植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對(duì)樹(shù)莓愈傷組織誘導(dǎo)的影響試驗(yàn)初報(bào)

1、    植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對(duì)樹(shù)莓愈傷組織誘導(dǎo)的影響試驗(yàn)初報(bào)    陸楊輝摘 要 以有刺黑樹(shù)莓葉柄、葉片及莖段為外植體，接種在附加不同濃度和種類的生長(zhǎng)素（naa、iba、2，4-d）及細(xì)胞分裂素（kt、6-ba）的ms基本培養(yǎng)基上，探討植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明：當(dāng)選葉柄、葉片作為外植體時(shí)，誘導(dǎo)形成愈傷的最佳生長(zhǎng)素為naa，濃度分別為1.0 mg·l-1、0.20.5 mg·l-1；當(dāng)選莖段作為外植體時(shí)，宜用iba誘導(dǎo)形成愈傷，濃度為3.0 mg·l-1。經(jīng)比較分析，篩選出的誘導(dǎo)愈傷形

2、成的最佳外植體為葉柄，培養(yǎng)基為ms+naa 1.0 mg·l-1。關(guān)鍵詞 樹(shù)莓；愈傷組織；誘導(dǎo)分析：s567.239 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：b doi：10.19415/ki.1673-890x.2018.17.074樹(shù)莓屬于薔薇科懸鉤子屬，半灌木果樹(shù)，近年來(lái)在國(guó)際市場(chǎng)走俏，正在成為果樹(shù)行業(yè)增長(zhǎng)熱點(diǎn)之一。樹(shù)莓不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，而且有些品種抗旱、抗寒、耐瘠薄，在西北地區(qū)可大面積推廣種植。樹(shù)莓所采用扦插、根蘗、壓條等傳統(tǒng)繁殖方法，其繁殖系數(shù)低、速度慢，影響了優(yōu)良品種的推廣速度，采用組織培養(yǎng)技術(shù)可以快速繁殖樹(shù)莓的優(yōu)良品種1-3。在植物組織培養(yǎng)中，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)植物外植體形態(tài)產(chǎn)生的影響報(bào)道很多4-6，

3、但有關(guān)多種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)黑樹(shù)莓不同外植體誘導(dǎo)形成愈傷的影響報(bào)道卻很少?；诖耍接懥酥参锷L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及不同外植體部位對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響，從而找出適于黑樹(shù)莓形成愈傷的最佳培養(yǎng)基和最佳外植體，為更快、更好地繁育樹(shù)莓奠定良好的基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 材料研究所用的材料為有刺黑樹(shù)莓，來(lái)自園藝系組培室。試驗(yàn)所用外植體葉片、葉柄和莖段均取自離體培養(yǎng)獲得的無(wú)菌苗。1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件試驗(yàn)所用的基本培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基，通過(guò)在ms培養(yǎng)基上添加不同種類及濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，研究其對(duì)樹(shù)莓不同外植體愈傷組織誘導(dǎo)的影響。各培養(yǎng)基中蔗糖的濃度為30 g·l-1，瓊脂為7 g·l-1，ph值為5

4、.65.8。培養(yǎng)室溫度為2224 ，光強(qiáng)為2 500 lx，每天光照14 h。1.3 方法在無(wú)菌條件下，從黑樹(shù)莓芽誘導(dǎo)形成的無(wú)菌苗上直接切取0.51.0 cm的葉柄、1.0 mm莖段及3.0 mm×4.0 mm葉片（葉片有一邊保持完好狀態(tài)，接種時(shí)將其完好的一邊朝向瓶壁）接到誘導(dǎo)愈傷形成的培養(yǎng)基上。葉片、葉柄、莖段每個(gè)處理分別接3瓶、3瓶、4瓶，每瓶接種7塊外植體。接種后每天觀察記錄外植體形態(tài)變化及愈傷組織增殖動(dòng)態(tài)，接種14 d時(shí)統(tǒng)計(jì)形成愈傷組織的塊數(shù)，并計(jì)算出每種組合及每種外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率。愈傷組織誘導(dǎo)率=形成愈傷組織塊數(shù)/接種外植體塊數(shù)×100%2 結(jié)果與分析2.1

