乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)1

1、乙肝表面抗原及乙肝兩對(duì)半檢測(cè)主要內(nèi)容檢測(cè)方法及原理檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法 酶免疫技術(shù) 免疫定量分析法檢測(cè)的方法及原理檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法膠體金免疫層析法Part 1 膠體金免疫層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。檢測(cè)方法及原理膠體金免疫層析法膠體金免疫層析法Part 2酶免疫技術(shù) 以酶標(biāo)記的

2、抗體（或抗原）作為主要試劑，將抗原抗體的特異性和酶高效催化反應(yīng)的專一性相結(jié)合的一種免疫檢測(cè)技術(shù)。酶結(jié)合物既保留抗體（或抗原）的免疫學(xué)活性，又保留酶對(duì)底物的催化活性。特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、試劑穩(wěn)定、方法簡(jiǎn)便易行檢測(cè)方法及原理Part 2兩對(duì)兩對(duì)半半ELISAELISA檢測(cè)檢測(cè)原理原理 ELISA ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載

3、體體聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即: :用于檢測(cè)抗體的間接用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISAELISA雙抗雙

4、抗體夾心法及體夾心法及ELISAELISA間接法。間接法。檢測(cè)方法及原理Part 2兩對(duì)兩對(duì)半半ELISAELISA檢測(cè)檢測(cè)原理原理 1 HBsAg：雙抗體夾心法 正比 單克隆HBsAbHBsAg多克隆HBsAbHRP 2 HBsAb：雙抗原夾心法 正比 HBsAgHBsAbHBsAgHRP 檢測(cè)原理Part 2兩對(duì)兩對(duì)半半ELISAELISA檢測(cè)檢測(cè)原理原理 3 HBeAg：雙抗體夾心法 正比 單克隆HBeAbHBeAg多克隆HBeAbHRP 4 HBeAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法 反比 多克隆HBeAbHBeAgHBeAbHRP / HBeAb（標(biāo)本） 5 HBcAb：競(jìng)爭(zhēng)抑制法 反比 HBcAgHB

5、cAbHRP / HBcAb（標(biāo)本）檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法免疫定量分析方法 近年來，隨著抗病毒藥物的不斷問世，以及抗病毒藥近年來，隨著抗病毒藥物的不斷問世，以及抗病毒藥物療效與乙肝病毒及其血清標(biāo)志物水平之間關(guān)系的相關(guān)物療效與乙肝病毒及其血清標(biāo)志物水平之間關(guān)系的相關(guān)研究不斷深入，單純研究不斷深入，單純HBsAgHBsAg定性檢測(cè)在療效的監(jiān)測(cè)，特別定性檢測(cè)在療效的監(jiān)測(cè)，特別是根據(jù)其早期變化對(duì)遠(yuǎn)期療效進(jìn)行預(yù)測(cè)方面，顯得越來是根據(jù)其早期變化對(duì)遠(yuǎn)期療效進(jìn)行預(yù)測(cè)方面，顯得越來越難以滿足要求。而且，很多學(xué)者對(duì)一些新藥上市注冊(cè)越難以滿足要求。而且，很多學(xué)者對(duì)一些新藥上市注冊(cè)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行

6、分析發(fā)現(xiàn)，臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，HBsAgHBsAg的定量檢測(cè)在抗病毒的定量檢測(cè)在抗病毒治療療效的監(jiān)測(cè)方面確有非常重要的意義。因此，治療療效的監(jiān)測(cè)方面確有非常重要的意義。因此，HBsAgHBsAg的定量檢測(cè)就顯得十分重要。的定量檢測(cè)就顯得十分重要。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法免疫定量分析方法 要想完成要想完成HBsAgHBsAg定量檢測(cè)，必須滿足以下條件：定量檢測(cè)，必須滿足以下條件： 采用自動(dòng)分析系統(tǒng)，采用自動(dòng)分析系統(tǒng)， 有可溯源的標(biāo)準(zhǔn)品，有可溯源的標(biāo)準(zhǔn)品， 測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品之間有線性關(guān)系。測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品之間有線性關(guān)系。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法免疫定量分析

