初始污染菌檢測

1、2008年5月1 一次性使用醫(yī)療用品一次性使用醫(yī)療用品 初始污染菌檢測初始污染菌檢測江蘇省醫(yī)療器械檢驗所江蘇省醫(yī)療器械檢驗所一次性器具室一次性器具室2008年5月2微微 生生 物物 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 知知 識識微生物基礎(chǔ)知識微生物基礎(chǔ)知識無菌技術(shù)無菌技術(shù)初始污染菌檢測初始污染菌檢測關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟致病菌檢查致病菌檢查2008年5月3微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查無菌檢查無菌檢查微生物限度檢查微生物限度檢查細菌、真菌數(shù)量細菌、真菌數(shù)量控制菌控制菌其他（初始污染菌）其他（初始污染菌） 2008年5月4 微微 生生 物物 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 知知 識識 微生物與微生物學(xué)微生物與微生物學(xué) 自然界中存在著一個數(shù)量極其龐大、

2、個體微小和結(jié)構(gòu)自然界中存在著一個數(shù)量極其龐大、個體微小和結(jié)構(gòu)簡單的生物類群，簡單的生物類群，即微生物即微生物。微生物大多數(shù)為單細胞，。微生物大多數(shù)為單細胞，必須借助光學(xué)顯微鏡放大千倍或電子顯微鏡放大數(shù)萬倍必須借助光學(xué)顯微鏡放大千倍或電子顯微鏡放大數(shù)萬倍才能肉眼可見的一類微小生物的統(tǒng)稱。才能肉眼可見的一類微小生物的統(tǒng)稱。 微生物學(xué)微生物學(xué)是研究微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分類、生理代謝、是研究微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分類、生理代謝、遺傳變異、生態(tài)分布和微生物與人類、動植物關(guān)系等的遺傳變異、生態(tài)分布和微生物與人類、動植物關(guān)系等的一門學(xué)科。我們對微生物深入研究的目的在于更好地開一門學(xué)科。我們對微生物深入研究的目的在

3、于更好地開發(fā)微生物資源，充分利用微生物有利于人類生活方面。發(fā)微生物資源，充分利用微生物有利于人類生活方面?？刂莆⑸锏挠泻Ψ矫妫怪玫貫槿祟惙?wù)。控制微生物的有害方面，使之更好地為人類服務(wù)。 2008年5月5微微 生生 物物 的的 分分 類類微生物非細胞型非細胞型微生物微生物原核細胞型原核細胞型微生物微生物真核細胞型真核細胞型微生物微生物病毒病毒亞病毒因子亞病毒因子細菌細菌放線菌放線菌衣原體衣原體 支原體等支原體等真菌原生生物2008年5月6細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 細菌個體形態(tài)細菌個體形態(tài) 細菌是一類細胞細而短（細胞直徑約細菌是一類細胞細而短（細胞直徑約0.5m,0.5-5m0

4、.5m,0.5-5m）、結(jié)）、結(jié)構(gòu)簡單、細胞壁堅韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強的原核微構(gòu)簡單、細胞壁堅韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強的原核微生物，分布廣泛。生物，分布廣泛。 形態(tài)圖細菌菌落形態(tài)細菌菌落形態(tài) 單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心的單個或少數(shù)細菌細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團，這就是菌落。細一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團，這就是菌落。細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細菌的菌落特征以及菌

5、落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細菌的菌落特征因種而異。因種而異。 可作為鑒定細菌種的依據(jù)?？勺鳛殍b定細菌種的依據(jù)。 菌落圖2008年5月7細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征2008年5月8細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 2008年5月9細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征銅綠假單孢菌的菌落特征銅綠假單孢菌的菌落特征 2008年5月10細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37C，最適生長pH 7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透

6、明的溶血環(huán)。2008年5月11細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征金黃色葡萄球菌的單個菌落在金黃色葡萄球菌的單個菌落在Baird-Parker瓊脂平板上呈圓形瓊脂平板上呈圓形,表面光滑、表面光滑、凸起、濕凸起、濕 潤潤,直徑直徑23mm?；液谏梁谏??；液谏梁谏?有光澤有光澤,常有淺色常有淺色(非白色非白色)的邊的邊緣緣,周圍繞以不透明圈周圍繞以不透明圈 (沉淀沉淀),其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時具有黃油樣粘稠感。具有黃油樣粘稠感。2008年5月12細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 描描 述述1.大小：直徑大?。褐睆?.形狀：圓形、假根形、不規(guī)

7、則型形狀：圓形、假根形、不規(guī)則型3.隆起形狀：擴展、苔狀、低凸、凸面、乳頭狀隆起形狀：擴展、苔狀、低凸、凸面、乳頭狀4.邊緣：整齊、波狀、裂葉狀、圓鋸齒狀、有緣毛邊緣：整齊、波狀、裂葉狀、圓鋸齒狀、有緣毛5.表面狀態(tài)：光滑、皺褶、顆粒狀、龜裂狀、同心環(huán)狀表面狀態(tài)：光滑、皺褶、顆粒狀、龜裂狀、同心環(huán)狀6.表面光澤：閃光、不閃光、金屬光澤表面光澤：閃光、不閃光、金屬光澤7.質(zhì)地：油脂狀、膜狀、脆質(zhì)地：油脂狀、膜狀、脆8.透明程度：不透明、半透明透明程度：不透明、半透明 細菌菌落的常規(guī)描述細菌菌落的常規(guī)描述2008年5月13細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 細菌基本結(jié)構(gòu)細菌基本結(jié)構(gòu)莢莢 膜膜細胞壁

8、細胞壁胞漿膜胞漿膜核核 蛋蛋 白白核核 質(zhì)質(zhì)2008年5月14細細 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的細胞壁結(jié)構(gòu)比較革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的細胞壁結(jié)構(gòu)比較細胞壁結(jié)構(gòu)GG厚度2080nm1015nm強度堅韌疏松糖類含量約45約15脂類含量約2約20磷壁酸無有脂多糖無有脂多糖（LPS）,包括脂蛋白A，核心多糖和特異性多糖三個部分。LPS對動物具有毒性作用，它牢固地結(jié)合在細胞表面，只在菌體融解時才釋放，稱為細菌內(nèi)毒素。其中脂蛋白A是內(nèi)毒素的主要生物學(xué)活性組分。2008年5月15真真 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 霉菌個體形態(tài)霉菌個體形態(tài) 霉菌亦稱絲狀真菌，是在分類

