一般毒性作用試驗教材

1、12/8/20211 一般毒性作用試驗一般毒性作用試驗12/8/202123R原則：Replacement Reduction Refinement RpentlecameRnifoitcudRtnemen填填詞詞游游戲戲12/8/20213一般毒性毒性一般毒性毒性& 1 急性毒性作用急性毒性作用& 2 蓄積毒性蓄積毒性& 3 亞慢性和慢性毒性作用亞慢性和慢性毒性作用 & 4 局部毒性作用局部毒性作用12/8/202141 急性毒性作用急性毒性作用一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗三、急性毒性分級三、

2、急性毒性分級12/8/20215一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指機體是指機體( (人或試驗人或試驗動物動物) )一次接觸或一次接觸或2424小時內多次接觸小時內多次接觸化學物后在化學物后在短期短期( (最長到最長到1414天天) )內所發(fā)生的內所發(fā)生的毒性效應毒性效應，包括，包括一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應。效應。 12/8/20216一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的目的目的測試和求出化學毒物

3、對一種或幾種試驗動物的致死量測試和求出化學毒物對一種或幾種試驗動物的致死量( (以以LDLD5050表示表示) )以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用強度。強度。并通過觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作并通過觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作用性質、可能的靶器官和致死原因，提供化學毒物的急性用性質、可能的靶器官和致死原因，提供化學毒物的急性中毒資料、初步評價對人體產(chǎn)生損害的危險性。中毒資料、初步評價對人體產(chǎn)生損害的危險性。探求化學毒物急性毒性的劑量探求化學毒物急性毒性的劑量反應關系與中毒特征。反應關系與中毒特征。為亞慢性、慢性毒性作用試驗

4、的染毒劑量設計提供參考為亞慢性、慢性毒性作用試驗的染毒劑量設計提供參考依據(jù)。依據(jù)。研究化學毒物急性中毒的預防和急救治療措施。研究化學毒物急性中毒的預防和急救治療措施。為毒理學機制研究提供線索為毒理學機制研究提供線索 。 12/8/20217一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：LD50/LC50Zac （LD50/Limac）Zac為半數(shù)致死劑量與急性閾劑量的比值 LD84/LD16(或或LC84LC16) 劑量劑量反應曲線斜率反應曲線斜率 12/8/20218二、急性毒性試驗的主要步驟二、急性毒性試驗的主要步驟

5、健康動物的選擇性別辨認動物稱重、編號和分組劑量設置受試物的配制灌胃中毒體征和動物死亡情況觀察LD50的計算12/8/20219二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗( (一一) )試驗動物試驗動物 原則原則 ：急性毒性試驗要求選擇對化學毒物的代謝和毒效應表急性毒性試驗要求選擇對化學毒物的代謝和毒效應表現(xiàn)與人的反應盡可能一致的試驗動物?，F(xiàn)與人的反應盡可能一致的試驗動物。- -相似性原則相似性原則動物易于獲得動物易于獲得- -可獲得性原則可獲得性原則品系純化品系純化- -重復性和均一性原則重復性和均一性原則價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。- -相容或相匹配原則相容或相匹配原則12/8

6、/202110二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗1 1試驗動物的種屬和品系試驗動物的種屬和品系最好用兩種種屬的動物最好用兩種種屬的動物嚙齒類嚙齒類: :小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非嚙齒類：非嚙齒類：狗或猴狗或猴。急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，優(yōu)先考慮白色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急優(yōu)先考慮白色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急性毒性試驗則優(yōu)先考慮大鼠。性毒性試驗則優(yōu)先考慮大鼠。12/8/202111二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗試驗動物的年齡和體重：試驗動物的年齡和體重：急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇剛成年

7、急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇剛成年動物進行試驗，而且須是未曾交配和受孕的動物。例動物進行試驗，而且須是未曾交配和受孕的動物。例如：大鼠如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批試驗動物體重同一批試驗動物體重變異范圍不應超過該批動物平均體重的變異范圍不應超過該批動物平均體重的2020。 12/8/202112三、急性毒性試驗三、急性毒性試驗3.3.試驗動物的性別：試驗動物的性別：急性毒性試驗的主要內容是求急性毒性試驗的主要內容是求LDLD505

