試驗(yàn)室常用血液抗凝劑的特點(diǎn)及應(yīng)用

1、實(shí)驗(yàn)室常用血液抗凝劑的特點(diǎn)及應(yīng)用在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中，有許多檢測(cè)項(xiàng)目的血液標(biāo)本是需要抗凝才可以檢測(cè)的。而抗 凝劑種類較多， 實(shí)際應(yīng)用中要根據(jù)不同的需要進(jìn)行選擇， 才能獲得理想的效果。 實(shí) 驗(yàn)室中常用的抗凝劑有 肝素 、乙二胺四乙酸鹽（ EDTA 鹽）、枸櫞酸鹽、草酸鹽 等 4 種，現(xiàn)將它們的特點(diǎn)及應(yīng)用分別敘述如下：一、 肝素 抗凝是用于血液化學(xué)成分檢測(cè)的首選抗凝劑。肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多 糖，是分散相物質(zhì)平均分子質(zhì)量為15000。其抗凝原理主要是通過(guò)與抗凝血酶川結(jié)合引起抗凝血酶川構(gòu)型發(fā)生變化，加速凝血酶-凝血酶復(fù)合體形成而產(chǎn)生抗凝作用。此外，肝素還能借助血漿輔助因子（肝素輔助因子n）來(lái)抑制凝血

2、酶。常用肝素抗 凝劑是肝素的鈉、鉀、鋰、銨鹽，其中以肝素鋰最好，但其價(jià)格較貴，鈉、鉀鹽會(huì) 增加血液中的鈉、鉀含量，銨鹽會(huì)增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的劑量為10.012.5 IU/ml 血液。 肝素對(duì)血液成分干擾較少， 不影響紅細(xì)胞體積， 不引起溶血， 適用于做紅細(xì)胞滲透 性試驗(yàn)、血?dú)?、血漿滲透量、紅細(xì)胞壓積及普通生化測(cè)定。但肝素具有抗凝血酶作 用，不適合做血凝試驗(yàn)。另外， 肝素過(guò)量可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少，所以不 適合做白細(xì)胞分類和血小板計(jì)數(shù)， 更不能用于止血檢驗(yàn)。 此外， 肝素抗凝血不能用 于制作血涂片，因?yàn)?Wright 染色后出現(xiàn)深藍(lán)色背景，影響顯微鏡減產(chǎn)。肝素抗凝 血應(yīng)于短時(shí)

3、間內(nèi)使用，否則放置過(guò)久血液又可凝固。二、 乙二胺四乙酸鹽 （EDTA 鹽）EDTA 能與血液中 Ca2+ 結(jié)合成螯合物，凝血過(guò)程被阻斷，血液不能發(fā)生凝固。EDTA 鹽有鉀、鈉、鋰鹽，國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦使用的是EDTA-K 2，其溶解度最高，抗凝速度最快。 EDTA 鹽通常配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)是 15%的水溶液，每 ml 血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA 溶液。EDTA鹽可在100C 下干燥，抗凝作用不變。此抗凝劑不影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)及大小，對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)影響最小，并且可以抑制血 小板的聚集， 適用于一般血液學(xué)檢測(cè)。 但如果抗凝劑濃度過(guò)高，滲透壓上升，會(huì)造 成細(xì)胞

4、皺縮。 EDTA 溶液 pH 與鹽類關(guān)系較大，低 pH 可使細(xì)胞膨脹。 EDTA-K 2可 使紅細(xì)胞體積輕度膨脹， 采血后短時(shí)間內(nèi)平均血小板體積非常不穩(wěn)定半小時(shí)后趨于 穩(wěn)定。 EDTA-K 2使 Ca2+、Mg 2+下降， 同時(shí)使肌酸激酶、 堿性磷酸酶降低， EDTA-K 2 的最佳濃度為 1.5mg/ml 血液，如果血少，中性粒細(xì)胞會(huì)腫脹分葉消失，血小板會(huì) 腫脹、崩解，產(chǎn)生正常血小板的碎片，使分析結(jié)果產(chǎn)生錯(cuò)誤。EDTA 由于能抑制或干涉纖維蛋白凝塊形成時(shí)纖維蛋白單體的聚合，不適于血凝和血小板功能檢測(cè) ，也不適用于鈣、鉀、鈉及含氮物質(zhì)的測(cè)定。此外，EDTA 能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子

5、，故不適合制作組化染色和檢查紅斑狼瘡細(xì)胞的血涂片。三、枸櫞酸鹽2+枸櫞酸鹽主要是枸櫞酸鈉，其抗凝原理是能與血液中的Ca2結(jié)合形成螯合物，使Ca2+失去凝血功能，凝血過(guò)程被阻斷，從而阻止血液凝固。枸櫞酸鈉有Na3C6H5O7 2出0和2Na3C6H5O7 IIH2O兩種晶體，通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液，與血液按照 1:9 體積混合。大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝，它有助于V因子和忸因子的穩(wěn)定，并且 對(duì)平均血小板體積及其他凝血因子影響較小， 可用于血小板功能分析。 枸櫞酸鈉細(xì) 胞毒性較小，也是輸血中血液保養(yǎng)液的成分之一。但是，枸櫞酸鈉 6mg 才能抗凝1ml 血液，堿性強(qiáng)，不適用于