9、學(xué)上很不相同的許多真菌的一部霉菌亦稱絲狀真菌，是在分類學(xué)上很不相同的許多真菌的一部分，凡是生長在營養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀或絮狀菌絲體分，凡是生長在營養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀或絮狀菌絲體的真菌，統(tǒng)稱為霉菌，霉菌為真核微生物，其結(jié)構(gòu)比細菌復(fù)雜。的真菌，統(tǒng)稱為霉菌，霉菌為真核微生物，其結(jié)構(gòu)比細菌復(fù)雜。酵母菌個體形態(tài)酵母菌個體形態(tài) 酵母菌是單細胞真核微生物。酵母菌細胞的形態(tài)通常有球形、卵酵母菌是單細胞真核微生物。酵母菌細胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細菌的單細胞個體要圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細菌的單細胞個體要大得多，一般為大得多，一般為15

10、15微米微米530530微米。酵母菌無鞭毛，不能游動。微米。酵母菌無鞭毛，不能游動。酵母菌具有典型的真核細胞結(jié)構(gòu)酵母菌具有典型的真核細胞結(jié)構(gòu), ,有細胞壁、細胞膜、細胞核、細胞有細胞壁、細胞膜、細胞核、細胞質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。2008年5月16霉霉 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征 由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴展到整個培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑12厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑取；菌落正

11、反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。 2008年5月17酵酵 母母 菌菌 形形 態(tài)態(tài) 特特 征征啤酒酵母的菌落 大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細菌相似，但比細菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別為黑色。 2008年5月18微微 生生 物物 群群 體體 生生 長長 規(guī)規(guī) 律律 將少量單細胞純培養(yǎng)接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基將少量單細胞純培養(yǎng)接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時取樣測定其細菌含量，可以看中，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時取樣測定其細菌含量，可以看到以下現(xiàn)象：開始有一短

12、暫時間，細菌數(shù)量并不增加，隨之細到以下現(xiàn)象：開始有一短暫時間，細菌數(shù)量并不增加，隨之細菌數(shù)目增加很快，既而細菌數(shù)又趨穩(wěn)定，最后逐漸下降。如果菌數(shù)目增加很快，既而細菌數(shù)又趨穩(wěn)定，最后逐漸下降。如果以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速度為縱坐標(biāo)以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速度為縱坐標(biāo)作圖，可以得到一條曲線，稱為作圖，可以得到一條曲線，稱為繁殖曲線繁殖曲線，通常又稱為生長曲，通常又稱為生長曲線。生長曲線代表了細菌在新的適宜的環(huán)境中生長繁殖直至衰線。生長曲線代表了細菌在新的適宜的環(huán)境中生長繁殖直至衰老死亡全過程的動態(tài)變化。根據(jù)細菌生長繁殖速率的不同，可老死亡全過程的動態(tài)變化。根據(jù)

13、細菌生長繁殖速率的不同，可將生長曲線大致分為延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階將生長曲線大致分為延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。段。 規(guī)律的描述規(guī)律示意圖2008年5月19微微 生生 物物 群群 體體 生生 長長 規(guī)規(guī) 律律延遲期：少量細菌接種到新鮮培養(yǎng)基后，一般不少量細菌接種到新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進行立即進行 繁殖，生長速度近于零。處于延遲期繁殖，生長速度近于零。處于延遲期細菌細胞的特點是分裂遲緩、代謝活躍。細菌細胞的特點是分裂遲緩、代謝活躍。對數(shù)期：對數(shù)期：對數(shù)期又稱指數(shù)期。這一階段突對數(shù)期又稱指數(shù)期。這一階段突 出特點是細菌數(shù)以幾何級數(shù)增加，出特點是細菌數(shù)以幾何級數(shù)增加，

14、代時穩(wěn)定，細菌數(shù)目的增加與原生代時穩(wěn)定，細菌數(shù)目的增加與原生 質(zhì)總量的增加，與菌液混濁度的增質(zhì)總量的增加，與菌液混濁度的增 加均呈正相關(guān)性。加均呈正相關(guān)性。 穩(wěn)定期：又稱恒定期或最高生長期。處于穩(wěn)定期又稱恒定期或最高生長期。處于穩(wěn)定期 的微生物，新增殖的細胞數(shù)與老細胞的的微生物，新增殖的細胞數(shù)與老細胞的 死亡數(shù)幾乎相等，整個培養(yǎng)物中二者處死亡數(shù)幾乎相等，整個培養(yǎng)物中二者處 于動態(tài)平衡，此時生長速度又逐漸趨向于動態(tài)平衡，此時生長速度又逐漸趨向 零。零。 衰亡期：穩(wěn)定期后如再繼續(xù)培養(yǎng)，細菌死亡率逐漸增加，以致死亡數(shù)大大超過新生數(shù)，群體中活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)了“負生長”，此階段叫衰亡期。 2008

15、年5月20微生物操作技術(shù)無菌環(huán)境是前提！微生物操作技術(shù)無菌環(huán)境是前提！ 主要是指在微生物實驗工作中，控制或防止各類微生物的主要是指在微生物實驗工作中，控制或防止各類微生物的 污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌實驗器材等，統(tǒng)稱為無菌技術(shù)。境設(shè)施、無菌實驗器材等，統(tǒng)稱為無菌技術(shù)。 無菌環(huán)境的無菌環(huán)境的 應(yīng)應(yīng)用是一個完整的操作技術(shù)體系。用是一個完整的操作技術(shù)體系。若其中的任何一個環(huán)節(jié)污染，若其中的任何一個環(huán)節(jié)污染，那么其他環(huán)節(jié)雖是無菌操作，也將完全失去意義。那么其他環(huán)節(jié)雖是無菌操作，也將完全失去意義。無菌技術(shù)概念無

16、菌環(huán)境 無菌環(huán)境是指人們用物理的或化學(xué)的方法，在某一可控的無菌環(huán)境是指人們用物理的或化學(xué)的方法，在某一可控的空間內(nèi)使微生物數(shù)量降低到最低限度，接近于無菌的一種空空間內(nèi)使微生物數(shù)量降低到最低限度，接近于無菌的一種空間。間。2008年5月21試驗環(huán)境的要求及無菌操作試驗環(huán)境的要求及無菌操作 環(huán)境潔凈度環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度級下的局部潔凈度100級的級的 單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。 陽性實驗室、檢查間分離。陽性實驗室、檢查間分離。 嚴(yán)格按無菌操作嚴(yán)格按無菌操作,防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染；避免操作者自身被微生物感染。微生物污染；

