不同產(chǎn)地粉葛四種異黃酮含量比較

1、不同產(chǎn)地粉葛四種異黃酮含量比較粉葛為豆科植物甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth 的干燥 根，載于中國(guó)藥典 1 ，具有解肌退熱、生津止渴的功效、 臨床主要用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、口渴等癥狀。粉葛的主 要化學(xué)活性成分有葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷 元等異黃酮類化合物 2 ，具有降血壓、降血糖、保護(hù)肝臟、治 療頸椎病等作用 3-4 ；同時(shí)粉葛富含淀粉，因此具有較高的醫(yī) 用和食用價(jià)值。 近年來， 文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)粉葛異黃酮多指標(biāo)成分的含 量測(cè)定 5-8 ，但是隨著粉葛栽培面積的不斷擴(kuò)大，出現(xiàn)了許多 栽培品種，因此不同產(chǎn)地藥材之間的有效成分含量存在著一定的

2、差異，進(jìn)而影響了藥材的質(zhì)量。 研究采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì) 廣東、廣西、安徽粉葛中四種異黃酮成分的含量，為粉葛藥材質(zhì) 量控制提供方法和依據(jù)。1 儀器與試藥1.1 儀器 Waters2695 高效液相色譜系統(tǒng) （2998 型二極管陣 列檢測(cè)器）；KQ3200D型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超市儀器 XX公司）；Thermo超純水設(shè)備；電子分析天平（梅特勒 -托利多 儀器上海XX公司）；FW135中草藥粉碎機(jī)（天津市泰勒特儀器 XX公司）。JP+21.2 藥品與試劑 3'- 甲氧基葛根素對(duì)照品（批號(hào)： 141217，成都普菲德生物技術(shù) XX公司）；葛根素對(duì)照品（批號(hào)：10752-201313

3、）、大豆苷對(duì)照品（批號(hào)： 111738-201302）、大 豆苷元（批號(hào)： 111502-200402 ）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究 院；粉葛（批號(hào)：150420,安徽本草國(guó)藥飲片 XX公司；批號(hào)： 150302，安徽省金芙蓉中藥飲片 XX公司；批號(hào)：1504005,江西 樟樹天齊堂中藥飲片 XX公司）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試 劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取各對(duì)照品適量,分別用甲 醇制成每毫升中含有葛根素 0.062 mg、 3'- 甲氧基葛根素 0.0076 mg 大豆苷0.012 mg、大豆苷元 0.0164 mg即可。2.2 供試品溶液的制備

4、取不同產(chǎn)地的粉葛粉末 （過三號(hào)篩） 約 1.0 g ,精密稱定,分別置于具塞錐形瓶中,精密加入 30%乙 醇 100 ml ,稱定重量,超聲提取 30 min ,放冷,再稱定重量,用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45卩m 微孔濾膜,即得。2.3 色譜條件 色譜柱Hypersil C18 色譜柱（4.6 mmx 250 mm 5 a m）；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm 柱溫：30 °C；流速：1.0 ml/min ； 進(jìn)樣量：10 a l ;梯度洗脫條件見表1。色譜見圖1。2.4 方法學(xué)考察2.4.1 線性范圍考察 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液 0.2、0.5、1、2、

5、5、10 ml，置于10 ml容量瓶?jī)?nèi)，以甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 a m微孔濾膜濾過。分別按“ 2.3 ”項(xiàng)下條件測(cè) 定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X, ng）繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線，得到葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的 回歸方程，見表 2。2.4.2 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液， 按“2.3 ”項(xiàng)色譜條 件重復(fù)測(cè)定 6 次，測(cè)得葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大 豆苷元的峰面積 RSD分別為0.52%、1.36%、1.00%、0.35%,結(jié) 果表明儀器精密度良好。2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一來源的粉葛 6份,分別按“2.2” 項(xiàng)下制

6、備供試品溶液,按“ 2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄 峰面積,計(jì)算葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分別為 0.29%、0.04%、0.04%、0.03%, RSD分別為 1.61%、 1.98%、 1.50%、 1.62%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一來源的供試品溶液, 按“2.3”項(xiàng) 下的色譜條件，分別用于 0、2、4、6、8 12 h進(jìn)樣10卩L分 別測(cè)定葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積, RSD分別為1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，結(jié)果表明供試品溶液 在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好

7、。2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一粉葛根粉末約 0.5 g ,置于錐形瓶中,精密加入適當(dāng)量的對(duì)照品溶液,按“ 2.2”項(xiàng)下 制備供試品溶液, 平行制備 6份。按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定, 計(jì)算平均回收率和 RSD葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、 大豆苷元的平均回收率分別為101.1%、 99.86%、 101.78%、103.39%, RSD分別為 1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結(jié)果表明 該方法準(zhǔn)確可靠。 JP2.5 樣品含量測(cè)定 取不同產(chǎn)地的粉葛， 分別按“ 2.2 ”項(xiàng)下 方法制備供試品溶液，按“ 2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄各個(gè) 成分的峰面積， 以外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量， 結(jié)果見表 33 討論 不同產(chǎn)地粉葛藥材中四種異黃酮類成分含量比較，葛根素： 廣東安徽廣西； 3-甲氧基葛根素：安徽 廣東廣西；大豆苷： 廣東 安徽或廣西；大豆苷元：廣東 廣西安徽；不同產(chǎn)地之間 含量相差較大的是 3'- 甲氧基葛根素，