組織病理切片的制作過(guò)程

1、組織病理切片的制作過(guò)程1取材 組織取材的方法是制作切片的一個(gè)重要程序，根據(jù)教學(xué)、科研及外檢的具體要求取自人體（外科手術(shù)切除標(biāo)本、活檢標(biāo)本、尸檢標(biāo)本）或動(dòng)物，并確定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)的基本理論知識(shí)，還要掌握實(shí)際操作技術(shù)，每個(gè)組織器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取組織作為制片材料，不然，無(wú)法達(dá)到教學(xué)、科研和臨床診斷的目的，具體要求如下：(1) 材料新鮮： 取材組織愈新鮮愈好， 人體組織一般在離體后， 動(dòng)物組織在處死后迅速固定，以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。(2) 組織塊的大小：所取組織塊較理想的體積為 2.0cm×2.0cm×0.3cm，

2、以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內(nèi)部，但根據(jù)制片材料和目的不同，組織塊的較理想體積也不同，如制作病理外檢、科研切片，其組織塊可以薄取 0.2cm 即可，這樣可以縮短固定脫水透明的時(shí)間，若制作教學(xué)切片厚取 0.5cm，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。(3) 勿擠壓組織塊 : 切取組織塊用的刀剪要鋒利，切割時(shí)不可來(lái)回銼動(dòng)。夾取組織時(shí)切勿過(guò)緊，以免因擠壓而使組織、細(xì)胞變形。(4) 規(guī)范取材部位 : 要準(zhǔn)確地按解剖部位取材， 病理標(biāo)本取材按照各病變部位、性質(zhì)的不同，根據(jù)要求規(guī)范化取材。(5) 選好組織塊的切面 : 根據(jù)各器官的組織結(jié)構(gòu)，決定其切面的走向?？v切或橫切往往是顯示組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，如

3、長(zhǎng)管狀器官以橫切為好。(6) 保持材料的清潔 : 組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用水沖洗干凈后再放入固定液中。(7) 保持組織的原有形態(tài) : 新鮮組織固定后，或多或少會(huì)產(chǎn)生收縮現(xiàn)象，有時(shí)甚至完全變形。為此可將組織展平，以盡可能維持原形。2固定(1) 小塊組織固定法： 這是最常用的方法， 從人體或動(dòng)物體取下的小塊組織，須立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定， 通常，標(biāo)本與固定液的比例為 1:4 20，但組織塊不宜過(guò)大過(guò)厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為 2.0cm×2.0cm×0.3cm。(2) 注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過(guò)大或固定液極難滲入

4、內(nèi)部，或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物體進(jìn)行固定。這時(shí)宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織和全身，從而得到充分的固定。(3) 蒸汽固定法： 比較小而厚的標(biāo)本， 可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。 如血液涂片，則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。最常用的固定液有10%甲醛固定液和 95%乙醇固定液。3脫水透明 標(biāo)本經(jīng)過(guò)固定和沖洗后， 組織中含有較多的水分， 必須將組織塊內(nèi)的水分置換出來(lái)，這一過(guò)程叫做脫水。無(wú)論是用石蠟切片，還是用火棉膠切片，都必須除去組織中所含水分，因含水組織與石蠟、火棉膠等包埋材料不相容，常用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。脫水的步驟是： 80%、

5、90%、95%、100%各種濃度乙醇2 小時(shí)，此過(guò)程可用脫水機(jī)自控完成。丙酮也是一種脫水能力很強(qiáng)的脫水劑，但因其脫水能力很強(qiáng)，對(duì)組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學(xué)切片時(shí)一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經(jīng)過(guò)一個(gè)能溶于石蠟的溶劑替代過(guò)程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、三氯甲烷、水楊酸甲酯等。4浸蠟、包埋(1) 使石蠟浸入組織中，取代組織中含有的透明劑。(2) 包埋：將浸蠟后的組織置于融化的固體石蠟中， 石蠟?zāi)毯螅?組織即被包在其中，稱蠟塊，此過(guò)程稱為包埋。5切片和貼片(1) 修整蠟塊：可視其組織的大小，在組織邊緣約 0.2cm 處，切去余蠟部分，否則易造成組織皺縮不平。(2) 準(zhǔn)

