還原糖含量的測(cè)定

1、編輯ppt1實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六還原糖和總糖含量的測(cè)定還原糖和總糖含量的測(cè)定（3,5-二硝基水楊酸比色法）二硝基水楊酸比色法）編輯ppt2目的目的通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，掌握還原糖定量測(cè)定的基通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，掌握還原糖定量測(cè)定的基本原理，學(xué)習(xí)比色定糖法的基本操作，熟本原理，學(xué)習(xí)比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度計(jì)的使用方法。悉分光光度計(jì)的使用方法。編輯ppt3原理原理還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類(lèi)，還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類(lèi)，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖。乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀原糖。乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。還原糖的測(cè)定是糖定量

2、測(cè)粉是非還原糖。還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法，其基本原理是定的基本方法，其基本原理是用比色法對(duì)用比色法對(duì)還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定還原性的單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計(jì)）。含量計(jì)）。編輯ppt4在堿性條件下，還原糖與在堿性條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊二硝基水楊酸試劑（酸試劑（DNS）共熱，）共熱，3,5-二硝基水楊酸被二硝基水楊酸被還原為還原為3-氨基氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的

3、量與棕紅色物質(zhì)在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光值，波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算，就可以分別求出樣查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算，就可以分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。品中還原糖和總糖的含量。編輯ppt5編輯ppt6操作步驟操作步驟1、繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)編輯ppt7將以上各管將以上各管上下顛倒幾次使溶液混勻上下顛倒幾次使溶液混勻后，后，按順序倒入比色杯中，在按順序倒入比色杯中，在540nm波長(zhǎng)條件波長(zhǎng)條件下進(jìn)行比色測(cè)定：用下進(jìn)行比色測(cè)定：用0號(hào)管溶液調(diào)零點(diǎn)，分

4、號(hào)管溶液調(diào)零點(diǎn)，分別記錄各管吸光值；然后以葡萄糖濃度為別記錄各管吸光值；然后以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，橫坐標(biāo)，為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。編輯ppt82、測(cè)定樣品中還原糖和總糖含量。、測(cè)定樣品中還原糖和總糖含量。（1）提取樣品中的還原糖：）提取樣品中的還原糖：準(zhǔn)確稱(chēng)取準(zhǔn)確稱(chēng)取1g食用面粉放置于食用面粉放置于100ml三角瓶三角瓶中，加少量蒸餾水調(diào)成糊狀，再加入中，加少量蒸餾水調(diào)成糊狀，再加入50ml蒸餾水，搖勻，置于蒸餾水，搖勻，置于50水浴條件下水浴條件下20分分鐘，使還原糖浸出；在鐘，使還原糖浸出；在4000rpm、5分鐘條分鐘條件下進(jìn)行離心，得到的上清液倒入件下進(jìn)行離

5、心，得到的上清液倒入100ml容容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，上下顛倒上下顛倒幾次幾次將溶液混勻，作為還原糖待測(cè)液。將溶液混勻，作為還原糖待測(cè)液。編輯ppt9（2）提取樣品中的總糖：）提取樣品中的總糖：準(zhǔn)確稱(chēng)取準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1g食用面粉放置于食用面粉放置于100ml三角三角瓶中，加入瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及及15ml蒸餾蒸餾水，沸水浴水，沸水浴30分鐘（分鐘（注意不能把水燒干注意不能把水燒干）。）。用滴管吸取用滴管吸取12滴水解液于白瓷板上，加滴水解液于白瓷板上，加1滴滴I-KI溶液，如顯示出藍(lán)色說(shuō)明水解不完全，溶液，如顯示出藍(lán)色說(shuō)明水解不完全，可適

6、當(dāng)延長(zhǎng)沸水浴時(shí)間；若不顯藍(lán)色，則可適當(dāng)延長(zhǎng)沸水浴時(shí)間；若不顯藍(lán)色，則說(shuō)明水解完全。說(shuō)明水解完全。編輯ppt10待水解液冷卻至室溫后加入待水解液冷卻至室溫后加入1滴滴酚酞指示酚酞指示劑，用劑，用6mol/L NaOH中和至微紅色，在中和至微紅色，在4000rpm、5分鐘條件下離心，得到的上分鐘條件下離心，得到的上清液轉(zhuǎn)移到清液轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用蒸餾水定容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，容至刻度，上下顛倒幾次上下顛倒幾次混勻溶液，作為混勻溶液，作為總糖待測(cè)液?？偺谴郎y(cè)液。編輯ppt11（3）顯色和比色，按下表操作）顯色和比色，按下表操作編輯ppt12結(jié)果處理結(jié)果處理以以1、2號(hào)管的吸光值，分

7、別在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)號(hào)管的吸光值，分別在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出相應(yīng)的還原糖上查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)毫克數(shù)。按下列公式。按下列公式計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量：計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量：編輯ppt13注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)盡量同時(shí)進(jìn)行盡量同時(shí)進(jìn)行，一起一起顯色和比色顯色和比色。2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有的試管要、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有的試管要潔凈潔凈，加入各種試劑量要準(zhǔn)確。，加入各種試劑量要準(zhǔn)確。3、試劑、試劑不可倒出試劑瓶不可倒出試劑瓶，必須必須用干凈的移液管吸取，用后用干凈的移液管吸取，用后蓋好瓶塞，放回原處。蓋好瓶塞，放回原處。4、移液管使用：有色、移液管使用：有色看外邊緣看外邊緣，無(wú)色，無(wú)色看中間凹處看中間凹處。5、沸水?。?、沸水?。喉毜人序v后須等水沸騰后，才能將要加熱的物品放入鍋中；，才能將要加熱的物品放入鍋中；時(shí)刻注意鍋內(nèi)的水，時(shí)刻注意鍋內(nèi)的水，防止燒干防止燒干。6、每組同學(xué)離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，必須經(jīng)實(shí)驗(yàn)老師檢查并