3-方法的選擇和建立資料

1、Cha-3 方法的選擇、建立和認(rèn)證方法的選擇、建立和認(rèn)證2 |Analysis of Biopharmaceuticals3.1 分析質(zhì)量控制分析質(zhì)量控制3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)分析方法(1)標(biāo)準(zhǔn)分類1988年中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法 國家標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)地方標(biāo)準(zhǔn)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)3 |Analysis of Biopharmaceuticalsl （2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 是一種或多種經(jīng)確定了高穩(wěn)定性的物理、化學(xué)和計(jì)量學(xué)特性，并經(jīng)正式批準(zhǔn)可作為標(biāo)準(zhǔn)使用，以便用來校準(zhǔn)測量儀器、評價方法或給材料賦值的物質(zhì)或材料。l 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用校準(zhǔn)儀器 分析標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方法 分析質(zhì)量控制4 |Analysis of Biopharmac

2、euticalsl 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分類l 基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ultimate standardl 標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)standard reference materail5 |Analysis of Biopharmaceuticalsl (3)標(biāo)準(zhǔn)方法l 權(quán)威機(jī)構(gòu)審批和發(fā)布l 我國的國標(biāo)法6 |Analysis of Biopharmaceuticalsl 3.1.2分析質(zhì)量控制l 把分析誤差控制在允許范圍內(nèi)，保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確性l 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制l （1）空白實(shí)驗(yàn):純水代替試液，其他步驟一樣。l （2）標(biāo)準(zhǔn)曲線:計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程和相關(guān)系數(shù)7 |Analysis of Biopharm

3、aceuticals（3）質(zhì)量控制圖l 精密度控制圖上、下警告限 上、下控制限l 準(zhǔn)確度控制圖 ：利用回收率及其標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算x2Sx3S8 |Analysis of Biopharmaceuticals3.2 計(jì)量認(rèn)證（略）計(jì)量認(rèn)證（略）l 為社會提供公正數(shù)據(jù)的產(chǎn)品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，必須經(jīng)省級以為社會提供公正數(shù)據(jù)的產(chǎn)品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，必須經(jīng)省級以上人民政府計(jì)量行政部門對其計(jì)量檢定、測試能力和可上人民政府計(jì)量行政部門對其計(jì)量檢定、測試能力和可靠性考核合格?？啃钥己撕细?。9 |Analysis of Biopharmaceuticals3.3 藥物分析方法的選擇和建立藥物分析方法的選擇和建立l 了解被測組分

4、的性質(zhì)，了解被測組分的性質(zhì)，l 查閱文獻(xiàn)、參考書查閱文獻(xiàn)、參考書l 現(xiàn)有的科研條件現(xiàn)有的科研條件l 選擇適當(dāng)?shù)姆椒ㄟx擇適當(dāng)?shù)姆椒╨ 試驗(yàn)方案的確定和試驗(yàn)準(zhǔn)備試驗(yàn)方案的確定和試驗(yàn)準(zhǔn)備l 試驗(yàn)的開展和試驗(yàn)方案的修正試驗(yàn)的開展和試驗(yàn)方案的修正l 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理試驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理l 論文的形成論文的形成10 |Analysis of Biopharmaceuticals方法方法分析方法分析方法免疫學(xué)方法免疫學(xué)方法液質(zhì)聯(lián)用液質(zhì)聯(lián)用氣相色譜氣相色譜高效液相色譜高效液相色譜氣質(zhì)聯(lián)用氣質(zhì)聯(lián)用11 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4 藥物分析方法的驗(yàn)證和質(zhì)量控制藥物分析方法的驗(yàn)證和

5、質(zhì)量控制l 確定藥物或其代謝產(chǎn)物的方法必 須具備以下特點(diǎn):靈敏度精確性特異性準(zhǔn)確性12 |Analysis of Biopharmaceuticals靈敏度靈敏度l 檢測方法能夠定量的最小藥物濃度必須大于藥物在體內(nèi)最大濃度的10%. 最小定量值 (LOQ): 1/10 最大濃度(Cmax) 13 |Analysis of Biopharmaceuticals特異性特異性l檢測方法必須能將檢測物和同時服用的其他混合物區(qū)分開14 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4.1 藥物分析方法的驗(yàn)證與質(zhì)量控制藥物分析方法的驗(yàn)證與質(zhì)量控制l 特異性l 檢出限 (LOD)l 定量