6、備好切片用具：切片刀、毛筆、眼科鑷子（彎）、漂烘溫控儀(3) 安裝蠟塊：將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。(4) 安裝切片刀：將切片刀安裝在切片機(jī)的刀臺(tái)上， 把刀臺(tái)上的緊固螺絲旋緊，使切片時(shí)不產(chǎn)生振動(dòng)，能保持一定的切片厚度。(5) 切片的厚度：切片機(jī)的厚度調(diào)節(jié)器上刻有 050m或 025m，可任意選擇其厚度，石蠟切片的厚度一般在 46m。(6) 切片(7) 鋪片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在 4045的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。(8) 貼片、烘片：待切片在恒溫水面上充分展平后， 將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余水，置入 6065恒溫箱內(nèi)或切片漂烘溫控儀的烘

7、箱內(nèi)烤片 1530 分鐘，脫去溶化組織間隙的石蠟。6染色和封片 常用的染色方法是蘇木素- 伊紅（Hematoxylin-Eosin）染色法，簡(jiǎn)稱染色法。這種方法對(duì)任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料, 可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色，如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等；伊紅是一種酸性染料，可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色，如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在染色的切片中均呈紅色。染色程序如下 : 脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固常規(guī)蘇木素染色中的對(duì)比染色是用伊紅, 近年來(lái)在英、美國(guó)家的一些實(shí)驗(yàn)室則采用焰紅（ phloxine ）, 此外也有用桔黃G（OrangeG）、比布里希

8、猩紅(Biebrich scarlet)、波爾多紅 (Bordeaux red)等作為對(duì)比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。1.取材取材的好壞，直接影響切片的質(zhì)量。醫(yī)生在取材時(shí)，首先要有一把鋒利的取材刀，在切割組織時(shí)要避免取材刀來(lái)回拖拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般厚度以 0.3cm 為適，較容易發(fā)脆的組織如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結(jié)、大塊癌組織等可適當(dāng)厚一點(diǎn)，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些；淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠，并盡量剔除周?chē)闹窘M織。在取材中還應(yīng)十分注意組織內(nèi)是否有縫線或骨組織，如碰到不可避免的鈣化組織，應(yīng)與技術(shù)

9、室講明，在切取纖維組織、肌肉、組織、胃腸道時(shí)，應(yīng)注意纖維及肌肉的走向，取材時(shí)盡可能按與纖維平行走向切取為佳。2.固定固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個(gè)制片過(guò)程中無(wú)法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過(guò)程。固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止了細(xì)胞內(nèi)的酶對(duì)蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各和成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加組織韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需及時(shí)固定，固定液的量應(yīng)為組織的5 倍。固

10、定的關(guān)鍵主要與固定的及時(shí)性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時(shí)間有關(guān)。最常用的固定液為10福爾馬林。筆者認(rèn)為，10福爾馬林由于受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時(shí)的揮發(fā)和取材時(shí)帶入的水分影響，濃度被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對(duì)組織的穿透性，形成周?chē)潭ê枚醒牍潭ú坏降默F(xiàn)象。通過(guò)實(shí)踐，本人認(rèn)為以酸性1215的福爾馬林最佳。 大標(biāo)本（2cm厚）一般需要 612 個(gè)小時(shí)，小標(biāo)本一般需要 36 個(gè)小時(shí)；當(dāng)室溫低 18 時(shí)，可在 37以下的溫箱內(nèi)加溫 4 6 個(gè)小時(shí)。由于 HE染色最佳著色 PH為 , 中性福爾馬林對(duì)蘇木素染色有一定影響 , 細(xì)胞核容易發(fā)灰 , 核染色質(zhì)不佳。所以 ,

11、盡管中性福爾馬林對(duì)抗原有很好的保存作用，但酸性福爾馬林對(duì)絕大多數(shù)抗原來(lái)說(shuō)也有很好的保存作用，所以在沒(méi)有特別處理的情況下常規(guī)HE用 1215酸性福爾馬林也可以 （每 100 毫升 1215福爾馬林液內(nèi)加 5 毫升冰醋酸）。骨髓、結(jié)締組織固定以 Bouin 液為佳，經(jīng) Bouin 液固定后的組織必須流水沖洗 4 小時(shí)以上。有條件的單位可根據(jù)不同要求選用二種或二種以上的固定液；少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫(kù)，以便適應(yīng)各種特殊的處理要求。3. 水洗固定后水洗（ 1020 分鐘），通常被很多人所忽視，而水洗不徹底，容易造成脫片和染色不鮮艷。對(duì)需做免疫組織化學(xué)的組織，更不應(yīng)當(dāng)忽視。福爾馬林不利于組織塊內(nèi)抗原的

