白細胞分類計數(shù)

1、白細胞分類計數(shù)定義白細胞分類計數(shù)是將血液制成分布均勻的薄膜涂片，用染料染色，根據(jù)各類白細胞 著色特征，在顯微鏡下觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量的變化、予以分類計數(shù)并求出各種白細胞所 占的百分率。意義血液中的白細胞一般包括：顆粒細胞（嗜中性、嗜酸性和堿性細胞）、淋巴細胞（大、中、小淋巴細胞）和單核細胞，它們分工不同，在體內(nèi)發(fā)揮各自的作用。 嗜中性白細胞，成熟的嗜中性白細胞通過吞噬作用而消滅入侵的細菌，特別是球菌。在嚴重感染和炎癥初期時最活躍；嗜酸性白細胞，常積聚在抗原 -抗體反應(yīng)的部位，因此，認為它抑制組胺等物 質(zhì)的活動；嗜堿性白細胞，堿性顆粒中有肝素，表明它有抗凝作用；淋巴細胞；參與機體免疫反應(yīng)；單核

2、細胞；它有特殊的酶系統(tǒng)，能對付頑強的病原體，如真菌、原生動物、 結(jié)核桿菌及布病等。在慢性感染時或體內(nèi)有較多組織碎片需要清除時，它會大量出現(xiàn)。在正常情況下，白細胞構(gòu)成的比例、形態(tài)和質(zhì)量基本是不變的，但在病理情況下，這種 比例、形態(tài)、質(zhì)量將會發(fā)生變化，故臨床上常把計數(shù)白細胞總數(shù)和分類計數(shù)結(jié)合起來，進 行分析和診斷某些感染性疾病的種類。目的與要求掌握計數(shù)的原理、方法和臨床意義原理由于白細胞內(nèi)含有帶不同電荷的物質(zhì)，其中帶正電荷的物質(zhì)易與酸性染料結(jié)合呈現(xiàn)紅色（這種物質(zhì)叫嗜酸性物質(zhì)或顆粒，而其本身呈堿性）；而帶負電荷的物質(zhì)易與堿性染料結(jié)合呈現(xiàn)藍色（這種物質(zhì)叫嗜堿性物質(zhì)或顆粒，而其本身呈酸性）；當(dāng)細胞內(nèi)物質(zhì)

3、帶的正負電荷相等時，那么結(jié)合的酸性染料和堿性染料幾乎相等，這些物質(zhì)就呈現(xiàn)紅、藍相混的紫紅色（這種物質(zhì)叫嗜中性物質(zhì)或顆粒）。這樣血片中的白細胞經(jīng)過染色后就被染成紅、藍及紫紅 色，從而可以識別分類?！酒鞑呐c試劑】器材：載玻片、染色缸及支架、洗瓶、顯微鏡及鏡油、白細胞分類計數(shù)器、吸水紙等。試劑：染液、緩沖液步驟1 .米血2制作血涂片：取潔凈載玻片數(shù)張，選擇邊緣光滑的載片作為推片（也可用血細胞計數(shù) 板的蓋玻片做為推片），用左手的拇指及中指夾持載片并置于平穩(wěn)的臺面上，右手持推片。取被檢血（經(jīng) EDTA抗凝）1小滴，放于載玻片的右端，手持推片放于血滴之前并與載片 接觸，以30°40°角

4、向后拉動推片，使之與血滴接觸，待血液擴散形成一條線狀之后， 以均等的速度輕輕向前推動推片，則血液就被均勻地涂于載片上而形成一薄血膜。良好的血片，血液應(yīng)分布均勻，厚度要適當(dāng)，對光觀察時呈霓紅色，血膜應(yīng)位于玻片中央，兩端留有 空隙，以便標上患畜名稱、畜別、編號、日期。常溫下自然風(fēng)干（冬天可適當(dāng)加溫）。3. 染色3. 1單染色瑞氏染色：滴加染液（約 20滴）蓋滿血膜，染1分鐘后，再加等量的緩沖液， 繼續(xù)染色3 10分鐘（外界溫度低染色時間長，反之亦然），用水沖去染液，吸干染片，干燥后，油鏡觀察。對胞漿及顆粒染色效果好。姬姆薩氏染色：在血膜上先加 2-3滴甲醇使血膜固定，3-5分鐘后待甲醇揮發(fā)后再加染