8、0，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性試驗對動物性別要求為外，一般急性毒性試驗對動物性別要求為雌雄各雌雄各半半。如果在預試驗時發(fā)現(xiàn)化學毒物。如果在預試驗時發(fā)現(xiàn)化學毒物( (如農(nóng)藥如農(nóng)藥) )對雌、對雌、雄動物毒效應的敏感性有明顯差異，則應單獨分雄動物毒效應的敏感性有明顯差異，則應單獨分別求出雌性與雄性動物各自的別求出雌性與雄性動物各自的LDLD5050。如果試驗是。如果試驗是為致畸試驗作準備，也可僅作雌性動物的為致畸試驗作準備，也可僅作雌性動物的LDLD5050測測試。試。 12/8/202113二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗4.動物數(shù)量與隨機分組：動物數(shù)量與隨機分組：大、小鼠等小動物大

9、、小鼠等小動物 每組每組10只只狗等大動物狗等大動物 每組每組6只只分組原則分組原則隨機化原則隨機化原則5.禁食：禁食：經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜進食；染毒后禁食隔夜進食；染毒后禁食4h大動物大動物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后繼續(xù)禁食染毒后繼續(xù)禁食24h，但在禁食時要保障飲水。，但在禁食時要保障飲水。6.實驗動物的預檢：實驗動物的預檢：選擇健康動物選擇健康動物12周的檢疫期周的檢疫期12/8/202114二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗 （二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境（二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境恒定的溫度：恒定的溫度：2

10、23濕度：濕度：3070%照度：晝夜各半照度：晝夜各半飼料合格、飲水合格、墊料合格飼料合格、飲水合格、墊料合格12/8/202115二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（三）染毒途徑的選擇（三）染毒途徑的選擇: 染毒途徑（染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：）的選擇需考慮：1、模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實際接觸受試、模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實際接觸受試物的途徑和方式物的途徑和方式； 2、有利于不同化學物之間急性毒性大小的比、有利于不同化學物之間急性毒性大小的比較較； 3、受試物的性質和用途；、受試物的性質和用途； 4、 各種受試物毒性評價程序的要求等。各種受試物毒性評價程序的要求

11、等。 最常用的染毒途徑為最常用的染毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。注射途徑。 12/8/202116二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗經(jīng)口經(jīng)口( (胃腸道胃腸道) )接觸接觸 : 灌胃灌胃: :小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.5ml/10g0.5ml/10g 大鼠一次灌胃體積不超過大鼠一次灌胃體積不超過5ml/5ml/只只 家兔不超過家兔不超過10ml/2kg10ml/2kg 狗不超過狗不超過50ml/10kg50ml/10kg 吞咽膠囊吞咽膠囊: : 經(jīng)呼吸道接觸經(jīng)呼吸道接觸 : 靜式吸入靜式吸入 動式吸入動式吸入 經(jīng)皮膚接

12、觸經(jīng)皮膚接觸 :注射途徑接觸注射途徑接觸: : 12/8/202117二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組: 1 1查閱文獻查閱文獻了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、熔點、沸點、密度、閃點、揮發(fā)度、蒸氣壓、水態(tài)、熔點、沸點、密度、閃點、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號及純度，雜質成溶性和脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號及純度，雜質成分與含量等。分與含量等。確定使用哪一種計算方法求確定使用哪一種計算方法求LDLD5050，然后再設計劑量，然后再設計劑量分組。分組。LDLD5050的計算方法常

13、用寇氏法、概率單位法、霍的計算方法常用寇氏法、概率單位法、霍思法等。思法等。找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的接觸途徑所測得的LDLD5050(LC(LC5050) )值作為受試化學物的預期值作為受試化學物的預期毒性中值。毒性中值。 12/8/202118二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組:2 2預試驗預試驗 設定以此預期值作為待測化學物的中間劑量組，并設定以此預期值作為待測化學物的中間劑量組，并

