢查顏色檢查顏色的品種的品種適

45、宜進(jìn)行溶液的顏色檢查的原料建立方法時(shí)要考慮的問題建立方法時(shí)要考慮的問題溶劑溶劑濃度濃度穩(wěn)定性穩(wěn)定性臨床安全性需要臨床安全性需要工藝生產(chǎn)能力工藝生產(chǎn)能力同類產(chǎn)品水平同類產(chǎn)品水平溶液的溶液的顏色顏色制訂限度時(shí)要考慮的問題制訂限度時(shí)要考慮的問題主成分主成分純度純度雜質(zhì)的雜質(zhì)的含量含量穩(wěn)定性穩(wěn)定性數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)臨床安全性需要臨床安全性需要工藝生產(chǎn)能力工藝生產(chǎn)能力同類產(chǎn)品水平同類產(chǎn)品水平顏色的顏色的限度限度應(yīng)用色差計(jì)轉(zhuǎn)換進(jìn)口藥注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)-舉例溶液的顏色溶液的顏色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)無色；如顯色，與同體積的比色液（取棕紅色貯備液1.8ml加8.2ml水，混勻）比較（中國藥典2010年版二部

46、附錄 a第一法），不得更深。色差計(jì)法應(yīng)用舉例說明：說明：企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)按企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)按epep檢查，規(guī)定檢查，規(guī)定“與與b5b5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（epep第第5 5版版2.2.22.2.2溶液的顏色）比較不得更深溶液的顏色）比較不得更深”。因。因epep標(biāo)準(zhǔn)比色液從三原色開始就與中國藥典不同，如按此標(biāo)準(zhǔn)比色液從三原色開始就與中國藥典不同，如按此檢查會(huì)有困難，故采用色差計(jì)進(jìn)行了對(duì)比測(cè)定，結(jié)果檢查會(huì)有困難，故采用色差計(jì)進(jìn)行了對(duì)比測(cè)定，結(jié)果epep的的b5b5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值（號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值（e e* *=3.58=3.58）與中國藥）與中國藥典典br3br3號(hào)（號(hào)（e e* *=3.19=

47、3.19）和）和br4br4號(hào)（號(hào)（e e* *=4.46=4.46）的中值）的中值（3.823.82）較為接近，約相當(dāng)于）較為接近，約相當(dāng)于br3.5br3.5號(hào)。因號(hào)。因br3br3號(hào)是取號(hào)是取棕紅色貯備液棕紅色貯備液1.5ml1.5ml加加8.5ml8.5ml水，水，br4br4號(hào)是取棕紅色貯備號(hào)是取棕紅色貯備液液2.0ml2.0ml加加8.0ml8.0ml水配制而成，所以本次復(fù)核將棕紅色水配制而成，所以本次復(fù)核將棕紅色貯備液貯備液1.8ml1.8ml加加8.2ml8.2ml水配制了專用比色液，該比色液水配制了專用比色液，該比色液的的e e* *為為3.643.64，與，與epep b5

48、b5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值幾乎一號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值幾乎一致，按此轉(zhuǎn)換限度既不改變質(zhì)控原有水平，又方便在致，按此轉(zhuǎn)換限度既不改變質(zhì)控原有水平，又方便在國內(nèi)檢驗(yàn)。國內(nèi)檢驗(yàn)。 應(yīng)用色差計(jì)轉(zhuǎn)換進(jìn)口藥注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)-舉例藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例 由于某些藥物組成的復(fù)雜性，特別是一些生物大分由于某些藥物組成的復(fù)雜性，特別是一些生物大分子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當(dāng)前的質(zhì)子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當(dāng)前的質(zhì)控需要，控需要，20102010年版藥典逐漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。年版藥典逐漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。 首次運(yùn)用首次運(yùn)用毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳法 注射用抑肽酶：檢查兩個(gè)特定雜質(zhì)

49、注射用抑肽酶：檢查兩個(gè)特定雜質(zhì) 注射用鹽酸頭孢吡肟：注射用鹽酸頭孢吡肟： 方法方法1-1-毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳法 n- n-甲基吡咯烷甲基吡咯烷 方法方法2-hplc2-hplc法（羧基柱，電導(dǎo)檢測(cè)）法（羧基柱，電導(dǎo)檢測(cè)）毛細(xì)管電泳法檢查特定雜質(zhì)毛細(xì)管電泳法檢查特定雜質(zhì)抑肽酶由上海藥檢所起草，參考抑肽酶由上海藥檢所起草，參考uspusp增訂增訂去丙氨酸去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶酶和去丙氨酸抑肽酶檢查項(xiàng)檢查項(xiàng)色譜條件：石英毛細(xì)管分離柱，毛細(xì)管溫度：色譜條件：石英毛細(xì)管分離柱，毛細(xì)管溫度：3030，電極液：磷，電極液：磷酸二氫鉀溶液；分離壓：酸二氫鉀溶液；分離