7、方法 化學(xué)發(fā)光技術(shù)是近二十年來發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析技術(shù)。 化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（Chemiluminesent Immunoassay，CLIA）是免疫測(cè)定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測(cè)定技術(shù)。由于這種測(cè)定具備很高的特異性和很小的干擾，因此，如同RIA、FIA等一樣利用免疫反應(yīng)的特異性和化學(xué)發(fā)光本身的信號(hào)特異性形成了目前所說的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）技術(shù)。檢測(cè)方法及原理Part 3免疫定量分析方法免疫定量分析方法 原理： 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是通過檢測(cè)患者血清從而對(duì)人體進(jìn)行免疫分析的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器。將定量的患者血清和辣根過氧化物（

8、HRP）加入到固相包被有抗體的白色不透明微孔板中，血清中的待測(cè)分子與辣根過氧化物酶的結(jié)合物和固相載體上的抗體特異性結(jié)合。分離洗滌未反應(yīng)的游離成分。然后，加入魯米諾Luminol發(fā)光底液 ，利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體，從基態(tài)回到激發(fā)態(tài)，能量以光子的形式釋放。此時(shí)，將微孔板置入分析儀內(nèi)，通過儀器內(nèi)部的三維傳動(dòng)系統(tǒng)，依次由光子計(jì)數(shù)器讀出各孔的光子數(shù)。樣品中的待測(cè)分子濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量分析。最后，打印數(shù)據(jù)報(bào)告，以輔助臨床診斷。方法步驟 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 備注：因各廠家生產(chǎn)試劑操作方法備注：因各廠家生產(chǎn)試劑操作方法不同，故參見試劑盒說明書不同，故參見試劑盒說明書結(jié)果判斷及臨床意

9、義一、結(jié)果判斷結(jié)果判斷Part 1膠體金免疫層析法結(jié)果判斷膠體金免疫層析法結(jié)果判斷 以艾康生物檢測(cè)試劑盒為例：以艾康生物檢測(cè)試劑盒為例：陽性（+）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)物質(zhì)。陰性（-）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)物質(zhì)。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。注意：測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在規(guī)定的觀察時(shí)

10、間內(nèi)，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判為陽性結(jié)果。結(jié)果判斷Part 1膠體金免疫層析法結(jié)果判斷膠體金免疫層析法結(jié)果判斷陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無紅色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有待測(cè)抗體。弱陽性（+）：質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。弱陽性結(jié)果表明：標(biāo)本中含有少量待測(cè)抗體。陰性 （-）：兩條紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）。陰性結(jié)果表明：標(biāo)本中檢測(cè)不出待測(cè)抗體。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試紙條已變質(zhì)損壞。在任何情況下，應(yīng)重新測(cè)試。如果問題仍然存在

11、，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。結(jié)果判斷Part 2酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù) 以上海科華試劑盒為例：以上?？迫A試劑盒為例：1 HBsAg： COV=陰性對(duì)照平均OD值+0.1 樣本OD值/COV值1.0為陽性 樣本OD值/COV值1.0為陰性2 HBsAb、HBeAg： COV=陰性對(duì)照平均OD值2.1（OD0.05按0.05計(jì)算） 當(dāng)樣本OD值COV值為陽性 當(dāng)樣本OD值COV值為陰性結(jié)果判斷Part 2酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù) 3 HBeAb：COV（陰性對(duì)照平均OD值陽性對(duì)照平均OD值）0.5 標(biāo)本OD值COV為陰性，COV為陽性4 HBcAb：原倍血清COV陰性對(duì)照平均OD值0

