喘息靈膠囊Ⅰ（含馬兜鈴）和喘息靈膠囊Ⅱ（不含馬兜鈴）平喘作用的比較

1、喘息靈膠囊i （含馬兜鈴）和喘息靈膠囊ii （不含馬兜鈴）平喘作用的比較:鄧元榮，謝振家，劉詩(shī)洪，邱騰穎【摘要】 目的比較喘息靈膠囊i （原方，含馬兜鈴）和ii （新 方，不含馬兜鈴）的平喘作用。方法用豚鼠噴霧致喘法和豚鼠離體 氣管螺條法比較喘息靈膠囊二個(gè)樣品的平喘作用，用量反應(yīng)六點(diǎn)法 計(jì)算 其效價(jià)比。結(jié)果喘息靈膠囊二個(gè)樣品3個(gè)劑量均能明顯延長(zhǎng) 哮喘潛伏期并對(duì)離體氣管平滑肌具有松弛作用；豚鼠噴霧致喘法的 效價(jià)比i : 11=1 : 0.97 （95%可信限為0.47-1.47）,豚鼠離體氣 管螺條法的效價(jià)比i : 11=1 ： 0.98 （95%可信限為0.761.20）。 結(jié)論 喘息靈膠囊i

2、 （原方）和ii （新方）均有明顯的平喘作用， 二個(gè)樣品的效價(jià)相當(dāng)?！娟P(guān)鍵詞】 喘息靈膠囊i、ii;馬兜鈴；平喘作用；噴霧致喘 法；離體氣管螺條法abstract:objective chuanxiling capsules i debilis sieb. et zuccto pare the anti(original prescription,)and chuanxilingasthmatic effects of containing aristolochia capsules ii (modifiedprescription, not containing aristolochia d

3、ebilis sieb. et zucc) methods the antitussive effects of chuanxiling capules i and ii ethod of spray induced asthma on the guinea pigs and the method of in vitro trachea on the guinea pigs, and calculate the potency ratios ethod of dosage reaction. results all the three doses of the tples can prolon

4、g the animal' s cough latent period and relieve the in vitro trachea smooth muscle. the potency ratio under the method of spray induced asthma is i ： 11 = 1 ： 0.97 (95% confidence interval is 0.471.47). and the ratio under the method of in vitro trachea is i ： ii = 1 ： 0.98 (95% confidence inter

5、val is 0.76 1.20). conclusion both chuanxiling capsules i and ii have the obvious anti asthma effect and their potency ratios are almost the samekey a effect ； method of spray induced asthma ； in vitro trachea喘息靈膠囊是由中藥（含馬兜鈴等）和化學(xué)藥組成的中西夯復(fù) 方制劑，經(jīng)國(guó)家批準(zhǔn)1,臨床用于治療哮喘，以緩解氣喘、咳 嗽、咳痰等癥狀，療效確切。近年來(lái)，由于有關(guān)馬兜鈴引起慢性腎 損害的報(bào)道

6、及許多國(guó)家對(duì)馬兜鈴的禁用2,故擬將喘息靈膠囊中 的馬兜鈴去除，觀測(cè)其對(duì)平喘、止咳和祛痰的影響。本研究通過(guò)豚 鼠噴霧致喘法實(shí)驗(yàn)和豚鼠離體氣管螺條法實(shí)驗(yàn)觀察喘息靈膠囊i（原方，含馬兜鈴）和膠囊ii （新方，去馬兜鈴）的平喘作用，并 比較兩藥在平喘作用上的差異。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物 豚鼠100只,體質(zhì)量300400 g,雌雄各半，清潔級(jí)， 由上海申旺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)：scxk （7）2002-0012, 合格證號(hào):n0007262；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院屏障系 統(tǒng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（syxk（閩）20060004）。1.2試劑與儀器喘息靈膠囊i （原方），規(guī)格:0.29 g/粒（含馬兜

7、 鈴30 mg）,批號(hào):050101。喘息靈膠囊ii （新方），規(guī)格:0.26 0粒（去馬 兜鈴），批號(hào):050109o試驗(yàn)中兩藥等效劑量比為1 ：0.9,均為中試產(chǎn) 品，由廈門建發(fā)制藥有限公司提供。磷酸組胺，5妙瓶，上海國(guó)藥集 團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào):f20041224o氨茶堿，上海一平制藥 有限公司提供，批號(hào)：20040529c氯乙酰膽堿,5 g/片，上海國(guó)藥集團(tuán) 化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào):lot.no.6240-bd生物信號(hào)采集分析系 統(tǒng)，成都儀器廠生產(chǎn)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用spss 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用單因素方差分析和生物六點(diǎn)法 方差分析，p<0.05為差異有顯

