ISO-15189試驗(yàn)室認(rèn)可性能驗(yàn)證方案教學(xué)提綱

1、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室ISO 15189認(rèn)可性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方案為了滿足目前醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的需求保證實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，特制定本方案。適用于強(qiáng)生 VITROS產(chǎn)品的試驗(yàn)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證，包括V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600 上所能開展的所有定性檢測項(xiàng)目。本方案從準(zhǔn)確度、精密度、參考范圍、線性范圍以及方法學(xué)比對5個方面對各個試驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行評價。一、 精密度（Precision ）:精密度是指在規(guī)定條件下所獲得的 檢測結(jié)果的接近程度，表示測定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。精密度通常用不精密度表示?？梢苑謩e評價連續(xù)精密度（批內(nèi)精密度）、重復(fù)性不精密度（中間精密度，包括批間、日間精密度

2、等）和再現(xiàn)性精密度。本方案采用批內(nèi)和天間兩種方法對各個試驗(yàn)項(xiàng)目的精密度進(jìn)行評價。全部實(shí)驗(yàn)過程使用同批號試劑和質(zhì)控品，并且保證檢測當(dāng)日質(zhì)控在控。1、批內(nèi)精密度（連續(xù)精密度）：方法：在檢測患者標(biāo)本過程中，連續(xù)運(yùn)行高低水平質(zhì)控品各20次,記錄檢測結(jié)果。計算批內(nèi)精密度的 CV值和SD值。結(jié)果評價（1）廠家評價標(biāo)準(zhǔn)：計算精密度指數(shù)=驗(yàn)證SD/廠商SD 精密度指數(shù)要求小于等于1,或者實(shí)測CV小于等于廠家要求的CY 兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。（2）按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在 CLIA88允許誤差的1/4以內(nèi)，見美國CLIA' 88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。2、天間精密度（中間精

3、密度）：方法：同樣使用兩個水平的質(zhì)控品，若需復(fù)溶凍干質(zhì)控品做實(shí)驗(yàn)，要 注意選擇產(chǎn)品的穩(wěn)定性和瓶間差。要嚴(yán)格控制每次復(fù)溶凍干品時的操 作手法。連續(xù)測試20天，每天檢測1次。在次過程中不能更換試劑批 號及質(zhì)控品批號，是否需要重新定標(biāo)則取決于實(shí)驗(yàn)室。測試完成后記錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價(1)廠家評價標(biāo)準(zhǔn)：計算天間的SDtCVt,并計算精密度 指數(shù)=驗(yàn)證SD/廠商SD精密度指數(shù)要求小于等于1,或者實(shí)測CVJ、于 等于廠家要求的CM兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。(2)按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度應(yīng)在 CLIA88允許誤 差的1/3以內(nèi)，見美國CLIA' 88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。二、

4、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度(accuracy才旨檢測結(jié)果與被測量物真值之間的接近程度。是 分析測量范圍、分析靈敏度以及生物參考區(qū)間評價的基礎(chǔ)。準(zhǔn)確度的評價方法很多，比如檢測定值參考物質(zhì)，同參考方法進(jìn) 行比對，同有溯源性的檢測系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比對，衛(wèi)生部臨檢中 心質(zhì)評的匯報結(jié)果均可以作為評價準(zhǔn)確性的方法之一。本方案采 用測定定值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法來評價各個檢測項(xiàng)目的準(zhǔn)確度。定值 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用廠家定值標(biāo)準(zhǔn)品。方法：(1)試驗(yàn)期間保證機(jī)器狀態(tài)正常，保證試驗(yàn)當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控在控。(2)按廠家要求準(zhǔn)備各個項(xiàng)目的新批號定標(biāo)品(要與定標(biāo)時使用的定標(biāo)品批號不同)各一套，按照標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶(3)記錄該新批號定標(biāo)品的定值。(4)在設(shè)備上檢測各

5、個定標(biāo)品(多水平)的相關(guān)項(xiàng)目，每個水平 重復(fù)2次，記錄檢測結(jié)果，將檢測結(jié)果錄入準(zhǔn)確度評價 表格。結(jié)果評價：(1)廠家標(biāo)準(zhǔn)： 按照各定標(biāo)品各水平的定值和不確定度(廠家提 供)，來確定準(zhǔn)確度的偏倚范圍。計算實(shí)測均值的各項(xiàng)目各水 平定標(biāo)品的偏倚，與偏倚范圍相比較，來判斷偏倚是否可以接 受。詳見準(zhǔn)確度評價表，實(shí)測的均值如果落在該限度內(nèi)， 則為其準(zhǔn)確度認(rèn)為可被接受。(2)按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確度偏倚應(yīng)該在CLIA88允許誤差的1/2 以內(nèi)，見美國CLIA' 88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求。三、參考范圍驗(yàn)證參考NCCLSC28A蟻件，本方案僅對廠家提供的或者實(shí)驗(yàn)室正在使用的各個項(xiàng)目的參考范圍進(jìn)行驗(yàn)

