兒童急性白血病細(xì)胞視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的表達(dá)及臨床意義

1、兒童急性白血病細(xì)胞視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的表達(dá)及臨床意義 作者：袁向亮，趙惠君，蔣黎敏，徐，袁曉軍，湯靜燕，沈立松【摘要】 本研究檢測(cè)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（retinoblastoma protein, pRb）在不同類型兒童急性白血病細(xì)胞中的表達(dá)，并探討其表達(dá)水平與細(xì)胞周期、危險(xiǎn)度、微小殘留?。╩inimal residual disease, MRD）監(jiān)測(cè)、預(yù)后等臨床診斷治療監(jiān)測(cè)指標(biāo)的關(guān)系。對(duì)89例初發(fā)小兒急性白血病患者（包括25例AML, 10例T-ALL, 54例B-ALL）及7例正常對(duì)照骨髓標(biāo)本，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分別檢測(cè)治療前后視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的表達(dá)情況，并對(duì)部分病例進(jìn)行細(xì)胞周期

2、分析。 結(jié)果表明： 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)pRb的表達(dá)準(zhǔn)確直觀；在各種類型的急性白血病中pRb的高水平表達(dá)具有普遍性，同一患兒白血病細(xì)胞pRb的表達(dá)明顯高于非白血病細(xì)胞，在不同類型的急性白血病中pRb均有缺失表達(dá)； pRb的表達(dá)水平與白血病細(xì)胞的細(xì)胞循環(huán)周期可能存在一定的相關(guān)性，pRb表達(dá)陽(yáng)性的B-ALL中處于G1期的白血病細(xì)胞數(shù)顯著高于pRb表達(dá)陰性的病例(92% vs 77%)； B-ALL中，MRD陽(yáng)性組pRb的表達(dá)量明顯低于陰性組，且差值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且治療前后非白血病細(xì)胞的pRb表達(dá)水平是穩(wěn)定的； pRb的表達(dá)量與B-ALL早期治療預(yù)后之間存在一定相關(guān)性，B-

3、ALL預(yù)后不良組pRb的表達(dá)量低于預(yù)后良好組（P<02 / 2305）。結(jié)論： pRb在兒童急性白血病細(xì)胞中存在高水平表達(dá)或缺失等異常形式的表達(dá)差異，pRb的表達(dá)與白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期、MRD監(jiān)測(cè)、早期治療反應(yīng)的預(yù)后評(píng)價(jià)等存在相關(guān)性，對(duì)于B-ALL的治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估具有指導(dǎo)意義。 【關(guān)鍵詞】 急性白血病； 兒童急性白血病；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白； MRD監(jiān)測(cè)Expression of Retinoblastoma Protein in Child Acute Leukemia Cells and Its Clinical SignificanceAbstractThe resear

4、ch was aimed to detect the expression levels of retinoblastoma protein (pRb) in child acute leukemia cells, and to explore its possible association with leukemia cells cycle, the risk of disease, minimal residual disease (MRD) monitoring and prognosis of B-ALL. Flow cytometry (FCM) was used to detec

5、t the expression of pRb in 89 cases of acute leukemia (including 25 AML, 10 T-ALL and 54 B-ALL) and bone marrows from 7 normal children (control group). Meanwhile the cell cycle in some cases was analyzed . The results showed that (1) the FCM could accurately detect the expression of pRb in acute le

6、ukemia cells; (2) the high level of pRb expression was frequent in all types of child acute leukemias. In the same case, the expression of pRb was significantly increased in leukemia cells when compared with non-leukemia cells. And no detectable pRb protein was found in partial cases of acute leukem

7、ia; (3) there was a close relation between expression of pRb and the cell cycle of leukemia cells, the number of G1 phase cells in pRb positive case of B-ALL was more than that in pRb negative case (92% vs 77%); (4) in B-ALL, the level of pRb expression in MRD positive group was significantly lower

8、than that in MRD negative group (P<0.05), but pRb expression was stable in non-leukemia cells during therapy; (5) pRb expression was related to the early response to therapy in B-ALL, the expression of pRb was significantly increased in sensitive group when compared with insensitive group (P&

