醫(yī)學檢驗知識點4

1、第十六章細胞因子與細胞黏附因子的測定細胞因子是由活化的免疫細胞及某些基質(zhì)細胞表達并分泌的活性物質(zhì)，其主要生物學功能是介導和調(diào)節(jié)免疫應答及炎癥反應，其化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)或多肽。細胞黏附分子是介導細胞間及細胞與細胞外基質(zhì)間黏附作用的分子，其化學本質(zhì)為糖蛋白，可以細胞膜表面表達和可溶性兩種形式存在。二者分別在機體的免疫調(diào)節(jié)、炎癥應答、創(chuàng)傷修復、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。第一節(jié)生物學測定方法常見的生物學測定法包括：基于DNA檢測的分子生物學測定法：細胞因子或細胞黏附分子DNA擴增法、RNA印跡法、原位雜交法、核酸酶保護分析等，可定性或定量分析細胞因子和細胞黏附分子的基因或mRNA。生物活性

2、測定法：根據(jù)細胞因子特定的生物活性而設計的檢測方法，主要用于細胞因子的測定。一、促進細胞增殖和抑制細胞增殖測定法（一）放射性核素摻入法：通過細胞DNA合成的增加或減少來判斷細胞增殖的方法。該法的優(yōu)點是結(jié)果客觀，可常規(guī)用于大標本量的測定，但方法的特異性受依賴細胞株依賴程度的影響。此外，測定過程中需要使用放射性核素，廢物的處理較繁瑣。（二）MTT比色法：不使用放射性核素，以細胞代謝變化作為增殖指征來檢測細胞因子生物活性的測定方法。二、細胞毒活性測定法待測細胞因子做一系列稀釋后加至指示細胞培養(yǎng)體系，以檢測培養(yǎng)細胞的死細胞數(shù)作為判斷指標，死細胞數(shù)量與細胞因子的活性成正比。如TNF殺傷腫瘤細胞的測定。三

3、、抗病毒活性測定法抗病毒活性測定法主要用于IFN等細胞因子的檢測。四、趨化活性測定法具有趨化活性的細胞因子，也稱趨化因子，諸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能誘導中性粒細胞、單核-巨噬細胞或淋巴細胞等定向遷移。其誘導細胞遷移的方式包括趨化性和化學增活性。趨化性是誘導細胞由趨化因子低濃度處向趨化因子高濃度處做定向移動的特性，可采用瓊脂糖和Boyden盲端微孔小室趨化試驗測定。化學增活性則指細胞因子增強細胞隨機運動能力的特性，可采用瓊脂糖小滴化學動力學試驗測定。某些細胞因子的活性可通過刺激特定細胞分泌的代謝產(chǎn)物而間接反映，據(jù)此建立的測定方法，稱為細胞因子誘導產(chǎn)物測定法。例如

4、，IL-1可誘導胸腺細胞分泌IL-2，IL-2的水平可間接反映IL-1的活性；細胞因子誘導產(chǎn)物測定法，是目前測定IL-1最常用的方法。五、生物學活性測定方法學評價用于細胞因子生物學活性測定，對細胞因子前體或其降解產(chǎn)物、與可溶性受體結(jié)合的細胞因子、細胞因子聚合物等，均不能用此法檢測。細胞因子受體拮抗物、細胞因子的天然抗體和類細胞因子等，也將干擾細胞因子活性的測定。細胞因子生物學活性測定法主要具有以下特點：敏感性較高；特異性不高；操作繁瑣；易受干擾。第二節(jié)免疫測定方法獲得針對某一細胞因子的特異性抗體（包括多克隆抗體或單克隆抗體），采用免疫測定法進行檢測。一、ELISA方法ELISA法是細胞因子首選

5、檢測法，可作定性或定量分析。雙抗體夾心法是用于細胞因子測定的最常用方法，該法使用的抗體可以是針對同一抗原的多克隆抗體，也可以是針對同一抗原的不同抗原表位的單克隆抗體。細胞因子測定的標本主要包括兩大類，一是血清（血漿）、關節(jié)液等體液，可用于細胞因子和可溶性黏附分子的檢測；二是細胞體外培養(yǎng)后的培養(yǎng)上清液，只用于細胞因子的檢測。ELISA法具有特異、簡便、易于推廣和標準化等優(yōu)點，可同時檢測大量標本且試驗廢棄物便于處理。此外，無生物學活性的細胞因子前體、分解片段以及與相應受體的結(jié)合物也可用此法檢測。其缺點是敏感性偏低、不能判斷細胞因子的生物學活性。二、流式細胞分析法主要用于細胞內(nèi)細胞因子和細胞表面黏附