6、血液化驗(yàn)和生化測(cè)驗(yàn)。四、草酸鹽 草酸鹽也是常用的抗凝劑，優(yōu)點(diǎn)是溶解度大，作用原理是溶解后解離的草酸根與標(biāo)本中的 。玄2+形成草酸鈣沉淀，使 Ca2+失去凝血功能，凝血過(guò)程被阻斷。常用的草酸鹽抗凝劑種類有草酸鈉、 草酸鉀和草酸銨， 草酸鈉的常用濃度為 O.1 mol/L ， 與血液按1:9比例使用。但是，高濃度 k+或Na+易使血細(xì)胞脫水皺縮，而草酸銨則 可使血細(xì)胞膨脹， 故測(cè)定血細(xì)胞比容時(shí)用草酸銨與草酸鉀或草酸鈉兩者適當(dāng)比例混 合的抗凝劑， 恰好不影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積。 常用于血液生化測(cè)定， 但不適用于 K+、 Ca 2+的測(cè)定。由于生成草酸鈣沉淀，紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)鋸齒狀，白細(xì)胞出現(xiàn)空泡， 淋巴

7、細(xì)胞及單核細(xì)胞會(huì)變形， 不宜做血片檢查。 草酸鹽可使血小板聚集， 并影響白 細(xì)胞形態(tài)，不能用于白細(xì)胞和血小板分類計(jì)數(shù)。主要參考文獻(xiàn)：1. 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.第三版.北京：人民衛(wèi)生出版 社,2002:1243.2. 郭 建,孫葵英,孫 濱,等.抗凝劑選擇 對(duì)全血 細(xì)胞分 析的影響.臨床檢驗(yàn)雜 志,1998,16(2):311.3. 張 文.臨床檢驗(yàn)抗凝劑特點(diǎn)及應(yīng)用 .廣東醫(yī)學(xué) ,2005,26(8):1158-1159.4. 周偉青 .抗凝劑在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用 .現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志 ,2006,15(2 4):3403-3404.5. 羅學(xué)志 ,喻志祥 .淺談抗凝劑在實(shí)驗(yàn)室

8、中的應(yīng)用.社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志 ,2006,4(8):61-62.附錄四 常用抗凝劑的配制及用法2009-06-02 17:32附錄四 常用抗凝劑的配制及用法在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常需動(dòng)物的全身抗凝，采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)?抗凝劑抗凝。對(duì)抗凝劑的要求是：用量少、溶解度大、不帶進(jìn)干擾實(shí)驗(yàn)的雜質(zhì)。一、肝素(1) 肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很強(qiáng) ,作死亡復(fù)蘇等實(shí)驗(yàn)時(shí) , 常用它作動(dòng)物全身抗凝劑，肝素 的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力， 阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等 作用，從而使血液不發(fā)生凝固。(2) 配制和用量純的肝素10mg能抗凝65125 ml血液(按Img等于125U, 1020U能抗1

9、 ml 血液計(jì) )。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時(shí)間長(zhǎng)短不等，因而其抗凝效 果也不相同。一般可配成1%肝素生理鹽溶液，用時(shí)取0.1毫升于試管內(nèi)，100C 烘干，每管能抗凝510ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤(rùn)一下管壁， 直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。 在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作全身抗凝時(shí)， 一般劑量為： 大 白鼠 2. 5 3. 0mg/200 300g 體質(zhì)量，兔 10mgkg 體質(zhì)量，狗 5 10mgkg 體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點(diǎn)， 因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋白質(zhì)各部分 的測(cè)定時(shí)，不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素 12500U,相當(dāng)于10 0mg。二、草酸鹽合劑(1 )

10、原理 草酸胺能使血細(xì)胞略為膨大，而草酸鉀能使血細(xì)胞微縮小，因此草酸銨與草 酸鉀按 3：2 比例配置，可使血細(xì)胞體積保持不變；加福爾馬林則能防止微生物 在血中繁殖。此抗凝劑最適于作紅細(xì)胞比積測(cè)定。（2）配制方法及用量草酸銨1. 2g、草酸鉀0. 8g、福爾馬林1. 0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血 加草酸鹽合劑0. 1ml（即相當(dāng)草酸銨1. 2mg草酸鉀0. 8mg）。根據(jù)取血量將計(jì) 算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取 0. 5ml 于試管，烘干后每管 可使 5ml 血不凝固。（3）注意事項(xiàng) 草酸的作用在于能夠沉淀血凝過(guò)程中所必需的鈣離子，而達(dá)到抗凝目的。用 時(shí)注意加的量應(yīng)適中，

11、不能過(guò)多， 以免妨礙去蛋白質(zhì)血濾液的制取。 不適用于血 液內(nèi)鈣或鉀的測(cè)定，也不能用于血液非蛋白氮測(cè)定。三、枸櫞酸鈉常配成35%水溶液。也可直接加粉劑，每毫升血加 35mg即可達(dá)到抗凝 目的。枸櫞酸鈉可使鈣失去活性，防止凝血。但其抗凝作用較差，堿性較強(qiáng)，不宜 作化學(xué)檢驗(yàn)之用。 僅可用于紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定。 急性血壓測(cè)定實(shí)驗(yàn)所用枸櫞酸 鈉為 5 6溶液。四、草酸鉀（一）原理和注意事項(xiàng) 草酸鉀為最常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結(jié)合， 形成不溶解的草酸鈣， 使血液不凝固。 常用于非蛋白氮測(cè)定， 但不適用于測(cè)定鉀 和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故應(yīng)注意。（二）配制及使用方法取草酸鉀10g,加蒸餾水少許使溶解，再加蒸餾水至100ml