試驗五粗脂肪的定量測定

1、實驗五粗脂肪的定量測定第一法抽提法一、目的與要求：1 、熟悉掌握粗脂肪的測定方法。2、熟悉與掌握重量分析的基本操作，包括樣品處理，烘干，恒重等。二、原理：本法為重量法，用脂肪溶劑將脂肪提出后進行稱量，該法適用于固體和液體樣品。通常將樣品浸于脂肪溶劑，為乙醚或沸點30至 60的石油醚，借助于索氏提取器進行循環(huán)抽提。用本法提取的脂肪性物質(zhì)為脂肪類物質(zhì)的混合物，其中含有脂肪游離脂肪酸、磷脂酯、固醇、芳香油某些色素及有機酸等。因此，稱為粗脂肪。三、試劑及儀器：(1) 無水乙醚(2) 海砂(3) 索氏提取器(4) 恒溫水浴鍋(5) 烘箱(6) 脫脂棉花(7) 脫脂濾紙四、操作步驟(一 )樣品的準備稱取樣

2、品的重量根據(jù)材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在10以下的，稱取樣品10-12 克 ;脂肪含量為50-60的，則稱取樣品2-4 克，(可以用測定水分后的樣品)。將樣品在80-100 烘箱去水分。一般烘4 小時，烘干時要避免過熱。冷卻后，準確地稱取一定量樣品，必要時，拌以精制海砂，無損地移入濾紙筒內(nèi)，用脫脂棉塞嚴，將濾紙筒放人索氏提取器的提取管內(nèi)，注意勿使濾紙筒高于提取管的虹吸部分。（ 二 ） 抽取將洗凈的提取瓶在1.5烘箱內(nèi)烘干至恒重,加乙醚約達到提取瓶容積的 1 2-2 3，然后將提取器各部分按圖連接，注意不能漏氣。加熱提取時，應(yīng)在電熱恒溫水浴中進行（水浴溫度約為40-50 ）也可以使用燈泡

3、或電爐加熱的水浴鍋，嚴禁用火 焰 直 接 加 熱 索 氏 提 取 器 。在 加 熱 時 乙 醚 蒸 發(fā) ，乙 醚 蒸 汽 由 連 接 管 上 升 至 冷 凝 器 ，凝 結(jié) 成 液 體 滴 入 提取 管中 ，此 時 樣 品內(nèi)的 脂 肪 為 乙 醚液 面超 過 虹 吸 管高 度后 溶 有 脂肪 的 乙 醚 虹 吸 管 流 入 提 取 瓶 ，為 此 循 環(huán) 抽 提 ，調(diào) 解 水 域 溫 度 ，使 乙 醚 每 小 時 循環(huán)3 5次 ， 提 出時間 視 樣 品 的 性質(zhì) 而定 ， 一 般 需612小 時 ，樣品含有脂肪是否提取完全，可以用濾紙來粗略判斷，從提取管內(nèi)吸取少量的乙醚并滴在凈的濾紙上，待乙醚干

4、后，濾紙上不留有油脂的半點 則表示已經(jīng)提取完全。提 取 完 全 后 ，再 將 乙 醚 蒸 到 提 取 管 內(nèi) ，待 乙 醚 液 面 達 到 虹 吸 管 的 最 高處以前，取下提取管。五、稱重和計算將 提 取 瓶 中 的 乙 醚 全 部 蒸 干 ， 洗 凈 外 壁 ， 置 于 105 烘 箱 干 燥 至 恒 重，按下式計算樣品的促脂肪百分含量。W1-W0脂肪（ ） 1/0WW1： 接 受 瓶 和 脂 肪 重 量 （ 克 ） 。W： 樣 品 重 量 （ 克 ） 。W0：接 受瓶重量（克）。六、注意事項（1） 樣品 應(yīng)干燥后研細，裝 樣 品 的 濾 紙 筒 一 定 要 緊 密 ， 不 能 往 外 漏

