《飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物的測(cè)定尼龍袋法》編制說(shuō)明

1、飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物的測(cè)定尼龍袋法編制說(shuō)明(送審稿 )一、 標(biāo)準(zhǔn)制定背景及任務(wù)來(lái)源1.1 標(biāo)準(zhǔn)制定背景瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物（ FOM）的量與瘤胃產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸（ VFA ）量和微生物蛋白質(zhì)（ MCP）產(chǎn)量成正比， VFA 和 MCP 產(chǎn)量又與反芻動(dòng)物生產(chǎn)性能密切相關(guān)。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)馮仰廉教授在奶牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn) （ NY/T34-2004 ）中首次提出了“瘤胃能氮平衡原理” ，即通過(guò)比較用 FOM 估測(cè)的 MCP 的產(chǎn)量與用瘤胃降解蛋白（ RDP）估測(cè)的 MCP 產(chǎn)量間的關(guān)系來(lái)確定日糧的能氮是否平衡，能氮平衡能達(dá)到最高的 MCP 合成量和最佳的飼料利用率。 因此，F(xiàn)OM 已逐漸成為配置反芻動(dòng)物日糧的重

2、要指標(biāo)。生產(chǎn)單位很難實(shí)現(xiàn) FOM 的測(cè)定，目前科研院所關(guān)于 FOM 的測(cè)定都是采用尼龍袋法或根據(jù)飼料常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分估測(cè)，但由于尼龍袋布料孔徑、動(dòng)物飼喂水平等的不同將導(dǎo)致不同檢測(cè)結(jié)果間沒(méi)有可比性， 不利于指導(dǎo)動(dòng)物生產(chǎn)。因此，現(xiàn)亟需在國(guó)內(nèi)統(tǒng)一 FOM 的測(cè)定方法，明確反芻動(dòng)物主要飼料原料和配合飼料的 FOM 含量，并依據(jù) FOM 和 RDP 含量?jī)?yōu)化日糧配方，提高飼料轉(zhuǎn)化效率，提高生產(chǎn)性能，減少氮的環(huán)境排放量，提反芻動(dòng)物飼養(yǎng)效益。1.2 任務(wù)來(lái)源本標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)來(lái)源于國(guó)標(biāo)委綜合201467號(hào)文件國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委關(guān)于下達(dá)2014年第一批國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知 ，計(jì)劃編號(hào) 20140309-T-469，項(xiàng)目

3、名稱：飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物 (FOM)測(cè)定方法。二、 主要工作過(guò)程2.1 確定標(biāo)準(zhǔn)初稿2019 年 4 月，本標(biāo)準(zhǔn)編制組成員查詢和收集了國(guó)內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)和生產(chǎn)數(shù)據(jù)等資料，結(jié)合瘤胃尼龍袋法測(cè)定步驟， 初步確定了標(biāo)準(zhǔn)的制定和相應(yīng)的試驗(yàn)方法，形成了標(biāo)準(zhǔn)初稿。之后，工作組對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了多次討論研究，同時(shí)用瘺管牛對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中采用的試驗(yàn)方法和步驟進(jìn)行了初步的檢驗(yàn)，積累了檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。2.2 整理標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)2019 年 5 月 -10 月，經(jīng)認(rèn)真研究分析，根據(jù)有關(guān)專家意見(jiàn)基礎(chǔ)上，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容進(jìn)行了補(bǔ)充完善， 在此基礎(chǔ)上， 編寫(xiě)完成了飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物的測(cè)定尼龍袋法標(biāo)準(zhǔn)及編制說(shuō)明征求意見(jiàn)稿。 向全國(guó)反芻動(dòng)物行

