細胞因子及其受體檢測-下篇臨床免疫學及檢驗

1、下篇臨床免疫學及檢驗第二十五章 細胞因子及其受體檢測chapter 25 assays for cytokine and cytokine receptor第一部分 教學內(nèi)容和要求一、目的要求掌握：細胞因子的匸物學和免疫沖各種檢測方法的原理及評價；熟悉：生物寧和免疫學方法檢測細胞因 子的技術(shù)耍點及方法評價；了解：細胞因子的分子牛物學檢測方法、細胞因子受體及可溶性受體的檢測技 術(shù)。二、教學內(nèi)容1. 生物學檢測法：細胞增殖法，靶細胞殺傷或抑制法，細胞病變抑制法，趨化活性測定法，生物學檢測法 的評價。2. 免疫學檢測法：雙抗體夾心elisa,放射免疫分析，酶聯(lián)免疫斑點試驗，細胞內(nèi)細胞因子的檢測，免

2、疫學檢測法的評價。3. 分子生物學檢測：細胞i大i子的dna檢測，細胞因子mrna表達的測定，分子生物學檢測法的評價。4. 細胞因子受體檢測技術(shù)：膜結(jié)合受體的測定，可溶性受體的測定。第二部分測試題一、選擇題（一）單項選擇題（a型題）1 .能夠川細胞増殖法檢測的細胞因了是a. csf b. tnf c. ifn2. 生物學檢測法最重要的優(yōu)點是a.高特異性b.高靈敏性3. 免疫化學測定法最重要的優(yōu)點a.高特異性b.高靈敏性dil6e.il-8c.操作簡單d.活性單位測定c.含量測定d.活性單位測定e.實驗成木低e.實驗成木低4.能夠川細胞病變抑制法檢測的細胞i人1了a. csfb tnfc.ifn

3、dil6e. il-85.檢測il2的依賴細胞株是:a. b9b 7td1c.ctlld. l929e. wish6.檢測tnf的靶細胞株a. b9b 7td1c.ctlld l929e. wish7. 檢測人干擾素的指示細胞株a. b9 b. 7td1 c. ctll d. l929 e. wish8. mtt比色法的測定波氏為a. 570nm b 450nm c 490nm d 670nmm e 630nm9. 可測定單個細胞分泌細胞因子的方法a. elisa b. ria c.凝集反應(yīng)d. elispot e.免疫比濁10. 可同時測定兩種細胞因子的方法是a. elisa b. ria

4、c.生物學檢測法d. elispot e. pcr11. 細胞內(nèi)細胞因子的檢測主要用于測定的細胞是a. tcb. thc. b細胞d. nk細胞e.巨噬細胞（二）多項選擇題（x型題）1. 生物學法檢測細胞因子的特點具冇a.高特異性b.髙靈敬性 c.操作簡單d.活性單位測定e.實驗成本低2. 免疫化學法檢測細胞因子的特點包括a.高特異性b.髙靈敬性 c.操作簡單d.活性單位測定e.含量測定3. 能夠用細胞増殖法檢測的細胞因子冇a. il-2 b. tnf c. ifn d. il-6 e. il-84. 用于檢測細胞増殖程度的方法a.直接計數(shù) b. elispot c. 3h-tdr摻入法d.

5、mtt 比色法 e. bas-elisa5 .能夠用于檢測細胞毒反應(yīng)程度的方法有a.結(jié)晶紫染色法b. mtt比色法 c. bas-elisad. elispot e. 51 cr 釋放法6. 測定細胞因子含量常用的技術(shù)有a. elisa b. ria c.凝集反應(yīng)d. elispot e.免疫比濁7. 在mtt比色法屮，用于溶解反應(yīng)產(chǎn)物的溶劑有a. dmso b. peg c. sds d. nbt e.酸化異內(nèi)醇8. 檢測膜型細胞因了受體的方法是a.熒光抗體技術(shù)b. elisa c.斑點-elisad.流式細胞術(shù)e. ria9. 檢測細胞因子的主要方法包括a.用elisa檢測細胞因了及其受體

6、b.用依賴性細胞株檢測相應(yīng)細胞因子c.用分子雜交技術(shù)檢測細胞因了 mrna的表達 d.用pcr技術(shù)檢測細胞因子e. 用生物活性檢測法檢測細胞因了活性水平10. 檢測可溶性細胞因了受體的方法冇：a.熒光抗體技術(shù) b. elisa c.斑點-elisad.流式細胞術(shù)e. r1a11. el前細胞內(nèi)細胞因子的檢測方法有a. ria b.免疫熒光染色技術(shù)c.流式細胞術(shù) d. elisa e.細胞病變抑制法二、填空題1. 測定細胞因子的方法可分為、和，其中檢測細胞因了的生物活性，其結(jié)果以表示。2. 免疫學檢測法檢測細胞因子的，其結(jié)果以表示。3. 細胞生物活性測定包括、和等方法。4. 檢測il-2的生物活

7、性采用法，檢測干擾素的活性采用法，檢測腫瘤壞死因了活性采用法。5. 檢測細胞增殖程度常采用的試驗方法有和。6. 在mtt比色法中，代謝產(chǎn)物為紫色結(jié)晶顆粒，該產(chǎn)物經(jīng)或溶解顯色，測定波長為nm, 參考波長為nm。7. 用于測定il-2的細胞株為,用于測定tnf的細胞株為或。8. 用于測定人干擾素的細胞株為,攻擊病璉為。9. 測定il-8生物活性的方法是。10. 用免疫化學法測定細胞因子含量常采用的方法有、和。三、名詞解釋1. 依賴細胞株（dependence cell strain）2. 細胞因子活性單位（cytokine activity unit）四、問答題1. 細胞因子檢測的臨床意義及其注意