17、避免操作者自身被微生物感染。 無菌操作在有潔凈級別的實驗室中進行，與試驗相無菌操作在有潔凈級別的實驗室中進行，與試驗相關(guān)的金屬器械、玻璃器皿、稀釋劑等應(yīng)經(jīng)過關(guān)的金屬器械、玻璃器皿、稀釋劑等應(yīng)經(jīng)過滅菌滅菌處處理；其他的材料應(yīng)經(jīng)過表面消毒、紫外線照射消毒理；其他的材料應(yīng)經(jīng)過表面消毒、紫外線照射消毒后，再帶入實驗室后，再帶入實驗室 。2008年5月22無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)1.技術(shù)培訓(xùn)和考核制度技術(shù)培訓(xùn)和考核制度2.儀器和試劑的校對制度儀器和試劑的校對制度3.實驗記錄制度實驗記錄制度4.結(jié)果質(zhì)疑和核對制度結(jié)果質(zhì)疑和核對制度5.技術(shù)方法的規(guī)范制度技術(shù)方法的規(guī)范制度 實驗室安全制度1.安全通則安全通則2

18、.生物安全生物安全微生物檢驗質(zhì)量控制制度2008年5月23無無 菌菌 技術(shù)技術(shù)菌 種菌種保藏原理 保藏的原則是根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件保藏的原則是根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁下盡量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但又不至于死亡，以降低菌種的變異率。殖受到抑制但又不至于死亡，以降低菌種的變異率。菌種保藏步驟選擇典型菌落確定菌體形態(tài)選擇保藏方法定期檢查方法主要原理適用的微生物包藏時間特點瓊脂斜面低溫保藏法低溫（4）廣泛16個月簡便液體石蠟保藏法低溫，缺氧廣

19、泛1年以上簡便干燥（砂土）保藏法干燥，無營養(yǎng)產(chǎn)孢微生物110年簡便有效冷凍真空干燥法干燥，缺氧、低溫廣泛5 10年復(fù)雜但有效液氮超低溫保藏法超低溫廣泛數(shù)十年復(fù)雜但有效菌種保藏方法2008年5月24無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)瓊脂斜面低溫保存法方法適用范圍特點注意事項 將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面上，按規(guī)定的溫度和時間培將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面上，按規(guī)定的溫度和時間培養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，4度冰箱保藏。度冰箱保藏。每隔每隔1個月移種一次，繼續(xù)進行保藏。個月移種一次，繼續(xù)進行保藏。 本法適用與經(jīng)常使用的

20、細菌、酵母菌等。本法適用與經(jīng)常使用的細菌、酵母菌等。（1）優(yōu)點：簡便，易推廣；一般不需要另選則保藏用培養(yǎng)基；對大多數(shù)）優(yōu)點：簡便，易推廣；一般不需要另選則保藏用培養(yǎng)基；對大多數(shù) 都適用。都適用。（2）缺點：保藏期短；傳代次數(shù)多，易變異和污染。）缺點：保藏期短；傳代次數(shù)多，易變異和污染。 （1）保藏菌種的選擇。）保藏菌種的選擇。（2）定期檢查。）定期檢查。 （3）做好記錄。）做好記錄。 2008年5月25無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)半固體石蠟保存法方法適用范圍特點注意事項 用石蠟讓培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水用石蠟讓培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，并可防止水分蒸發(fā)，從而延長菌種

21、的保藏時間。平，并可防止水分蒸發(fā)，從而延長菌種的保藏時間。 本法適用與部分霉菌、酵母菌和放線菌等，對細菌的效本法適用與部分霉菌、酵母菌和放線菌等，對細菌的效果較差。果較差。（1）優(yōu)點：簡便，易推廣。）優(yōu)點：簡便，易推廣。（1）液體石蠟的高度。）液體石蠟的高度。（2）定期檢查。）定期檢查。 （3）做好記錄。）做好記錄。 2008年5月26無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)斜面培養(yǎng)基接種技術(shù)方法1. 左手持分離培養(yǎng)的平板培養(yǎng)基，右手持接種環(huán)，經(jīng)左手持分離培養(yǎng)的平板培養(yǎng)基，右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰燒灼，冷卻后在平板上挑取菌落?；鹧鏌疲鋮s后在平板上挑取菌落。2. 左手立即放下平板，換持斜面培養(yǎng)基，用右手小指左手立

22、即放下平板，換持斜面培養(yǎng)基，用右手小指和無名指拔出管塞，夾持于手指之間。和無名指拔出管塞，夾持于手指之間。3. 將管口在火焰上通過兩三次，但勿燒燙。再迅速將將管口在火焰上通過兩三次，但勿燒燙。再迅速將挑取有菌的接種環(huán)伸進斜面內(nèi)，從斜面的底部向上挑取有菌的接種環(huán)伸進斜面內(nèi)，從斜面的底部向上劃一條接種線，又自下而上蜿蜒接種成曲線。劃一條接種線，又自下而上蜿蜒接種成曲線。4. 退出接種環(huán)，塞上管塞。接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后放置。退出接種環(huán)，塞上管塞。接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后放置。5. 培養(yǎng)后，沿接種線長出菌苔，非接種線的部位應(yīng)無培養(yǎng)后，沿接種線長出菌苔，非接種線的部位應(yīng)無細菌生長。細菌生長。2008年5月27無

23、無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)分離技術(shù)分離技術(shù)劃線分離法劃線分離法分段劃線法分段劃線法組段間接種環(huán)的滅菌、冷卻！組段間接種環(huán)的滅菌、冷卻！2008年5月28無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)金黃色葡萄球菌的保藏一般為凍干粉劑，安瓿瓶密封包裝。選擇性培養(yǎng)基分離菌種。增菌性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基分離菌種。斜面接種、培養(yǎng)低溫保藏2008年5月29無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)無菌器材實驗器材滅菌器材滅菌器材消毒器材消毒器材凡是檢驗中使用的器材，能滅菌處凡是檢驗中使用的器材，能滅菌處理的，必須滅菌處理。如：玻璃器理的，必須滅菌處理。如：玻璃器皿、吸管、培養(yǎng)基、稀釋劑、無菌皿、吸管、培養(yǎng)基、稀釋劑、無菌衣、口罩等，在使用前必須經(jīng)過適衣、口