6、證。方法：(1)選擇20個能夠代表實(shí)驗(yàn)室的健康總體的標(biāo)本。(2)保證試驗(yàn)系統(tǒng)運(yùn)行正常，依照標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測標(biāo)本。(3)運(yùn)行該20份標(biāo)本，記錄結(jié)果，將結(jié)果填入?yún)⒖紖^(qū)間驗(yàn)證表 格。結(jié)果評價 如果20個參考個體中不超過2例的檢測值在驗(yàn)證的參考限之外，廠 商或提供參考區(qū)間的實(shí)驗(yàn)室報告的 95嗦考區(qū)間可以接受。如果3例 以上超出界限，再選擇20個參考個體進(jìn)行驗(yàn)證，若少于或等于 2個 觀測值超過原始參考值，則可接受，若還有 3個超出參考限，需要重 新檢查各種條件，決定是否建立自己的參考區(qū)間。四、線性范圍分析測量范圍即定量檢測項(xiàng)目的線性范圍， 是整個檢測系統(tǒng)(包 括儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、檢驗(yàn)

7、人員等)對應(yīng)于系 列分析濃度的儀器最終輸出的信號間是否呈恒定比例的性能，是一個很重要的儀器性能分析指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)通過測定不同配比比例的高低值新鮮患者標(biāo)本，以驗(yàn)證實(shí)測值和理論值的線性關(guān)系，來評估每個檢測項(xiàng)目的線性范圍。方法：(1)實(shí)驗(yàn)室人員必須十分熟悉儀器的操作、質(zhì)量控制和定標(biāo)方法，以及正確的收集樣本。試驗(yàn)期間保證儀器狀態(tài)良好下，質(zhì)控在控。(2)全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間內(nèi)收集，如可能，單個分析 試驗(yàn)最好在一，天內(nèi)做完。(3)用于驗(yàn)證線性范圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測試所用的標(biāo)本類型相 同或相類似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素(如溶血、 黃疸、脂血等)。如果上述條件不可避免，則應(yīng)在最后的報告

8、中注明在評價實(shí)驗(yàn)中所用的標(biāo)本處理方法或基質(zhì)類型。注意: 收集的高濃度標(biāo)本應(yīng)盡可能的接近線性范圍高限。(4)按照線性評價表格要求配比標(biāo)本。將 H和L樣品按：5L、 4L+IH、3L+2H、2L十3H、1L十4H、5H關(guān)系各自配制棍合， 形成系列評價樣品。(5)難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用相應(yīng)稀釋液作系列 不同程度稀釋，形成系列評價樣品。(6)在線性評價表格記錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價：將數(shù)據(jù)填入線性評價表格，以 婕示各樣品的預(yù)期值， 以Y表示各樣品的實(shí)測值，得出散點(diǎn)圖。若所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)呈明顯直線趨勢，用直線回歸對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，得 直線回歸 Y=bX+a若r2>0,95 ,斜率b在1.00

9、±0.03范圍內(nèi)，可直 接判斷測定方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。五、用患者標(biāo)本進(jìn)行方法比對及偏倚評估實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備用一個新的檢測系統(tǒng)或測定方法(或新的試劑盒、新儀器 進(jìn)行病人標(biāo)本測定前，應(yīng)與原有的檢測系統(tǒng)或者公認(rèn)的參考方法-起檢測一批病人標(biāo)本，從測定結(jié)果間的差異了解新檢測系統(tǒng)或方法引人 后的偏倚。如果偏倚不大，或者偏倚量在允許誤差范圍內(nèi)，說明兩檢 測系統(tǒng)或方法對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，新檢測系統(tǒng)或方法替代 原有檢測系統(tǒng)或方法不會對臨床引人明顯偏倚，這樣的實(shí)驗(yàn)稱為方法學(xué)比較實(shí)驗(yàn)。在方法學(xué)比較中，常將新方法稱為實(shí)驗(yàn)方法，與之比較 的方法稱為比較方法。試驗(yàn)方法：(1)各種儀器處于良好的

10、工作狀態(tài)，嚴(yán)格按 SO操作。(2)檢驗(yàn)人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各個環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。(3)在整個實(shí)驗(yàn)中，保持實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都處于完整的質(zhì)量控 制之下，始終對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有校準(zhǔn)措施。(4)實(shí)驗(yàn)時間至少做5天，時間長一些更好，可以客觀反映實(shí)際情況。(5)至少做4時病人標(biāo)本，多一點(diǎn)更好。(6)盡可能使50%勺實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)， 各個標(biāo) 本分析物含量越寬越好。(7)不要使用對任一方法有干擾的標(biāo)本。(8)每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都能做雙份測定。例如，第l次序號為1、2.3.4、5.6 、7、8 ,第2次序號為8、7、6、5, 4、3、2.1。兩方法都按此實(shí)