12、.3 1:30稀釋血清COV陰性對(duì)照平均OD值0.5 標(biāo)本OD值COV為陰性，COV為陽性二、臨床意義臨床意義 臨床意義 臨床意義 HBsAg HBsAg的定量檢測(cè)是目前監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)抗的定量檢測(cè)是目前監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)抗乙肝病毒治療后應(yīng)答的新工具，結(jié)合乙肝病毒治療后應(yīng)答的新工具，結(jié)合HBV DNHBV DNA A及乙肝病毒及乙肝病毒e e抗原（抗原（HBeAgHBeAg）的陰轉(zhuǎn)和血清）的陰轉(zhuǎn)和血清轉(zhuǎn)換，我們能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的近期和遠(yuǎn)轉(zhuǎn)換，我們能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的近期和遠(yuǎn)期抗病毒治療的療效。因此，該檢測(cè)已在臨期抗病毒治療的療效。因此，該檢測(cè)已在臨床上得以廣泛開展，特別是被用于判定抗病床上得以廣泛開展，特

13、別是被用于判定抗病毒治療療效，以及根據(jù)早期下降的速度和幅毒治療療效，以及根據(jù)早期下降的速度和幅度來預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效及決定療程上。度來預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期療效及決定療程上。臨床意義 聚乙二醇干擾素（聚乙二醇干擾素（Peg IFNPeg IFN） -2a-2a治療乙肝患者治療乙肝患者的研究結(jié)果顯示，治療的研究結(jié)果顯示，治療1212周時(shí)周時(shí)HBsAgHBsAg定量定量1500 IU/ml20000 IU/ml20000 IU/ml（約占治療人群的（約占治療人群的16%16%）, ,則治療結(jié)束停則治療結(jié)束停藥藥1 1年時(shí)的年時(shí)的HBeAgHBeAg血清轉(zhuǎn)換率僅為血清轉(zhuǎn)換率僅為19%19%（8/438/43例）。例）。

14、 臨床意義 此外，研究還發(fā)現(xiàn)，患者治療后此外，研究還發(fā)現(xiàn)，患者治療后HBsAgHBsAg下降速下降速度和幅度還與其長(zhǎng)期清除率有關(guān)。在治療度和幅度還與其長(zhǎng)期清除率有關(guān)。在治療2424周周HBsHBsAg1500 IU/mlAg1500 IU/ml且同時(shí)出現(xiàn)且同時(shí)出現(xiàn)HBeAgHBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者血清轉(zhuǎn)換的患者中，有中，有20%20%可獲得可獲得HBsAgHBsAg清除。因此，清除。因此，HBsAgHBsAg定量可定量可以用于指導(dǎo)治療。而且，治療結(jié)束時(shí)以用于指導(dǎo)治療。而且，治療結(jié)束時(shí)HBsAgHBsAg水平越水平越低，停藥后隨訪的低，停藥后隨訪的HBsAgHBsAg清除率越高。清除率越高。臨床

15、意義 布魯內(nèi)托（布魯內(nèi)托（BrunettoBrunetto）研究顯示，無論是）研究顯示，無論是HBeAgHBeAg（+ +）還是還是HBeAgHBeAg（- -）的慢性乙肝患者，在接受干擾素治療）的慢性乙肝患者，在接受干擾素治療4848周后，若其周后，若其HBsAgHBsAg定量定量10 IU/ml10 IU/ml10 IU/ml（占（占88%88%，171/19171/194 4例），隨訪例），隨訪3 3年，僅有年，僅有2%2%（4/1744/174例）的患者出現(xiàn)例）的患者出現(xiàn)HBsAgHBsAg消失。同樣，治療消失。同樣，治療4848周時(shí)周時(shí)HBsAgHBsAg下降下降2 log2 log