12、保存4 .脫水和透明所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來(lái)，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過(guò)程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過(guò)度（原因是組織在純酒精內(nèi)時(shí)間過(guò)久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過(guò) 35）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過(guò)多等等。一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實(shí)低濃度的酒精具有強(qiáng)大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時(shí)間就可完成，如果這時(shí)不縮短純酒精的時(shí)

13、間，便會(huì)引起組織發(fā)脆；如果脫水時(shí)加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標(biāo)記。為了使石蠟浸入到組織塊內(nèi)，必須經(jīng)過(guò)一種既能與脫水劑混合，又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì)，這個(gè)過(guò)程稱透明。目前最好的透明劑是二甲苯。很多人認(rèn)為二甲苯極容易使組織發(fā)脆，這個(gè)觀點(diǎn)很片面，在常溫下，如果不是時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（超過(guò) 4 小時(shí)以上）二甲苯并不會(huì)引起組織過(guò)份發(fā)脆，相反會(huì)使某些組織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織：比如子宮肌瘤等相當(dāng)好切），但是當(dāng)二甲苯溫度超過(guò) 35以后，極易引起組織發(fā)脆。所以本人認(rèn)為， 大小標(biāo)本最好分開(kāi)脫水， 一般情況下，大標(biāo)本脫水時(shí)間 （室溫 18）以 80酒精 2 小時(shí)、 95酒精（ 2 道）各 1 個(gè)半小時(shí)

14、至 2 小時(shí)、純酒精（ 3 道）各 1 個(gè)半小時(shí)至 2 小時(shí)，二甲苯（2 道）各 30-60 分鐘為宜；小標(biāo)本脫水時(shí)間應(yīng)相應(yīng)縮短。脫水時(shí)間長(zhǎng)短，與室溫高低有密切的相關(guān)。我們?cè)趯?shí)踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在 1215時(shí)，可作為一個(gè)臨界溫度范圍。當(dāng)室溫高于此溫度范圍時(shí)，組織容易脫水，可適當(dāng)縮短脫水時(shí)間；而室溫低于該溫度范圍時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)脫水時(shí)間 （如能保證在一個(gè)恒定的溫度下最佳） 。更換試劑，應(yīng)以量為基礎(chǔ)，定量更換，不能等到切片不好時(shí)再去更換。否則，至少會(huì)有 23 批組織切片不好。 根據(jù)我科經(jīng)驗(yàn)，如試劑用量為500ml，每 500 個(gè)蠟塊更換一次為宜。5. 浸蠟組織透明后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過(guò)程稱為浸蠟。用

15、其他浸透劑（如火棉膠、明膠等）滲入組織內(nèi)部的過(guò)程可稱為浸透或透入。浸蠟溫度過(guò)高（超過(guò) 60），在蠟內(nèi)加入二甲苯蠟或由于透明時(shí)帶進(jìn)的二甲苯過(guò)多，都會(huì)導(dǎo)致組織發(fā)硬，還會(huì)使組織內(nèi)的抗原受到破壞；所以作者主張浸蠟用的石蠟熔點(diǎn)在 56（三道），第一道：石蠟 30 分鐘；第二道：石蠟 90 分鐘；第三道：石蠟， 90 分鐘。浸蠟溫度控制在 5658左右。（第一道也可用硬脂酸石蠟 1：3 混合浸蠟，不僅可軟化組織， 特別適用于比較韌、 硬的組織，而且由于硬脂酸是弱酸性的，對(duì)細(xì)胞核有媒染作用，核漿比鮮明，但容易脫片；同時(shí)對(duì)疏松組織容易散片） 。有條件的可以每天打開(kāi)第一道石蠟的蓋子，讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟

