水牛角清涼茶中水牛角水解工藝優(yōu)化研究

1、    水牛角清涼茶中水牛角水解工藝優(yōu)化研究    劉臣摘要 目的選優(yōu)水牛角清涼茶中水牛角的水解工藝。方法以提取物中總氮含量為考察指標，采用正交試驗，以酸水濃度、酸水用量及水解時間為因素，優(yōu)選最佳水解條件，同時對酸堿水解的優(yōu)選、醇沉濃度及水洗倍數(shù)等參數(shù)進行了篩選。結果最佳工藝確定為8倍量4 mol/l濃度的硫酸水解10 h，濃縮至相對密度為1.101.15（50 ）的浸膏，60%乙醇醇沉，4倍量水水洗，最后配制成均一穩(wěn)定的水牛角清涼茶。結論優(yōu)選的水解工藝提取的氨基酸含量較高，工藝穩(wěn)定可行。關鍵詞 水牛角；正交試驗；水解工藝；優(yōu)化；總氮含量r284.1 a

2、 1007-5739（2015）01-0290-02水牛角清涼茶由水牛角、金銀花等組成，主要用于緩解熱病神昏、咽喉腫痛、煩躁易怒等不適癥狀。主藥水牛角為?？苿游锼５碾p角，富含膽甾醇及丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸、絲氨酸、纈氨酸等人體必須的氨基酸營養(yǎng)成分1，具有清熱2、涼血、解毒、鎮(zhèn)靜3的功效，主治熱病頭痛、壯熱神昏、斑疹、吐衄、小兒驚風、喉痹咽腫等疾病4，本品咸寒，專入血分，善清心肝胃三經(jīng)之火而有涼血解毒之功，為治血熱毒盛之要藥。其清熱涼血解毒之功與犀角相似而藥力較緩，可作犀角的代用品。水牛角中氨基酸總量通常以凱式定氮法測定總氮含量計。本研究采用正交試驗設計法，以總氮得率

3、為指標，優(yōu)化水牛角的水解工藝條件，并對酸堿水解的優(yōu)選、醇沉濃度以及水洗倍數(shù)等參數(shù)進行了篩選，從而確定了水牛角的最佳水解工藝。1 材料與方法1.1 藥品與儀器試驗用水牛角飲片購于哈爾濱市藥材公司中藥飲片廠。試驗儀器：凱式定氮儀b-324k型（北京閱微堂科技發(fā)展有限公司）；al型梅特勒電子分析天平（瑞士）；yzg型真空干燥箱（天津隆業(yè)輕工機械有限公司）。試驗用硫酸、氫氧化鋇等均為分析純。1.2 試驗方法1.2.1 水牛角酸堿水解條件的對比試驗。一般動物藥的蛋白質水解多采用酶解法5-6或酸堿水解工藝。本試驗采用酸堿法，為了比較2種水解方法對水牛角中總氮提取率的影響，將水牛角分別以氫氧化鋇堿水解和硫酸

4、酸水解進行比較試驗。取1/2處方量的水牛角共6份，每3份為1個平行樣，按2種工藝進行提取，用10倍體積量6 mol/l硫酸和10倍體積量6 mol/l氫氧化鋇，分別水解8 h。按中國藥典（2010年版附錄）用凱氏定氮法以總氮含量為指標進行比較。1.2.2 水牛角水解條件的優(yōu)化試驗。選定了酸濃度、水解時間、加酸量3個因素進行了正交方法考察。每個因素設定3個水平，水牛角各取處方量的1/2，以水解后總氮含量為考察指標，進行了l9（34）正交試驗，其因素水平設計見表1。1.2.3 水牛角水解液濃縮密度對比試驗。水牛角按優(yōu)選工藝條件水解、濾過，濾液用10%的氫氧化鈉溶液調節(jié)ph值至4，濾過。取2倍處方量

5、的水牛角水解液平均分為8份，每2份為1個平行樣，分別濃縮至相對密度為1.05、1.10、1.15、1.20（50 ）的清膏，冷卻，各加乙醇至60%，靜置24 h，過濾，濃縮，分別在醇沉前后測定其總氮的含量。1.2.4 水牛角水解膏醇沉條件對比試驗。水牛角按優(yōu)選工藝條件水解，取2倍處方量的水牛角水解液濃縮至相對密度為1.101.15（50 ）的清膏，冷卻，平均分為8份，每2份為1個平行樣，分別加乙醇至50%、60%、70%、80%，靜置24 h，過濾，回收乙醇至相對密度為1.101.15（50 ）的清膏。分別在醇沉前后測其總氮含量。1.2.5 水洗條件對水牛角水解膏中有效成分的影響試驗。水牛角按