50、壓：12kv12kv；波長：；波長：214nm214nm結(jié)果：去丙氨酸抑肽酶結(jié)果：去丙氨酸抑肽酶rtrt為為0.990.99，去丙氨酸，去丙氨酸- -去甘氨酸去甘氨酸- -抑肽酶抑肽酶rtrt為為0.980.98，兩相關(guān)物間分離度，兩相關(guān)物間分離度1.401.40，去丙氨酸，去丙氨酸- -抑肽酶與抑肽酶間分抑肽酶與抑肽酶間分離度離度1.241.24、抑肽酶拖尾因子、抑肽酶拖尾因子1.81.8minutes1516171819202122232425au-0.006-0.004-0.0020.0000.0020.0040.0060.00818.35418.55418.792抑肽酶抑肽酶sds-p

51、agesds-page凝膠電泳圖凝膠電泳圖 本品系自牛胰或肺中提取、純化制得的肽酶抑制劑。本品系自牛胰或肺中提取、純化制得的肽酶抑制劑。 采用采用sds-pagesds-page凝膠電泳的方法抑肽酶的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)凝膠電泳的方法抑肽酶的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果如圖所示，都只有一個(gè)條帶。可能是抑肽酶和有關(guān)果如圖所示，都只有一個(gè)條帶?？赡苁且蛛拿负陀嘘P(guān)物質(zhì)的分子量相差不大，使用凝膠電泳不能將其分離物質(zhì)的分子量相差不大，使用凝膠電泳不能將其分離藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例 首次運(yùn)用首次運(yùn)用柱串聯(lián)技術(shù)柱串聯(lián)技術(shù)- -抑肽酶抑肽酶 參照參照usp32usp32用三根用三根tsktsk柱串聯(lián)檢查高

52、分子蛋白質(zhì)。采柱串聯(lián)檢查高分子蛋白質(zhì)。采用分子排阻色譜法，用三根色譜柱串聯(lián)（用分子排阻色譜法，用三根色譜柱串聯(lián)（tsk-tsk-g4000swxlg4000swxl柱）柱溫柱）柱溫3535，流速，流速1.0ml/min,1.0ml/min,二聚體二聚體rt0.9rt0.9，與主峰分離度，與主峰分離度1.41.4，主峰拖尾因子，主峰拖尾因子0.910.91。min01020304050mau 020406080 vwd1 a, wavelength=280 nm (xmm20090304000012.d) 28.522 30.036藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例柱串聯(lián)技術(shù)柱串聯(lián)

53、技術(shù) 適用于適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，的難分離物質(zhì)，通過將一根通過將一根scxscx（陽離子交換陽離子交換）短柱與一根）短柱與一根mgmgc c1818長柱串聯(lián)長柱串聯(lián)就可以簡(jiǎn)單達(dá)到將其分離的目的。就可以簡(jiǎn)單達(dá)到將其分離的目的。 原理：原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會(huì)由于正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會(huì)由于scxscx短柱的離子交換短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（

54、通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會(huì)毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入質(zhì)）與中性物質(zhì)則會(huì)毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入c18c18長柱中，從長柱中，從而成功分離；然后由于而成功分離；然后由于mgcmgc1818長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作用而對(duì)中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對(duì)帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留用而對(duì)中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對(duì)帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡(jiǎn)單被分開了作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡(jiǎn)單被分開了 如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換短柱與短柱與c c1818長柱前接一根長柱前接一根nhnh2

55、2短柱短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。 藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例 首次運(yùn)用首次運(yùn)用肽圖分析技術(shù)肽圖分析技術(shù)： 根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點(diǎn)，使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶，一般為肽鏈內(nèi)點(diǎn)，使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶，一般為肽鏈內(nèi)切酶，作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷，切酶，作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷，再通過一定的分離檢測(cè)手段形

56、成特征性指紋圖譜，再通過一定的分離檢測(cè)手段形成特征性指紋圖譜，用此法進(jìn)行鑒別，專屬性強(qiáng)，可鑒別僅相差一個(gè)氨用此法進(jìn)行鑒別，專屬性強(qiáng)，可鑒別僅相差一個(gè)氨基酸殘基的不同種屬來源的樣品?；釟埢牟煌N屬來源的樣品。 如如胰島素胰島素- -采用采用v8v8酶解酶解+hplc+hplc法；法； 重組人生長激素重組人生長激素- -采用胰蛋白酶酶解采用胰蛋白酶酶解+hplc+hplc法獲得肽法獲得肽圖進(jìn)行鑒別圖進(jìn)行鑒別等。等。胰島素肽圖胰島素肽圖人胰島素酶解人胰島素酶解-hplc-hplc肽圖肽圖豬胰島素酶解豬胰島素酶解-hplc-hplc肽圖肽圖電泳法電泳法- -等電聚焦水平板電泳法等電聚焦水平板電泳法