24、罩等，在使用前必須經(jīng)過適當(dāng)方法滅菌，并在較潔凈的環(huán)境中當(dāng)方法滅菌，并在較潔凈的環(huán)境中保存?zhèn)溆?。保存?zhèn)溆?。凡檢驗用器材無法滅菌處理的，使凡檢驗用器材無法滅菌處理的，使用前必須經(jīng)消毒處理。如：無菌室用前必須經(jīng)消毒處理。如：無菌室的桌凳、天平、工作臺以及工作人的桌凳、天平、工作臺以及工作人員的手等。員的手等。2008年5月30無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)無菌操作無菌操作基本概念：基本概念：無菌操作一般是指在無菌環(huán)境條件下，使用無菌制品或無無菌操作一般是指在無菌環(huán)境條件下，使用無菌制品或無 菌器材進行檢驗或?qū)嶒灥倪^程中，菌器材進行檢驗或?qū)嶒灥倪^程中， 能防止微生物污染與干能防止微生物污染與干 擾的一種常規(guī)操

25、作方法。擾的一種常規(guī)操作方法。操作目的操作目的：（1 1）保證檢驗物品不被環(huán)境中的微生物的污染；）保證檢驗物品不被環(huán)境中的微生物的污染； （2 2）防止被檢微生物在操作中污染實驗人員和實驗環(huán)境。）防止被檢微生物在操作中污染實驗人員和實驗環(huán)境。主要方面主要方面：（1 1）實驗前的準(zhǔn)備實驗前的準(zhǔn)備 （2 2）實驗中的操作實驗中的操作 （3 3）意外事故的處理意外事故的處理2008年5月31無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)進入無菌室的控制進入無菌室的控制1、定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；定期檢查無菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；2、無菌室在使用前開啟紫外線燈、無菌室在使用前開啟紫外線燈3060min進行空氣消

26、毒；進行空氣消毒；3、在進行接種傾注瓊脂平板均需在無菌室超凈工作臺或接種罩內(nèi)操作、在進行接種傾注瓊脂平板均需在無菌室超凈工作臺或接種罩內(nèi)操作3、檢查一切進入無菌環(huán)境的器材滅菌、消毒的標(biāo)志物是否完備；、檢查一切進入無菌環(huán)境的器材滅菌、消毒的標(biāo)志物是否完備；4、洗手消毒：首先用肥皂涂在手上揉搓、洗手消毒：首先用肥皂涂在手上揉搓1015s，肥皂雖不殺菌，肥皂雖不殺菌， 有去污作用，然后用流水徹底沖洗，可有效除去手上大多數(shù)暫有去污作用，然后用流水徹底沖洗，可有效除去手上大多數(shù)暫 住菌，如連續(xù)洗住菌，如連續(xù)洗23次次(視手的污染程度視手的污染程度)，使殘余的微生物減，使殘余的微生物減 少到最低水平，再用

27、消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴銨、碘少到最低水平，再用消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴銨、碘 伏、乙醇、過氧乙酸等。伏、乙醇、過氧乙酸等。5、操作人員將手部消毒后，再穿戴無菌工作服、操作人員將手部消毒后，再穿戴無菌工作服(包括鞋、帽、口罩包括鞋、帽、口罩 等等)。嚴(yán)格的無菌服應(yīng)是戴帽套頭的無扣的上衣，頸部、臉部及。嚴(yán)格的無菌服應(yīng)是戴帽套頭的無扣的上衣，頸部、臉部及 袖口是緊口的，以保護身體，防止污染。一般的無菌衣是背開袖口是緊口的，以保護身體，防止污染。一般的無菌衣是背開 口，圍胸部、緊扣頸部與長袖緊口的，以保護身體，防止污染?？冢瑖夭?、緊扣頸部與長袖緊口的，以保護身體，防止污染。6、在進入無菌室

28、后，進一步用浸有消毒液的棉球或泡沫塑料物消、在進入無菌室后，進一步用浸有消毒液的棉球或泡沫塑料物消 毒手，然后可進行檢驗或?qū)嶒灢僮?。毒手，然后可進行檢驗或?qū)嶒灢僮鳌?008年5月32無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)檢驗過程的控制檢驗過程的控制1、在所有操作中均不應(yīng)大幅度或快速動作，以免攪動空氣中塵、在所有操作中均不應(yīng)大幅度或快速動作，以免攪動空氣中塵 埃微粒。埃微粒。2、使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴散。、使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴散。3、在近火焰區(qū)操作。、在近火焰區(qū)操作。4、使用金屬接種器具、用前、用后均需燃燒滅菌。、使用金屬接種器具、用前、用后均需燃燒滅菌。5、應(yīng)

29、用橡膠乳頭套在吸管上端，吸吹供試液或培養(yǎng)液等，切勿、應(yīng)用橡膠乳頭套在吸管上端，吸吹供試液或培養(yǎng)液等，切勿 用嘴直接吸吹吸管。用嘴直接吸吹吸管。6、用注射器吸取樣品、培養(yǎng)物時，注射器內(nèi)應(yīng)無空氣；裝卸針、用注射器吸取樣品、培養(yǎng)物時，注射器內(nèi)應(yīng)無空氣；裝卸針 頭時應(yīng)用滅菌的鑷子；從密封容器內(nèi)抽取液體時，應(yīng)注入無頭時應(yīng)用滅菌的鑷子；從密封容器內(nèi)抽取液體時，應(yīng)注入無 菌空氣；帶液體的針筒針頭應(yīng)向上傾斜，并用菌空氣；帶液體的針筒針頭應(yīng)向上傾斜，并用75%乙醇棉球乙醇棉球 (擠干擠干)保護針頭根部；注射時勿用力過猛，以免內(nèi)容物噴出保護針頭根部；注射時勿用力過猛，以免內(nèi)容物噴出 或針頭脫落使溢出液體污染滅菌器