8、的問題。2. 生物學測定法測定細胞因子原理及其優(yōu)缺點。3. 生物學測定法測定細胞因了的技術(shù)類型及其應(yīng)用。4. 免疫化學法測定細胞因了原理及其優(yōu)缺點。第三部分參考答案與題解一、選擇題（一）單項選擇題（a型題）1. d 2. d 3. a 4. c 5. c 6. d 7. e 8. a 9. d 10. d 11. b（二）多項選擇題（x型題）1. bde 2. ace 3. ad 4. acd 5. abe 6. abd 7. ae 8. ad9. abcde 10. bce 11. bc二、填空題1. 生物學測定法、免疫化學測定法、分子生物學測定法、生物學測定法、活性單位/毫升（u/ml）。

9、2. 蛋白含暈、皮克/毫升（pg/ml）或納克/毫升（ng/ml）o3. 細胞増殖法、靶細胞殺傷法、細胞病變抑制法、趨化活性測定法。4. 細胞増殖法、細胞病變抑制法、靶細胞殺傷法。5. 3h-tdr摻入法、mtt比色法。6. 酸化界內(nèi)醇、二甲基亞佩、570 nm、630 nm。7. ctll、l929、weh1164.138. wish、vs vo9. boyden小室法。10. 雙抗體夾心elisa、放射免疫分析、酶聯(lián)免疫斑點試驗（elispot）。三、名詞解釋1. 依賴細胞株：是指人們?yōu)闄z測某一種細胞因了而篩選的，該細胞株的分裂増殖只依賴于某一種細胞 因子的存在，并在一定濃度范圍內(nèi)與細胞増

10、殖程度呈正相關(guān)。若培養(yǎng)基中缺乏這種細胞因子，依賴株則不 能存活。2. 細胞因了活性單位：細胞因了使相應(yīng)細胞達到最人程度增殖的50%時所需細胞因了的含量稱為細 胞因子的一個活性單位。四、問答題1. 細胞因子是機體內(nèi)十分巫要的免疫分子。在棊礎(chǔ)免疫學研究中，檢測細胞因子水平用于探討細胞 因子水平與免疫細胞表熨、分化、增殖以及功能的相互關(guān)系及細胞因子與某些生理病理過程的相互關(guān)系。 在臨床醫(yī)學的研究中，當發(fā)生某些疾病時，體內(nèi)細胞因子及受體表達可發(fā)生界常，這些異常與機體免疫功 能界常或發(fā)生病理損傷有關(guān)。兇此，檢測患者細胞因子及其受體表達水平有助丁對臨床某些疾病的診斷、 治療和預(yù)后的判斷。另一方面，細胞因子

11、基因工程產(chǎn)品的問世，促進了重組細胞因子的臨床應(yīng)用，這也要 求對患者體內(nèi)相應(yīng)細胞因子水平進行判斷?？倆,檢測細胞因子及其受體具冇重要的應(yīng)用價值。由于細胞因子多以自分泌和旁分泌的方式發(fā)揮作用，很少進入到血液循壞。因此對丁資白水平的檢測 來說，檢測局部體液屮細胞因子較測定血清或血漿屮細胞因子更具有實際意義。另一方面，山于細胞因子 網(wǎng)絡(luò)的特性，細胞因了之間是相互關(guān)聯(lián)的，故單獨檢測一種細胞因了及其受體并不能提供更多信息，常需 耍多種細胞因子的聯(lián)合檢測。2. 細胞因了生物學檢測法是根據(jù)某些細胞因子特定的生物學功能設(shè)訃的，因此該方法是測定細胞因 子生物活性水平的方袪。其原理是應(yīng)用一定的拆示系統(tǒng)（如細胞）與己

12、知活性的細胞因了標準品或待測標 木相互作用，最終以指示系統(tǒng)的變化（如細胞増殖、死亡或分泌蛋白等）來顯示細胞因了的功能，將待檢 標木與標準品進行比較最終得知待檢標木的細胞因子水平。生物學檢測方法測定的是細胞因子的生物學活性，能真實反映細胞因子在體內(nèi)發(fā)生作用的情況，并仕 具有較高的靈敏度，不需商品化試劑盒，成木低適介基礎(chǔ)研究工作。但是，山于不同細胞因子間的生物學 作用貝有重疊性，導(dǎo)致該方法的特異性不強。應(yīng)用依賴性較強的細胞株或使用中和性單克隆抗體封閉干擾 物質(zhì)的作用，可提高實驗方法的特異性。此外，生物學方法操作繁瑣，需進彳亍細胞培養(yǎng)，實驗周期長，影 響因索較多，重復(fù)性差。3. 根據(jù)指示系統(tǒng)的農(nóng)現(xiàn)不同，生物學檢測的方法可分為細胞增殖法、靶細胞殺傷或抑制法、細胞病 變抑制法、集落形成測定法、趨化作用測定法和誘導(dǎo)產(chǎn)物測定法等。細胞增殖法是域常用的細胞因子生物 學活性測定方法，可用-f il-2. 1l-6等多種白細胞介索的測定。靶細胞殺傷法用于腫瘤壞死因子的測定， 細胞病變抑制法用于干擾素測定，集落形成測定法用于集落刺激因子測定，趨化作用測定法川于趨化因子 測定。4. 免疫學檢測法是建立在抗原抗體反應(yīng)基礎(chǔ)上的免疫化學分析技術(shù)。細胞因子的化學本質(zhì)是哥白質(zhì) 或多肽，因此很容易制備相