14、在該劑量的上下各設計在該劑量的上下各設計l l一一2 2個劑量組作為預試驗劑量。個劑量組作為預試驗劑量。根據(jù)確定的劑量組進行染毒。根據(jù)確定的劑量組進行染毒。根據(jù)預試驗的死亡資料確定組距。根據(jù)預試驗的死亡資料確定組距。 12/8/202119二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組:3 3正式試驗正式試驗; ; 一般來說、根據(jù)試驗設計所選用的一般來說、根據(jù)試驗設計所選用的LDLD5050計算方法來確計算方法來確定組數(shù)。定組數(shù)。 12/8/202120二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（五）試驗周期與毒效應觀察五）試驗周期與毒效應觀察1.中毒癥狀中毒癥狀12/8/20

15、2121二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（五）試驗周期與毒效應觀察（五）試驗周期與毒效應觀察: 2.體重體重在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，應同時觀察體重在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，應同時觀察體重的變化。的變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化。體重體重改變的原因很多，若化學毒物刺激或損傷消化道可出改變的原因很多，若化學毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若化學毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也化學毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也會減輕。如果化學毒物影響水的攝取

16、或腎功能急性損會減輕。如果化學毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。所以，對存活動物尤傷，也可能在體重上反映出來。所以，對存活動物尤其是對低于其是對低于LDLD5050劑量組的存活動物應在觀察期劑量組的存活動物應在觀察期1414天天內稱量其體重的變化以便了解受試物引起毒效應的內稱量其體重的變化以便了解受試物引起毒效應的持續(xù)時間。持續(xù)時間。 12/8/202122二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（五）試驗周期與毒效應觀察（五）試驗周期與毒效應觀察:3.3.病理檢查及其他指標病理檢查及其他指標: :急性毒性試驗中，對死亡的動物均應及時進行大體解急性毒性試驗中，對死亡的動物均應及

17、時進行大體解剖和病理組織學檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理剖和病理組織學檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無充血、變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進行取材做出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進行取材做組織病理學檢查。對存活動物在觀察期結束時進行大組織病理學檢查。對存活動物在觀察期結束時進行大體病理檢查必要時做組織病理學檢查。根據(jù)試驗需體病理檢查必要時做組織病理學檢查。根據(jù)試驗需要可進一步擴大觀察項目如體溫、心電圖、腦電圖要可進一步擴大觀察項目如體溫、心電圖、腦電圖或進行某些生化指標測定等?；蜻M行某些生化指標

18、測定等。12/8/202123二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（五）試驗周期與毒效應觀察五）試驗周期與毒效應觀察4.死亡和死亡時間死亡和死亡時間重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，可為深分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，可為深人研究化學物的毒作用機制提供參考。人研究化學物的毒作用機制提供參考。 12/8/202124LD50的計算方法的計算方法改進寇氏法改進寇氏法霍恩法序貫法序貫法Bliss法12/8/202125改進寇氏

19、法改進寇氏法是利用計量對數(shù)與死亡率呈S型曲線而設計的方法，又稱平均致死量法。本法要求每個染毒劑量組動物數(shù)要相同動物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等組距呈等比級數(shù)比級數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率80%。12/8/202126計算公式如下：M=Xk-i(p-0.5)Sm=i(pq/n)1/2M:lg LD50 i：相鄰兩劑量組之對數(shù)差值Xk：最大劑量的對數(shù)值 ；q：存活率p：各組死亡率之和; n:每組動物數(shù)12/8/202127組別 劑量對數(shù) 動物數(shù) 死亡數(shù) 1 1.1761 10 02 1.2561 10 23 1.3361 10 54 1.4161 10 75 1.4961 10 912/