16、的患者，的患者， 隨隨訪訪3 3年，年，HBsAgHBsAg消失率高達(dá)消失率高達(dá)42%42%；下降；下降2 log2 log患者中，僅有患者中，僅有3%3%的的HBsAgHBsAg消失。因此，在治療結(jié)束時(shí)，對(duì)于那些消失。因此，在治療結(jié)束時(shí)，對(duì)于那些HBV DNHBV DNA A 陰轉(zhuǎn)并出現(xiàn)陰轉(zhuǎn)并出現(xiàn)HBeAgHBeAg血清轉(zhuǎn)換的患者，如果血清轉(zhuǎn)換的患者，如果HBsAgHBsAg水平下水平下降不明顯，可考慮延長(zhǎng)療程，以進(jìn)一步提高降不明顯，可考慮延長(zhǎng)療程，以進(jìn)一步提高HBeAgHBeAg血清轉(zhuǎn)血清轉(zhuǎn)換率和換率和HBsAgHBsAg清除率。清除率。臨床意義檢測(cè)模式分析檢測(cè)模式分析Part 4檢測(cè)結(jié)檢

17、測(cè)結(jié)果模式分析果模式分析HBsAgHBsAgHBsAbHBsAbHBeAgHBeAgHBeAbHBeAbHBcAbHBcAbPreS1AgPreS1AgPreS1AbPreS1Ab簡(jiǎn)要意義簡(jiǎn)要意義乙肝乙肝表面表面抗原抗原乙肝乙肝表面表面抗體抗體乙肝乙肝E抗原抗原乙肝乙肝E抗抗體體乙肝乙肝核心核心抗體抗體乙肝乙肝前前S1抗原抗原乙肝乙肝前前S1抗體抗體HBsAgHBsAg陽性提示陽性提示乙肝乙肝攜帶；攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽性提示病毒復(fù)制陽性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽陽性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽

18、陽性提示肝細(xì)胞有阻斷性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝乙肝病毒感染的功能。病毒感染的功能。- - - - - - - -沒有沒有乙肝乙肝病毒感染，不具備免疫力。病毒感染，不具備免疫力。- -+ +- - - - - -接種疫苗，接種疫苗，乙肝乙肝恢復(fù)，具備免疫力?；謴?fù)，具備免疫力。- - - - - - -+ +急性急性乙肝乙肝恢復(fù)或接種進(jìn)口疫苗，具備免疫力?；謴?fù)或接種進(jìn)口疫苗，具備免疫力。- -+ +- - - - -+ +接種疫苗或少量接種疫苗或少量乙肝乙肝病毒感染后恢復(fù)，免疫力強(qiáng)。病毒感染后恢復(fù)，免疫力強(qiáng)。+ +- - - - - - -表面抗原攜帶；急性表面抗原攜帶；急性乙肝乙肝病毒感染潛伏期后期

19、。病毒感染潛伏期后期。+ +- -+ +- - -+ +- -急性急性乙肝乙肝早期，病毒復(fù)制，有傳染性。早期，病毒復(fù)制，有傳染性。+ +- -+ +- -+ + +- -急慢性急慢性乙肝乙肝，病毒復(fù)制，有傳染性，病毒復(fù)制，有傳染性（即大三陽）即大三陽）。+ +- -+ +- -+ +- -+ +急慢性急慢性乙肝乙肝，恢復(fù)期或治療有效，有傳染性。，恢復(fù)期或治療有效，有傳染性。+ +- - - -+ +- - -急慢性急慢性乙肝乙肝，傳染性弱或沒有傳染性。，傳染性弱或沒有傳染性。臨床意義HBsAgHBsAgHBsAbHBsAbHBeAgHBeAgHBeAbHBeAbHBcAbHBcAbPreS1A

20、gPreS1AgPreS1AbPreS1Ab簡(jiǎn)要意義簡(jiǎn)要意義乙肝乙肝表面表面抗原抗原乙肝乙肝表面表面抗體抗體乙肝乙肝E抗原抗原乙肝乙肝E抗抗體體乙肝乙肝核心核心抗體抗體乙肝乙肝前前S1抗原抗原乙肝乙肝前前S1抗體抗體HBsAgHBsAg陽性提示陽性提示乙肝乙肝攜帶；攜帶；HBeAg、pre-S1Ag、陽性提示病毒復(fù)制陽性提示病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)；傳染性強(qiáng)；HBsAb、HBeAb陽性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，陽性提示機(jī)體具備免疫力，趨于恢復(fù)，pre-S1Ab陽性提示肝細(xì)胞有阻斷陽性提示肝細(xì)胞有阻斷乙肝乙肝病毒感染病毒感染的功能。的功能。+ +- - - -+ + +- -急慢性急慢性乙肝乙肝，