4、業(yè)相關(guān)技術(shù)專家發(fā)出征求意見(jiàn)稿，發(fā)出征求意見(jiàn)函25 份，收到反饋 20 份，根據(jù)反饋意見(jiàn)進(jìn)行匯總整理，形成標(biāo)準(zhǔn)預(yù)審稿，報(bào)送全國(guó)飼料標(biāo)準(zhǔn)化專業(yè)委員會(huì)。2.3 組織專家進(jìn)行預(yù)審2019 年 11 月，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)組織有關(guān)專家對(duì)其起草的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)反芻動(dòng)物飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物（ FOM ）測(cè)定方法（征求意見(jiàn)稿）進(jìn)行了預(yù)審。與會(huì)專家一致同意國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)反芻動(dòng)物飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物（ FOM ）測(cè)定方法（征求意見(jiàn)稿）按預(yù)審意見(jiàn)修改后形成送審稿。三、標(biāo)準(zhǔn)編制原則和主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù)3.1 標(biāo)準(zhǔn)編制原則在標(biāo)準(zhǔn)的制定過(guò)程中嚴(yán)格遵循國(guó)家有關(guān)方針、政策、法律、法規(guī)和規(guī)章，標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)規(guī)則及表述按照 GB/T 1.1-20

5、09標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則 1 和 GB/T 20001.4-2015標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第 4 部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn) 2 的要求編寫(xiě)。在標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中力求做到：技術(shù)內(nèi)容的敘述正確無(wú)誤；文字表達(dá)準(zhǔn)確、簡(jiǎn)明、易懂；標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)成嚴(yán)謹(jǐn)合理；內(nèi)容編排、層次劃分等符合邏輯與規(guī)定。3.2 主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù)適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于風(fēng)干狀態(tài)的飼料原料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料或全混合日糧（ TMR ）牛羊瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物的測(cè)定。主要的技術(shù)指標(biāo)瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物（ fermentable organic matter in the rumen）：風(fēng)干狀態(tài)的飼料原料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料或全混合日糧（T

6、MR ）中可被瘤胃微生物發(fā)酵的有機(jī)物。瘤胃實(shí)時(shí)降解率（ instantaneous rumen degradability）：飼料在瘤胃中停留一定時(shí)間后某成分被降解的質(zhì)量占該成分原質(zhì)量的百分比，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)（%）表示。瘤胃食糜外流速率（ outflow rate of rumen digesta ）：?jiǎn)挝粫r(shí)間內(nèi)從瘤胃中流出的食糜質(zhì)量占瘤胃內(nèi)食糜總質(zhì)量的百分比，用“%/h”表示。瘤胃有效降解率（ effective rumen degradability）：根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)降解率，結(jié)合實(shí)際飼喂條件下瘤胃食糜外流速率計(jì)算而得的降解率。 又稱動(dòng)態(tài)降解率，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。飼料樣品逃逸率（ fee

7、d escape rate）飼料樣品的部分細(xì)小顆?？赡懿槐唤到舛ㄟ^(guò)尼龍袋孔直接逃逸，逃逸部分占總體的比值，用百分比（%）表示。技術(shù)內(nèi)容建立優(yōu)化飼料瘤胃尼龍袋法測(cè)定方法。建立飼料瘤胃發(fā)酵有機(jī)物測(cè)定方法。3.3 測(cè)定方法及主要技術(shù)儀器2.5mm 篩孔飼料樣品粉碎機(jī)、 度值為 0.0001 g 的分析天平、 高溫電阻爐、 真空干燥箱或鼓風(fēng)干燥箱、托盤(pán)。瘺管動(dòng)物及飼養(yǎng)管理本標(biāo)準(zhǔn)需要 4 頭安裝有永久性瘤胃瘺管的成年?；虺赡暄?，牛用瘺管內(nèi)徑應(yīng)大于 100 mm，羊用瘺管內(nèi)徑應(yīng)大于40 mm,。要求動(dòng)物品種相同，年齡、生理狀態(tài)、生產(chǎn)性能相近，健康狀況良好。進(jìn)行試驗(yàn)的動(dòng)物要求安裝瘤胃瘺管手術(shù)后20 天以上