11、驗(yàn)。(9)應(yīng)在2個小時內(nèi)兩種方法對同批標(biāo)本分別開始實(shí)驗(yàn)，最好使用當(dāng) 天采集的標(biāo)本。(10)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，記錄數(shù)據(jù)。保留原始數(shù)據(jù)。結(jié)果評價：(1)不采用已明確有人為誤差的結(jié)果。(2)將所有無明顯誤差的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄下來。但是，若兩種方法結(jié) 果的各自差值大于任一方法的批內(nèi)不精密度，應(yīng)查對標(biāo)本，并 重新實(shí)驗(yàn)。若找不出原因，應(yīng)保留數(shù)據(jù)備考。(3)整個實(shí)驗(yàn)一定要有內(nèi)部質(zhì)量控制，失控時結(jié)果必須重做。(4)對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的初步篩查：設(shè)比較方法測定結(jié)果為X值，實(shí)驗(yàn)方法測定結(jié)果為Y值。在 方法學(xué)比對表格上錄入檢測數(shù)據(jù)，若有40個標(biāo)本，則有80個X和 Y的結(jié)果。檢查每一方法內(nèi)現(xiàn)份測定值有無離群表現(xiàn)，先計算每一標(biāo)本 每一方

12、法成對結(jié)果的差值和差值的均值。 以4倍的各方法差值的均值 為判斷限，各方法內(nèi)標(biāo)本的成對差值都應(yīng)在限值內(nèi)， 說明雙份測定結(jié) 果符合要求。若原數(shù)據(jù)僅40例病人標(biāo)本的結(jié)果，剔除的數(shù)據(jù)應(yīng)另做實(shí)驗(yàn)補(bǔ) 上。若有1例以上需剔除，應(yīng)檢查原因是標(biāo)本原因，其他數(shù)據(jù)仍可使 用。無法找出原因，則保留使用所有數(shù)據(jù)。若最大差異超過臨床允許 誤差，應(yīng)從儀器、試劑、方法上尋找原因，停止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。(5)在方法學(xué)比對表格上，以X勻值、Y均值和(Y-X)、X乍圖， 通過這兩種圖了解線性關(guān)系，即有無明顯離群點(diǎn)，是否呈恒定變異等 情況。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果具良好線性關(guān)系，繼續(xù)處理數(shù)據(jù)。(6) X、Y關(guān)系實(shí)驗(yàn)點(diǎn)有無離群表現(xiàn)先看圖在無明顯離群點(diǎn)。

13、若無，可作以后的統(tǒng)計；若有，應(yīng)對X、Y配 對值作離群值計算。將每一個標(biāo)本兩個方法的前后兩個測定值一一對 應(yīng)，求出第1個X與第1個Y的差值和第2個X與第2個Y的差值， 并計算出所有標(biāo)本總的平均差值，以4倍的平均差值為判斷限值。所 有差值都不應(yīng)超出限值。若有，為離群點(diǎn)，僅一點(diǎn)離群點(diǎn)，剔除。有 一點(diǎn)以上離群點(diǎn)，需查原因，判斷是否保留數(shù)據(jù)。若原因不清，不能 隨意剔除，全部保留作統(tǒng)計分析，或者用一批新標(biāo)本重做評價。凡有 剔除的，應(yīng)另用標(biāo)本補(bǔ)做。(7)標(biāo)本內(nèi)分析物含量分布是否適當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)。相關(guān)系數(shù) r常用來表 示兩個變量間互相關(guān)系密切的程度。在直線回歸統(tǒng)計時，除所 有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和回歸線間的離散度會影響r值的大小

14、外，實(shí)驗(yàn)點(diǎn)對 應(yīng)的分析物含量分布寬度也會明顯影響r值的大小。若實(shí)驗(yàn)點(diǎn) 過于密集，盡管離散度不大，但r值偏小。因此，可用r檢驗(yàn)X 取值范圍是否適當(dāng)。一般要求r大于或等于0.975 (或r2大于或 等于0. 95),認(rèn)為X范圍是適合的。若r小于0.975時，應(yīng)再 多做實(shí)驗(yàn)，擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍。(8)線性回歸統(tǒng)計可用直線回歸分析來估計斜率和截距。 數(shù)據(jù)以回歸式Y(jié)=b沛a,表示這 些數(shù)據(jù)的直線趨.這是以X方法為準(zhǔn)，Y方法與之配合的關(guān)系式。式 中b為斜率,a為截距。兩方法理想狀態(tài)的回歸式應(yīng)為 Y=X 即b =1 , a=0。根據(jù)臨床使用要求，可在各個臨床醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc處，了解Y方法引人后相對于X方法的系

15、統(tǒng)誤差(SE) , SE = | (b -1)Xc + a | o(9)以美國CLIA' 88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求允許誤差的1/2 為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差(SE)不大于允許誤差，認(rèn) 為系統(tǒng)誤差在可接受水平內(nèi)。備注：1、各個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該根據(jù)自己的實(shí)際情況，建立性能驗(yàn)證的方法和標(biāo)準(zhǔn)。該方法適用于科室內(nèi)所有生化設(shè)備的驗(yàn)證。2、上述試驗(yàn)方案可用于強(qiáng)生Vitros系列產(chǎn)品，僅供實(shí)驗(yàn)室參考，參考文獻(xiàn)：1、 臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)，馮仁豐 ，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社2、 臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評價，楊有業(yè) 張秀明，人民衛(wèi)生出版社3、 NCCLS Method Comparison and Bias Estimation UsingPatient Samples; Approved GuidelineSecond