5、液； 染色20-60分鐘（依外界溫度高低而定染色時間長短） ；水洗，干后油鏡觀察。對胞核及血 液原蟲染色效果好。3. 2復(fù)染色（混合染色）瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色：先加瑞氏染液，半分鐘后用水洗去染液；再加姬姆薩氏染液染約10分鐘，水洗、干燥鏡檢?；蛟谂R染色時向瑞氏染液中加入適量的姬姆薩氏原液，即每10毫升瑞氏染液中，加入0.5-1.0毫升姬姆薩氏原液，混勻后，按瑞氏染色的步驟進行染色。4. 鏡檢分類計數(shù)方法：四角曲則計數(shù)法或三段曲則計數(shù)法 步驟：（1）先用低倍鏡觀察血片上白細胞的分布情況 一般嗜中性白細胞，單核細胞及體積較大的細胞分布在血片的上，下邊及尾端，中小淋巴細胞則多在涂片的起始端滴加鏡油

6、,轉(zhuǎn)用油鏡頭進行計數(shù)至少數(shù)100個白細胞，根據(jù)染色特點，分別計數(shù)各類白細胞的數(shù)量， 最后求出各類白細胞占總數(shù)的百分比。白細胞分類計數(shù)的臨床意義 1判斷可能的感染或疾病的狀況1）.嗜中性白細胞：（1） 增多：見于某些急性傳染病 （豬丹毒、炭疽、出敗等）和慢性傳染病（鼻疽、結(jié)核等），某些化膿性疾?。撔孕啬ぱ?、膿性腹膜炎、肺膿腫及創(chuàng)傷性心包炎等），某些急性炎癥（急 性胃腸炎、急性肺炎、急性子宮內(nèi)膜炎和乳房炎等），術(shù)后一周內(nèi)，酸中毒的初期，毛地黃中毒以及腎上腺素中毒等。（2）減少：見于病毒性疾病以及病危期，造血機能受阻或衰弱；懷騾子的母驢在妊娠中毒 癥時，嗜中性白細胞顯著減少。2）.嗜酸性白細胞：（

7、1） 增多：見于某些寄生蟲病（肝片吸蟲病、球蟲病、旋毛蟲病等），某些過敏疾病（飼草 過敏、尋麻疹、注射血清后等），皮膚病（濕疹、疥癬等）（2）減少：見于毒血癥、尿毒癥、嚴重創(chuàng)傷及中毒等。3）.嗜堿性白細胞：增多或減少較少見。4）.淋巴細胞：（1） 增多：見于某些慢性傳染病（如結(jié)核、布病等），急性傳染病的恢復(fù)期， 某些病毒?。ㄘi 瘟、流感等）以及血孢子蟲病等。（2）減少：常在嗜中性白細胞數(shù)絕對增多時，出現(xiàn)淋巴細胞減少的現(xiàn)象。說明機體與病原 正處于激烈的斗爭，此后若淋巴細胞漸漸增多，表示預(yù)后良好。5）.大單核細胞：（1 ）增多：見于某些原蟲病，某些慢性細菌感染以及某些病毒病（如馬傳染性貧血）。（2

8、）減少：見于急性傳染性病的初期及各種疾病的垂危期。2. 判斷預(yù)后1）預(yù)后不良：白細胞總數(shù)及嗜中性白細胞的百分比顯著升高者；嗜中性桿狀核細胞及晚幼 細胞顯著增多者；白細胞總數(shù)未能隨病情的發(fā)展而適時升高者；嗜酸性白細胞完全消失者。2）預(yù)后良好：白細胞總數(shù)及嗜中性白細胞的百分比隨病情的好轉(zhuǎn)而逐步下降者；嗜中性桿 狀核細胞及晚幼細胞逐漸減少而分葉核細胞漸次相應(yīng)恢復(fù)者；淋巴細胞的百分比逐漸恢復(fù) 者；大單核細胞暫時增多者；嗜酸性白細胞重新出現(xiàn)或暫時增多者。白細胞的染色（瑞氏或姬姆薩氏）特點 1嗜堿性粒細胞：細胞較大，呈圓形或橢圓形，胞漿中有深紫色的較小的染色顆粒。2. 嗜酸性粒細胞：細胞較大，呈圓形或橢圓