6、限 (LOQ)l 線性相關(guān)l 檢測范圍l 精確性l 準(zhǔn)確性l 穩(wěn)定性15 |Analysis of Biopharmaceuticals1、驗(yàn)證、驗(yàn)證-特異性特異性l 特異性研究應(yīng)該在化驗(yàn)分析階段展開l 必須清楚的闡述特異性過程l 特異性必須用結(jié)構(gòu)近似的對照物加以驗(yàn)證 l 結(jié)果的選擇是基于科學(xué)的判斷16 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-特異性特異性17 |Analysis of Biopharmaceuticals2、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 檢出限檢出限(LOD)l （三）檢測限（三）檢測限（limit of detection， LOD） l 檢測限系指試樣在確

7、定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測物能被檢檢測限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。測出的最低濃度或含量。l 是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可?；虻陀谠撘?guī)定濃度即可。18 |Analysis of Biopharmaceuticals2、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 檢出限檢出限(LOD)l 各種可能的方法感官評價被測物可被可靠檢測出的最低限度信噪比3:1 可以接受斜率和回應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差 LOD = 3.3 / S = 回應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差 S = 標(biāo)定曲線斜率19 |Analysis of Biopharmaceutical

8、s3、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 最小定量值最小定量值(LOQ)l 根據(jù)信噪比 可信的定量信噪比為 10:1l 根據(jù)回應(yīng)值和斜率 LOQ = 10 / S =回應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差 S =標(biāo)定曲線斜率20 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-LOD/LOQ 推薦數(shù)據(jù):l LOD , LOQ 和確定LOQ的方法都應(yīng)該被說明l 各種限值的確定必須建立是在適當(dāng)?shù)氖茉嚇颖緮?shù)量的基礎(chǔ)上得出21 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-LOD22 |Analysis of BiopharmaceuticalsLOQ, LOD 和和 SNRl 定量限 (LOQ)

9、l 檢出限 (LOD)l 信噪比 (SNR)干擾線值干擾線值峰 ALOD峰 BLOQ基線基線驗(yàn)證驗(yàn)證23 |Analysis of Biopharmaceuticals4、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 線性線性l應(yīng)該在研究階段,通過所期望的濃度范圍來評價l至少應(yīng)該在濃度范圍內(nèi)選擇5組濃度進(jìn)行試驗(yàn)l相關(guān)系數(shù), y- 回歸斜率和偏差平方和必須準(zhǔn)確得出l分析回歸線偏差得到線性相關(guān)24 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證- 線性線性25 |Analysis of Biopharmaceuticals5、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 范圍范圍l 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的

10、高、低限濃度或量的區(qū)間。l 在線性研究中得到特異性范圍,此范圍應(yīng)該含蓋某些研究中可能出現(xiàn)的特殊數(shù)值l 范圍應(yīng)該在科學(xué)準(zhǔn)確的信息指導(dǎo)下進(jìn)行劃分l 范圍的確定可因測定項(xiàng)目不同而有不同要求：l 含量測定范圍為80%-120%；含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測定應(yīng)為被測雜質(zhì)限度的50%-120%；溶出度應(yīng)為測定范圍的20%。26 |Analysis of Biopharmaceuticals6、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 精確性精確性（precision） 精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。取樣測定所得結(jié)果之間的接近程

11、度。用偏差（用偏差（d d）、標(biāo)準(zhǔn)）、標(biāo)準(zhǔn)偏差偏差( (SDSD) )、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差( (RSDRSD) )（變異系數(shù)，（變異系數(shù)，CVCV）表示。）表示。 l 通過定量受試物樣品峰值來評價試驗(yàn)的精確度通過定量受試物樣品峰值來評價試驗(yàn)的精確度l 精確性必須在至少精確性必須在至少3 3組試驗(yàn)濃度下進(jìn)行驗(yàn)證組試驗(yàn)濃度下進(jìn)行驗(yàn)證( (高高/ /中中/ /低低) ) l 根據(jù)試驗(yàn)樣品數(shù)量和可信區(qū)間根據(jù)試驗(yàn)樣品數(shù)量和可信區(qū)間, ,精確度應(yīng)該以回收百分率精確度應(yīng)該以回收百分率的形式報(bào)出的形式報(bào)出27 |Analysis of Biopharmaceuticals偏差（偏差（d d）：測量值與

12、平均值之差）：測量值與平均值之差xxdi允許差：容量分析（中和法、非水滴定法、銀量法、絡(luò)合滴允許差：容量分析（中和法、非水滴定法、銀量法、絡(luò)合滴定法、重氮化法、氧化還原法）定法、重氮化法、氧化還原法）0.3%0.3%；重量法；重量法 0.5% 0.5%；氧；氧瓶燃燒法瓶燃燒法 0.5% 0.5%；儀器分析；儀器分析 3% 3%、凱氏定氮法、凱氏定氮法 1% 1%（A-平均值）平均值）/平均值平均值 100%相對偏差相對偏差28 |Analysis of Biopharmaceuticals標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SDSD或或S S）12nxxSi相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD）

