實驗九玻璃器皿的清洗包扎培養(yǎng)基的制備及滅菌

1、實驗九實驗九 玻璃器皿的清洗包扎，玻璃器皿的清洗包扎，培養(yǎng)基的配制及滅菌培養(yǎng)基的配制及滅菌一、目的要求一、目的要求 l 1 1、明確培養(yǎng)基的配制原理。、明確培養(yǎng)基的配制原理。l 2 2、通過對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制，掌握配制、通過對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。培養(yǎng)基的一般方法和步驟。l 3 3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍 l 4 4、了解干熱滅菌的原理和應用范圍。、了解干熱滅菌的原理和應用范圍。 l 5 5、了解紫外線滅菌的原理和方法。、了解紫外線滅菌的原理和方法。l 6 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟練操作。、玻璃器

2、皿的清洗包扎要熟練操作。二、基本原理二、基本原理l 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和它含有牛肉膏、蛋白胨和NaClNaCl。其中牛肉膏為。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源，而提供氮源，而NaClNaCl提供無機鹽。在配制固體培提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下常用濃度下9696時溶化，一般實際應用

3、時在沸時溶化，一般實際應用時在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在燒焦。瓊脂在4040時凝固，通常不被微生物分時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。 由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此，由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其要用稀酸或稀堿將其pHpH調(diào)至中性或微堿性，調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。牛肉膏蛋白胨培以利于細菌的生長繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏牛肉膏

4、3g 3g 蛋白胨蛋白胨 10g 10g NaCl 5g NaCl 5g 瓊脂瓊脂151520g 20g 水水 1000ml pH 71000ml pH 74 47 76 6干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。l紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長為為200200300nm300nm的紫外線都有殺菌能力，的紫外線都有殺菌能力，其中以其中以260nm260nm的殺菌力最強。的殺菌力最強。 為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外線燈以前，可在

5、無菌室內(nèi)（或接種箱內(nèi)）線燈以前，可在無菌室內(nèi)（或接種箱內(nèi)）噴灑噴灑3 35 5的石炭酸溶液，一方面使空的石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細菌。面也可以殺死一部分細菌。超凈工作臺內(nèi)紫外燈（線）滅菌三、器材三、器材 l牛肉膏，蛋白胨，牛肉膏，蛋白胨， NaClNaCl，瓊脂；，瓊脂； 1mol/L NaOH1mol/L NaOH， 1mol/L HCl1mol/L HCl； 試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌

6、鍋，汽滅菌鍋，pHpH試紙（試紙（ pH 5pH 55 59 90 0），），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。 l培養(yǎng)皿，試管，吸管，電烘箱等。培養(yǎng)皿，試管，吸管，電烘箱等。l牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6 6套一包），套一包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。手提式高壓蒸汽菌鍋等。l紫外線燈，紫外線燈，3 35 5石炭酸或石炭酸或2 23 3來蘇爾來蘇爾溶液，牛肉膏蛋白胨平板溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。四、操作步驟四、操作步驟l一、稱量l準確、迅速，一種藥品一把藥勺，勿蓋錯藥瓶蓋l二、溶化l水的加法、加熱攪拌l三、調(diào)pHl忌調(diào)過頭后來回

7、調(diào)培養(yǎng)基的制備l四、過濾l五、分裝l1、液體分裝：試管高度的1/4左右l 三角瓶容積的1/2l2、固體分裝：試管高度的1/5左右（制斜面）l 半固體：1/3左右（垂直穿刺）l馬丁氏培養(yǎng)基定容；瓶口棉塞培養(yǎng)基的制備l 六、加塞l 七、包扎l 八、滅菌l 一般15磅（121）20分鐘l 九、擺斜面l 溫度、斜面長度（試管的1/2）l 十、無菌檢查l 37培養(yǎng)2448小時常用培養(yǎng)基l 一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基l 應用最廣泛的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。l 配方：l 牛肉膏 3.0gl 蛋白胨 10.0gl NaCl 5.0gl 水 1000ml l pH 7.4-7.6 常用培養(yǎng)基l二、高氏號培養(yǎng)基l用于培養(yǎng)、觀

8、察放線菌形態(tài)特征；l加入適量的抗菌物質(zhì)（抗生素、酚）用于分離放線菌（選擇性培養(yǎng)基）。常用培養(yǎng)基l 高氏號培養(yǎng)基配方：l 可溶性淀粉 20g 按配方順序依次溶解否則l NaCl 0.5g 產(chǎn)生沉淀l KNO3 1.0g l K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素現(xiàn)用現(xiàn)加,溫度不宜l MgSO4.7H2O 0.5g 過高否則易分解l FeSO4.7H2O 0.01gl 瓊脂 15-25gl 水 1000mll pH 7.4-7.6 常用培養(yǎng)基l 三、馬丁氏培養(yǎng)基l 用于分離真菌的選擇性培養(yǎng)基l 配方：l KH2PO4 1.0g 另加孟加拉紅和鏈霉素l MgSO4.7H2O 0.5g 抑制細菌、放

9、線菌生長l 蛋白胨 5gl 葡萄糖 10gl 瓊脂 10-20gl 水 1000mll pH 自然試管分裝試管分裝擺斜面擺斜面擺斜面實物圖擺斜面實物圖五、實驗報告五、實驗報告l結(jié)果結(jié)果 檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。試管清潔如何，檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。試管清潔如何，培養(yǎng)基制備的合不合理。培養(yǎng)基制備的合不合理。玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗器皿包扎器皿包扎器皿包扎器皿包扎 六、思考題六、思考題（1 1）培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應具備哪些條件？為）培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應具備哪些條件？為什么？什么？（2 2）在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問）在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題？為什么？圖題？為什么？圖5 5通氣塞通氣塞A A配制時紗布塞法；配制時紗布塞法；B B滅菌時包牛皮紙；滅菌時包牛皮紙；C C培養(yǎng)時紗布翻出培養(yǎng)時紗布翻出（3 3）培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何）培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？l（4 4）干熱滅菌完畢后，在什么情況下才能）干熱滅菌完畢后，在什么情況下才能開箱取物？為什么？開箱取物？為什么？ l