8、著性。2方法與結(jié)果2豚鼠噴霧致喘法3篩選豚鼠：取健康豚鼠，用多功能 霧化器將0.1%磷酸組胺和1.0%氯乙酰膽堿等容積混合液以2 ml/min流速向密封玻璃容器（容積4 000 ml）開(kāi)始噴霧，到玻璃容 器內(nèi)全部充滿白色霧為準(zhǔn)，將豚鼠放入其中接受噴霧15 s,噴霧終 止，立即取出豚鼠，記錄自噴霧起出現(xiàn)哮喘的潛伏期。哮喘分級(jí)： i.呼吸加速;ii呼吸困難;iii.抽搐;iv.翻倒。以iv翻倒為標(biāo)準(zhǔn)，潛伏 期以120 s為限，超過(guò)者認(rèn)為不敏感，棄除（注：動(dòng)物一出現(xiàn)抽搐， 即拉開(kāi)箱門取出動(dòng)物，以免動(dòng)物因窒息而死亡）。次日實(shí)驗(yàn)取合格豚鼠82只，體質(zhì)量300400 g,雌雄各半，隨 機(jī)分為8組：陰性對(duì)照

9、組12只，其余各組10只。各給藥組按劑量 灌胃給藥，灌胃容積均為15 ml/100 g bg kg-lo末次給藥前各組 動(dòng)物禁食給水12 h。末次給藥后1 h,讓豚鼠接受噴霧刺激，方法同 前篩選實(shí)驗(yàn)，記錄自噴霧起岀現(xiàn)哮喘的潛伏期。哮喘以iv翻倒為標(biāo) 準(zhǔn)。每組動(dòng)物均按以上方法同樣操作，每組試驗(yàn)結(jié)束后，必須更換 溶液，以免影響因濃度而產(chǎn)生誤差。結(jié)果見(jiàn)表13。從表1可見(jiàn)，喘息靈膠囊i和ii的3個(gè)劑量對(duì)0.1%磷酸組胺和 1.0%氯乙酰膽堿致豚鼠氣管痙攣所引起的哮喘有明顯延長(zhǎng)哮喘發(fā)生 潛伏期作用，與生理鹽水組比較差異有顯著性（p<0.01）,說(shuō)明具 有平喘作用。表1喘息靈膠囊i和ii對(duì)豚

10、鼠噴霧致喘法的影響（略）tab.l the parison of the effects of chuanxiling capsules i and ii on the guinea pigs ethod of spray induced asthma與生理鹽水組比較：*p<ool表2喘息靈膠囊i和ii對(duì)豚鼠噴霧致喘法六點(diǎn)法方差分析 （略）tab.2 the variance analysis of six point method applied on chuanxiling capsules i and ii on the guinea pigs ethod of spray

11、 induced asthma表3喘息靈膠囊i和ii對(duì)豚鼠噴霧致喘法效價(jià)比較（略）tab.3 the potency ratios of chuanxiling capsules i and ii on the guinea pigs ethod of spray induced asthma從表2可見(jiàn)，喘息靈膠囊i和ii二個(gè)藥物間的變異無(wú)顯著性 （p>0.05）,說(shuō)明兩藥作用強(qiáng)度差別無(wú)顯著性；回歸間和組間變 異有顯著性（p<o.ol）,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)劑量比值及實(shí)驗(yàn)組安排妥當(dāng)； 偏離平行、二次曲線及反向二次曲線檢驗(yàn)無(wú)顯著性（p>oo5）, 說(shuō)明兩藥的量效曲線

12、無(wú)二次曲線關(guān)系和反向曲線關(guān)系，兩線呈直線 平行關(guān)系，可以計(jì)算效價(jià)。綜上所述，可見(jiàn)本實(shí)驗(yàn)的可靠性檢查是 合格可靠的，因此可進(jìn)行可信限計(jì)算。分析結(jié)果表3表明，喘息靈膠囊i和ii二個(gè)藥品，對(duì)哮喘潛伏 期延長(zhǎng)率作用的效價(jià)比i : ii二1 : 0.97 （95%可信限為0.47- 1.47） o2.2離體氣管平滑肌螺旋條收縮實(shí)驗(yàn)32.2.1藥物的配制 實(shí)驗(yàn)前24 h取喘息靈i和ii各10.0 g和8.9 g,分別加克氏液（ph-7.1） 100 ml,配成濃度為10%與8.9%溶 液，放入詔°c冰箱內(nèi)進(jìn)行浸泡保存?zhèn)溆?。次日離心取上清液并在取 得的上清液基礎(chǔ)上再用克氏液稀釋10倍，即為1.0%