9、amp;lt;005). It is concluded that high level or absence of pRb expression can be found in child acute leukemia cells. The expression of pRb is positively related to cell cycle of leukemia cells, MRD monitoring and the early response to therapy. In short, the detection of pRb expression level can gui

10、de the therapy and the evaluation of prognosis in B-ALL.Key worksacute leukemia; child acute leukeima; retinoblastoma protein; MRD monitor視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（retinoblastoma protein, pRb）作為細(xì)胞周期的重要調(diào)控因子以及它的基因作為第一個(gè)被克隆的抑癌基因在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌等多種腫瘤中異常表達(dá)、缺失或突變等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。以往研究表明，急性白血病細(xì)胞中pRb的表達(dá)狀態(tài)與白血病細(xì)胞對(duì)化療的敏感性及患者

11、生存期有關(guān)1，2。因此研究pRb的表達(dá)情況對(duì)闡明白血病的發(fā)病機(jī)制及對(duì)于白血病的診斷、治療監(jiān)測(cè)具有重要意義。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)89例小兒急性白血病患者（包括AML、T-ALL、B-ALL）標(biāo)本的檢測(cè)，研究pRb蛋白在急性白血病的表達(dá)情況以及pRb蛋白的表達(dá)水平及其與細(xì)胞周期、急性B淋巴系白血病危險(xiǎn)度分期、微小殘留?。╩inimal residual disease, MRD）監(jiān)測(cè)和治療預(yù)后的相關(guān)性。材料和方法病例2003年2月2004年11月，上海兒童醫(yī)學(xué)中心收治的初發(fā)急性白血病患兒89例。在89例中急性B淋巴系白血?。˙-ALL）54例，男32例，女22例，中位年齡5歲；急性T淋巴系白血病

12、（T-ALL）10例，男9例，女1例，中位年齡6歲；急性髓性白血病(AML)25例，男17例，女8例，中位年齡7歲。所有患者都經(jīng)FAB分型法以及流式細(xì)胞術(shù)免疫分型法確診，并用PVDL（泊尼松、長(zhǎng)春新堿、柔紅霉素、左旋門冬酰胺酶）方案進(jìn)行誘導(dǎo)緩解治療。在第1療程結(jié)束而達(dá)到臨床緩解后，對(duì)部分B-ALL病例進(jìn)行MRD監(jiān)測(cè)。正常對(duì)照7例，均為上海兒童醫(yī)學(xué)中心兒?？企w檢正常的兒童，中位年齡6.6歲。主要儀器與試劑流式細(xì)胞儀（FACS Calibure Becton Dickinson產(chǎn)品）；Anti-pRb-FITC (Becton Dickinson PharMingen產(chǎn)品)； 鼠IgG1-FITC

13、(Becton Dickinson PharMingen產(chǎn)品)作為同型對(duì)照；CD45-PC5；8E透膜劑(美國(guó)St.Jude Children's Research Hospital, Dr Dario Campana 贈(zèng)送)；胎牛血清（Gibco產(chǎn)品）；牛血清白蛋白（Sigma產(chǎn)品）； Ficoll淋巴細(xì)胞分離液。標(biāo)本收集及處理取白血病患者和正常兒童0.5 ml骨髓液，用Ficoll 分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，用PBSA (含0.2 % 牛血清白蛋白及0.2 % 疊氮鈉的PBS)洗2遍后懸浮。調(diào)節(jié)每管細(xì)胞數(shù)為（2-3） ×106, 先用表面抗原標(biāo)志CD45-PC5標(biāo)記，孵育10

14、分鐘。用PBSA洗2 遍，加入8E透膜劑避光40分鐘。離心5分鐘去上清，加入Wash 緩沖液(含5 % 胎牛血清，1.5 % 牛血清白蛋白，0.0055% EDTA 和0.2% 疊氮鈉的PBS) 10分鐘。離心去上清，用Wash 緩沖液再洗1遍。加入Anti-pRb-FITC和鼠IgG1-FITC抗體進(jìn)行胞漿染色10分鐘，用Wash 緩沖液洗2 遍，多聚甲醛懸浮待用。作細(xì)胞周期分析時(shí)，作PI DNA染色處理，先將細(xì)胞用30%乙醇固定，37孵育20分鐘，PI染液染色，室溫封閉至上機(jī)分析。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析用FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)，測(cè)定前先用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校準(zhǔn)儀器。用CellQues