21、病毒復(fù)制有傳染性，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝乙肝E抗原抗原變異。變異。+ +- - -+ + +- - -急慢性急慢性乙肝乙肝，沒有傳染性或傳染性弱，沒有傳染性或傳染性弱（即小三（即小三陽）陽）。+ +- - -+ + +- -+ +急慢性急慢性乙肝乙肝或或乙肝乙肝治療后恢復(fù)期，傳染性弱。治療后恢復(fù)期，傳染性弱。+ +- - -+ + + +- -急慢性急慢性乙肝乙肝，病毒復(fù)制有傳染性，病毒復(fù)制有傳染性，乙肝乙肝E抗原抗原變異。變異。- - - - -+ +- - -乙肝乙肝核心抗隱性攜帶，有核心抗隱性攜帶，有乙肝乙肝既往有感染史。既往有感染史。- - - -+ + +- - -急性急性乙肝乙肝恢

22、復(fù)期或既往有感染史?；謴?fù)期或既往有感染史。- -+ +- -+ + +- -+ +乙肝乙肝恢復(fù)期或急性恢復(fù)期或急性乙肝乙肝既往有輕度既往有輕度乙肝乙肝病毒感病毒感染史。染史。+ +- - -+ +- - - -慢慢乙肝乙肝病毒感染攜帶，傳染性弱或沒有傳染性。病毒感染攜帶，傳染性弱或沒有傳染性。+ +- -+ + + + +- -急性急性乙肝乙肝趨于恢復(fù)，趨于恢復(fù)，乙肝乙肝攜帶，病毒復(fù)制有傳攜帶，病毒復(fù)制有傳染性。染性。- - - - - -+ +- -提示提示乙肝乙肝病毒早期感染，有傳染性，建意檢測(cè)病毒早期感染，有傳染性，建意檢測(cè)HBV-DNA。臨床意義 一、何謂一、何謂PreS1AgPreS

23、1Ag？ PreS1Ag PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因組前是乙型肝炎病毒基因組前S1S1區(qū)編碼區(qū)編碼的前蛋白，具有很強(qiáng)的免疫原性，是病毒表面抗原的前蛋白，具有很強(qiáng)的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)(HBsAg)的組成成分。它只存在于具有傳染性的完的組成成分。它只存在于具有傳染性的完整的乙肝病毒顆粒上，是黏附和侵襲人體肝細(xì)胞的整的乙肝病毒顆粒上，是黏附和侵襲人體肝細(xì)胞的主要因子。主要因子。 臨床意義 二、檢測(cè)二、檢測(cè)PreS1AgPreS1Ag的意義的意義 1. PreS1Ag 1. PreS1Ag的檢測(cè)能夠彌補(bǔ)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足的檢測(cè)能夠彌補(bǔ)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的不足 PrPreS1AgeS

24、1Ag出現(xiàn)在急性乙肝感染的最早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前，即可出現(xiàn)在急性乙肝感染的最早期，在轉(zhuǎn)氨酶升高前，即可查出，是早期診斷乙肝病毒感染的標(biāo)志。查出，是早期診斷乙肝病毒感染的標(biāo)志。 急性乙肝急性乙肝PreSPreS1Ag1Ag轉(zhuǎn)陰越早，預(yù)后越好，提示病毒清除和病情好轉(zhuǎn)。反之，轉(zhuǎn)陰越早，預(yù)后越好，提示病毒清除和病情好轉(zhuǎn)。反之，P PreS1AgreS1Ag持續(xù)陽性，則提示將發(fā)展成慢性肝炎。持續(xù)陽性，則提示將發(fā)展成慢性肝炎。 抗抗HBe(HBe() )慢性乙肝約占慢肝的慢性乙肝約占慢肝的30%50%30%50%，檢測(cè)，檢測(cè)PreS1Ag(PreS1Ag() )，提示病毒，提示病毒在機(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，具有傳

