消化道平滑肌生理特性及藥物對(duì)平滑肌收縮的影響

1、消化道平滑肌生理特性及藥物對(duì)平滑肌收縮的影響【目的和原理】觀察家兔離體胃腸平滑肌的電生理特性和一般特性；熟悉哺乳動(dòng)物離體器官灌 流的一種方法；觀察不同濃度乙酰膽堿對(duì)家兔離體腸平滑肌的作用及阿托品對(duì)乙酰 膽堿的拮抗作用；熟悉研究藥物量效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)方法。消化道平滑肌具有自動(dòng)節(jié)律性，較大的伸展性，對(duì)化學(xué)物質(zhì)、溫度改變及牽張刺 激較為敏感等一般生理特性。電位變化方面，消化道平滑肌除了具有一般可興奮組 織的靜息電位和動(dòng)作電位，還有其特有的慢波電位。乙酰膽堿通過激動(dòng)腸管平滑肌上的M型膽堿受體可引起腸管平滑肌收縮，在一定劑量范圍內(nèi)，其收縮強(qiáng)度呈劑 量 依賴性。阿托品作為M型膽堿受體阻斷劑，可競(jìng)爭(zhēng)性地拮抗乙酰

2、膽堿對(duì) M受體的 激動(dòng)作用?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】 家兔，體重2.53.0Kg?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】 超級(jí)恒溫器、恒溫浴管、BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、木 槌、萬(wàn)能支架臺(tái)、雙凹夾2個(gè)、溫度計(jì)、燒杯、石蠟作底面的表面皿、玻璃微電極、Ag-AgCl電極絲、張力換能器、注射器(1.0ml7支、注射針頭、手術(shù)器械、 蛙心夾、彈簧夾、 兔手術(shù)臺(tái)。臺(tái)氏液、1:10,000腎上腺素、1N NaOH、1N HCl、 不同濃度(3X10-1、3X10-3、3X10-5、3X10-7、3X10-9、3X10-11mol/L 氯化乙酰 膽堿?！緦?shí)驗(yàn)步驟和觀察項(xiàng)目】1.標(biāo)本制作及實(shí)驗(yàn)裝置準(zhǔn)備(1首先裝好超級(jí)恒溫器和恒溫浴管，恒

3、溫浴管是循環(huán)供液式，恒溫工作點(diǎn)定在 室溫20o Co調(diào)節(jié)出氣管，使氣泡一個(gè)一個(gè)、不斷地逸出。(2用木槌猛擊家兔頭枕部致昏，迅速剖開腹腔，找出胃與十二指腸交界處，用線 結(jié)扎,將與十二指腸相連的腸系膜沿腸緣剪開，在結(jié)扎線近胃?jìng)?cè)剪斷小腸，立即取出長(zhǎng)約2030cm的腸管。把離體腸管置于4o C的臺(tái)氏液中輕輕漂洗將腸內(nèi)容物 沖洗干 凈,并將腸管剪成23cm數(shù)段，再換臺(tái)氏液備用。(3連接標(biāo)本及記錄：輕取一段離體腸管標(biāo)本，一端連于L型管的小鉤上，另一端 用蛙心夾與張力換能器相連。掛好腸管后穩(wěn)定約10min開機(jī)進(jìn)入程序，可以描1記一段離體腸平滑肌正常收縮曲線。2.電生理特性觀察：(1灌制微電極：配置2N KC

4、l溶液做為電極液，拉制玻璃微電極，充入電極 液，使微 電極尖端無(wú)氣泡，電極電阻1030MD 。(2輕取一段離體腸管標(biāo)本，放于盛有臺(tái)氏液的表面皿中，剪開腸管，用小鋼針將 標(biāo)本固定在石蠟底面上，不要過分牽拉。表面皿中臺(tái)氏液略高于標(biāo)本表面約1mm。(3將微電極安裝到微電極操縱器上，并將一根Ag-AgCl電極絲插入玻璃微電 極內(nèi)，電極絲另一端連于微電極放大器、極輸入端。微電極放大器的-"極輸入端接參考電極，與表面皿中臺(tái)氏液接通。(4開機(jī)進(jìn)入程序，降下微電極，使其尖端刺入平滑肌細(xì)胞內(nèi)，觀察電位變化。3. 一般特性觀察：(1記錄腸管在室溫臺(tái)氏液里的活動(dòng)。(2將臺(tái)氏液溫度逐漸升高至38o C,記錄

5、腸管運(yùn)動(dòng)的變化。(3待臺(tái)氏液溫度穩(wěn)定于38o C后，加腎上腺素(1:10, 000 1-2滴于浴管中，觀察 腸管運(yùn)動(dòng)的變化。在觀察到有明顯效應(yīng)后，立刻用38o C臺(tái)氏液沖洗3次，使腸管活 動(dòng)恢復(fù)正常。(4同法，分別加入1N NaOH溶液1-2滴;1N HCl溶液1-2滴，觀察對(duì)腸管 運(yùn)動(dòng)的 影響(5用含Ca 2+臺(tái)氏液沖洗3次,換入無(wú)Ca 2+臺(tái)氏液，觀察腸管運(yùn)動(dòng)變化(6將結(jié)果填入下表。家兔離體小腸平滑肌一般生理特性觀察項(xiàng)目緊張性收縮頻率收縮幅度室溫臺(tái)氏液38o C臺(tái)氏液1:10,000腎上腺2素1N NaOH1N HCl38o C無(wú)Ca 2+臺(tái)氏液注:表中虛線上方各項(xiàng)內(nèi)容均為在含 Ca 2+