5、 生長(zhǎng)素對(duì)樹(shù)莓形成愈傷的誘導(dǎo)2.1.1 單一生長(zhǎng)素的影響2.1.1.1 naa的影響當(dāng)以葉柄作為外植體時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率隨naa濃度的增加而升高，當(dāng)naa濃度達(dá)到1.0 mg·l-1時(shí)，誘導(dǎo)率達(dá)到最高值100%，隨后則隨naa濃度的增加而下降。由表1還可看出，形成愈傷的時(shí)間隨naa濃度的增加而縮短；當(dāng)以葉片作外植體時(shí)，隨naa濃度的增加誘導(dǎo)率逐漸降低，形成愈傷的時(shí)間則越來(lái)越長(zhǎng)，這說(shuō)明naa對(duì)于葉片誘導(dǎo)愈傷效果不顯著，試驗(yàn)中所設(shè)計(jì)的naa濃度可能過(guò)高；當(dāng)以莖段作外植體時(shí)，隨naa濃度的增加誘導(dǎo)率升高，當(dāng)濃度為1.0 mg·l-1時(shí)，誘導(dǎo)率達(dá)最高值82.1%，隨后則隨濃度升高而

6、誘導(dǎo)率下降，開(kāi)始形成愈傷的時(shí)間沒(méi)有表現(xiàn)出規(guī)律性變化?？傮w來(lái)說(shuō)，不同外植體誘導(dǎo)愈傷對(duì)naa濃度有不同要求。當(dāng)以naa作為外源激素添加到ms培養(yǎng)基上誘導(dǎo)樹(shù)莓形成愈傷時(shí)，其濃度宜設(shè)為1.0 mg·l-1，選用葉柄作為外植體。2.1.1.2 2，4-d的影響由表2可以看出，以葉柄作外植體時(shí)，濃度為0.21.0 mg·l-1，愈傷組織誘導(dǎo)率隨2，4-d濃度的增加而升高，最高值為68.2%，當(dāng)2，4-d濃度超過(guò)1.0 mg·l-1時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率隨濃度的增加而降低。由此可知，當(dāng)用葉柄誘導(dǎo)愈傷時(shí)，2，4-d的濃度宜設(shè)為1.0 mg·l-1；當(dāng)以葉片作外植體時(shí)，濃度為

7、0.21.0 mg·l-1，愈傷組織誘導(dǎo)率隨2，4-d濃度的增加而降低，當(dāng)濃度超過(guò)1.0 mg·l-1時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率開(kāi)始回升；當(dāng)以莖段作外植體時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率則隨濃度的升高而降低，這說(shuō)明對(duì)莖段而言，試驗(yàn)中所設(shè)計(jì)的2，4-d濃度有可能過(guò)高，應(yīng)進(jìn)一步降低濃度，確定能使莖段達(dá)到最高愈傷組織誘導(dǎo)率的2，4-d的濃度范圍。2.1.1.3 iba的影響由表3知，無(wú)論是以葉柄、葉片外植體，還是以莖段作外植體，愈傷組織誘導(dǎo)率均是隨iba濃度的增加而升高，說(shuō)明試驗(yàn)中所設(shè)計(jì)的iba濃度有可能過(guò)低。當(dāng)濃度為3.0 mg·l-1，選莖段作外植體時(shí)，愈傷誘導(dǎo)率達(dá)到最高，為92.9%，

8、形成愈傷的時(shí)間也很短，在接種后的第5 d便形成了白色、致密的愈傷組織。所以當(dāng)選用iba作為外源激素添加到ms培養(yǎng)基上誘導(dǎo)樹(shù)莓形成愈傷時(shí)，宜選莖段作為外植體。2.1.1.4 naa、2，4-d、iba對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率作用效果的比較由表1、表2、表3可知，當(dāng)naa、2，4-d、iba處于低濃度狀態(tài)0.2 mg·l-1、0.5 mg·l-1時(shí)，除當(dāng)它們的濃度為0.2 mg·l-1，均選用莖段作為外植體時(shí)所得到的誘導(dǎo)率外，均是naa的作用效果最好，誘導(dǎo)率最高達(dá)81%，2，4-d的作用次之，iba的作用效果最差，誘導(dǎo)率僅為14.3%-34.3%。當(dāng)激素處于高濃度狀態(tài)1.0