15、t軟件(version 3. 2)獲取分析10 000個(gè)細(xì)胞。不同的抗體組合及不同的患者標(biāo)本都用同一設(shè)定條件檢測(cè)。應(yīng)用CD45/SSC設(shè)門法將不同型的白血病細(xì)胞與正常細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。pRb表達(dá)水平以除去陰性對(duì)照的百分比例表示。每一標(biāo)本均進(jìn)行免疫分型檢測(cè)，并對(duì)B-ALL病例進(jìn)行MRD篩選。MRD監(jiān)測(cè)患者誘導(dǎo)治療結(jié)束后的骨髓標(biāo)本，經(jīng)Ficoll分離液分離單個(gè)核細(xì)胞后, 用篩選時(shí)確認(rèn)為有效的抗體組合進(jìn)行4色熒光標(biāo)記檢測(cè)。應(yīng)用Shen等建立的B-ALL MRD監(jiān)測(cè)方法檢測(cè)3。早期預(yù)后反應(yīng)判定根據(jù)上海兒童醫(yī)學(xué)中心ALL-XH-99及NHL-99方案按序化療： ALL患兒以治療第7天強(qiáng)的松試驗(yàn)作為腫瘤細(xì)胞對(duì)

16、激素治療的敏感性評(píng)估指標(biāo)。強(qiáng)的松治療第7天外周血白血病細(xì)胞下降至1 000/l為強(qiáng)的松反應(yīng)良好（pGR）組，1 000/l 為強(qiáng)的松反應(yīng)不良（pPR）組； ALL患兒以第19天骨髓像及MRD檢測(cè)作為腫瘤細(xì)胞對(duì)早期聯(lián)合化療的敏感性評(píng)估指標(biāo)。第19天骨髓中鏡下原始淋巴細(xì)胞小于5%，MRD陰性定為早期聯(lián)合化療反應(yīng)良好組，大于5%，MRD陽(yáng)性則為早期聯(lián)合化療反應(yīng)不良組； 以治療第35±10天達(dá)緩解及部分緩解作為早期聯(lián)合化療反應(yīng)良好組，反之為早期聯(lián)合化療反應(yīng)不良組。以上標(biāo)準(zhǔn)只要符合其中一項(xiàng)，或不符合但治療過(guò)程中死亡、發(fā)生急性粒細(xì)胞白血病變等情況即被列為預(yù)后不好，反之為預(yù)后良好。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用S

17、PSS 11.5和Sigma Plot 9.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)pRb值作相關(guān)分析。對(duì)各組數(shù)據(jù)首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布數(shù)據(jù)以±SD表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)M及其5%-95%分布范圍表示，組間數(shù)據(jù)分析采用秩和檢驗(yàn)。率的比較采用2檢驗(yàn)。相關(guān)性采用線性相關(guān)分析。P值<0.05作為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性意義標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果pRb在兒童急性白血病中的表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病細(xì)胞中pRb的表達(dá)由于白血病患兒骨髓標(biāo)本中的白血病細(xì)胞CD45表達(dá)較正常細(xì)胞偏低，應(yīng)用CD45/SSC設(shè)門法可以將患者骨髓中白血病細(xì)胞與正常細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。在直方圖中以除去陰性對(duì)照的Anti-pRb-FITC熒光表達(dá)區(qū)域設(shè)門

18、M1，計(jì)算pRb的表達(dá)百分?jǐn)?shù)，以此來(lái)評(píng)估患兒腫瘤細(xì)胞的pRb表達(dá)水平。對(duì)每一例標(biāo)本同時(shí)設(shè)門檢測(cè)白血病細(xì)胞與非白血病細(xì)胞的pRb表達(dá)情況，結(jié)果見(jiàn)圖1。pRb在兒童急性白血病中的表達(dá)兒童急性白血病患兒骨髓腫瘤細(xì)胞的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的表達(dá)值呈非正態(tài)分布，其具體表達(dá)量見(jiàn)附表。各類白血病中腫瘤細(xì)胞pRb的表達(dá)量明顯高于正常水平，與正常對(duì)照相比均存在顯著性差異（AML P=0.019, T-ALL P=0.002, B-ALL P=0001）。并且在同一類急性白血病中白血病細(xì)胞pRb 的表達(dá)量顯著高于非白血病細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。急性白血病組間pRb的表達(dá)量也不盡相同，