6、優(yōu)選工藝水解、濃縮、醇沉、回收乙醇，分別取2個處方量的水解濃縮膏平均分為8份，每2份為1個平行樣，混勻，攪拌下分別緩緩加入3、4、5、6倍量水，充分攪拌，靜置24 h，濾取上清液，濃縮至相對密度為1.101.15（50 ）的清膏。分別測定固形物及總氮的含量7-9。2 結果與分析2.1 水牛角酸堿水解條件對比試驗結果水牛角酸堿水解條件對比結果見表2。從表2可以看出，酸水解工藝所得總氮含量明顯比堿水解工藝高，證明用硫酸水解水牛角比用堿水解更合理。2.2 水牛角水解條件優(yōu)化試驗結果l9（34）正交試驗結果見表3。從表3可以看出，影響因素最大的是a因素和b因素，c因素影響較少，在a因素中a3a2>

7、;a1，在b因素中b3>b2>b1，在c因素中c3c2>c1。綜合考慮，并結合能源消耗情況，優(yōu)選水解工藝確定為a2b3c2，即酸濃度為4 mol/l，加8倍量酸，水解10 h。方差分析結果見表4。以此優(yōu)選工藝進行驗證，結果平均含氮量為15 032 mg，rsd=1.5%，證明該工藝可行。2.3 水牛角水解液濃縮密度對比試驗結果水牛角水解液濃縮密度對比試驗結果見表5。從表5可以看出，相對密度太小時，醇沉效果不好，可能由于所消耗的乙醇量過大；相對密度太大時，醇沉后總氮含量有所下降，可能是由于濃度太高，所形成的沉淀對有效成分包裹所致。故相對密度定為1.101.15（50 ）較為合適

8、。2.4 不同水牛角水解膏醇沉條件對比試驗結果不同水牛角水解膏醇沉條件對比試驗結果見表6。從表6可以看出，若醇沉濃度過低，則效果不好，雜質較多，總氮含量隨著醇沉濃度的增加下降較快，故醇沉濃度定為60%較合適。2.5 水洗條件對水牛角水解膏中有效成分的影響水洗條件對水牛角水解膏中有效成分的影響結果見表7。從表7可以看出，4倍量水洗比3倍量水洗固形物有明顯的減少，且4、5、6倍量水洗倍數(shù)對固形物的影響差別不大，水洗的倍數(shù)均對有效成分影響不大，故選定水洗倍數(shù)為4倍。3 結論與討論以水牛角的有效成分總氨基酸為指標，對水牛角清涼茶中水牛角的提取工藝參數(shù)進行優(yōu)化，其中包括酸堿水解條件的比較、酸水解的最佳條

9、件、醇沉濃度及水洗倍數(shù)等，最終確定最佳工藝為用8倍量4 mol/l濃度的硫酸水解10 h，濃縮至相對密度為1.101.15（50 ）的浸膏，60%乙醇醇沉，4倍量水水洗，最后配制成均一穩(wěn)定的水牛角清涼茶。經(jīng)工藝驗證，成品含量均在28.5 mg/ml以上，經(jīng)6個月穩(wěn)定性試驗考察結果證明，確定該工藝是可行的。4 參考文獻1 鄧愍民，李進進，武卉.微波輔助提取水牛角的工藝研究j.實用中西醫(yī)結合臨床，2007，10（5）：80-81.2 劉睿，段金廒，李友濱，等.水牛角主要藥效學評價及解熱活性物質基礎研究j.南京中醫(yī)藥大學學報，2007，23（5）：297-301.3 陳赤.水牛角的研究與作用j.廣西中醫(yī)學院學報，2004，7（4）：72-73.4 郭云協(xié).水牛角臨床應用舉隅j.新中醫(yī)，2008，40（6）：93.5 劉天舒.水牛角水提工藝的研究j.湖南中醫(yī)雜志，2005，21（2）：77-78.6 李寶國，杜雪，張孝衛(wèi).正交實驗優(yōu)選水牛角酶解的提取工藝研究j.中國當代醫(yī)藥，2009，16（14）：24-25.7 尚強，劉巖，吳建雄，等.正交試驗法優(yōu)選水牛角水解工藝j.中國中藥