5、 樣品，否則重做。（2） 放入濾紙筒的高度不能超過回流彎管，否則乙醚不易穿透樣品，脂肪不能全部提出，造成誤差。（3） 碰到含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水處理，等其干燥后 聯(lián)通濾紙一起放入提取器內(nèi)。（4） 提 取 時 水 浴 溫 度 不 能 過 高 ， 一 般 使 乙 醚 剛 開 始 沸 騰 即 可 ( 約45 左右) 。回流速度以每8-12次時為宜。(5)所用乙醚必須是無水乙醚，如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機物抽出，造成誤差。(6)用于樣品測定脂肪，可按下式計算原來樣品脂肪的含量W1-W0脂肪() (100-A)W脂肪(尸 物的耐鹽性得到不同程度提高。其中Z hang和Blumwald

6、(2001)、Z h a n g等(2001)報告的轉(zhuǎn)A t NHX 1基因番茄可耐 200mm o 1 / L的氯化鈉，并把吸收的鈉鹽積累在葉片中，而果實的品質(zhì)不受影響。這些研究預(yù) 示著在提高植物耐鹽性方面,離子的選擇吸收和跨膜運輸?shù)幕蚬こ淌侵参锬望}性種質(zhì)改良的有效途徑。A-100 克樣品水分的含量(克 )(7)冷凝管上端最好連接一個氯化鈣干燥管，這樣不僅可以防止空氣中水分進入， 而且還可以避免乙醚揮發(fā)在空氣中，這樣可防止實驗室微小環(huán)境空氣的污染。如無此裝置，塞一團干脫脂棉球亦可。(8)如果沒有無水乙醚可以自己制備，制備方法如下：在1000 毫升乙醚中，加入無水石膏50 克，振搖數(shù)次，靜置

7、1 0 小時以上蒸餾，收集35以下的餾液，即可應(yīng)用。(9)將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時，瓶口向一側(cè)傾斜45放置使揮發(fā)物乙醚易與空氣形成對流，這樣干燥迅速。(10)樣品及醚提出物在烘箱內(nèi)烘干時間不要過長，因為一些很不飽和的脂肪酸， 容易在加熱過程中被氧化成不溶于乙醚的物質(zhì)；中等不飽和脂肪酸，受熱容易被氧化而增加重量在沒有真空干燥箱的條件下，可以在100-105干燥1.5-3小時。(u)如果沒有乙醴或無水乙醴時，可以用石油醴提取，石油醴沸點30-60C為好。(12)使用揮發(fā)乙醚或石油醚時，切忌用直接火加熱。應(yīng)用電熱套電水浴，電燈泡等實驗法(二 ) 酸水解法、原理: 樣品經(jīng)酸水解后用乙醚提取，除去溶劑即

8、得游離及結(jié)合脂肪總量。二、試劑與儀器：1、鹽酸2、 95乙醇3、乙醚4、石油醚5、 100 毫升具塞刻度量筒三、操作方法：1、樣品處理(1)固體樣品：精密稱取約2 克水，混勻后再加重。毫升鹽酸。置于50 毫升大試管內(nèi)，加8 毫升(2)液體樣品：稱取10.0克，置于50毫升大試管內(nèi)，加工0 毫升鹽酸，2、將試管放70-80水浴中，每隔5-10 分鐘以玻璃棒攪拌一次，至樣品消化完全為止，約40-50 分鐘。3、取出試管，加人10 毫升乙醇，混合。冷卻后將混合物移于100 毫升具塞量筒中， 以 25 毫升乙醚分次洗試管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振搖1 分鐘，小心開塞，放出氣體，再塞好。靜置12 分鐘，小心開塞，并用石油醚-乙醚等量混合液沖洗塞及筒口附著的脂肪。靜置10-20 分鐘，待上部液體清晰，吸出上清液于已恒重的錐形瓶內(nèi)，再加 5 毫升乙