30、材或環(huán)境。或針頭脫落使溢出液體污染滅菌器材或環(huán)境。7、當(dāng)滅菌瓶塞或試管塞掉落在工作臺上，一般不宜再用，應(yīng)另、當(dāng)滅菌瓶塞或試管塞掉落在工作臺上，一般不宜再用，應(yīng)另 換無菌塞，或通過火焰處理后再用。換無菌塞，或通過火焰處理后再用。2008年5月33無無 菌菌 技技 術(shù)術(shù)意外事故的控制1、假定無菌衣受污染，應(yīng)脫下翻轉(zhuǎn)包裹，使污染部分包在、假定無菌衣受污染，應(yīng)脫下翻轉(zhuǎn)包裹，使污染部分包在 內(nèi)部，送往消毒，經(jīng)滅菌后，洗滌再用。內(nèi)部，送往消毒，經(jīng)滅菌后，洗滌再用。2、因偶然打破盛有培養(yǎng)物的器皿，致使病原性的菌毒種外、因偶然打破盛有培養(yǎng)物的器皿，致使病原性的菌毒種外 溢，污染了工作室及操作者的衣物及體表時，

31、當(dāng)事人應(yīng)溢，污染了工作室及操作者的衣物及體表時，當(dāng)事人應(yīng) 冷靜，切勿亂動以免擴大污染面。應(yīng)喚他人用浸透消毒冷靜，切勿亂動以免擴大污染面。應(yīng)喚他人用浸透消毒 液的毛巾或紗布覆蓋于碎片上，或?qū)⑾疽旱乖谖廴疽旱拿砘蚣啿几采w于碎片上，或?qū)⑾疽旱乖谖廴?區(qū)，浸沒一定時間。先從外至內(nèi)逐步清理污染源，最后區(qū)，浸沒一定時間。先從外至內(nèi)逐步清理污染源，最后 將衣物徹底滅菌。清理時應(yīng)避免用手指收集玻璃碎片，將衣物徹底滅菌。清理時應(yīng)避免用手指收集玻璃碎片， 以防污染皮膚，造成病原性微生物感染事故。以防污染皮膚，造成病原性微生物感染事故。3、對一般小面積的污染可自行處理，較大范圍的污染則請、對一般小面積的污染可

32、自行處理，較大范圍的污染則請 人協(xié)助。人協(xié)助。2008年5月34消消 毒毒 滅滅 菌菌 技技 術(shù)術(shù)消毒消毒disinfection消毒消毒基本概念：基本概念：消毒是殺滅清除傳播媒介上病原微生物。但不能殺死消毒是殺滅清除傳播媒介上病原微生物。但不能殺死 芽孢等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。芽孢等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。消毒方法：見下頁消毒方法：見下頁滅菌滅菌sterilization滅菌滅菌基本概念：基本概念：凡能殺滅物體中所有活的微生物的作用稱為滅菌。凡能殺滅物體中所有活的微生物的作用稱為滅菌。常用滅菌方法常用滅菌方法：濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、

33、氣體滅菌法等。：濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法等。2008年5月35消消 毒毒 滅滅 菌菌 技技 術(shù)術(shù)消毒劑消毒劑消毒原理消毒原理常用濃度常用濃度備注備注乙醇 蛋白質(zhì)變性、溶解細胞 70%75% 能迅速殺死細菌繁殖體，對一般病毒有一定的消毒作用。一般用95%乙醇稀釋成70%75%的乙醇溶液，常用于皮膚消毒。市售或自配的75%乙醇并非無菌 洗必太 0.1%0.5%消毒器械，0.05%用于皮膚、黏膜和沖洗傷口。難溶于水，常制成葡萄糖酸鹽、鹽酸鹽、醋酸鹽使用，對革蘭陽性菌、陰性菌均有殺菌作用，但對前者作用較強。0.5%的洗必太與70%的乙醇混合用，比單一用一種殺菌效果好。不能與肥皂、

34、洗衣粉、其他陰離子物質(zhì)、升汞合用 過氧乙酸 蛋白質(zhì)沉淀 0.5%皮膚消毒 廣譜消毒劑。能殺死細菌繁殖體、芽孢、 真菌與某些病毒，對空氣、皮膚和食品消毒常用，0.2%0.5%用于塑料、織物、等消毒；用1g/m3熏蒸，過氧乙酸產(chǎn)生的蒸汽，對空氣的消毒效果很好。 碘伏 鹵化作用市售碘伏為0.75%、10%、7.5%、5%、1% 廣譜殺菌劑，對革蘭陽性、陰性菌類、炭疽芽孢菌均有殺滅作用。 來蘇(甲酚肥皂液) 損傷細胞膜 2% 2%水溶液可用于皮膚消毒 來蘇比苯酚的殺菌作用強，有毒性，消毒手后有麻木感 2008年5月36消消 毒毒 滅滅 菌菌 技技 術(shù)術(shù)儀儀 器器準(zhǔn)備和包裝準(zhǔn)備和包裝滅菌方法滅菌方法時間

35、時間濕度濕度()濾器濾器用洗碟機清洗，分別放在不銹鋼小車用洗碟機清洗，分別放在不銹鋼小車上上高壓滅菌高壓滅菌40min40min121121擦凈劑擦凈劑用棕色紙包在原包裝上用棕色紙包在原包裝上高壓滅菌高壓滅菌40min40min121121金屬試管架金屬試管架放在不銹鋼小車上放在不銹鋼小車上高壓滅菌高壓滅菌40min40min121121鑷子、刮刀鑷子、刮刀插在試管里，塞塞子，放入玻璃紙信插在試管里，塞塞子，放入玻璃紙信封，封口封，封口烘箱干熱滅菌烘箱干熱滅菌高壓滅菌高壓滅菌4h4h不少于不少于15min15min205205121121吸管吸管( (移液管移液管) )用清潔器清洗，烘干，分別

36、放入金屬用清潔器清洗，烘干，分別放入金屬筒中筒中烘箱干熱滅菌烘箱干熱滅菌4h4h205205燒杯燒杯清洗，用箔封口清洗，用箔封口烘箱干熱滅菌烘箱干熱滅菌4h4h20520510ml10ml、20ml20ml帶螺旋帶螺旋帽的小瓶帽的小瓶置不銹鋼小車上置不銹鋼小車上高壓滅菌高壓滅菌不少于不少于15min15min1211210.45m0.45m微孔濾膜微孔濾膜的濾器的濾器按原包裝或從原包裝移去濾器置玻璃按原包裝或從原包裝移去濾器置玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)皿內(nèi)高壓滅菌高壓滅菌15min15min1211212008年5月37培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 的的 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 知知 識識培養(yǎng)基水分炭源氮源無機鹽類 生長因子凝