8、，已恢復(fù)正常生理狀態(tài)。采用常規(guī)牛（羊）飼料原料，根據(jù)相應(yīng)飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制日糧，按 1.3 倍維持水平飼養(yǎng)，日糧精粗比為 4:6。日糧中不應(yīng)添加抗生素等任何影響瘤胃功能和內(nèi)環(huán)境的調(diào)控劑及干擾瘤胃正常發(fā)酵機(jī)能的物質(zhì)。按照常規(guī)飼養(yǎng)管理程序，每天投料2 3 次，自由飲水。預(yù)飼期至少15 天，預(yù)飼期和試驗(yàn)期不能更換日糧， 不能對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫、 治療及實(shí)施其他可能干擾瘤胃消化機(jī)能的任何措施。尼龍袋和塑料管的準(zhǔn)備選用孔徑為 50m 的尼龍布，制成的尼龍袋， 牛用規(guī)格為 8cm×12cm，羊用規(guī)格為 6cm×10cm，袋底部?jī)山浅殊g圓形，以免樣品殘留。用細(xì)滌綸線雙線縫合尼龍袋。針孔用在瘤胃

9、內(nèi)不易溶解或脫落的膠粘劑彌合。酒精燈烤焦。應(yīng)對(duì)尼龍袋進(jìn)行編號(hào)，使用前放入瘤胃內(nèi)散邊用電烙鐵燙平或用72h，取出、洗凈、 65烘干至恒重后方可使用。半軟塑料管的直徑應(yīng)介于 0.5 0.8cm 之間。牛用的長(zhǎng)度為 50cm，羊用的長(zhǎng)度為 25cm。在塑料管的一端距頂端 12cm 處向遠(yuǎn)端劃透一長(zhǎng) 3cm 的夾縫，用于固定尼龍袋。在塑料管的另一端距頂端12cm 處打孔，直徑約0.5cm，捆綁尼龍線。也可采用鎖鏈與網(wǎng)兜等方式固定尼龍袋。測(cè)定方法將采集的樣品按照GB/T 14699.1飼料采樣 3 的規(guī)定，縮分至 200g 左右，進(jìn)行風(fēng)干處理，粉碎通過(guò)2.5mm 篩孔，置于樣品瓶?jī)?nèi)，清潔干燥處保存?zhèn)錅y(cè)。

10、將尼龍袋置于真空干燥箱或鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)65 烘干至恒重。 用分析天平稱取尼龍袋重量，然后將稱重后的待測(cè)樣品放入尼龍袋底部，袋口處不應(yīng)沾染樣品。 尼龍袋和待測(cè)樣品質(zhì)量均精確至 0.0001 g。牛精飼料樣品每個(gè)袋裝 5g 左右，粗飼料樣品每個(gè)袋裝 3g 左右。羊精飼料樣品每個(gè)袋裝 3g 左右，粗飼料樣品每個(gè)袋裝 2.5g 左右。每個(gè)尼龍袋建議使用不超過(guò) 3 次。分別將每?jī)蓚€(gè)裝有待測(cè)樣品的尼龍袋口交叉夾于一根半軟塑料管的夾縫中， 用橡皮筋纏繞固定， 確保其不滲漏、 不脫落。在早晨飼喂前 1 h ，打開(kāi)試驗(yàn)動(dòng)物的瘤胃瘺管蓋，將尼龍袋通過(guò)瘤胃瘺管放入瘤胃腹囊中， 尼龍袋應(yīng)始終沉浸于瘤胃內(nèi)容物中。 將固定

11、尼龍袋的軟管或其他材料綁定于瘺管蓋上。精飼料在瘤胃內(nèi)的培養(yǎng)時(shí)間為： 2、4、8、16、 24、30、36 和 48 h。粗飼料的培養(yǎng)時(shí)間為： 4、8、16、24、30、36、48 和 72 h。每個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)從每頭 （只）試驗(yàn)動(dòng)物瘤胃中各取出 2 個(gè)尼龍袋，直至所有尼龍袋全部取出為止。 將取出的尼龍袋立即浸泡在冰水中， 盡快用自來(lái)水沖洗， 在沖洗過(guò)程中可用手輕輕擠壓， 直至水清為止，防止尼龍袋中的殘余物隨水逃逸。 另裝 2 個(gè)尼龍袋，作為空白對(duì)照，不放入瘤胃內(nèi)，直接對(duì)其按裝樣和沖洗過(guò)程進(jìn)行處理， 用于計(jì)算飼料樣品逃逸率，以減小樣品中的細(xì)小顆?？芍苯訌哪猃埓滋右輰?duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。將所有沖洗過(guò)的