57、瓊脂糖凝瓊脂糖凝膠電泳法膠電泳法醋酸纖維素醋酸纖維素薄膜電泳法薄膜電泳法紙電泳紙電泳法法等點(diǎn)聚焦水等點(diǎn)聚焦水平板電泳法平板電泳法聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝膠電泳法凝膠電泳法sds-聚丙烯酰聚丙烯酰胺凝膠電泳法胺凝膠電泳法典型的等電聚焦圖譜典型的等電聚焦圖譜重組人生長激素（二部第重組人生長激素（二部第566566頁）頁）用此法做鑒別用此法做鑒別 純化水、注射用水和滅菌注射用水的增修純化水、注射用水和滅菌注射用水的增修訂訂u純化水、注射用水的修訂純化水、注射用水的修訂增訂：增訂： 電導(dǎo)率電導(dǎo)率 氯化物氯化物硫酸鹽硫酸鹽鈣鹽鈣鹽二氧化碳二氧化碳 總有機(jī)碳測(cè)定總有機(jī)碳測(cè)定 易氧化物易氧化物藥典中新檢驗(yàn)技術(shù)

58、的應(yīng)用藥典中新檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用藥典附錄通用檢測(cè)方法變化提示藥典附錄通用檢測(cè)方法變化提示重金屬檢查法：重金屬檢查法： 甲管（標(biāo)準(zhǔn)）乙管（供試品）甲管（標(biāo)準(zhǔn)）乙管（供試品） + +丙管（標(biāo)準(zhǔn)丙管（標(biāo)準(zhǔn)+ +供試品）供試品） 如丙管顏色淺于甲管則將一法改為二法進(jìn)行檢查如丙管顏色淺于甲管則將一法改為二法進(jìn)行檢查 勘誤！第二法規(guī)定乙管（標(biāo)準(zhǔn)）中顯出的顏色勘誤！第二法規(guī)定乙管（標(biāo)準(zhǔn)）中顯出的顏色與甲管（供試品）比較，不得更深。與甲管（供試品）比較，不得更深。 附錄通用檢測(cè)方法中的變化提示附錄通用檢測(cè)方法中的變化提示澄清度檢查法：澄清度檢查法： 增加增加“幾乎澄清幾乎澄清”的定義：的定義：0.50.5號(hào)號(hào)1

59、1號(hào)號(hào)溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法 恢復(fù)恢復(fù)“無色或幾乎無色無色或幾乎無色”的定義的定義 性狀顏色描述與顏色檢查項(xiàng)匹配：原有些液體制劑品種顏性狀顏色描述與顏色檢查項(xiàng)匹配：原有些液體制劑品種顏色檢查項(xiàng)規(guī)定色檢查項(xiàng)規(guī)定“與黃色與黃色2 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，不得更深號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，不得更深”，但性狀描述為但性狀描述為“無色或幾乎無色的澄明液體無色或幾乎無色的澄明液體”，與附錄定，與附錄定義不匹配，現(xiàn)修訂為義不匹配，現(xiàn)修訂為“無色至微黃色的澄明液體無色至微黃色的澄明液體”。 本版藥典中極個(gè)別品種仍然存在此問題本版藥典中極個(gè)別品種仍然存在此問題！尼莫地平注射液！尼莫地平注射液 藥典附錄變化提示藥典附錄

60、變化提示 引濕性試驗(yàn)指導(dǎo)原則引濕性試驗(yàn)指導(dǎo)原則重金屬檢查法：重金屬檢查法：phph測(cè)定法：測(cè)定法：不溶性微粒檢查法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：可見異物檢查法：滲透壓摩爾濃度：滲透壓摩爾濃度： 20102010年版年版20052005年版年版（1 1）供試品）供試品 符合藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（2 2）稱量瓶稱量瓶 試驗(yàn)前一天置試驗(yàn)前一天置252511 80802%2%環(huán)境中預(yù)引濕環(huán)境中預(yù)引濕（3 3）瓶蓋同條件放置）瓶蓋同條件放置（1 1）供試品）供試品 干燥失重或水分符干燥失重或水分符 合限度要求合限度要求（2 2）稱量瓶稱量瓶 沒要求預(yù)引濕沒要求預(yù)引濕（3 3）瓶蓋）瓶蓋 沒