9、形，胞漿中有鮮紅色的染色顆粒。3. 中性粒細胞：細胞中等大小，呈圓形或橢圓形，胞漿中有淡玫瑰紅的小顆粒。依細胞核的形態(tài)分為髓細胞、幼稚型、桿狀核及分葉核細胞。髓細胞的細胞核色淡，著色不均， 呈長圓形或豆型。幼稚型的細胞核著色較淡，核染色質(zhì)疏松，多呈腎型、豆型。桿狀核 細胞的核致密、色深，呈桿狀的香腸形、蹄鐵型或S型，兩邊平行。分葉核細胞其核分 成26個不等，并在其間有細絲狀連接為其特征。4. 淋巴細胞：胞體呈圓形，直徑大者為大淋巴細胞，小者稱小淋巴細胞；核呈深藍紫色，圓形，致密且常偏在；胞漿呈淡天藍色，核周圍有淡染色帶（或呈透明帶）；小淋巴細胞的胞漿極少，有時僅呈月牙形，位于一側(cè)。5. 單核細

10、胞：個體極大，呈不正、多邊、多角形，胞漿呈較暗的煙灰色，核呈紫褐色，形 如腎形、山字形、折疊狀，核染色質(zhì)疏松網(wǎng)狀。【正常參考值】見表 1-1表1-1各種動物白細胞分類正常平均值（%動物種類白細胞總數(shù)X109/L嗜堿性白細胞嗜酸性白細胞嗜中性白細胞淋巴細胞單核細胞晚幼細胞桿狀核分葉核牛8.00.54.00.53.033.057.02.0馬9.50.54.50.54.054.034.02.5羊綿 8.2,山 9.60.54.51.03.033.055.53.5豬14.80.52.51.05.532.055.03.5駱駝0.58.01.06.547.035.02.0犬9.4少見4.00.00.870

11、.020.05.0貓12.04.50.250.254.563.525.81.2雞19.01-45-825-30%55-6010附注：1白細胞的染色(用瑞氏或姬姆薩氏)特點：1嗜堿性粒細胞：細胞較大，呈圓形或橢圓形，胞漿中有深紫色的較小的染色顆粒。2嗜酸性粒細胞：細胞較大，呈圓形或橢圓形，胞漿中有鮮紅色的染色顆粒。3中性粒細胞：細胞中等大小，呈圓形或橢圓形，胞漿中有淡玫瑰紅的小顆粒。依細胞核的 形態(tài)分為髓細胞、幼稚型、桿狀核及分葉核細胞。髓細胞的細胞核色淡，著色不均，呈長圓 形或豆型。幼稚型的細胞核著色較淡，核染色質(zhì)疏松，多呈腎型、豆型。桿狀核細胞的核致 密、色深，呈桿狀的香腸形、蹄鐵型或S型，

12、兩邊平行。分葉核細胞其核分成26個不等，并在其間有細絲狀連接為其特征。4淋巴細胞：胞體呈圓形，直徑大者為大淋巴細胞，小者稱小淋巴細胞；核呈深藍紫色，圓 形，致密且常偏在；胞漿呈淡天藍色，核周圍有淡染色帶(或呈透明帶)；小淋巴細胞的胞漿極少，有時僅呈月牙形，位于一側(cè)。5單核細胞：個體極大，呈不正、多邊、多角形，胞漿呈較暗的煙灰色，核呈紫褐色，形如 腎形、山字形、折疊狀，核染色質(zhì)疏松網(wǎng)狀。2. 各種畜禽血細胞的染色特點：禽血細胞的形態(tài)特點：雞白細胞總數(shù)19X109/L.異嗜性白細胞占白細胞總數(shù)的 25-30%;嗜酸性白細胞占5%-8%;嗜堿性白細胞占1-4%;淋巴細胞占55-60%;單核細胞占10

