實(shí)驗(yàn)三齊墩果酸及提取

1、實(shí)驗(yàn)三齊墩果酸及提取實(shí)驗(yàn)三齊墩果酸的提取、分離及鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握三祜皂昔元的提取、分離和鑒定技術(shù)，熟悉三祜皂昔的性質(zhì)。2、掌握兩相溶劑水解方法。3、掌握堿溶鹽析法提取秸類化合物的方法。齊墩果酸又名慶四素，屬五環(huán)三秸類化合物，廣泛分布于植物界，已報(bào)道 其以游離態(tài)、酯、昔或兼有的形式存在于150多種植物中，而多數(shù)是以昔的形 式存在。但含齊墩果酸的量超過(guò)10%的甚少。從刺五加、龍牙梅木中提得率超 過(guò)10%,純度達(dá)95%以上，是理想的藥用資源，是一種天然產(chǎn)物化學(xué)成分，并 己證實(shí)其具有多種生物活性。純齊墩果酸是白色簇狀結(jié)晶，無(wú)色、無(wú)味、無(wú)臭，熔點(diǎn)為308-310-C,不溶 于水，可溶于甲醇、乙醇

2、、乙醛、丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑。據(jù)研究證實(shí)，齊墩 果酸具有消炎抑菌、增強(qiáng)免疫功能、降轉(zhuǎn)氨酶、改善肝功能，糾正體內(nèi)異常蛋 白代謝，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的臨床藥理作用，它對(duì)急性黃 疽型肝炎和慢性病毒性肝炎療效顯著，是國(guó)內(nèi)研制的保肝、治療肝炎的有效藥 物之一。此外，齊墩果酸還具有抗血栓形成、抗突變、抗艾滋病、抑制HIV-I 的復(fù)制作用；以及強(qiáng)心、利尿和抑制S180瘤株生長(zhǎng)等作用，其毒性小，副作用 低，安全范圍大。齊墩果酸還因其有抗衰老、抗突變、清除自由基的作用，還 可以作為化妝品成分被廣泛應(yīng)用。女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum kit.的干燥成熟果實(shí)，為常 用的扶

3、正固本中藥。藥理研究表明其促進(jìn)免疫的主要有效成分為齊墩果酸、熊 果酸及乙酰齊墩果酸。齊墩果酸以游離態(tài)和結(jié)合成昔的形式同存于女貞子中。 經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其齊墩果酸含量以幼果期（8月）含量最高，可達(dá)& 04%,隨著發(fā) 育成熟下降到2.5%左右。其在果實(shí)中的含量分布為外中果皮全果實(shí)內(nèi)果皮 種仁。女貞子還含橄欖苦昔、D-甘露醇、硬脂酸、植物蠟等。女貞子中主要有效成分：（1）齊墩果酸：CHO$,白色針狀結(jié)晶（95%乙醇），mp 305-306#Co可溶于熱甲醇、乙醇、乙醛、氯仿、丙酮等，不溶于水。（2）熊果酸：CUMX,白色針狀結(jié)晶（95%乙醇），mp 286-287#Co易溶于 二氧六環(huán)、毗喘?？扇?/p>

4、于熱乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醛，不溶于水。（3）乙酰齊墩果酸：CsOs,白色簇晶。Mp 2589-2609。溶于氯仿、乙齊墩果酸乙酰齊墩果酸R=HR=OCOCH3熊果二、實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)女貞子中齊墩果酸以游離型和結(jié)合成昔的形式共存于果實(shí)中，采用酸 水解，氯仿萃取同步法提取齊墩果酸。根據(jù)女貞子齊墩果酸以游離型和結(jié)合成昔的形式共存于果實(shí)中，采用堿溶 解，制備成鈉鹽形式，酸沉淀方法提取齊墩果酸。三、實(shí)驗(yàn)材料：1、器材：500ml圓底燒瓶、燒杯、水浴鍋、滴管、球形冷凝管、索氏提 取器、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、普通濾紙、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、硅膠G-CMG-Na 板、層析缸等；2、藥品及試劑:：女貞子果