19、差異有顯著性意義（P=0.015）。組間兩兩比較，B-ALL中pRb的表達(dá)量高于AML，但差異無(wú)顯著性意義（P>0.05）, T-ALL中pRb的表達(dá)量高于B-ALL，也高于AML且差異均有顯著性意義（P<0.05）。將B-ALL和T-ALL同歸類為一類急性淋巴系白血病，比較ALL與AML中間表達(dá)量的差異，ALL 22.33 (0.63-74.30) 顯著高于AML 12.51(0.25-64.43)（P=0.018）。同時(shí)，我們檢測(cè)到在部分白血病細(xì)胞中pRb有缺失表達(dá)，缺失表達(dá)率分別為： AML 7/25(28%), T-ALL 1/10(10%), B-ALL

20、6/54(11%), AML的缺失率明顯高于其他型白血病。缺失率的比較用卡方檢驗(yàn)，組間比較及兩兩比較均未發(fā)現(xiàn)差異的顯著性（P=0.136）(P>0.05)。pRb的表達(dá)水平與白血病細(xì)胞周期有關(guān)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）是細(xì)胞周期的抑制子，為驗(yàn)證pRb的表達(dá)是否能夠?qū)⒛[瘤細(xì)胞限制在G1期，我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀的PI DNA染色法進(jìn)行了6例不同類型白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在所有檢測(cè)的6例標(biāo)本中非白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期分析是一致的，但在腫瘤細(xì)胞中pRb表達(dá)陽(yáng)性的T-ALL和AML中處于G1期的白血病細(xì)胞數(shù)高于pRb表達(dá)陰性的病例，但差異不明顯，而pRb表達(dá)陽(yáng)性的B-ALL處于G

21、1期的白血病細(xì)胞數(shù)卻顯著高于pRb表達(dá)陰性的病例（92% vs 77%）（圖2）。這種差異性可能具有重要基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用意義，值得我們今后分析更多病例，更深入的探討。Table . Expression of pRb in child acute leukemia（略）pRb與微小殘留病監(jiān)測(cè)的相關(guān)性對(duì)初發(fā)患兒標(biāo)本做pRb表達(dá)檢測(cè)的同時(shí)，根據(jù)我們以前建立的急性B系淋巴細(xì)胞白血病MRD監(jiān)測(cè)的方法，我們對(duì)其中的37例標(biāo)本作了19天及早期緩解后的MRD檢測(cè)，比較初發(fā)病人的pRb表達(dá)水平與MRD的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，在B-ALL中MRD陰性組為21例，pRb表達(dá)中間值為 22.90 (0.75-92.91)；M

22、RD陽(yáng)性組為16例，pRb為 9.50 (0.40-44.00) 。MRD陽(yáng)性組中pRb的表達(dá)量明顯低于陰性組，且差值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.047）。為驗(yàn)證白血病的治療過(guò)程中pRb表達(dá)水平的檢測(cè)是否具有重復(fù)性，我們又對(duì)大部分作19天MRD檢測(cè)的骨髓標(biāo)本檢測(cè)其治療后的pRb表達(dá)水平，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在同一患者標(biāo)本中初發(fā)和MRD檢測(cè)時(shí)非白血病細(xì)胞中pRb表達(dá)水平是穩(wěn)定（圖3）。如圖示該病例患兒初發(fā)時(shí)骨髓中非白血病細(xì)胞的pRb表達(dá)量為8.03%，做19天MRD檢測(cè)時(shí)骨髓中非白血病細(xì)胞的pRb表達(dá)量為8.04%。pRb與危險(xiǎn)度的相關(guān)性分析我們研究pRb與危險(xiǎn)度的關(guān)系擬分析pRb的表達(dá)量是否與白血病的危險(xiǎn)度有關(guān)