13、%.(1) 紅細胞：呈卵圓形，大小為1014 09微米，體積比馬的紅細胞大中央有橢圓形的核， 核中有不規(guī)則的深染色質(zhì)胞漿呈橙紅色異嗜性白細胞：又叫假嗜酸性白細胞，相當(dāng)于哺乳動物的嗜中性粒細胞，近乎圓形，大小為0-14微米，胞漿淡染，其中有許多嗜酸性桿狀或紡錘型結(jié)晶顆粒，這種顆粒被染成淺紅色胞核呈多型性，核通常為2-5葉，葉間的連接帶較明顯核內(nèi)染色質(zhì)塊較粗大，呈藍紫色鴨 的異嗜性白細胞顆粒為不正圓形；鵝的為大米粒樣(3) 嗜酸性白細胞：大小為4-11微米嗜酸性顆粒大而呈球形(鴨的呈桿狀)，染成深紅色胞漿 為淡藍灰色；核常為2葉，染成藍色(4) 嗜堿性白細胞：胞漿內(nèi)有中等大小的深紫色顆粒；核為圓形

14、、卵圓形或分葉，核染色較淺(5) 淋巴細胞：分大、中、小淋巴細胞，小的居多，常有突起淋巴細胞胞漿微嗜堿性(淡藍色);核呈圓形或一側(cè)凹陷(核的凹陷側(cè)有時可見到嗜天青顆粒)，核常偏在，染色質(zhì)粗糙或細勻(6) 單核細胞：占白細胞總數(shù)的10%比大淋巴細胞稍大，其胞漿為藍灰色(與大淋巴細胞相似，但胞漿比淋巴細胞多)核不規(guī)則，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松均勻為細絲狀(7) 凝血細胞：相當(dāng)于哺乳動物的血小板，呈卵圓形，胞漿清晰，其中央有一圓形的核在細胞的一端常有一個或多個染成紅色的小顆粒；胞核的染色質(zhì)密集并結(jié)成較大的塊馬的血細胞形態(tài)特征：馬的白細胞總數(shù)9.5 >109/L.嗜中性白細胞占白細胞總數(shù)的58.5%;嗜

15、酸性白細胞占45%;嗜堿性白細胞占05%;淋巴細胞占34%;單核細胞占25%(1) 紅細胞：大小一致，平均直徑為5.7微米,染色濃且均勻 沖心淡染區(qū)不明顯紅細胞常形成長鏈狀(錢串狀)，一般不出現(xiàn)未成熟的紅細胞(2) 嗜中性白細胞：成熟的細胞，核呈劇齒樣外觀，核分葉明顯.母馬的嗜中性白細胞核上有時可見鼓錘狀突起胞漿染成淡紅色，其中有桃紅色微細的顆粒 在健康馬的末梢血液中，嗜中性 桿狀核白細胞的核比分葉核白細胞的核大，呈馬蹄形或S形，核的邊緣有染色較深的斑點.(3) 嗜酸性白細胞：細胞中有明亮的，被染成橙紅色的，大而圓的顆粒，這種嗜酸性顆粒充滿整個胞漿，甚至覆蓋在胞核上，致使淡藍色的胞漿幾乎看不到

16、(4) 嗜堿性白細胞：胞漿中有散在的或密集的被染成深藍紫色的，大小和形狀一定的顆粒(5) 淋巴細胞：大多數(shù)為小淋巴細胞，其特點是核大且染色濃，僅有一小片月牙形的天藍色的胞漿大淋巴細胞的胞漿相對較多，呈淡藍色，胞漿中含有為數(shù)不多的天藍色小顆粒單核細胞：核多呈腎形，偏于細胞一側(cè).胞漿呈灰藍色，內(nèi)有微細的天藍色顆粒(7)血小板：一般呈卵圓形,也有呈精子形狀者，常聚集在一起，內(nèi)有細小的天藍色顆粒牛的血細胞形態(tài)特點：牛的白細胞總數(shù)8.0 >109/l.嗜中性白細胞占白細胞總數(shù)的36.5%;嗜酸性白細胞占4.0%;嗜堿性白細胞占0.5%;淋巴細胞占57%;單核細胞占2.0%.(1) 紅細胞：大小不均