16、如有雜質(zhì)盡可能過(guò)濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受損，或切片破碎和劃痕增多。6. 包埋用包埋劑來(lái)支持組織的過(guò)程稱包埋。最常用的是石蠟包埋法。包埋的關(guān)鍵一是平整，二是方位。要求在包埋時(shí)，應(yīng)采用鑷子輕壓組織塊拱起部份，使之平貼于底部，通常采用組織的最大面包埋。囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。小塊多顆組織，應(yīng)盡量放在一起，并保證在一個(gè)平面上。修去兩邊的余蠟（所謂的兩邊，指切片時(shí)與切片刀垂直的兩側(cè)） 。包埋時(shí)還應(yīng)注意有無(wú)縫線，紙絮，如有一定要去除。胃黏膜活檢標(biāo)本，不能按一般的規(guī)律取最大包埋面，應(yīng)采取窄面豎起包埋。包埋的蠟更應(yīng)過(guò)濾，留有雜質(zhì)的石蠟，容易造成污染或刀口受損。蠟的熔點(diǎn)應(yīng)在 5658之間選擇，不提

17、倡在冬天使用軟蠟。因?yàn)橛密浵灠竦南瀴K，到了夏天，會(huì)粘在一起，不利于資料的保存，而且即使在冬天，用硬蠟包埋的蠟塊也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。7. 磨刀要想切好一張切片，首先要有一把鋒利的切片刀。磨刀是從事切片技術(shù)人員的一項(xiàng)最基本技術(shù)，刀磨的好壞，直接關(guān)系到切片的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同，但都要求用力均勻，使刀口和磨刀石全面接觸，兩手的用力點(diǎn)應(yīng)在刀口上，而不是在刀背上。切片刀應(yīng)用一次磨一次，每次僅需1015 分鐘，過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的磨刀，容易把已經(jīng)磨出的鋒刃磨掉，檢查切片刀是否鋒利，用手試摸刀口的方法并不十分科學(xué)，不僅不能證明切片刀是否真正鋒利，而且容易損害刀口，最簡(jiǎn)單的辦法是每次磨好后拿一個(gè)蠟塊試切一

18、下。每次磨好刀后，應(yīng)將磨刀石用蓋子蓋好，以防灰塵掉在磨刀石上，用有灰的磨刀石磨刀，會(huì)使切片刀產(chǎn)生許多細(xì)小的缺口?，F(xiàn)在很多單位都買(mǎi)了磨刀機(jī)，磨刀機(jī)用來(lái)開(kāi)刀鋒和磨缺口的確不錯(cuò)，但由于磨刀的角度和時(shí)間不易精確掌握，故效果并不理想。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，真正的鋒刃很難用機(jī)器磨出來(lái)。一次性刀片在很大程度上解決了這個(gè)問(wèn)題。如用一次性刀片，必須及時(shí)更換刀口。一個(gè)刀口切小標(biāo)本不應(yīng)超過(guò)2025 只蠟塊，切大標(biāo)本不應(yīng)超過(guò) 1015 只蠟塊。8. 切片切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在 0100 微米左右，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進(jìn)行細(xì)切。細(xì)切至組織塊表面均勻一致，無(wú)白點(diǎn)后，再把

19、切的蠟片放入溫水中。切片時(shí)要求用力均勻、柔和，搖速不易過(guò)快或過(guò)慢。過(guò)快會(huì)導(dǎo)致切片厚薄不均，機(jī)器磨損；過(guò)慢會(huì)使切片增厚。切片厚度一般為 35 微米。切片的要求是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應(yīng)與組織塊一致，切片的不完整，常會(huì)將重要病變遺漏，導(dǎo)致誤診、漏診。在切片放蠟塊時(shí)，應(yīng)注意組織包埋的方向，組織的層次，纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行，較難切的部分應(yīng)放在上面，如皮膚的表皮，腫塊的包膜，胃腸道的漿膜等，這樣可以減少組織的斷裂現(xiàn)象。操作切片機(jī)時(shí)應(yīng)用力均勻，避免用力過(guò)重。對(duì)脫鈣組織、骨髓，以及已知的鈣化組織，應(yīng)選用固定的刀口，以減少其他部位出現(xiàn)缺口的可能性。在使用毛筆展片時(shí)要防止筆絲進(jìn)入刀口，