9、mg·l-1、3.0 mg·l-1時(shí)，iba的作用效果得到加強(qiáng)，愈傷組織誘導(dǎo)率為19.0%92.9%，與naa的作用效果不分上下，2，4-d的作用效果最差，愈傷組織誘導(dǎo)率最高僅達(dá)68.2%。2.1.2 不同種類生長(zhǎng)素配合使用對(duì)誘導(dǎo)愈傷的影響由于各種生長(zhǎng)素對(duì)樹(shù)莓不同部位外植體的愈傷組織誘導(dǎo)效果不同，形成的愈傷在形態(tài)和數(shù)量上均存在一定的差異，為了更進(jìn)一步確定生長(zhǎng)素在樹(shù)莓愈傷誘導(dǎo)方面的作用，以ms為基本培養(yǎng)基，配合添加了不同種類及濃度的生長(zhǎng)素，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，當(dāng)naa、2，4-d、iba的濃度均處于0.2 mg·l-1時(shí)，naa與2，4-d配合使用對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)

10、率的作用效果強(qiáng)于naa與iba配合使用時(shí)的效果。而當(dāng)3者的濃度均處于0.5 mg·l-1、1.0 mg·l-1時(shí)，naa與iba組合的效果要優(yōu)于naa與2，4-d組合的效果，其中以naa 0.5 mg·l-1+iba 0.5 mg·l-1配合使用效果最好，愈傷組織誘導(dǎo)率為71.4%95.2%。2.2 細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配合使用對(duì)誘導(dǎo)愈傷的影響由表5可知，單獨(dú)使用iba，愈傷組織誘導(dǎo)率為14.3%34.3%，當(dāng)培養(yǎng)基中再添加6-ba時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率下降為0%19%，這說(shuō)明6-ba對(duì)愈傷形成有抑制作用。當(dāng)iba與kt配合使用時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率明顯提高，葉片

11、的誘導(dǎo)率可達(dá)100%，莖段的誘導(dǎo)率可達(dá)96.5%，然而美中不足的是，葉片形成的愈傷量少且十分緊密，莖段形成的愈傷則呈現(xiàn)褐色。3 主要結(jié)論植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是影響外植體形成愈傷的最主要因素之一，不同生長(zhǎng)素對(duì)樹(shù)莓葉柄、葉片、莖段形成愈傷的促進(jìn)作用不同，有報(bào)道指出，在某些植物中，不同種類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)適宜搭配所產(chǎn)生的效果要比單獨(dú)使用時(shí)的效果好7。而本試驗(yàn)研究的結(jié)果則與之相反，無(wú)論是不同種類生長(zhǎng)素之間配合使用，還是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配合使用，它們對(duì)形成愈傷的效果均不如使用單一生長(zhǎng)素時(shí)好，如以naa 1.0 mg·l-1，選用葉柄作為外植體，形成愈傷的效果最好，誘導(dǎo)率達(dá)到100%。2，4-d的

12、作用效果居中，因?yàn)樗赡軐?duì)人體健康不利，有可能與細(xì)胞癌變有關(guān)，所以實(shí)際應(yīng)用中，在培養(yǎng)基選擇方面還是應(yīng)盡量選用不含2，4-d或2，4-d含量較低的培養(yǎng)基。在利用樹(shù)莓外植體形成愈傷組織時(shí)，雖然iba與kt配合使用會(huì)得到較高的愈傷組織誘導(dǎo)率，然而形成的愈傷組織質(zhì)量不好，所以在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)盡量避免添加細(xì)胞分裂素kt和6-ba。在安偉等8做的關(guān)于紅寶玉樹(shù)莓的莖段培養(yǎng)及試管繁殖的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)莖段極易褐變死亡，這一現(xiàn)象在本次研究所用的材料有刺黑樹(shù)莓中的表現(xiàn)也很明顯，這可能是因?yàn)榍o段酚類物質(zhì)含量和酚氧化酶活性較高。在以后的試驗(yàn)中，可預(yù)先在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑，如維生素c、聚乙烯吡咯烷酮等，也可利用活性炭吸附有毒醌類物質(zhì)。參考文獻(xiàn)：1 胡建剛，黃巧興，濃秋云.黑樹(shù)莓的試管繁育j.植物生理學(xué)通訊，1994，30（5）：356.2 王國(guó)英，王建華.懸鉤子離體葉片和莖段的培養(yǎng)及植株再生j.北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，21（1）：12-16.3 代漢萍，潭呂華，黃慶文.樹(shù)莓莖尖培養(yǎng)技術(shù)及其應(yīng)用j.中國(guó)果樹(shù)，2000（4）：18-20.4 莫磊興，牟海飛，鄒瑜，等.月季組培快繁技術(shù)研究j.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，16（4）：439-443.5 畢艷娟，周麗艷，高書(shū)國(guó)，等.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)含笑離