17、勻，平均直徑為5.5微米，不易形成串錢狀.在重劇疾病時，可見到紅細胞形 成串錢狀，因此根據(jù)串錢形成的程度，對判斷預(yù)后有一定的幫助.(2) 嗜中性白細胞：成熟細胞的核分葉明顯，各葉間有較短的核絲連接，胞漿呈淡桃紅色，含 有大量紫紅色的細小顆粒 .桿狀核細胞的核短而粗且稍彎曲 ，胞漿染色比成熟型的淡，顆粒 也較少.晚幼粒細胞的核較大，呈圓形，腎形，核染色質(zhì)出現(xiàn)斑點狀構(gòu)造，胞漿為淡灰色，顆粒不 明顯. 嗜酸性白細胞：嗜酸性顆粒較小，呈圓形，有屈光性，顆粒之間有空隙，呈現(xiàn)出淡灰色的細 胞漿.胞核多呈桿狀，也有呈分葉狀的，核染色質(zhì)濃淡不勻. 嗜堿性白細胞：嗜堿性顆粒呈卵圓形，大小和馬的相似.(5) 淋巴

18、細胞：大小極不一致，小淋巴細胞的大小似紅細胞，往往只能看到核，胞漿很少.大淋巴細胞大小似單核細胞.各種淋巴細胞的胞漿中有大小不等的紫紅色顆粒(6) 單核細胞：核呈牛腎形或多角形，染色質(zhì)呈彌散性或紐扣狀.胞漿呈灰色，常有空泡出現(xiàn).(7) 血小板：每一血小板的體積較小，有時可出現(xiàn)比紅細胞還大的巨型血小板，內(nèi)有紫紅色的小顆粒.常聚集成堆，有時浮在紅細胞上.綿羊的血細胞形態(tài)特點：綿羊的白細胞總數(shù)8.2 >109/L.嗜中性白細胞占白細胞總數(shù)的26.9%;嗜酸性白細胞占 2.9%;嗜堿性白細胞占0.2%;淋巴細胞占68.1%;單核細胞占1.9%.(1) 紅細胞：大小略有差異，平均直徑為4.5微米，

19、多數(shù)是單個存在，少數(shù)可有串錢狀，細胞中央淡 染.(2) 嗜中性白細胞：分葉的核明顯分為數(shù)葉，葉間有細絲連接，核染色質(zhì)為斑點狀，在母羊常 可看到突起的染色體.胞漿的染色性較弱，一般呈淺桃色，其中有彌散性的微細小顆粒.嗜中 性桿狀核型的細胞核多呈 U字形，也有呈S形的，核染色質(zhì)的斑紋比分葉核型的淺 ，胞漿稍 帶藍紫色.成年健康綿羊的血液中，桿狀核細胞非常少.(3) 嗜酸性白細胞：嗜酸性顆粒大小一致，卵圓形，呈橙紅色，輪廓明顯.胞漿為淺藍色.(4) 嗜堿性白細胞：有暗紫色的大小均勻的圓形嗜堿性顆粒，分布在胞漿及胞核上.胞核的顏色比胞漿稍深，但兩者的界限帶不明顯.(5) 淋巴細胞：特點是胞漿內(nèi)有大的嗜

20、天青顆粒.在核與胞漿之間，有明顯的淡染區(qū)，好象形成了空隙.(6) 單核細胞：核為變形蟲樣，多為三葉，每一葉較寬，核的染色質(zhì)呈星芒狀.胞漿呈灰藍色.(7) 血小板：為深紫色的小顆粒，常聚集在一起，有時可見到巨型血小板.山羊的血細胞形態(tài)特點：山羊的白細胞總數(shù)9.6 >09/L.嗜中性白細胞占白細胞總數(shù)的41.8%;嗜酸性白細胞占 0.7%;嗜堿性白細胞占0.7%;淋巴細胞占54.5%;單核細胞占2.3%.(1) 紅細胞：為家畜中紅細胞最小者，其平均直徑為4.1微米，形狀圓形乃至橢圓形，染色均 勻，常單個存在.(2) 嗜中性白細胞：成熟的嗜中性白細胞核分葉比綿羊少，母羊的核有鼓錘狀突起.胞漿著

21、色與綿羊的相似.(3) 嗜酸性白細胞：有明顯紫紅色的圓而小的嗜酸性顆粒充滿于胞漿中核多呈桿狀，也有分成2-3葉的(4) 嗜堿性白細胞：嗜堿性顆粒的顏色與核的顏色相似(藍紫色),但顆粒周圍有一稍紅的帶(5) 淋巴細胞：胞漿呈淺藍色，但在邊緣為深藍色，胞漿內(nèi)有大小不一的紅紫色的小顆粒(6) 單核細胞：胞漿呈淡藍色，胞漿內(nèi)有空泡，并有細小的藍紫色顆粒胞核呈卵圓形，桿狀或 分葉，核染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)呈鈕扣狀(7) 血小板：與綿羊血小板相似，為深紫色的小顆粒，常聚集在一起豬的血細胞形態(tài)特點：豬的白細胞總數(shù)14.8 XW9/l.嗜中性白細胞占白細胞總數(shù)的38.5%;嗜酸性白細胞占2.5%;嗜堿性白細胞占0.5%