20、8/202128M=Xk-i(p-0.5)=1.4961-0.08（2.3-0.5）Sm=i(pq/n)1/2=0.08（0.16/10+0.25/10+0.21/10+0.09/10）1/212/8/202129霍恩法霍恩法利用劑量對數(shù)與死亡率的轉換數(shù)呈直線關系而設計的方法，又稱平均移動法或劑量遞增法。該法使用動物數(shù)少，可直接查表求出LD50 。該法推薦使用4個染毒劑量，要求每組動物數(shù)相等，一般用4-5只動物，且劑量組按等比級數(shù)排列。12/8/202130序貫法序貫法又稱平均數(shù)法、階梯法或上-下法，先以一個劑量進行實驗，若動物死亡，則以下一個較小劑量試探；若動物存活，則以較大劑量試探，依次類

21、推，最終求出LD50。12/8/202131LD50 = (x f)/nn: 使用的動物總數(shù)；X：每個劑量組的劑量f : 每個劑量組使用動物數(shù)12/8/202132舉例：小鼠經(jīng)口給與某化學物染毒，10mg/kg劑量試探，預計使用4個劑量組，劑量組距對數(shù)值0.2，設計使用12只動物，結果如下劑量 存活 死亡12.59 0 210.00 2 37.94 2 26.31 1 012/8/202133x f=12.592+105+7.944+6.311該法優(yōu)點是節(jié)省動物，一般12-14只左右動物即可完成實驗。缺點？12/8/202134二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗(六六)經(jīng)典急性毒性試驗的局限性經(jīng)

22、典急性毒性試驗的局限性1.消耗的動物量大消耗的動物量大2.獲得的信息有限獲得的信息有限3.測得的測得的LD50僅僅是一個近似值僅僅是一個近似值4.在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學、血癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學、血液學及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒液學及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。性信息。12/8/202135三、急性毒性評價三、急性毒性評價外源化學物急性毒性分級（外源化學物急性毒性分級（WHO）毒性分級毒性分級大鼠一次經(jīng)口大鼠一次經(jīng)口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小時，死小時，死

23、亡亡24只的濃度只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮兔經(jīng)皮LD50(/mg/kg)對人可能致死的估計量對人可能致死的估計量g/kg總量總量(g/60kg)劇毒劇毒110515100012/8/202136三、急性毒性評價三、急性毒性評價我國食品毒理急性毒性分級法我國食品毒理急性毒性分級法(1994)急性毒性分級急性毒性分級大鼠經(jīng)口大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)大致相當于大致相當于70kg人的致死量人的致死量6級級(極毒極毒)1稍嘗稍嘗,150001050克克12/8/202137一、一、基本概念基本概念二二、 蓄積毒性試驗方法及其評價蓄積毒性試驗方法及其評價 2 蓄積毒性蓄積毒性12/8/202138 化

24、學毒物進入機體后，經(jīng)過生物轉化以代化學毒物進入機體后，經(jīng)過生物轉化以代謝產(chǎn)物或化學物原型排出體外。但是，當化學謝產(chǎn)物或化學物原型排出體外。但是，當化學毒物反復多次給動物染毒，化學毒物進入機體毒物反復多次給動物染毒，化學毒物進入機體的速度的速度( (或總量或總量) )超過代謝轉化的速度和排泄的超過代謝轉化的速度和排泄的速度速度( (或總量或總量) )時，化學毒物或其代謝產(chǎn)物就有時，化學毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機體內逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為可能在機體內逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學毒物的化學毒物的蓄積作用蓄積作用(accumulation)(accumulation)。 一、基本概念一、基

25、本概念12/8/202139某些毒物多次以小劑量反復多次以小劑量反復進入體內，可表現(xiàn)出機體對該毒物的反應性增強，即一次染毒不引起反應的劑量，如多次重復染毒，則可能引起明顯的反應甚至死亡。毒物的蓄積與進入機體的毒物劑量、重復染毒的間隔時間、毒性及代謝特點和機體反應特性條件有關。12/8/202140 蓄積作用實際上有二個含義：蓄積作用實際上有二個含義： 物質蓄積物質蓄積(material accumulation)(material accumulation) 功能蓄積功能蓄積(functional accumulation)(functional accumulation)一、基本概念一、基本