13、，也稱變異系數(shù)（），也稱變異系數(shù)（CV）%100 xSRSD29 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證- 精確性精確性LQCMQCHQC30 |Analysis of Biopharmaceuticals7、驗(yàn)證、驗(yàn)證- 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性l可重復(fù)性可重復(fù)性濃度含蓋了特異性范圍濃度含蓋了特異性范圍l試驗(yàn)中各參與要素的準(zhǔn)確性試驗(yàn)中各參與要素的準(zhǔn)確性如日期如日期,受試物受試物,設(shè)備設(shè)備l可重現(xiàn)性可重現(xiàn)性判斷其分析是否發(fā)生在特定的時期判斷其分析是否發(fā)生在特定的時期l數(shù)據(jù)提供數(shù)據(jù)提供標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn),偏差系數(shù)和可信區(qū)間等數(shù)據(jù)都應(yīng)該和準(zhǔn)確度附偏差系數(shù)和可信區(qū)間等數(shù)據(jù)都應(yīng)該和準(zhǔn)確度附在

14、一起在一起31 |Analysis of Biopharmaceuticals準(zhǔn)確度（accuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。 測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”?；厥赵囼?yàn) 空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M %100AMR空白回收率32 |Analysis of Biopharmaceuticals 加樣回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測定藥物含量已準(zhǔn)確測定藥物含量P P的真實(shí)樣品的真實(shí)樣品+ +已知量已知量A A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值

15、為M M%100APMR33 |Analysis of Biopharmaceuticals 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。 原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。34 |Analysis of Biopharmaceuticals 制劑制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的如不能得到制劑的

16、全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。被測物進(jìn)行測定，或與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗(yàn)衡量。中藥回收率一般要求在般要求在9595105%105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在求在9090110%110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。RSDRSD一般在一般在2%2%以內(nèi)。以內(nèi)。35 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性:36 |Analys

17、is of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性1天內(nèi)天內(nèi):天天:37 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性 校準(zhǔn)因素校準(zhǔn)因素:38 |Analysis of Biopharmaceuticals驗(yàn)證驗(yàn)證-精確性精確性/準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性FDA精確性精確性同一試驗(yàn)同一試驗(yàn)不同試驗(yàn)間不同試驗(yàn)間正常正常: 15%最低定量限最低定量限: 20%準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性同一試驗(yàn)同一試驗(yàn)不同試驗(yàn)間不同試驗(yàn)間正常正常: 15%最低定量限最低定量限: 99.599.5) )或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相?/p>

18、標(biāo)準(zhǔn)差一或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏龋鄬?biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于般應(yīng)不大于0.20.2；進(jìn)行回收率試驗(yàn)。；進(jìn)行回收率試驗(yàn)?；厥章室换厥章室话阍诎阍?9.799.7100.3100.3之間之間。 45 |Analysis of Biopharmaceuticals 2. 2. UVUV法法： 用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測定，其用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測定，其RSDRSD一般不大于一般不大于1 1。制劑的測定，回收率一般應(yīng)在。制劑的測定，回收率一般應(yīng)在9898102102之間。之間。 線性：吸光度線性：吸光度A一般在一般在0.20.7，濃度點(diǎn)，濃度點(diǎn)n5。用。用濃度濃度c對對A作線性回歸處理，得一直線方程，作線

19、性回歸處理，得一直線方程，r應(yīng)達(dá)到應(yīng)達(dá)到0.9999(n5)，方程的截距應(yīng)近于零。，方程的截距應(yīng)近于零。46 |Analysis of Biopharmaceuticals 3. HPLC3. HPLC法：要求法：要求RSD2RSD2，回收率回收率9898102102之之間。間。 線性范圍：用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃線性范圍：用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)度點(diǎn)n n應(yīng)為應(yīng)為5 57 7，用濃度，用濃度c c對峰高對峰高h(yuǎn) h或被測物的響應(yīng)值或被測物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r r應(yīng)大于應(yīng)大于0.9990.999，截距應(yīng)趨于零。截距應(yīng)趨于零。47 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4.3 3.4.3 生物藥物分析方法驗(yàn)證報(bào)告生物藥物分析方法驗(yàn)證報(bào)告l 必須以文字報(bào)告形式描述詳細(xì)的生物學(xué)分析方法l 所有用于產(chǎn)生結(jié)果的試驗(yàn)都必須在報(bào)告中闡述l GLP 符合/檢查