22、;淋巴細胞占55.0%;單核細胞占3.5%.(1) 紅細胞：平均直徑為6.2微米,可形成串錢狀，有時中央呈現(xiàn)淡染蒼白.(2) 嗜中性白細胞：成熟的核分為數(shù)葉，核絲不明顯，核染色質(zhì)呈鮮明的斑點狀構(gòu)造 .桿狀核細胞的核呈U字形或S形，核膜平滑.在1日齡健康仔豬的血液中常出現(xiàn)晚幼嗜中性白細胞，胞漿呈淡藍色乃至藍色.(3) 嗜酸性白細胞：顆粒呈圓形或卵圓形，染成橙紅色，均勻分布于胞漿中.核為腎形，桿狀 或分葉.(4) 嗜堿性白細胞：胞核明顯，呈淡紫色.嗜堿性顆粒為藍紫色，顆粒比馬的稍大.(5) 淋巴細胞：胞漿與核之間有一透明帶，胞漿的邊緣有小而細長的嗜天青顆粒(6) 單核細胞：核的邊緣不整齊，核染色質(zhì)

23、呈紐扣狀.胞漿為灰藍色，幾乎看不到胞漿的顆粒.血小板：呈小的卵圓形，有時也可見到細長的巨型血小板.白細胞分類計數(shù)血液中的白細胞一般包括：顆粒細胞（嗜中性、嗜酸性和堿性細胞）、淋巴細胞（大、中、小淋巴細胞）和單核細胞。在正常情況下，其構(gòu)成的比例、形態(tài)和質(zhì)量基本是不變的， 但在病理情況下，這種比例、形態(tài)、質(zhì)量將會發(fā)生變化， 故臨床上常把計數(shù)白細胞總數(shù)和分類計數(shù)結(jié)合起來，進行分析和診斷某些感染性疾病的種類?！驹怼堪准毎诸愑嫈?shù)是將血液制成分布均勻的薄膜涂片，用復(fù)合染料染色，根據(jù)各類白細胞著色特征，在顯微鏡下觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量的變化、予以分類計數(shù)并求出各種白細 胞所占的百分率，對疾病有輔助診斷意

24、義?！酒鞑呐c試劑】器材：載玻片、染色缸及支架、洗瓶、顯微鏡及鏡油、白細胞分類計數(shù)器、吸水紙等。試劑：染液、緩沖液1. 瑞（Wright ）氏染液瑞氏染粉O.lg，甲醇60.0ml。將染粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，然后將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻瓶，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此繼續(xù)操作，直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日后即可應(yīng)用。新配制的染液偏堿性，放置后可呈酸性。保存時間愈久，染色力愈佳。2. 吉（Giemsa）氏染液 吉氏染粉0.5g，純甘油33.0ml，純甲醇33.0m1。先將染粉置于研缽中，加入少量甘油，充分研磨，然后加入其余量的甘油，水浴加溫（6

25、0C） 1 2h,經(jīng)常用玻璃棒攪拌，使染色粉溶解，最后加入甲醇混合，裝棕色瓶中保存1周后過濾即成原液。臨用時取此原液1ml,加pH6. 8的緩沖液或新鮮蒸餾水 10ml，即成應(yīng)用液。3. 瑞一吉氏復(fù)合染色液瑞氏染粉1.0g，吉氏染粉0.3g，中性甘油10ml，甲醇500ml。先將瑞氏染粉與吉氏染粉置于研缽中，加入少量甘油和甲醇，充分研磨，吸出上層染液置棕色瓶中，在加甲醇繼續(xù)研磨，再吸出上液，如此連續(xù)數(shù)次，直至500ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振搖3 min，共5天，存放1周后可使用。4. 緩沖液（pH6.8） 磷酸氫二鈉（N&HPO） 3.8g，磷酸二氫鉀（KHPQ） 5.47g，