26、概念12/8/202141物質物質蓄積：實驗動物反復多次接觸化學物后，用化學分析方法能夠檢測到機體內存在該化學物或代謝產(chǎn)物功能功能（機能）蓄積：有的化學物在長期接觸后，機體內雖不能檢測到機體內存在該化學物或代謝產(chǎn)物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用。12/8/202142功能蓄積可能是由于機體內的化學物或其代謝產(chǎn)物的數(shù)量極微，不能檢測出物質的蓄積或者是由于每次機體接觸化學物后所引起的損害累積所致12/8/202143蓄積作用的檢測方法應用化學分析或其他技術測定化學物進入機體后在體內含量的變化過程。該方法可確定化學的半衰期生物學方法：即將一次染毒與多次染毒所產(chǎn)生的生物學效應進行比較，故該法所檢測的蓄積性不能

27、區(qū)分不能區(qū)分功能蓄積和物質蓄積。12/8/202144二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價化學毒物的化學毒物的蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質基礎蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質基礎，因此研究化學毒物在機體內的蓄積性是評價化學因此研究化學毒物在機體內的蓄積性是評價化學毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標準制訂過程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。生標準制訂過程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。蓄積毒性試驗是研究化學毒物基礎毒性的重要內蓄積毒性試驗是研究化學毒物基礎毒性的重要內容之一，容之一，目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)K K，

28、了解化，了解化學毒物蓄積毒性的強弱，學毒物蓄積毒性的強弱，并為慢性毒性試驗及其并為慢性毒性試驗及其他有關毒性試驗的劑量選擇提供參考。他有關毒性試驗的劑量選擇提供參考。12/8/202145(一一)蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 蓄積系數(shù)蓄積系數(shù)(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是多次是多次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應( (或死亡或死亡) )的累積劑量的累積劑量EDED5050(n)(n)與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應( (或死亡或死亡) )的劑量的劑量EDED5050(1)(1)的比值

29、，即：的比值，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1) (1) 二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價12/8/202146(2)(2)蓄積系數(shù)法常用試驗方案蓄積系數(shù)法常用試驗方案 固定劑量法固定劑量法 劑量遞增法劑量遞增法 劑量固定的劑量固定的20天蓄積法天蓄積法12/8/202147固定劑量法固定劑量法l動物： 常用大鼠或小鼠l分2組：染毒組和對照組 每組至少20只，雌雄各半。l固定劑量：1/201/5LD50 每日固定劑量、定時和相同途徑染毒l終止時間：試驗組累計發(fā)生一半動物死亡。

30、如接觸劑量已累計達5個LD50，也可終止。l實驗期限：最短為25天，最長100天。12/8/202148劑量遞增法劑量遞增法l動物：常用大或小鼠40只（或更多）l分組：染毒組和對照組 每組至少20只，雌雄各半。 l終止時間：試驗組累計發(fā)生一半動物死亡。在第21天也可結束，因累計劑量已達5.26 LD50。試驗最長為28天。12/8/2021490.400.600.901.362.003.004.48每日接觸劑量每日接觸劑量（LD50） 接觸天數(shù)接觸天數(shù) 四日接觸總劑量四日接觸總劑量（LD50） 累積接觸總劑量累積接觸總劑量（LD50） 14 58 9 12 13 16 1720 21 24 2

31、528 0.10 0.15 0.22 0.34 0.50 0.75 1.12 劑量遞增法使用劑量表劑量遞增法使用劑量表 0.40 1.00 1.90 3.26 5.26 8.26 12.74 12/8/202150分組劑量分組劑量 1/20 LD501/10 LD50 1/5 LD50 1/2 LD50對照組對照組染毒染毒1次次/d 20dn 10（）10 （）10 （）10 （）10 （）劑量固定的劑量固定的2020天蓄積法天蓄積法12/8/202151分組劑量分組劑量 1/20 LD501/10LD501/5 LD501/2LD50對照組對照組n 10（）10 （）10 （）10 （）10