25、染性，患者容易演變?yōu)楦斡不蚋卧跈C(jī)體內(nèi)繼續(xù)復(fù)制，具有傳染性，患者容易演變?yōu)楦斡不蚋伟?。加查癌。加查PreS1AgPreS1Ag，彌補(bǔ)了因，彌補(bǔ)了因HBeAgHBeAg的缺失造成的診治困難。的缺失造成的診治困難。 在乙肝無癥狀攜帶者中，有一定比例在乙肝無癥狀攜帶者中，有一定比例HBeAb(HBeAb() )者，如果者，如果PrePreS1Ag(S1Ag() )可反映出病毒并沒有被清除，在體內(nèi)復(fù)制仍然活躍，可反映出病毒并沒有被清除，在體內(nèi)復(fù)制仍然活躍，肝臟存在潛在的病理損傷。肝臟存在潛在的病理損傷。 抗病毒治療，檢測(cè)抗病毒治療，檢測(cè)PreS1AgPreS1Ag可作為治療前的患者篩查可作為治療前的

26、患者篩查( (適應(yīng)癥適應(yīng)癥) )和治療后的療效判斷。和治療后的療效判斷。 臨床意義 2. PreS1Ag 2. PreS1Ag檢測(cè)能夠加強(qiáng)檢測(cè)能夠加強(qiáng)HBVDNAHBVDNA檢測(cè)的作用檢測(cè)的作用 因病毒基因變異的影響，個(gè)別病毒變異株感染的患因病毒基因變異的影響，個(gè)別病毒變異株感染的患者者HBVDNAHBVDNA檢測(cè)為陰性，檢測(cè)為陰性，PreS1AgPreS1Ag的檢測(cè)可以防止漏檢，的檢測(cè)可以防止漏檢，并提示可能存在病毒變異跡象。并提示可能存在病毒變異跡象。 PreS1AgPreS1Ag是免疫是免疫測(cè)定技術(shù)，具有快速、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。測(cè)定技術(shù)，具有快速、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。PreS1AgPreS

27、1Ag的的檢測(cè)與檢測(cè)與HBVDNAHBVDNA檢測(cè)在乙肝的診斷方面檢測(cè)在乙肝的診斷方面相互補(bǔ)充和加相互補(bǔ)充和加強(qiáng)，就像強(qiáng)，就像HBVDNAHBVDNA不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣，同不能替代乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)一樣，同樣樣HBVDNAHBVDNA不能替代不能替代PreS1AgPreS1Ag的檢測(cè)。的檢測(cè)。臨床意義 三、何謂三、何謂PreS1AbPreS1Ab？ 是是HBVHBV的中和抗體，能阻止的中和抗體，能阻止HBVHBV侵入肝細(xì)侵入肝細(xì)胞，抗胞，抗-PreS1Ab-PreS1Ab在急性期和恢復(fù)早期出現(xiàn)，在急性期和恢復(fù)早期出現(xiàn)，預(yù)示病毒正在或已被清除，疾病預(yù)后良好。預(yù)示病毒正在或已被清除，疾病預(yù)后良

28、好。乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 前前S1S1抗體抗體 可作為急性乙型肝可作為急性乙型肝炎臨床預(yù)后早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)。炎臨床預(yù)后早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)。 臨床意義 四、四、PreS1AbPreS1Ab意義：意義： 1 1前前S1S1抗體是急性抗體是急性 HBV HBV 感染最早期出現(xiàn)的抗體比感染最早期出現(xiàn)的抗體比 HBsAb HBsAb 和和抗抗 HBcIgM HBcIgM 出現(xiàn)早，起到了臨床預(yù)后早期診斷的作用。前出現(xiàn)早，起到了臨床預(yù)后早期診斷的作用。前S1S1抗體出抗體出現(xiàn)提示預(yù)后良好。前現(xiàn)提示預(yù)后良好。前S1S1抗體參與病毒的清除，前抗體參與病毒的清除，前S1S1抗原抗原/ /抗體的反抗體的反