23、聯(lián)，從而決定是否對(duì)于治療起作用。對(duì)46例檢測(cè)過(guò)pRb表達(dá)且接受治療的患兒進(jìn)行的危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)表明：低危組（LR）, 中危組（MR），高危組（HR） pRb的表達(dá)量中間值依次為16.46 (0.61-63.52 )， 22.90 (2.04-74.35)， 29.87 (0.44-92.82)。雖然低危組低于中危組、高危組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)三者比較 (P=0.372) 或組間兩兩比較 (P低中=0.188; P低高=0.770; P中高=0.354) 均未發(fā)現(xiàn)差異的顯著性。pRb與早期治療預(yù)后的相關(guān)性研究在檢測(cè)pRb表達(dá)的41例病人中，我們對(duì)其進(jìn)行了治療效果的綜合評(píng)價(jià)，判定標(biāo)準(zhǔn)如前。其中預(yù)后良好組為24例，

24、pRb 29.75（2.06-72.33）；預(yù)后不好組17例，pRb 18.62 (0.40-41.04)。 預(yù)后不好組pRb的表達(dá)量低于預(yù)后良好組，兩者比較有顯著性差異（P=0.037）。對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，pRb的表達(dá)量與治療預(yù)后之間存在一定相關(guān)性（r =-0.335, P=0.032）。討論視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因 (Rb) 是第一個(gè)被克隆成功的腫瘤抑制基因, 其編碼的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb），既可通過(guò)與E2F、Elf-1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合成復(fù)合物阻止轉(zhuǎn)錄因子活化從而控制著細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化, 又可通過(guò)調(diào)控與細(xì)胞增殖有關(guān)的原癌基因的功能如c-myc、c-fos等抑制細(xì)胞增殖促進(jìn)細(xì)胞分化。Rb

25、基因的異常造成pRb缺失表達(dá)或表達(dá)異常，細(xì)胞失去自身生長(zhǎng)負(fù)調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生4。自Rb作為抑癌基因克隆成功后，關(guān)于其在血液系統(tǒng)腫瘤的異常表達(dá)研究表明，Rb的異常表達(dá)與白血病的發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。Sauerbrey等5研究發(fā)現(xiàn)在急性白血病中Rb失活的頻率占30%-64%, Rb基因結(jié)構(gòu)異常達(dá)18%。在急性髓性白血病中, Rb蛋白缺失占19%-55%。Rb基因的缺失在腫瘤中是一普遍現(xiàn)象，Rb基因缺失的結(jié)果是導(dǎo)致pRb蛋白水平的低表達(dá)或不表達(dá)。在各類急性白血病中我們均檢測(cè)到有pRb蛋白水平的缺失表達(dá)，缺失表達(dá)率分別為： AML 28%（7/25）, T-ALL 10%（1/10）, B-ALL 1

26、1%（6/54）。AML的缺失率高于其他型白血病，這與國(guó)外報(bào)道結(jié)果基本一致2。AML與B-ALL，T-ALL缺失率的差異無(wú)顯著性，說(shuō)明pRb在各類白血病中的缺失表達(dá)具有普遍性。在我們研究的89例新發(fā)各類急性白血病中，pRb的平均表達(dá)量明顯高于正常水平，ALL的表達(dá)水平高于AML且有顯著性差異。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在多例病人中pRb的表達(dá)中間值18.37（0.55-70.37）大大高于正常水平。因?yàn)橐郧暗难芯勘砻鳎琾Rb的表達(dá)與其磷酸化狀態(tài)以及處于腫瘤特異性的S期腫瘤細(xì)胞比例呈正相關(guān)6，所以我們發(fā)現(xiàn)的各類白血病中高水平表達(dá)的pRb可能以磷酸化形式存在。雖然高度表達(dá)，但pRb失去活性，釋放與之結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子E

27、2F或暴露其結(jié)合位點(diǎn)，促進(jìn)細(xì)胞周期越過(guò)G1/S限制點(diǎn)，所以pRb這種形式的高水平表達(dá)也可提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍。在白血病的發(fā)生中，可能存在細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶等pRb上游調(diào)控因子的異常表達(dá)，使pRb高異常表達(dá)，高磷酸化。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，pRb影響腫瘤細(xì)胞的增殖不僅僅是通過(guò)作為細(xì)胞周期的調(diào)控子發(fā)揮重要作用，還可能通過(guò)其他作用機(jī)制如抑制細(xì)胞凋亡等發(fā)揮作用7。所以白血病腫瘤細(xì)胞中pRb不僅缺失表達(dá)可參與腫瘤的發(fā)生，pRb的高水平表達(dá)可能通過(guò)不同的機(jī)制如高磷酸化狀態(tài)，抑制細(xì)胞凋亡等導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生?？梢?jiàn)pRb的缺失表達(dá)及高水平異常表達(dá)均可能參與急性白血病的發(fā)生發(fā)展。從我們6例pRb不同表達(dá)水