12、尼龍袋 （連同樣品殘余物） 置于真空干燥箱或鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)65下烘干至恒重。用分析天平稱重，精確至0.0001g。分別將各尼龍袋中的殘余物完全轉(zhuǎn)移出來(lái)。按照 GB/T 6438-2007飼料中粗灰分的測(cè)定 4 測(cè)定原樣品、各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)和校正試驗(yàn)樣品殘余物中的灰分含量。結(jié)果計(jì)算有機(jī)物含量計(jì)算方法如下：原樣品、校正試驗(yàn)和各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)樣品殘余物中有機(jī)物含量（OM ），數(shù)值以百分比（ %）表示，按下列公式計(jì)算：OM = 100% - ASH式中：ASH 校正試驗(yàn)和各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)樣品殘余物的灰分含量，單位為百分比（ %）。飼料樣品逃逸率計(jì)算方法如下 5 ：飼料樣品逃逸率（ FER），數(shù)值以百分比（ %）表示

13、，按下列公式計(jì)算：FER (風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ) ) =（FBI FAI） /FBI ×100%式中：FBI 校正試驗(yàn)裝袋樣品質(zhì)量 , 單位為克（ g）。FAI 校正試驗(yàn)袋殘余飼料質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。校正樣品量計(jì)算方法如下 5 ：校正裝袋飼料樣品質(zhì)量（CF），數(shù)值以克（ g）表示，按下列公式計(jì)算：CF（風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)）= AF（100%FER）式中：AF 實(shí)際裝袋飼料樣品量，單位為克（g）。FER 裝袋飼料樣品逃逸率 , 單位為百分比（ %）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。有機(jī)物瘤胃降解量計(jì)算方法如下 5 ：某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)有機(jī)物的降解量 （IDOM ），數(shù)值以克（g）

14、表示，按下列公式計(jì)算：IDOM （ CF×CROM ）（ IFR×IROM ）式中：CF 校正裝袋飼料樣品質(zhì)量，單位為克（g）。CROM 校正試驗(yàn)殘余物中有機(jī)物的含量，單位為百分比（%）。IFR 某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)殘余物的重量，單位為克（g）。IROM 某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)殘余物中有機(jī)物的含量，單位為百分比（%）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。有機(jī)物實(shí)時(shí)瘤胃降解率計(jì)算方法如下：t 時(shí)刻被測(cè)樣品中有機(jī)物的實(shí)時(shí)瘤胃降解率（ dp），數(shù)值以百分比（ %）表示，按下列公式計(jì)算 5 ：dpIDOM/ （CF×CROM ）式中：IDOM 某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)有機(jī)物的降解量，單位為克（g）。CF 校正

15、裝袋飼料樣品質(zhì)量，單位為克（g）。CROM 校正試驗(yàn)殘余物中有機(jī)物的含量，單位為百分比（%）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。降解參數(shù)計(jì)算方法如下6 ：樣品中有機(jī)物在瘤胃中的實(shí)時(shí)降解率符合指數(shù)曲線：dp= a + b（ 1 e-ct）式中：dpt 時(shí)刻被測(cè)樣品中有機(jī)物的實(shí)時(shí)瘤胃降解率，單位為百分比（%）。a 被測(cè)樣品中有機(jī)物的快速降解部分，單位為百分比（%）。b 被測(cè)樣品中有機(jī)物的慢速降解部分，單位為百分比（%）。c b 部分的降解速率，單位為百分比每小時(shí)（%/h）。t 樣品在瘤胃內(nèi)停留的時(shí)間，單位為小時(shí)。利用各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)實(shí)時(shí)降解率的數(shù)據(jù)（ P 和 t），采用最小二乘法，計(jì)算式中 a、b和 c 值