6、分子的檢測，通過特異性的熒光抗體染色，能簡單、快速地進行檢測，精確判斷不同細胞亞群的細胞因子和膜分子的表達情況。根據(jù)熒光抗體的性質(zhì)，熒光抗體染色分直接法和間接法。直接法較為常用，其敏感性雖不及間接法，但特異性強?？蓞^(qū)分具有不同分泌特性的細胞亞群，如Th1、Th2細胞等。檢測細胞內(nèi)細胞因子時，主要包括以下基本步驟：1.分離和培養(yǎng)待檢細胞。2.細胞固定：常用的細胞固定劑為4%多聚甲醛。3.封閉非特異性結(jié)合位點：即用含5%脫脂奶粉和鈣、鎂離子的PBS溶液，重懸已固定的細胞。4.染色與分析：即用熒光素標記的細胞因子特異性單克隆抗體做熒光抗體染色，用流式細胞儀分析熒光陽性細胞百分比和熒光強度。此外，若應

7、用不同熒光素標記兩種以上細胞因子的單克隆抗體，則可同時檢測同一細胞內(nèi)2種以上不同的細胞因子。三、酶聯(lián)免疫斑點試驗常用于類風濕因子、IFN-等細胞因子分泌細胞的定量測定。在作ELISPOT時，選擇的特異性抗體應該具有高親和力、高特異性、低內(nèi)毒素的特性。選用的細胞激活物必須不影響細胞的分泌功能。四、免疫學測定方法學評價免疫測定法幾乎可以用于所有細胞因子的檢測。優(yōu)點：特異性高，使用特異的單克隆抗體，可用于單一細胞因子的檢測；操作簡便、快速，無需依賴細胞株，故不需維持培養(yǎng)，可操作性增加，容易推廣和便于普查；影響因素相對較少且容易控制，重復性好，方法容易標準化。缺點：所測定的只是細胞因子的蛋白含量，與其

8、生物活性不一定成正比；測定結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系，使用不同來源親和力的單抗，對同一標本測到的結(jié)果可能不同；敏感性相對較低，比生物活性法約低10100倍，測定下限一般為100pg；若標本中存在細胞因子的可溶性受體，可能會影響特異性抗體對細胞因子的結(jié)合。第三節(jié)細胞因子與細胞黏附分子測定的臨床應用細胞因子的測定主要用于以下幾方面：特定疾病的輔助診斷；機體免疫狀態(tài)的評估；臨床疾病治療效果的監(jiān)測和指導用藥；疾病預防的應用。一、臨床應用原則細胞因子和黏附分子具有：異質(zhì)性、功能交叉性和多樣性、來源的復雜性和組織細胞的非特異性，故在臨床檢測中，要求：1.方法的聯(lián)合應用2.標本的適當選取3.細

9、胞因子的聯(lián)合檢測二、特定疾病診斷的輔助指標三、評估機體的免疫狀態(tài)、判斷治療效果及預后機體免疫狀態(tài)與疾病的發(fā)生發(fā)展和預后密切相關，機體免疫應答的強弱，可通過細胞因子或黏附分子的表達水平來反映。此外，通過人為調(diào)整患者體內(nèi)的細胞因子水平可達治療目的，人工重組細胞因子已在臨床疾病的治療方面發(fā)揮了重要作用。有關細胞因子錯誤的是A.有免疫細胞及某些基質(zhì)細胞產(chǎn)生B.能在細胞間傳遞信息C.具有免疫調(diào)節(jié)和效應功能D.為蛋白質(zhì)或多肽E.一種細胞只能產(chǎn)生一種細胞因子  正確答案E答案解析通常一種細胞能產(chǎn)生多種細胞因子，E選項錯誤。不屬于細胞因子生物學活性的是A.增強抗感染和細胞殺傷效應B.促進靶

10、細胞的增殖和分化C.促進炎癥過程，影響細胞代謝D.促進或抑制其他細胞因子的膜表面分子的表達E.中和及溶解病毒作用  正確答案E答案解析中和及溶解病毒是抗體的作用，不屬于細胞因子生物學活性，E選項錯誤。不屬于細胞因子的是A.白細胞介素B.干擾素C.CD3D.生長因子E.腫瘤壞死因子  正確答案C答案解析CD3是膜表面分子抗原。能殺傷腫瘤細胞的細胞因子是A.IL-2B.TNFC.IFND.CSFE.趨化因子  正確答案B答案解析能殺傷腫瘤細胞的細胞因子是TNF。不屬于細胞因子的生物學檢測方法的是A.細胞增殖法B.靶細胞殺傷法C.細胞因子誘導產(chǎn)物分析法D.細胞病變抑制法E.溶血空斑試驗  正確答案E答案解析溶血空斑試驗不屬于