28、平的各種急性白血病細(xì)胞周期分析中得出，pRb不同表達(dá)水平的T-ALL、AML中處于G1期的白血病細(xì)胞數(shù)差異不大，而B(niǎo)-ALL中pRb表達(dá)陽(yáng)性病例G1期的白血病細(xì)胞數(shù)卻高于pRb表達(dá)陰性的病例，這表明pRb在不同類型白血病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著不同的作用，這還有待于我們進(jìn)一步探討。我們利用此方法檢測(cè)得出，在B-ALL疾病診斷時(shí)的不同的危險(xiǎn)度組中pRb的表達(dá)無(wú)顯著性差異，不能作為判別危險(xiǎn)度的一項(xiàng)指標(biāo)。目前MRD對(duì)于急性白血病特別是B-ALL的治療監(jiān)測(cè)起著重要作用，分析MRD陽(yáng)性組和陰性組pRb的表達(dá)發(fā)現(xiàn)MRD陽(yáng)性組中pRb的表達(dá)量顯著低于陰性組。并且我們檢測(cè)的幾例緩解后作MRD時(shí)的骨髓細(xì)胞發(fā)現(xiàn)

29、，初發(fā)時(shí)pRb高表達(dá)而治療后表達(dá)明顯降低或不再表達(dá)，而非白血病細(xì)胞pRb的表達(dá)量是穩(wěn)定的。這一現(xiàn)象的具體應(yīng)用還需進(jìn)一步臨床標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，但至少這可提示pRb的表達(dá)可以作為一項(xiàng)MRD的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)用于臨床的可能性。對(duì)一些臨床上常用的化療藥物作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，其發(fā)揮作用的實(shí)質(zhì)是通過(guò)調(diào)控pRb網(wǎng)絡(luò)各組分，使無(wú)限增殖的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞周期停止進(jìn)行或誘導(dǎo)其凋亡8。所以pRb的異常表達(dá)可影響化療藥物的作用。以往學(xué)者報(bào)道，pRb的表達(dá)與非霍奇金淋巴瘤、急性粒系白血病等血液系統(tǒng)惡性腫瘤的預(yù)后的關(guān)系結(jié)果不一，并缺少系統(tǒng)的研究pRb表達(dá)量與急性B系淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后關(guān)系的資料。我們的結(jié)果表明，在B-ALL早期治療反應(yīng)

30、預(yù)后不好組pRb的表達(dá)量低于預(yù)后良好組，兩者比較有顯著性差異。在檢測(cè)的4例pRb陰性表達(dá)的B-ALL患者中有3例預(yù)后差（占75%），而正常的預(yù)后差的比例占41.5%，說(shuō)明pRb低表達(dá)的患者預(yù)后相對(duì)較差，所以初診時(shí)檢測(cè)pRb的表達(dá)水平對(duì)于判斷療效和預(yù)后有一定的意義。綜上所述，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兒童急性白血病中pRb的表達(dá)研究結(jié)果表明，pRb在白血細(xì)胞中存在缺失或高度表達(dá)等異常形式的表達(dá)，可能通過(guò)不同的機(jī)制在白血病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用，在不同類型的急性白血病細(xì)胞中pRb的表達(dá)也存在一定差異。而且pRb的表達(dá)與MRD檢測(cè)、早期治療反應(yīng)的預(yù)后存在相關(guān)性，這對(duì)于B-ALL的治療監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估具有指導(dǎo)意義

31、?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Jamal R, Gale RE, Shaun N, et al. The retinoblastoma gene (rb1) in acute myeloid leukaemia analysis of gene rearrangements, protein expression and comparison of disease outcome. Br J Haematol, 1996; 94:342-3512 Korkolopoulou PA, Angelopoulou MK, Kontopidou FN, et al. Retinoblastoma gene product and P21 (WAF1, CIP1) protein e