6、臺(tái)氏液的條件下進(jìn)行4.乙酰膽堿量效關(guān)系曲線的描繪及阿托品對(duì)乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用的觀察(1準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)裝置：此裝置由恒溫、供氣和排液以及記錄部分組成。恒溫部分 控制水浴 溫度38土 C。供氣部分由L型通氣管和氣源組成，氣流量以12個(gè)氣泡/秒為宜.供 液及排液部分主要是水浴管，具下端連有膠管及膠管夾以供排液使用，其上口端可隨 時(shí)充人新的恒溫營(yíng)養(yǎng)液。(2連接標(biāo)本1在1通道的輸入接口上安裝好張力傳感器2輕取一段離體腸管標(biāo)本，一端連于通氣管L型的小鉤上，另一端連于張力換能 器上的L型的小鉤上，然后將標(biāo)本懸浮在盛有30ml臺(tái)氏液的浴管中。(3設(shè)置計(jì)算機(jī)：1打開計(jì)算機(jī),選才¥ BL-410生物機(jī)能實(shí)

7、驗(yàn)系統(tǒng)。2選擇輸入信號(hào)”菜單中的“感道”子菜單。3在“通道”子菜單中選擇 張力”信號(hào)。4設(shè)置增益(一般為50、濾波(一般為30Hz、T(一般為DC、速度(一般為6。(4記錄一給藥一沖洗:開始一記錄正常平滑肌收縮曲線。1使用鼠標(biāo)單擊工具條上的 開始”命令按鈕。2記錄正常平滑肌收縮曲線后，從低濃度開始，依次向浴管內(nèi)加入各濃度的乙 酰 膽堿，同時(shí)選擇 通用標(biāo)記”命令，記錄給藥后的平滑肌收縮曲線，每次加入乙 酰膽堿， 待離體腸平滑肌收縮幅度達(dá)到最大后，用臺(tái)氏液沖洗三次，使腸管恢復(fù)到 給藥前狀態(tài)， 然后再加入下一個(gè)濃度的乙酰膽堿，每次沖洗時(shí)一定選擇暫停"命3令按鈕，以減少對(duì)張力傳感器的刺激。3

8、給予各濃度乙酰膽堿后，腸管經(jīng)沖洗恢復(fù)正常，再用含有阿托品的臺(tái)氏液沖 洗, 然后以含有阿托品的臺(tái)氏液作為營(yíng)養(yǎng)液重復(fù)步驟 (2 o4記錄結(jié)束后,選擇 停止”命令按鈕，起文件名保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(5求出Di和Ei:計(jì)算Di均以xi0-6mol/L為單位，效應(yīng)E以克為單位。(計(jì)算機(jī) 內(nèi)部計(jì)算時(shí)，會(huì)自動(dòng)將Di轉(zhuǎn)化為mol/L進(jìn)行計(jì)算。(6數(shù)據(jù)處理:選擇數(shù)據(jù)處理”菜單中的 計(jì)算PA 2、PD 2"子菜單:1選擇計(jì)算PD 2”計(jì)算類型后，分別輸入已計(jì)算好的無(wú)DH數(shù)據(jù)中相應(yīng)Di值和 Ei值，然后點(diǎn)擊 計(jì)算結(jié)果”再點(diǎn)擊 量效曲線”即得PD 2值和其相應(yīng)曲線。2選擇 計(jì)算PA 2”計(jì)算類型后；分別輸入已計(jì)算

9、好的無(wú)DH數(shù)據(jù)和加DH數(shù)據(jù)中相應(yīng)的Di 值和Ei值然后點(diǎn)擊 計(jì)算結(jié)果”再點(diǎn)擊 量效曲線”即得PA 2值和其相應(yīng)曲線。【注意事項(xiàng)】1 .在加藥前,必須先準(zhǔn)備好更換用的38o C臺(tái)氏液。2 .每次加藥出現(xiàn)效果后，必須立即更換浴管內(nèi)的臺(tái)氏液，待腸管恢復(fù)正?；顒?dòng)后 再觀察下一項(xiàng)目。3 .記錄電位時(shí)，要保持安靜，避免振動(dòng)實(shí)驗(yàn)臺(tái)，防止微電極移位或折斷；降下微電 極時(shí)要小心，當(dāng)微電極接近平滑肌時(shí)，緩緩下移，刺入平滑肌。4 .隨時(shí)檢查恒溫裝置，確保水浴管內(nèi)溫度控制在38±1 Co5 .離體腸管時(shí)，標(biāo)本及其張力傳感器的連線不要觸及浴管及通氣管管壁，而且標(biāo) 本與張力傳器的連線要垂直，不要過緊，也不要過松。6 .給藥時(shí)要將藥液直接滴于液面上，不要滴在線及管壁上，而且每次加藥的方式 要保持一致。7 .實(shí)驗(yàn)中盡量不要按停止”命令按鈕，以免丟失實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。8 .洗浴管時(shí)一定選擇暫?！泵畎粹o，以減少對(duì)張力傳感器的影響?！舅伎碱}