37、固劑其他培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基是人工配制的生物營養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各培養(yǎng)基是人工配制的生物營養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各種微生物生長繁殖的需要配成的一種混合營養(yǎng)物。種微生物生長繁殖的需要配成的一種混合營養(yǎng)物。培養(yǎng)基的主要成份培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基培養(yǎng)基形態(tài)形態(tài)用途用途成份成份固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基等選擇培養(yǎng)基等天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基2008年5月38培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 的的 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 知知 識識培養(yǎng)基制備常用儀器的準(zhǔn)備平皿平皿用紙或者布包好，或裝在金屬盒內(nèi)，于用紙或者布

38、包好，或裝在金屬盒內(nèi)，于121高高壓蒸汽滅菌壓蒸汽滅菌20min后烘干。后烘干。試管試管試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，用布試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，用布或報紙包好，于或報紙包好，于121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌20min后烘后烘干。干。移液管移液管先用少許棉花塞于吸口端，然后用紙包好或裝入先用少許棉花塞于吸口端，然后用紙包好或裝入金屬吸管筒內(nèi)，于金屬吸管筒內(nèi)，于121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌20min后后烘干。烘干。2008年5月39培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 的的 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 知知 識識培養(yǎng)基制備 溶溶 化化校正酸堿度校正酸堿度熱熱 過過 濾濾 分分 裝裝 滅滅 菌菌（1）先將卵磷

39、脂加入少量蒸餾水低溫加熱溶解溶、再加吐溫80混勻，加入瓊脂，靜置15分鐘。高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH可比最終pH值調(diào)高0.2左右，滅菌后基本合適。營養(yǎng)瓊脂：調(diào)PH7.1-7.4營養(yǎng)瓊脂一般采用營養(yǎng)瓊脂一般采用121、103.42kPa蒸汽滅菌蒸汽滅菌30min。液體培養(yǎng)基用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基用紗布塊中夾薄層脫脂棉過濾2008年5月40細細 菌菌 計計 數(shù)數(shù)基本概念 細菌數(shù)測定是微生物的定量檢查，對非規(guī)定滅菌產(chǎn)品中污染的活細菌數(shù)測定是微生物的定量檢查，對非規(guī)定滅菌產(chǎn)品中污染的活菌數(shù)量進行測定，通常以每克或每毫升供試品作為計量單位。菌數(shù)量進行測定，通常以每克或每毫升供試品作為計量單位。限制條件 平板

40、菌落計數(shù)法的特點是先使細胞分散、定位，增生可見菌落后平板菌落計數(shù)法的特點是先使細胞分散、定位，增生可見菌落后計數(shù)。它是一種有條件的計數(shù)法，其限制條件大致如下：計數(shù)。它是一種有條件的計數(shù)法，其限制條件大致如下：以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。 CFU(colony forming units):一個菌落就是一個細菌形成單位，它一個菌落就是一個細菌形成單位，它 可以由一個也可以由多個菌細胞形成。可以由一個也可以由多個菌細胞形成。受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。有繁殖能力的菌細胞才能認定有繁殖能力的菌細胞才能認定“活菌活菌”。2008年5月41初始污染菌檢測初始污染菌檢測 初

41、始污染菌檢測：目前使用標(biāo)準(zhǔn)初始污染菌檢測：目前使用標(biāo)準(zhǔn)GB 15980GB 15980（一次性使（一次性使用醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）。本標(biāo)規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品用醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）。本標(biāo)規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)對一次性使用滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)對一次性使用醫(yī)療用品（包括滅菌的和消毒的一次性使用醫(yī)療用品）醫(yī)療用品（包括滅菌的和消毒的一次性使用醫(yī)療用品）生產(chǎn)、裝配，包裝車間等生產(chǎn)過程和生產(chǎn)工人手提出生產(chǎn)、裝配，包裝車間等生產(chǎn)過程和生產(chǎn)工人手提出衛(wèi)生的質(zhì)量控制。衛(wèi)生的質(zhì)量控制。 引用標(biāo)準(zhǔn)：引用標(biāo)準(zhǔn)：GB7918.2GB7918.2、GB8368GB8368、GB83

42、69GB8369、中華人民共、中華人民共和國藥典。和國藥典。2008年5月42初始污染菌檢測初始污染菌檢測指標(biāo)含義指標(biāo)含義測定檢品細菌總數(shù)可用來判明檢品細菌污染的程度，以測定檢品細菌總數(shù)可用來判明檢品細菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對檢品進行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)。員的衛(wèi)生狀況，是對檢品進行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)。方法主要步驟方法主要步驟采樣采樣供試液制備供試液制備培養(yǎng)培養(yǎng)菌落計數(shù)菌落計數(shù)2008年5月43初始污染菌檢測初始污染菌檢測采樣方法采樣方法 供試液制備1. 供試品是供試品是敷料、可以破壞性類

43、敷料、可以破壞性類可用無菌手續(xù)稱取可用無菌手續(xù)稱取10g,放入放入100ml滅菌生理滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。的供試液。2.供試品是供試品是液體液體取取10ml加至加至100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。的供試液。3.對供試品對供試品不能采用破壞性不能采用破壞性取樣可用浸有取樣可用浸有無菌無菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積為表面積為100cm2.加入滅菌生理鹽水加入滅菌生理鹽水100ml。作為。作為1：10的供試液。的供試液。4.可用破壞性方法取樣供試品：

44、可用破壞性方法取樣供試品：（參照中華人民共和國藥典（參照中華人民共和國藥典2005年規(guī)定進年規(guī)定進行行)5、采樣數(shù)量：各類產(chǎn)品每批隨機抽取、采樣數(shù)量：各類產(chǎn)品每批隨機抽取10件樣品。件樣品。6、檢驗方法：將每樣取、檢驗方法：將每樣取5份平行樣，參照份平行樣，參照GB7918.2規(guī)定進行。規(guī)定進行。 2008年5月44初始污染菌檢測初始污染菌檢測7、結(jié)果計算公式：結(jié)果計算公式： 平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)菌數(shù)稀釋倍數(shù)菌數(shù) 菌數(shù)菌數(shù)/每件次（或每件次（或g） = 件次或重量（件次或重量（g）注意事項：注意事項： 供試品的取樣必須在萬級環(huán)境中供試品的取樣必須在萬級環(huán)境中100級凈化條件下，無菌操作