5、皮粗粉50g、5%氫氧化鈉溶液、濃硫酸、濃鹽酸、 乙醇、丙酮、氯仿溶液、石油醯（沸程6090°C）、冰醋酸、乙酸乙酯溶液、無(wú) 水硫酸鈉、乙酸酹四、實(shí)驗(yàn)操作步驟：1、酸水解和氯仿同步提取法稱取女貞子果皮粗粉25g,置于圓底燒瓶?jī)?nèi)，加15%鹽酸溶液175 ml,氯仿125 ml, 709水浴回流水解2h,過(guò)濾，分取氯仿提取液（在分液漏斗中進(jìn)行,注意：氯仿在下，水在上，因?yàn)槁确旅埽?.4916比水大，用水洗至中性,用無(wú)水硫酸鈉脫水干燥、過(guò)濾，用過(guò)濾液）另存。藥渣用水洗至中性，抽干，干燥 藥渣至含水量小于10% （攤平晾曬或低溫烘干）。將干燥藥渣置于圓底燒瓶?jī)?nèi)， 加氯仿250 ml回流lh,

6、合并二次氯仿提取液，取出2 ml留待薄層鑒識(shí)，其余 減壓回收氯仿（用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或常溫?fù)]干）至糖漿狀，趁熱轉(zhuǎn)移至燒杯中，冷后成半固狀物。女貞子果皮粗粉2、分離與精制回收氯t?至糖漿狀氯仿提取液回流方法1:取上述半固狀物，以少量石油醯洗滌.除去脂溶性較大的成分，即 有固體析出，抽干，得淺黃色析出物。用1:100倍量（W/V） 95%乙醇90C回 流10min,過(guò)濾，濾液濃縮至小體積，放置，析出粗晶，抽濾得齊墩果酸粗品。反復(fù)用90%乙醇重結(jié)晶，可得較純的齊墩果酸。半固狀物即方法1：淺黃色析出物乙醇回流齊墩果酸粗品齊墩果酸方法2：同方法1用石油醵處理得淺黃色析出物，加10倍量5%氫氧化鈉溶液煮 沸10

7、 min,放冷后抽濾，適量熱水洗滌12次，抽干得類白色析出物，用95% 乙醇C回流溶解，趁熱過(guò)濾，鹽酸調(diào)至pH 12,放置析晶。抽濾得齊墩果酸粗 品，用正己烷-乙醇(1:1)重結(jié)晶，可得較純的齊墩果酸。即方法2：半固狀物I淺黃色析出物I氫氧化鈉溶液煮沸I乙醇回流I齊墩果酸粗品齊墩果酸3、鑒定a.呈色反應(yīng)(1) 取本品約50mg,加氯仿2ml溶解后，加硫酸2滴，振搖，靜止，氯仿 液自無(wú)色(或淡黃色)漸變?yōu)榈t色。(2) 取本品少量，加乙酸Sf lml,微熱使溶解，滴加硫酸1滴，即顯紫紅色, 放置后色漸變深。(3) 取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛0. 5g,加冰乙酸10ml溶 解，即得)

8、0. 2ml,加高氯酸0. 8ml,置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，顯紫紅色，加乙酸 乙酯2ml,紫紅色溶入乙酸乙酯中，放置不變色。b.薄層色譜鑒別薄層板：硅膠G-CMG-Na板點(diǎn)樣：女貞子氯仿提取液、自制齊墩果酸乙醇溶液、齊墩果酸對(duì)照品乙醇 溶液(1 mg/ml)o展開劑：氯仿-丙酮(95:5)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(8:2)任選一種。顯色：噴10%硫酸甲醇溶液，105°C烘至顯色，日光和紫外光燈(365nm) 下檢識(shí)。觀察記錄：記錄圖譜及斑點(diǎn)顏色。4、計(jì)算得率得率二得到的齊墩果酸成品（g） /稱取得樣品量（g） *100%五、注意事項(xiàng)1、女貞子中齊墩果酸的含量因采收季節(jié)、產(chǎn)地不同有較大差異，可根據(jù)