Tris-HCl及其他幾種緩沖液配方

1、.Tris 是什么？有什么作用？Tris-HCl ，Tris-EDTA如何配制？Tris ：三羥甲基氨基甲烷三羥甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般簡稱為Tris ）是一種有機(jī)化合物，其分子式為(HOCH2)3CNH2。 Tris 被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備。例如，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的TAE 和 TBE 緩沖液（用于核酸的溶解）都需要用到 Tris 。由于它含有氨基因此可以與醛發(fā)生縮合反應(yīng)Tris 為弱堿，在室溫（25下，它的pKa 為 8.1 ；根據(jù)緩沖理論，Tris 緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0 到 9.2 之間

2、。Tris 堿的水溶液pH 在 10.5 左右，一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH 值至所需值，即可獲得該pH 值的緩沖液。但同時(shí)應(yīng)注意溫度對于Tris 的 pKa 的影響。由于 Tris 緩沖液為弱堿性溶液，DNA 在這樣的溶液中會被去質(zhì)子化，從而提高其溶解性。人們常常在Tris 鹽酸緩沖液中加入EDTA 制成 “TE緩沖液 ”，TE 緩沖液被用于DNA 的穩(wěn) 定 和 儲 存 。 如 果 將 調(diào) 節(jié)pH值 的 酸 溶 液 換 成 乙 酸 ， 則 獲 得 “TAE 緩 沖 液 ”（ Tris/Acetate/EDTA ），而換成硼酸則獲得 “TBE緩沖液 ”（ Tris/Borate/EDTA ）。這兩種

3、緩沖液通常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。用途：有機(jī)合成中間體。 在電泳緩沖液中同甘氨酸構(gòu)成緩沖體系，穩(wěn)定電泳過程中的PH 值。在凝膠中也起到穩(wěn)定PH 的作用，只不過是Tris-HCl 緩沖體系。Tris 緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑，還有許多重要用途。Tris 被用于不同pH 條件下的蛋白質(zhì)晶體生長。Tris 緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線蟲（C. elegans核纖層蛋白 lamin ）的中間纖維的形成。Tris 也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外， Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物。Tris 也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。1 / 3.1 M Tris-HCl (pH7.

4、4，7.6，8.0)組份濃度 1M Tris-HCl配制量1L配制方法：1.稱量 121.1 g Tris置于 l L 燒杯中。2.加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表加入濃 HCl 量調(diào)節(jié)所需要的pH 值。pH 值濃 HCl7.4約70 ml7.6約60 ml8.0約42ml4.將溶液定容至1 L 。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高 1 ，溶液的 pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位。1.5 M Tris-HCl (pH8.8)組份濃度1.5 MTris-HCl配制量1

5、 L配制方法2 / 3.1.稱量 181.7 g Tris置于 1 L 燒杯中。2.加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃 HCl 調(diào)節(jié) pH 值至 8.8 。4.將溶液定容至1 L 。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高 1 ，溶液的 pH 值大約降低0.03 個(gè)單位。TE 即 Tris-EDTA buffer（10mM Tris ， 1mM EDTA ， pH7.4 pH7.6 pH8.0）。常用分子生物學(xué)試劑，用于DNA 的溶解等。配制 1 0 ×TE Buffer (pH7.4, 7.6， 8.0)組份濃度： 100 mM Tris-HCl， 10 mM EDTA配制量： 1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于l L 燒杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4， 7.6 ， 8.0)100