45、，防止污級凈化條件下，無菌操作，防止污染。染。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時消除抑菌成份的干擾。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時消除抑菌成份的干擾。2008年5月45初始污染菌檢測初始污染菌檢測供試液制備供試液制備推薦的制備方法樣樣 品品 制制 備備供試液制備供試液制備梯度稀釋梯度稀釋加加 樣樣用滅菌剪刀將紗布剪成小塊，稱取用滅菌剪刀將紗布剪成小塊，稱取10g，移入，移入100ml稀釋劑中，保溫于稀釋劑中，保溫于45水浴中水浴中510min，不時振搖。，不時振搖。作為作為1：10供試液。供試液。供試液供試液10倍遞減稀釋。倍遞減稀釋。盡量避免絲線等雜物的混入。盡量避免絲線等雜物的混入。（1）每個稀釋級各吸取

46、）每個稀釋級各吸取1ml至每個滅至每個滅 菌平皿，每個稀釋級注菌平皿，每個稀釋級注2個平皿。個平皿。（2）經(jīng)滅菌完畢的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至）經(jīng)滅菌完畢的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至45-50 時，傾注上述各個平皿時，傾注上述各個平皿15ml，另，另傾注一個不加樣品滅菌空平皿作空白對照。傾注一個不加樣品滅菌空平皿作空白對照。以順時針或逆時針方向快速轉(zhuǎn)動平皿，使以順時針或逆時針方向快速轉(zhuǎn)動平皿，使供試液與培養(yǎng)基充分混勻。供試液與培養(yǎng)基充分混勻。紗布模擬紗布模擬2008年5月46初始污染菌檢測初始污染菌檢測梯度稀釋梯度稀釋1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml供試液供試液9mlNacl9mlNac

47、l1:101:1001:10002008年5月47平皿號細菌數(shù)平行行間1：101:100空白空白對照對照3748h菌落計數(shù)菌落計數(shù)373748h h菌落計數(shù)菌落計數(shù) 1212菌落均值菌落均值2008年5月48初始污染菌檢測初始污染菌檢測培培 養(yǎng)養(yǎng)將已經(jīng)凝固的平板倒置于將已經(jīng)凝固的平板倒置于37培養(yǎng)箱中，一般培養(yǎng)培養(yǎng)箱中，一般培養(yǎng)482h。菌落計數(shù)菌落計數(shù)計數(shù)方法：計數(shù)方法：將平板置菌落計數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點計，將平板置菌落計數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點計，以投射光襯以暗色背景，仔細觀察，計數(shù)。必要時可以借助于放大鏡、菌以投射光襯以暗色背景，仔細觀察，計數(shù)。必要時可以

48、借助于放大鏡、菌落計數(shù)器。落計數(shù)器。菌落特征：菌落特征： 形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡 黃色（如果培養(yǎng)基中加入黃色（如果培養(yǎng)基中加入0.1%TTC試劑，菌落為紅色）試劑，菌落為紅色） 邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或 扁平。扁平。 大小差異很大。大小差異很大。2008年5月49初始污染菌檢測初始污染菌檢測菌落計數(shù)菌落計數(shù)菌落計數(shù)基本規(guī)則1、選取平均菌落數(shù)在、選取平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋級作為報告菌落數(shù)測定范圍。之間的稀釋級作為報告菌落數(shù)測定范圍。 如只有如

49、只有1個稀釋級平均菌落數(shù)在個稀釋級平均菌落數(shù)在30300之間，則將稀釋級的菌落數(shù)乘以稀之間，則將稀釋級的菌落數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報告。釋倍數(shù)報告。2、如有兩個相鄰稀釋級的平均菌落數(shù)在、如有兩個相鄰稀釋級的平均菌落數(shù)在30300之間，則先計算兩稀釋級菌之間，則先計算兩稀釋級菌落數(shù)的比值。落數(shù)的比值。 高稀釋級的平均平板菌落數(shù)高稀釋級的平均平板菌落數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)比值比值= 低稀釋級的平均平板菌落數(shù)低稀釋級的平均平板菌落數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)當(dāng)比值當(dāng)比值2時，則以時，則以2個稀釋級的平均菌落數(shù)均值報告。當(dāng)比值個稀釋級的平均菌落數(shù)均值報告。當(dāng)比值2時，則以低稀時，則以低稀釋級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。

50、釋級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。3、如各稀釋級平均菌落數(shù)均在、如各稀釋級平均菌落數(shù)均在300以上，則按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報以上，則按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；如各稀釋級平均菌落數(shù)均在告；如各稀釋級平均菌落數(shù)均在30以下，則按最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍以下，則按最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。數(shù)報告。2008年5月50初始污染菌檢測初始污染菌檢測菌落計數(shù)菌落計數(shù)菌落計數(shù)基本規(guī)則4、如各稀釋級平均菌落數(shù)均不在、如各稀釋級平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最之間，則以最 接近接近30或或300的稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。的稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。5、如各稀釋級平均菌

51、落數(shù)均無菌落生長或最低稀釋級平如各稀釋級平均菌落數(shù)均無菌落生長或最低稀釋級平 均菌落數(shù)小于均菌落數(shù)小于1時，應(yīng)報告菌數(shù)為時，應(yīng)報告菌數(shù)為10個個/g或或ml。6、如有、如有3個稀釋級平均菌落數(shù)均在個稀釋級平均菌落數(shù)均在30300之間，則以后之間，則以后2級計算級間級計算級間比值報告。比值報告。7、菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在、菌落計數(shù)的報告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告。大于以內(nèi)時，按實有數(shù)值報告。大于100時，采用二位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)值后面，應(yīng)以四舍五入法計算。時，采用二位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)值后面，應(yīng)以四舍五入法計算。在報告菌落數(shù)為在報告菌落數(shù)為“不可計不可計”時，應(yīng)表明樣品的稀

52、釋度。時，應(yīng)表明樣品的稀釋度。2008年5月51初始污染菌檢測初始污染菌檢測菌落計數(shù)菌落計數(shù)細菌計數(shù)結(jié)果及報告方法例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù)個/g或個/ml報告方式個/g或個/ml10-110-210-311365164201640016000或1.610422760295461.63800038000或3.810432890271602.22710027000或2.71044不可計4650513513000510000或5.1105527115270270或2.71026不可計305123050031000或3.11042008年5月52 控制菌的檢查:參照藥典200