16、。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。有效降解率的計(jì)算計(jì)算方法如下 6 ：被測(cè)樣品中有機(jī)物的有效降解率（P），數(shù)值以百分比（ %）表示，利用 8.6 的計(jì)算結(jié)果（a、b、c 值）按下列公式計(jì)算：P = a + bc /（ c+k）式中：a 被測(cè)樣品中有機(jī)物的快速降解部分，單位為百分比（%）。b 被測(cè)樣品中有機(jī)物的慢速降解部分，單位為百分比（%）。c b 部分的降解速率，單位為百分比每小時(shí)（%/h）。k 被測(cè)樣品的瘤胃外流速率，單位為百分比每小時(shí)（%/h）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。式中的k 值可按本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A反芻動(dòng)物飼料瘤胃外流速率的測(cè)定中所規(guī)定的方法測(cè)定。由于 k 值的測(cè)定比較復(fù)雜， 因此在無(wú)測(cè)

17、定條件時(shí)可根據(jù)被測(cè)樣品的性質(zhì)和相關(guān)文獻(xiàn)資料設(shè)定 k 值。飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物含量計(jì)算方法如下：飼料樣品的瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物含量（FOM ），數(shù)值以百分比（ %）表示，按下列公式計(jì)算 7 ：FOM=P× OM式中：P 被測(cè)樣品中有機(jī)物的有效降解率，單位為百分比（%）。OM 被測(cè)樣品中有機(jī)物含量，單位為百分比（%）。計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。3.4 方法驗(yàn)證水洗損失率待測(cè)飼料每種裝入 10 個(gè)尼龍袋，袋口扎緊后， 即進(jìn)行沖洗 10 分鐘，測(cè)定干物質(zhì)的損失率及其變異程度 8 。結(jié)果干物質(zhì)損失率應(yīng)小于 5%。有機(jī)物損失率同一待測(cè)樣品每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的有機(jī)物降解量不能存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。方法的準(zhǔn)確度和精

18、密度考察為研究飼料瘤胃可發(fā)酵有機(jī)物測(cè)定方法的準(zhǔn)確性，隨機(jī)抽取同一批玉米、小麥、大麥、豆粕、棉粕、 DDGS、青貯和 TMR 的飼料樣品，采用本標(biāo)準(zhǔn)所述方法和設(shè)備進(jìn)行檢驗(yàn)，分別計(jì)算每種飼料的動(dòng)態(tài)和實(shí)時(shí)可發(fā)酵有機(jī)物降解率。 可發(fā)酵有機(jī)物動(dòng)態(tài)降解率公式中的各時(shí)間點(diǎn)降解率應(yīng)與該點(diǎn)實(shí)時(shí)可發(fā)酵有機(jī)物降解率之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則證明該方法在不同飼料上，具有較高的準(zhǔn)確度與精密度。四、與有關(guān)現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系在標(biāo)準(zhǔn)的制訂過(guò)程中嚴(yán)格貫徹國(guó)家有關(guān)方針、政策、法律和規(guī)章等，嚴(yán)格執(zhí)行強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。與相關(guān)的各種基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)相銜接，遵循了政策性和協(xié)調(diào)同一性的原則。五、標(biāo)準(zhǔn)在編制過(guò)程中意見(jiàn)分歧情況本標(biāo)

19、準(zhǔn)在編制過(guò)程中沒(méi)有重大意見(jiàn)分歧。六、作為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議本標(biāo)準(zhǔn)為化學(xué)分析方法標(biāo)準(zhǔn)，并不涉及有關(guān)國(guó)家安全、保護(hù)人體健康和人身財(cái)產(chǎn)安全、環(huán)境質(zhì)量要求等有關(guān)強(qiáng)制性地方標(biāo)準(zhǔn)或強(qiáng)制性條文等的八項(xiàng)要求之一，因此建議將其作為推薦性標(biāo)準(zhǔn)頒布實(shí)施。七、貫徹標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議（1）首先應(yīng)在實(shí)施前保證文本的充足供應(yīng)，讓每個(gè)使用者都能及時(shí)得到文本。這是保證新標(biāo)準(zhǔn)貫徹實(shí)施的基礎(chǔ)。（2）發(fā)布后、實(shí)施前應(yīng)將信息在媒體上廣為宣傳。八、廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議無(wú)。九、其他應(yīng)予說(shuō)明的事項(xiàng)無(wú)。參考文獻(xiàn)1 GB/T 1.1-2009 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則的要求 .2 GB/T 20001.4-2015 標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第 4 部分：試