32、 （）死亡死亡蓄積性不明顯蓄積性不明顯 死亡死亡弱弱死亡死亡中等中等死亡死亡強強12/8/202152 局限性局限性l不能判斷化學毒物的蓄積是物質蓄積或功能蓄積 ； l蓄積系數(shù)法，如果以死亡為指標，用LD50表示生物效應，有急性試驗的局限性，可能漏檢某些指標。 如 有機磷農(nóng)藥， 蓄積性小，但抑制AchE 12/8/202153一一 亞慢性毒性作用：亞慢性毒性作用： 亞慢性毒性的概念亞慢性毒性的概念 亞慢性毒性試驗的目的亞慢性毒性試驗的目的 亞慢性毒性試驗的設計亞慢性毒性試驗的設計 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用： 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性試驗的目的慢性毒性試驗的目的 慢性毒性試

33、驗設計慢性毒性試驗設計 3 亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗12/8/202154(一一) 概念：概念： 亞慢性毒性亞慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或實驗動物連續(xù)接觸較長時間、較大劑量或實驗動物連續(xù)接觸較長時間、較大劑量的外源化合物所引起的毒性效應。的外源化合物所引起的毒性效應。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或實驗是指人或實驗動物長期動物長期(甚至終生甚至終生)反復接觸低劑量的化反復接觸低劑量的化學毒物所產(chǎn)生的毒性效應。學毒物所產(chǎn)生的毒性效應。一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的12/8/202155

34、（二）試驗目的：（二）試驗目的： 1. 1.確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒 性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗中未發(fā)現(xiàn)的毒作用；性試驗中未發(fā)現(xiàn)的毒作用； 2.2.研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官； 3.3.研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量反應反應( (效應效應) )關系，確定其觀關系，確定其觀察到有害作用的最低劑量察到有害作用的最低劑量(LOAEL)(LOAEL)和

35、未觀察到有害作用的劑量和未觀察到有害作用的劑量（NOAELNOAEL），提出此受試物的安全限量參考值），提出此受試物的安全限量參考值; ; 4. 4.研究受試物亞慢性和慢性毒性損害的可逆性研究受試物亞慢性和慢性毒性損害的可逆性; ; 5. 5.亞慢性毒性試驗為慢性毒性試驗的劑量設計及觀察指標選擇提亞慢性毒性試驗為慢性毒性試驗的劑量設計及觀察指標選擇提 供依據(jù)供依據(jù); ; 6. 6.確定不同動物物種對受試物亞慢性和慢性毒效應的差異，為將確定不同動物物種對受試物亞慢性和慢性毒效應的差異，為將毒性研究結果外推到人提供依據(jù)。毒性研究結果外推到人提供依據(jù)。一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的一、亞慢性和

36、慢性毒性試驗的概念、目的12/8/202156二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計 （一）實驗動物選擇（一）實驗動物選擇 亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗 年齡：年齡：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g數(shù)量：數(shù)量：小動物小動物20 大動物大動物6性別：性別：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性試驗慢性毒性試驗年齡：年齡：大鼠大鼠 5070g 狗狗 80只）染毒劑量（高劑量組死亡率10%，低劑量組不引起任何中毒反應）染毒途徑指標觀察12/8/202166觀察指標一般綜合指標：動物一般行為、體重攝食量變化、中毒體征和死亡情況。血液及生化檢驗：常規(guī)項目包括血紅蛋白、紅細

37、胞數(shù)、白細胞、血清酶活力等。臟器重量：如心、肝、肺、腎等病理學檢查：試驗結束時結束時處死所有動物處死所有動物進行大體尸檢，如未見明顯病變，可將高劑量組和對照組的主要臟器進行病理學檢查。12/8/2021673慢性毒性試驗 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性試驗的目的慢性毒性試驗的目的 慢性毒性試驗設計慢性毒性試驗設計 12/8/202168(一一) 概念：概念：慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或實驗是指人或實驗動物長期動物長期(甚至終生甚至終生)反復接觸低劑量的化反復接觸低劑量的化學毒物所產(chǎn)生的毒性效應。學毒物所產(chǎn)生的毒性效應。一、慢性毒性試驗的概念、目的一、慢性毒性試驗的概念、目的12/8/202169（二）試驗目的：（二）試驗目的： 1. 1.確定受試物慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒確定受試物慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒 性試驗中性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，