53、5版、GB15979-2002 1.1.大腸埃希菌大腸埃希菌 BLBL增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)MUGMUG培養(yǎng)培養(yǎng)靛基質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗 具體檢查見表具體檢查見表1 1： 結(jié)果判斷結(jié)果判斷 MUGMUG陽性、靛基質(zhì)陰性，或陽性、靛基質(zhì)陰性，或MUGMUG陰性、靛基質(zhì)陽性，陰性、靛基質(zhì)陽性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)養(yǎng)18182424小時。若平板上無菌落生長、或生長的菌小時。若平板上無菌落生長、或生長的菌落與表落與表3 3所列的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未

54、檢出所列的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出大腸桿菌。若有可疑菌落，進行大腸桿菌。若有可疑菌落，進行IMVicIMVic。2008年5月53表表3大腸埃希菌菌落形態(tài)特征大腸埃希菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基培養(yǎng)基 菌落形態(tài)菌落形態(tài)曙紅亞甲藍瓊曙紅亞甲藍瓊呈紫黑色呈紫黑色,淺黑色淺黑色,藍紫色或粉色藍紫色或粉色,菌菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心落中心呈深紫色或無明顯暗色中心,圓形圓形,稍凸起稍凸起,邊緣整齊邊緣整齊,表面光滑表面光滑,濕潤濕潤,常有金屬光澤常有金屬光澤.麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂鮮桃紅色或微紅色鮮桃紅色或微紅色,菌落中心呈深桃菌落中心呈深桃紅色紅色,圓形圓形,扁平扁平,邊緣整齊邊緣整齊,表面光表

55、面光滑滑.2008年5月54表表1 大腸桿菌的檢查大腸桿菌的檢查試驗組試驗組培養(yǎng)培養(yǎng)基基 加入加入培養(yǎng)培養(yǎng)時間時間h h5mlMUG5mlMUG培養(yǎng)基培養(yǎng)基5h5h、24h36624h366nmnm紫外紫外燈觀察燈觀察24h24h后加入后加入靛基質(zhì)靛基質(zhì)供試品供試品陽性陽性對照對照膽鹽膽鹽乳糖乳糖培養(yǎng)培養(yǎng)基基100ml100ml10ml10ml供試液供試液+ + 5050100cfu100cfu大腸大腸24-4824-480.2ml0.2ml有熒光有熒光 玫瑰紅玫瑰紅供試品供試品10ml10ml供試液供試液0.2ml0.2ml無熒光無熒光 試劑本色試劑本色陰性陰性對照對照10ml10ml稀釋劑

56、稀釋劑0.2ml0.2ml無熒光無熒光 試劑本色試劑本色2008年5月55表表2 2結(jié)果判斷結(jié)果判斷MUG-IMUG-I麥康凱培養(yǎng)基麥康凱培養(yǎng)基IMVicIMVic結(jié)果結(jié)果+ +檢出大腸桿菌- -未檢出+ -無菌生長未檢出- +無菌生長未檢出+ -有菌生長-+- -檢出大腸桿菌- +有菌生長+-檢出大腸桿菌2008年5月562.2.金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)營養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)平板（高鹽）劃線培養(yǎng)平板（高鹽）劃線培養(yǎng)觀察觀察血漿凝血漿凝固酶試驗固酶試驗 具體檢查方法見表具體檢查方法見表3 3：2008年5月57表表3 3 金黃色葡萄球菌的檢查金黃色葡萄球菌的檢查試驗組試驗組 培

57、培養(yǎng)養(yǎng)基基 加入加入培養(yǎng)時培養(yǎng)時間間h h再培養(yǎng)再培養(yǎng) 結(jié)果結(jié)果供試品供試品陽性對陽性對照照營營養(yǎng)養(yǎng)肉肉湯湯100100mlml10ml10ml供供試液試液+ + 5050100cfu100cfu金葡金葡18182424小時，小時，必要時必要時可延至可延至4848小時小時劃線接種于卵劃線接種于卵黃氯化鈉瓊脂黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露培養(yǎng)基或甘露醇氯醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板基的平板上，培養(yǎng)上，培養(yǎng)24247272小時。小時。典型菌落生長典型菌落生長供試品供試品10ml10ml供供試液試液? ?陰性陰性對照對照10ml10ml稀稀釋劑釋劑無菌落生長無菌落生長2008年5月58表表4 4

58、金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)特征金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)特征 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 菌落形態(tài)菌落形態(tài)卵黃氯化鈉瓊脂卵黃氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑1 12mm2mm。甘露醇氯化鈉瓊脂甘露醇氯化鈉瓊脂 金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)，菌落直徑色環(huán)，菌落直徑0.70.71mm1mm。 平板上無菌落生長或生長的菌落不同于表平板上無菌落生長或生長的菌落不同于表4 4所列特征，判所列特征，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。供試品未檢出金黃色葡萄球菌。 平板上生長的菌落與表平

59、板上生長的菌落與表4 4所列的菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑所列的菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑選選2 23 3個菌落，分別接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)個菌落，分別接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)181824 24 小時。取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進行革蘭染色，并接種小時。取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進行革蘭染色，并接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18182424小時，作血漿凝固酶試驗。小時，作血漿凝固酶試驗。2008年5月59表表5 5金黃色葡萄球菌鑒定金黃色葡萄球菌鑒定鑒定方法鑒定方法 結(jié)果結(jié)果革蘭氏革蘭氏染色染色 G+ G+球菌，球菌，呈葡萄狀排列無芽孢、無莢膜呈葡萄狀排列無芽孢、

60、無莢膜血漿凝血漿凝固酶試驗固酶試驗(玻片法玻片法)陽性對照管陽性對照管血漿凝固應(yīng)為陽性血漿凝固應(yīng)為陽性可疑菌株培養(yǎng)液可疑菌株培養(yǎng)液 若血漿凝固者則檢出金葡菌若血漿凝固者則檢出金葡菌陰性對照管陰性對照管血漿應(yīng)流動自如血漿應(yīng)流動自如2008年5月603.3.銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌增菌培養(yǎng)平板劃線培養(yǎng)觀察 具體檢查方法見表8：2008年5月61表表5 5 銅綠假單胞菌的檢查（一）銅綠假單胞菌的檢查（一）試驗組試驗組培養(yǎng)基培養(yǎng)基加入加入培養(yǎng)時培養(yǎng)時間間h h培養(yǎng)基培養(yǎng)基結(jié)果結(jié)果供試品陽供試品陽性對照性對照膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml10ml供試液+ 50100cfu綠膿18 24h，必要時延長至48h劃