20、因?yàn)槊壳械揭桓P絲，就會(huì)增加一個(gè)缺口。切片厚度一般為46 微米，有人認(rèn)為：只要切片機(jī)刻度標(biāo)著幾個(gè)微米，切出來(lái)的片子就是幾個(gè)微米。其實(shí)不然，當(dāng)切片刀不鋒利，或切片時(shí)速度不勻，或切的較慢時(shí)，切的片子都會(huì)變厚，只有在切片刀十分鋒利、切片勻速的情況下，才能真正保證其厚度。下面是切片時(shí)碰到的問(wèn)題的原因及可能處理的方法：(1) 組織發(fā)脆：一般是脫水、透明、浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)，在切片時(shí)，邊切邊用嘴向蠟片吹氣，可能會(huì)好些。 (2) 切片卷起，可能是刀不鋒利，或刀鋒在另一面，或刀角度過(guò)大，切片太厚等等。 (3) 蠟片彎曲：可能是刀鋒不均，切片刀未磨直，切片刀與蠟塊不平行。 (4) 透

21、明、浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān) (5) 厚薄不均：可能是刀、刀座及蠟塊未夾緊，組織太硬，或切片機(jī)主軸太向前，或切片機(jī)已磨損。 (6) 切片出現(xiàn)裂痕：可能是刀有缺口， 石蠟內(nèi)有雜質(zhì)， 組織內(nèi)有鈣化、 骨片或有線結(jié) , 也可能會(huì)有棉紙纖維等。 (7) 切片不連片，切不下片，切片很厚，或者切片后蠟塊發(fā)白，內(nèi)陷：組織脫水不佳。補(bǔ)救辦法：可先將蠟塊溶解，取出組織，放入加熱水浴的丙酮內(nèi)（ 80），3060 分鐘，再進(jìn)行透明浸蠟包埋切片，也許會(huì)好一點(diǎn)。9. 展片與撈片展片水溫應(yīng)在 42至 47之間，這主要和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān), 水溫過(guò)高，會(huì)引起組織細(xì)胞散開(kāi)，水溫過(guò)低，切片皺摺無(wú)法攤平。包埋

22、蠟中如有二甲苯，也會(huì)造成石蠟溶解現(xiàn)象。而用一次性刀片切的片子，一碰到熱水，片子上的皺摺就無(wú)法再展開(kāi)，這有二個(gè)方法可以解決：第一、可以在切片時(shí)邊切邊向蠟片吹氣，這樣的片子就會(huì)非常平整，放到熱水里就會(huì)自然展開(kāi)，比較方便快捷，但這樣的片子會(huì)略微厚一點(diǎn)；第二、在切完片子后，先把切片放在 30%酒精水溶液中， 讓酒精的張力自動(dòng)把皺摺展開(kāi)，然后再將切片移到熱水，這樣的片子會(huì)較薄; 如酒精濃度過(guò)高，容易引起切片破碎，出現(xiàn)裂隙，像脂肪之類細(xì)胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會(huì)散開(kāi)，故不能用此法。最后撈片時(shí)玻片要干凈，要選擇那些完整、無(wú)皺摺的切片，粘貼于玻片中 1/3 和下 1/3 的中間。10. 烤片和脫蠟烤片

23、，一般在60的溫箱內(nèi)烤片 1 小時(shí)左右，溫度過(guò)高，會(huì)引起切片細(xì)胞收縮；時(shí)間太短 ( 少于 20 分鐘 ) ，容易造成脫片。脫蠟也相當(dāng)重要，如果脫蠟不干凈，切片不易著色或著色不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換，一般用3 道二甲苯，每500ml 液體，處理 500 張切片后更換一次為宜。當(dāng)室溫低于 18時(shí)，必須將切片從溫箱拿出后立即放入二甲苯中脫蠟，或?qū)⒍妆椒湃霚叵鋬?nèi)預(yù)熱（37左右）脫蠟，最高不得超過(guò)60。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精洗去二甲苯，至水。11. 染色蘇木素染色時(shí)間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為5 15 分鐘。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來(lái)水藍(lán)化， 并充分水洗（流水沖洗 5 分鐘以上），以防鹽酸殘留導(dǎo)致切