26、用蒸餾水 溶解并定容到1000 ml。【血片涂抹】1. 取潔凈載玻片數(shù)張，選擇邊緣光滑的載片作為推片（也可用血細胞計數(shù)板的蓋玻片做為推 片），用左手的拇指及中指夾持載片并置于平穩(wěn)的臺面上，右手持推片。2. 取被檢血（經(jīng) EDTA抗凝）1小滴，放于載玻片的右端，手持推片放于血滴之前并與載片接觸，以30°40°角向后拉動推片，使之與血滴接觸，待血液擴散形成一條線狀之后， 以均等的速度輕輕向前推動推片，則血液就被均勻地涂于載片上而形成一薄血膜。良好的血片，血液應(yīng)分布均勻，厚度要適當(dāng)，對光觀察時呈霓紅色，血膜應(yīng)位于玻片中央，兩端留有空隙，以便標上患畜名稱、畜別、編號、日期。常溫下自

27、然風(fēng)干（冬天可適當(dāng)加溫）。【血片染色】有單染和復(fù)染1. 瑞氏染色法 是最常用的染色法之一。將干燥的血片用蠟筆于血膜之兩端各劃一道橫線，以防染色液外溢。置血片于水平支架上，滴瑞氏染液于血片上，并計其滴數(shù)，直至將血膜浸蓋為止，待染12 min后，滴加等量緩沖液或新鮮蒸餾水，輕輕吹動使之混勻，再染410 min，用蒸餾水或常水沖洗，吸干，油鏡觀察。此染液對胞漿及顆粒的染色效果較好。2. 姬姆薩氏染色法 血涂片用甲醇固定 12 min。待甲醇揮發(fā)后再將血片直立于裝有姬姆 薩氏應(yīng)用液的染色缸中，染色 3060 min，取出用蒸餾水或常水沖洗，干燥后鏡檢。此染 液對細胞核及血液原蟲的染色效果較好。3. 瑞

28、氏與姬姆薩氏復(fù)合染色法將血片置于染色架上，滴加復(fù)合染液35滴，使其迅速布滿血膜，約1 min后，滴加緩沖液510滴，輕輕搖動玻片使之充分混合，510 min后用流水沖去染液，待干鏡檢?！痉诸愑嫈?shù)】1. 先用低倍鏡檢視血片上白細胞的分布情況，一般是粒細胞、單核細胞及體積較大的細胞分布在血片的上、下緣及尾端，淋巴細胞多在血片的起始端。滴加顯微鏡油，轉(zhuǎn)過油鏡頭進行分類計數(shù)。2. 計數(shù)時，為避免重復(fù)和遺漏， 可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計數(shù)法推移血片，記錄每一區(qū)的各種白細胞數(shù)。每張血片最少計數(shù)100個白細胞，連續(xù)觀察 23張血片，求出各種白細胞的百分比。3. 記錄時，可用“白細胞分類計數(shù)器”，也可事先設(shè)計

29、一表格，用畫“正”字的方法記錄，以便于統(tǒng)計百分數(shù)?！菊⒖贾怠恳姳?1-1表1-1各種動物白細胞分類正常平均值(%動物種類嗜堿性白細胞嗜酸性白細胞嗜中性白細胞淋巴細胞單核細胞晚幼細胞桿狀核分葉核牛0.54.00.53.033.057.02.0馬0.54.50.54.054.034.02.5羊0.54.51.03.033.055.53.5豬0.52.51.05.532.055.03.5駱駝0.58.01.06.547.035.02.0【臨床意義】白細胞分類計數(shù)可發(fā)現(xiàn)各種白細胞的量或質(zhì)的變化，結(jié)合白細胞總數(shù)，可進一步揭示機體防御機能的狀況，對疾病的診斷、病程、預(yù)后判斷及治療等有著重要的指導(dǎo)意義。由于外周血液中白細胞的組成主要為中性粒細胞和淋巴細胞，尤其是中性粒細胞數(shù)最多， 約占白細胞總數(shù)的 50%- 70%(除牛、豬外)，所以，在多數(shù)情況下，白細胞數(shù)的變化主要受 中性粒細胞的影響，其增多或減少的臨床意義與中性粒細胞變化的臨床意義基本一致。1. 嗜中性白細胞增加：(1)生理