29、轉(zhuǎn)預(yù)示疾病將進(jìn)入恢復(fù)期，急性乙型肝炎患者前轉(zhuǎn)預(yù)示疾病將進(jìn)入恢復(fù)期，急性乙型肝炎患者前S1S1抗原陰轉(zhuǎn)越早，抗原陰轉(zhuǎn)越早，前前S1S1抗體陽轉(zhuǎn)越早預(yù)后越好?？贵w陽轉(zhuǎn)越早預(yù)后越好。 2 2對(duì)慢性乙型肝炎患者長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)、隨訪對(duì)慢性乙型肝炎患者長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)、隨訪 出現(xiàn)血清前出現(xiàn)血清前S1S1抗體陽抗體陽性者，性者，HBVDNAHBVDNA陰轉(zhuǎn)率顯著增高或陰轉(zhuǎn)率顯著增高或 HBVDNA HBVDNA 含量顯著下降，預(yù)示疾病含量顯著下降，預(yù)示疾病恢復(fù)良好?；謴?fù)良好。 3 3乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 前前S1S1抗體抗體 可作為臨床抗病毒療效疾病預(yù)后可作為臨床抗病毒療效疾病預(yù)后的血清學(xué)指標(biāo)。的血清學(xué)指標(biāo)。 4 4

30、總之，乙型肝炎患者前總之，乙型肝炎患者前S1S1抗體出現(xiàn)與否，與病程的進(jìn)展以及抗體出現(xiàn)與否，與病程的進(jìn)展以及預(yù)后有較密切的關(guān)聯(lián)。前預(yù)后有較密切的關(guān)聯(lián)。前S1S1抗體的檢測(cè)對(duì)乙肝的診斷及治療有較為抗體的檢測(cè)對(duì)乙肝的診斷及治療有較為重要的臨床意義。重要的臨床意義。 三、注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1 1 標(biāo)本采集與處理的影響標(biāo)本采集與處理的影響標(biāo)本收集后應(yīng)盡快分離出血清或血漿以避免溶血。檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量使用新鮮的標(biāo)本。標(biāo)本若不能及時(shí)送檢，可在2-8冷藏3天。長(zhǎng)期保存需冷凍于-20，忌反復(fù)凍融。標(biāo)本嚴(yán)重溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色

31、造成假陽性。標(biāo)本凝固不全 ，正常血液采集后1/2-2h開始凝固，18-24h血塊完全收縮。在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?。注意事?xiàng) 2 2 試劑影響試劑影響因各廠家對(duì)檢測(cè)標(biāo)本要求、操作步驟不同，故認(rèn)真閱讀檢測(cè)試劑說明書能避免不必要的實(shí)驗(yàn)誤差（特別是膠體金免疫法）。不同廠家生產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為

32、89.4%-99.3%、78-89%,存在較大差異。有的廠家酶標(biāo)板孔間A值差大于15%；標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一不同方法學(xué)的檢測(cè)試劑，會(huì)使兩對(duì)半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實(shí)際工作中常用ELISA檢測(cè)HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對(duì)變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測(cè)存在差異。注意事項(xiàng) 3 3 干擾物質(zhì)的影響干擾物質(zhì)的影響 大約大約40%40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程

33、度影響檢測(cè)結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、同程度影響檢測(cè)結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)Ig (s)抗抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如RFRF因子可與標(biāo)記二抗的因子可與標(biāo)記二抗的FCFC段法結(jié)合造成假陽性，補(bǔ)體從段法結(jié)合造成假陽性，補(bǔ)體從C1qC1q活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，F(xiàn)cFc的的C1qC1q分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來，則補(bǔ)體分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來，則補(bǔ)體C1qC1q可將二者連接起來造成假陽性，采用可將二者連接起來造成假陽