13、與0.89%的受 試藥物溶液，測(cè)量其ph值分別為6.0和5.9o實(shí)驗(yàn)時(shí)分別取1.25. 0.625、0.312 ml的受試藥物溶液到容量為30 ml麥?zhǔn)显〔壑?，喘?靈膠囊i給藥3劑量組的終濃度為4.167 x 10-4> 2.083 x 10-4.1.042 x 10-4 g/l,喘息靈膠囊ii給藥3劑量組的終濃度為2.967x10- 4、1.483xi0-4> 0.742x10-4 g/l。陰性組給予克氏液,陽(yáng)性組給予 鹽酸異丙腎上腺素。2.2.2離體氣管平滑肌螺旋條的制備取400500 g豚鼠，擊 昏，立即剪開(kāi)頸部皮膚，分離氣管，從屮狀軟骨下至氣管下端分叉 處將整段氣管剪下，

14、置含氧的k h （krebs henseleit）液的培養(yǎng)皿中，細(xì)心剔除氣管周圍的結(jié)締組織，將氣管剪成螺旋條狀，寬 度以23個(gè)氣管環(huán)為宜(一段氣管可制成23個(gè)螺旋條，采用拉 氏浴槽內(nèi)用(37±0.5)°ck h液30 ml灌注，通入氧氣。開(kāi)啟 rm6240 bd多道生理信號(hào)采集分析系統(tǒng)，設(shè)置儀器參數(shù)，靜止丁法選取螺旋條做實(shí)驗(yàn))。定于容量為30 ml麥?zhǔn)显〔壑?在麥負(fù)荷為1 g,靈敏度為1 g,走紙速度為10.0 s/div (0.5 mm/s)。2.2.3實(shí)驗(yàn)方法 離體氣管平滑肌螺旋條固定于麥?zhǔn)显〔壑?，?記正常曲線30 min,加入0.1%磷酸組胺0.05 ml (終濃度

15、5.0x10-7 mmol l-1)刺激，使氣管平滑肌呈收縮狀態(tài)，待收縮到平穩(wěn)時(shí)，給 予各受試藥品，此時(shí)開(kāi)始記錄時(shí)間并描記5 min曲線，然后 計(jì)算 抑制白分率。各受試藥物試驗(yàn)順序采用拉丁法排序，方法同前。結(jié) 果見(jiàn)表4-6 o抑制率二(給藥前曲線高度給藥后曲線高度)/給藥前曲線高 度 x100%表4喘息靈膠囊i和ii對(duì)離體氣管平滑肌螺旋條收縮抑制的影 響(略)tab.4 the inhibitory effects of chuanxiling capsules i and ii on contracting of in vitro trachea smooth muscle與克氏液組比較：*

16、p<0.01從表4可見(jiàn)，喘息靈膠囊i和ii的3個(gè)劑量對(duì)0.1%磷酸組胺致 豚鼠離體氣管平滑肌螺旋條收縮有明顯抑制作用，與克氏液組比較 差異有顯著性(p<0.01),說(shuō)明具有解除氣管平滑肌痙攣?zhàn)饔?。從?可見(jiàn)，喘息靈膠囊i和ii二個(gè)藥品間的變異無(wú)顯著意義 (p>0.05),說(shuō)明兩藥作用強(qiáng)度差別無(wú)顯著性；回歸和組間變異 有顯著意義(p<0.01),說(shuō)明實(shí)驗(yàn)劑量比值及實(shí)驗(yàn)組安排妥當(dāng)； 偏離平行、二次曲線及反向二次曲線檢驗(yàn)無(wú)顯著意義 (p>0.05),說(shuō)明兩藥的量效曲線無(wú)二次曲線關(guān)系和反向曲線關(guān) 系，兩線呈直線平行關(guān)系，可以計(jì)算效價(jià)

17、。綜上所述，可見(jiàn)本實(shí)驗(yàn) 的可靠性檢查是合格可靠的，因此可進(jìn)行可信限計(jì)算。分析結(jié)果表6表明，喘息靈膠囊i和ii對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌 螺旋條收縮抑制作用的效價(jià)比，i ： ii = 1 : 0.98 (95%可信限為 0.76-1.20) o表5喘息靈膠囊i和ii對(duì)離體氣管平滑肌螺旋條收縮抑制六點(diǎn) 法方羌分析(略)tab.5 the variance analysis of six point method applied onchuanxiling capsules i and ii on in vitro trachea smooth muscle表6喘息靈膠囊i和ii對(duì)離體氣管平滑肌螺旋條收縮抑制的效 價(jià)結(jié)果（略）tab.6 the potency result of the inhibitory effects of chuanxiling capsules i and ii on contracting of in vitro trachea smooth muscle2.3最大耐受量（mtd）和最大給藥量測(cè)定4取昆明小鼠 60只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，陰性對(duì)照組、喘息靈